UNIVERSIDAD CENTRAL DEL ECUADOR

FACULTAD DE CIENCIAS QUÍMICAS

CARRERA DE BIOQUÍMICA CLÍNICA
Nombre: Emmily Lozano
Curso: Sexto semestre
Fecha: 19/10/2019
PRUEBAS BIOQUÍMICAS
1. OXIDASA

Principio: la oxidasa en presencia de O2, citocromo C y un reactivo para oxidasa (oxalato de dimetil-p-
fenilendiamina) oxida el reactivo a un compuesto coloreado – indofenol.
Procedimiento: Discos de oxidasa
-Discos húmedos impregnados con H2O destilada estéril – caja petri
-Colonias de un medio sólido
Resultados: color rosado a púrpura en segundos.

2. TSI – AZÚCAR TRIPLE Y HIERRO

Principio: capacidad de fermentar glucosa, lactosa y sacarosa, producir gas y ácido sulfhídrico (H2S).
Tiosulfato de sodio (Fe3+) y H2S – Sulfuro de Hidrogeno (negro)
Indicador: Rojo fenol (ácido-amarillo) (alcalino-rojo)
Color del medio: rojo
Inoculación: picar el fondo y extender sobre la superficie del medio.
Incubación: 18 a 24 horas a 37ºC
Resultados:
1.- Pico 2.- Pico ácido/fondo 3.- Pico 4.- La presencia de 5.- El
alcalino/fondo ácido ácido (pico alcalino/fondo burbujas, o ruptura ennegrecimiento del
(pico rojo/fondo amarillo/fondo alcalino (pico del medio de cultivo, medio indica que el
amarillo): el
amarillo): el rojo/fondo rojo): el indica que el microorganismo
microorganismo
solamente fermenta microorganismo microorganismo es microorganismo produce ácido
la glucosa. fermenta glucosa, no fermentador de produce gas a partir sulfhídrico
K/A lactosa y/o sacarosa. azúcares. de Glucosa
A/A K/K

3. SIMMONS CITRATO
Principio: capacidad para utilizar citrato como única fuente de carbono y fosfatos de amonio como única fuente de
nitrógeno, produciendo alcalinidad.
Indicador: azul de bromotimol (ácido-amarillo - no se observa) (alcalino-azul de Prusia oscuro).
Color del medio: verde.
Inoculación: extender sobre la superficie del medio.
Incubación: 24 a 48 horas a 35-37ºC.
Resultados:
 +Positivo: Crecimiento con intenso -Negativo: sin crecimiento y/o
color azul en el pico de flauta. En ningún cambio en el color verde.
algunas especies que se sabe que
son Citrato positivo: Crecimiento de
colonias pero sin cambio de color
del medio – falta de tiempo de
incubación 24h.

4. UREA
Principio: capacidad para hidrolizar la urea en dos moléculas de amoniaco por acción de la ureasa con alcalinidad
resultante.
Indicador: Rojo fenol (ácido-amarillo) (alcalino-rosado rojo).
Color del medio: amarillo-naranja.
Inoculación: Líquido: inóculo denso y agitar con suavidad. Sólido: estriar
Incubación: 6 (Proteus spp.) 18 y 24h (algunas cepas de Klebsiella spp., Enterobacter spp.) a 35-37ºC.
Resultados:
+ Positivo: -Negativo: amarillo o amarillo pálido
Color rosado-rojo en todo el medio (líquido o
sólido),
Color rosado-rojo solo en pico de flauta.
Rosado intenso y rápido – Proteusspp.
Rosado débil – Klebsiella pneumoniae

5. MIO (MOVILIDAD, INDOL Y ORNITINA)

MOVILIDAD INDOL ORNITINA
Principio: ver la movilidad de las Principio: capacidad del Principio: capacidad del
bacterias que contienen flagelos. microorganismo de separar indol a microorganismo para
Existen bacterias móviles que partir del triptófano. El indoles descarboxilarun aminoácido
producen variantes inmóviles. detectado por el uso de un reactivo. (ornitina– ornitina descarboxilasa) y
Color del medio: morado-lila Reactivo: R. de Ehrlich(Alcohol formar una amina produciendo
(semisólido) etílico) – xileno o éter alcalinidad del medio.
Inoculación: punción con aguja de R. de Kovacs (Alcohol amílico) Indicador: purpura de bromocresol
inoculación- verticalmente Color del reactivo: amarillo pálido (ácido-amarillo) (alcalino-púrpura).
Incubación: 18 y 24h a 35-37ºC Modo de uso: R. de Kovacs 3-5 Color del medio: purpura
Resultados: gotas de reactivo y agitar el tubo con Incubación: 24 a 48 horas a 37ºC.
+ Positivo: Microorganismos que suavidad. Resultados:
migran desde la línea de siembra y Incubación: 24 a 48 horas a 37ºC +Positivo: Color del medio: púrpura
difunden en el medio, produciendo Resultados: -Negativo: color amarillo en el
turbidez en todo el tubo. +Positivo: En segundos aparece un fondo del tubo que puede ser
-Negativo: crecimiento solo a lo anillo rojo o fucsia brillante. púrpura al final.
largo de la línea de inoculación, -Negativo: No hay ningún anillo.
resto del medio permanece claro. Aparece una capa del color del
reactivo (amarillo).
Variable: color anaranjado (escatol
precursor del indol).

