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UNIVERSIDAD AUTONOMA DE CHIHUAHUA

FACULTAD DE CIENCIAS QUIMICAS

MICROBIOLOGIA GENERAL
TORRES PONCE REYNA LIZETH
Prctica utilizacin de carbohidratos como fuente de
carbono y energa
Billy Rodrguez Lpez 21753
Erick Ivn Lpez Aguilar 271916
Manuel alvidrez Peralta 267100
Francisco Suarez Manquero 252257

Resumen
Se utilizaron los medios LIA, Kligler, TSI, FEA, MIO, SIM para sembrar S. enteritidis
para observar los resultados y se pudo concluir que las pruebas se realizaron
oportunamente y comparndolos con S enteritidis los resultados fueron los
esperados

Abstract
The LIA, Kligler, TSI, FEA, MIO, SIM media were used to grow S. enteritidis to see
the results and it was concluded that the tests were done on time and comparing
the results with S enteritidis were as expected

Introduccin
Un medio de cultivo consta de un gel o una solucin que cuenta con los nutrientes
necesarios para permitir, en condiciones favorables de pH y temperatura, el
crecimiento de virus, microorganismos, clulas, tejidos vegetales o incluso
pequeas plantas. Segn lo que se quiera hacer crecer, el medio requerir unas u
otras condiciones.

SIM Medio

Es un medio semislido destinado a verificar la movilidad, produccin de indol y


de sulfuro de hidrgeno en un mismo tubo.
Es til para diferenciar miembros de la familia Enterobacteriaceae.
Fundamento
El triptfano es un aminocido constituyente de muchas peptonas, y
particularmente de la triptena, que puede ser oxidado por algunas bacterias para
formar indol. En el proceso interviene un conjunto de enzimas llamadas
triptofanasa. El indol producido se combina con el aldehido del reactivo de Kovac
s o de Erlich, para originar un compuesto de color rojo. Las cepas mviles
pueden apreciarse en este medio, por la turbidez que producen alrededor de la
puncin de siembra, mientras que aquellas cepas productoras de sulfhdrico se
distinguen por la formacin de un precipitado negro de sulfuro de hierro a partir
del tiosulfato siempre que el medio se mantenga a un pH mayor a 7.2.
Siembra
A partir de un cultivo de 18-24 horas en medio slido, sembrar por puncin
profunda con aguja de inoculacin recta (no usar ansa con anillo). Se debe
inocular el centro del tubo, y la puncin debe abarcar 2 tercios de profundidad del

medio de cultivo desde la superficie. Es importante que la siembra se realice en


lnea recta.
Incubacin
Durante 24 horas, a 35-37 C, en aerobiosis.
Luego de la incubacin, agregar 3-5 gotas de reactivo de Kovacs o de Erlich.
Resultados
Cepas mviles: producen turbidez del medio, que se extiende mas all de la
lnea de siembra.
Cepas inmviles: el crecimiento se observa solamente en la lnea de siembra.
Cepas SH2 positivas: ennegrecimiento a lo largo de la lnea de siembra o en
todo el medio.
Cepas SH2 negativas: el medio permanece sin cambio de color.
Cepas indol positivas: desarrollo de color rojo luego de agregar el reactivo de
Kovacs o de Erlich.
Cepas indol negativas: sin cambio de color.

MIO medio

Fundamento
Medio de cultivo altamente nutritivo por la presencia de extracto de levadura,
peptona y triptena. La triptena aporta gran cantidad de triptofano, sustrato de la
enzima triptofanasa a partir del cual se forma indol que puede ser revelado con el
reactivo de Ehrlich (Indol Reactivo REF B1550361) o de Kovacs por la formacin
de un compuesto de color rojo.
La glucosa es el hidrato de carbono fermentable, la ornitina es el sustrato para la
deteccin de la enzima ornitina decarboxilasa, el prpura de bromocresol es el
indicador de pH, que en medio alcalino es de color prpura y en medio cido es
amarillo. El agar es el agente solidificante y a esta concentracin le otorga al
medio la propiedad de ser semislido, condicin necesaria para detectar
movilidad, que se evidencia por el enturbiamiento del medio o por crecimiento
que difunde mas all de la lnea de inoculacin del microorganismo en estudio.
Los microorganismos fermentadores de glucosa acidifican el medio de cultivo y
producen viraje del color prpura al amarillo. Las condiciones de acidez son
favorables para la actividad enzimtica ornitina decarboxilasa, que actua sobre la
ornitina generando putrescina, con la consecuente alcalinizacin del medio de
cultivo y viraje al color prpura
Procedimiento
Siembra A partir de un cultivo puro del microorganismo en estudio, sembrar por
puncin profunda utilizando aguja de inoculacin.
Incubacin

En aerobiosis, a 35-37 C durante 18-24 horas.

Interpretacin de los resultados


Observar la movilidad y el color del medio de cultivo. Luego realizar la prueba de
indol.
Movilidad:
Resultado positivo: presencia de turbidez o crecimiento ms all de la lnea de
siembra.
Resultado negativo: crecimiento solamente en la lnea de siembra.
Ornitina decarboxilasa:
Resultado positivo: color prpura.
Resultado negativo: color amarillo. A veces se puede desarrollar un color violceo
en la superficie del medio.

FEA medio

Fundamento
En el medio de cultivo, el extracto de levadura aporta los nutrientes necesarios
para el adecuado desarrollo bacteriano.
El aminocido fenilalanina sufre la desaminacin oxidativa catalizada por la
enzima fenilalanina deaminasa (es una flavoprotena), para producir cido
fenilpirvico y amonaco. La presencia del cido fenilpirvico se demuestra con el
agregado de cloruro frrico en medio cido, con el cual se forma un quelato de
color verdoso entre el cido fenil pirvico y los iones Fe3+.
Adems, en este medio se suele poner en evidencia la produccin de pigmentos
melnicos, como en el caso de Morganella morganii, Pseudomonas aeruginosa,
etc.
Siembra
A partir de un cultivo puro de 18-24 horas, sembrar un inculo denso estriando la
superficie del medio.
Incubacin
Incubar de 18 a 24 horas a 35-37 C, en aerobiosis.
Luego, se debe realizar el revelado: agregar unas gotas de una solucin acuosa de
cloruro frrico al 10% (cdigo B15-504-61).

Resultados
El anlisis de los resultados debe realizarse dentro de los primeros 5 minutos.
Positivo: desarrollo de color verde plido a intenso en el pico de flauta y en el
lquido de condensacin.
Negativo: sin cambios de color. El medio permanece amarillo debido al color del
reactivo cloruro frrico.

TSI medio

Fundamento
En el medio de cultivo, el extracto de carne y la pluripeptona, aportan los
nutrientes adecuados para el desarrollo bacteriano. La lactosa, sacarosa y glucosa
son los hidratos de carbono fermentables. El tiosulfato de sodio es el sustrato
necesario para la produccin de cido sulfhdrico, el sulfato de hierro y amonio, es
la fuente de iones Fe3+ , los cuales se combinan con el cido sulfhdrico y
producen sulfuro de hierro, de color negro. El rojo de fenol es el indicador de pH, y
el cloruro de sodio mantiene el balance osmtico.
Por fermentacin de azcares, se producen cidos, que se detectan por medio del
indicador rojo de fenol,el cual vira al color amarillo en medio cido. El tiosulfato de
sodio se reduce a sulfuro de hidrgeno el que reacciona luego con una sal de
hierro proporcionando el tpico sulfuro de hierro de color negro.
Siembra
A partir de un cultivo puro, sembrar en TSI, picando el fondo y extendiendo sobre
la superficie del medio.
Incubacin
A 35-37C durante 24 horas, en aerobiosis.
Resultados
1-Pico alcalino/fondo cido (pico rojo/fondo amarillo): el microorganismo
solamente fermenta la glucosa.
2-Pico cido/fondo cido (pico amarillo/fondo amarillo): el microorganismo
fermenta glucosa, lactosa y/o sacarosa.
3-Pico alcalino/fondo alcalino (pico rojo/fondo rojo): el microorganismo es no
fermentador de azcares.
4-La presencia de burbujas, o ruptura del medio de cultivo, indica que el
microorganismo produce gas.
5-El ennegrecimiento del medio indica que el microorganismo produce cido
sulfhdrico.

Kligler medio

Fundamento
En el medio de cultivo, la peptona de carne y la triptena, aportan los nutrientes
adecuados para el desarrollo bacteriano. La lactosa y la glucosa son los hidratos
de carbono fermentables. El tiosulfato de sodio es el sustrato necesario para la
produccin de cido sulfhdrico, el citrato de hierro y amonio, es la fuente de iones
Fe 3+, los cuales se combinan con el cido sulfhdrico y producen sulfuro de hierro,
de color negro. El rojo de fenol es el indicador de pH, y el cloruro de sodio
mantiene el balance osmtico. El agar es el agente solidificante.
Por fermentacin de azcares, se producen cidos, que se detectan por medio del
indicador rojo de fenol, el cual vira al color amarillo en medio cido. El tiosulfato
de sodio se reduce a sulfuro de hidrgeno el que reacciona luego con una sal de
hierro proporcionando el tpico sulfuro de hierro de color negro.
Siembra
A partir de un cultivo puro del microorganismo en estudio, sembrar el medio de
cultivo, picando el fondo y extendiendo sobre la superficie del medio.
Incubacin
A 35-37C durante 24 horas, en aerobiosis.
Resultados
1-Pico alcalino/fondo cido (pico rojo/fondo amarillo): el microorganismo
solamente fermenta la glucosa.
2-Pico cido/fondo cido (pico amarillo/fondo amarillo): el microorganismo
fermenta glucosa, y lactosa.
3-Pico alcalino/fondo alcalino (pico rojo/fondo rojo): el microorganismo es no
fermentador de azcares.
4-La presencia de burbujas, o ruptura del medio de cultivo, indica que el
microorganismo produce gas.
5-El ennegrecimiento del medio indica que el microorganismo produce cido
sulfhdrico.

LIA medio

Fundamento
En el medio de cultivo, la peptona y el extracto de levadura aportan los nutrientes
para el desarrollo bacteriano. La glucosa es el hidrato de carbono fermentable, y
la lisina es el sustrato utilizado para detectar la presencia de las enzimas
decarboxilasa y deaminasa. El citrato de hierro y amonio, y el tiosulfato de sodio,
son los indicadores de la produccin de cido sulfhdrico. El purpura de
bromocresol, es el indicador de pH, el cual es de color amarillo a pH igual o menor
a 5.2, y de color violeta a pH igual o mayor a 6.8.
Por decarboxilacin de la lisina, se produce la amina cadaverina, que alcaliniza el
medio y esto produce el viraje del indicador al color violeta. La decarboxilacin de
la lisina, tiene lugar en medio cido, por lo que es necesario que la glucosa sea

previamente fermentada.
Los microorganismos que no producen lisina decarboxilasa, pero que son
fermentadores de la glucosa, producen un viraje de la totalidad del medio de
cultivo al amarillo, pero a las 24 hs de incubacin se observa el pico de color
violeta debido al consumo de las peptonas, y el fondo amarillo.
La produccin de sulfuro de hidrgeno, se visualiza por el ennegrecimiento del
medio debido a la formacin de sulfuro de hierro.
Las cepas de los gneros Proteus, Providencia y algunas cepas de Morganella,
desaminan la lisina, esto produce un cido alfa-ceto-carbnico, el cual, con la sal
de hierro y bajo la influencia del oxgeno forma un color rojizo en la superficie del
medio.
Siembra
Por puncin profunda con aguja de inoculacin.
Incubacin
En aerobiosis, durante 24 horas a 35-37 C.
Resultados
1- Decarboxilacin de la lisina:
-Prueba Positiva: Pico violeta/fondo violeta.
-Prueba Negativa: Pico violeta/fondo amarillo.
2-Desaminacin de la lisina:
Pico rojizo/fondo amarillo. Esto sucede con cepas del gnero Proteus, Providencia
y alguna cepas de Morganella spp.
3-Produccin de cido sulfhdrico:
-Prueba positiva: Ennegrecimiento del medio (especialmente en el lmite del pico
y fondo)

Objetivos
Utilizar los medios LIA, Kligler, TSI, FEA, MIO, SIM para sembrar S. enteritidis y
observar los resultados para contrastarlos con los obtenidos en la literatura

Metodologa.
Se toman los seis medios, (LIA, Kligler, TSI, FEA, MIO, SIM) en sus

respectivos tubos de ensayo obtenidos del laboratorio.


se procede a esterilizar el rea de trabajo y de tomar la cepa S. enteritidis, con un
asa despus de pasarla a la flama, se enfra y toma una muestra de la cepa y se

siembra en cada uno de los tubos de ensayo, sellando el final del tubo con el
mechero.
Se colocan a incubacin en aerobiosis al menos 24hrs a 35 C para recoger los
resultados de la prctica y contrastarlos con la literatura

Resultados.
Medio
LIA

Resultados
Fondo amarillo/pico negro

Kligler

Fondo amarillo/pico negro

TSI

Fondo amarillo/pico negro


(parcialmente)
El medio permanece amarillo

FEA
MIO
SIM

Azul en superficie, morado en parte


inferior, sin crecimiento lejos de la
estra
Sin crecimiento lejos de la estra
presenta color semi verde

Interpretacin
Decarboxilaza de la lisina
negativa
Fermenta glucosa y
produce cido sulfhdrico
Fermenta glucosa y
produce cido sulfhdrico
Negativo, sin presencia
del cido fenilpirvico
Ornitina decarboxilasa
negativa y sin motilidad
Sin motilidad produccin
de ac sulfhdrico

Discusin
Las S. enteritidis Son bacterias mviles que producen cido sulfhdrico (H2S).
Emplean glucosa por poseer una enzima especializada, pero no lactosa, y no
producen ureasa ni tienen metabolismo fermentativo.
Es un agente productor de zoonosis de distribucin universal. Se transmite por
contacto directo o contaminacin cruzada durante la manipulacin, en el
procesado de alimentos o en el hogar; tambin por va sexual.

Por consecuencia los resultados obtenidos son coherentes con la literatura, sin
embargo en prximas prcticas sera til tener cuidado al manipular el medio MIO
debido a su resultado azul.

Conclusin
Se cumpli el objetivo de la prctica tomando como base los resultados de los
medios y compararlos con los resultados que se esperaran, as mismo se reafirm
el uso de dichos medios para identificacin de s. enteritidis

Bibliografa
Schrenk, W.G. Applied Spectroscopy. 40 (1), XIX, 1986.
Welz, B. Atom-Absorptions Spektroskopie. Verlag Chemie, Weinheim. 1983.
http://britanialab.com.ar/esp/productos.
-Fabrication and thermoelectric properties of c-axis oriented nanocrystalline Bi2Sr2Co2Oy thin films, Thin
Solid Films, 534,p168: http://dx.doi.org/10.1016/j.tsf.2013.02.107
-Temperature-dependent rectifying and photovoltaic characteristics of an oxygen-deficient Bi2Sr2Co2Oy/Si
heterojunction,Chinese Physics B, 22, 10, p107301: http://dx.doi.org/10.1088/1674-

1056/22/10/107301