6. LIA (AGAR LISINA HIERRO)

Principio: capacidad del microorganismo para descarboxilar un aminoácido (LISINA) y formar una amina (Cadaverina)
produciendo alcalinidad del medio. Produce gas y ácido sulfhídrico (H2S). Desaminación de la lisina esto produce un
ácido alfa-ceto-carbónico
Tiosulfato de sodio (Fe3+) y H2S – Sulfuro de Hidrogeno (negro)
Indicador: purpura de bromocresol (ácido-amarillo) (alcalino-púrpura)
Color del medio: purpura
Inoculación: punción y estriado en pico de flauta
Incubación: 18 a 24 horas a 37ºC
Resultados:
1.- Decarboxilación de la lisina: 2.- Desaminación de la lisina: 3.- Producción de ácido sulfhídrico
+Positivo: Pico violeta/fondo Pico rojizo/fondo amarillo. Esto Positivo: Ennegrecimiento del
violeta. sucede con cepas del género medio
-Negativo: Pico violeta/fondo Proteus, Providencia y alguna 4.- Producción de gas
amarillo cepas de Morganella spp.

7. FENILALANINA AGAR
Principio: capacidad del microorganismo para desaminar (fenilalanina deaminasa) la fenilalanina (ac. Fenilpirúvico)
produciendo acidez del medio.
Reactivo: Cloruro férrico 10%
Color del medio: amarillo pálido
Color del reactivo: amarillo
Inoculación: estriado en pico de flauta
Incubación: 18 a 24 horas a 37ºC
Modo de uso: Cloruro férrico 5 gotas al tubo inclinado – esperar 1 a 5 min.
Resultados:
+Positivo: desarrollo de color verde -Negativo: sin cambios de color.
pálido a intenso en el pico de flauta El medio permanece amarillo
y en el líquido de condensación. debido al color del reactivo
cloruro férrico.

8. VOGES PROSKAUER (VP)

Principio: Identificación de organismos que fermentar la glucosa, pero rápidamente convierten los productos ácidos en
acetoina y 2,3-butanodiol. Al añadir los reactivos de VP la acetoina (si está presente) es convertida a diacetil, que
reacciona con los nucleótidos de guanidina de la peptona para producir un color rojo.
Reactivo: alfa naftol al 5% en alcohol etílico absoluto e hidróxido de potasio al 40%.
Color del medio: amarillo claro
Color del reactivo: ligeramente pardo o cobre
Inoculación: suspender las colonias en el caldo
Incubación: 18 a 24 horas a 37ºC
Modo de uso: Añadir 0,6 ml de alfa naftol y 0.2 ml de hidróxido de potasio. No agitar el tubo. Dejar a temperatura
ambiente durante 10-15 minutos.
Resultados:
 + Positivo: Desarrollo de un color -Negativo: Sin cambio de color
rojo en pocos minutos. después de la adición del reactivo.

9. ROJO DE METILO (RM)

Principio: Identificación de organismos que fermentar la glucosa, con generación de productos ácidos (ác. Láctico, ác.
Acético y ác. Succínico) que confieren un pH bajo al caldo de cultivo. Al adicionar rojo de metilo en un medio ácido se
identifica una coloración roja.
Reactivo: rojo de metilo al 0.04 %
Color del medio: amarillo claro
Color del reactivo: amarillo claro
Inoculación: suspender las colonias en el caldo
Incubación: 18 a 24 horas a 37ºC
Modo de uso: Añadir 5 gotas rojo de metilo. NO agitar el tubo. Observar la coloración.
Resultados:
+Positivo: Desarrollo de un color -Negativo: Sin cambio de color
rojo en pocos minutos. después de la adición del reactivo.

10. NITRATO
Con esta prueba se investiga la capacidad de las bacterias para reducir los nitratos convirtiéndolos en nitritos o en
nitrógeno, es decir se estudia la presencia de nitrato reductasa y nitrito reductasa.
Se utiliza el medio de cultivo caldo nitratos. Para revelar la presencia de nitritos en el medio se emplearán dos reactivos:
reactivo A (ácido sulfamínico al 0.8% en ácido acético glacial 5N) y reactivo B (α-naftilamina al 0.5% en ácido acético
glacial 5N) que se añadirán tras la incubación.

11. CATALASA
La catalasa es una enzima que poseen la mayoría de las bacterias aerobias. Descompone el peróxido de hidrógeno en
agua y oxígeno. El desprendimiento de burbujas procedentes del oxígeno indica que la prueba es positiva.

12. SIM
Principio: Es un agar semisólido y diferencial, especialmente diseñado para ayudar a la identificación de algunas
bacterias, principalmente de la familia Enterobacteriaceae. Está compuesto por tripteína, peptona, sulfato de hierro,
sulfato de amonio, tiosulfato de sodio y agar. Este medio permite la ejecución de tres importantes pruebas: la producción
de sulfuro de hidrógeno (H2S), la formación de indol y la motilidad, de allí proviene el acrónimo SIM.
SULFURO DE HIDROGENO INDOL. MOTILIDAD

Las bacterias capaces de formar
sulfuro de hidrógeno tomarán el
azufre del tiosulfato de sodio. Una
vez formado el H2S -gas incoloro-,
este reacciona con la sal de hierro
presente en el medio, formando
sulfuro ferroso, claramente visible
(precipitado negro). Las bacterias
que no forman H2S, dejan el medio
del color original (beige).
La triptofanasa es una enzima es la
encargada de clivar al aminoácido
triptófano, con la consecuente
formación de indol (sustancia
incolora), ácido pirúvico y amonio.
Para evidenciar se necesita de
(reactivo de Ehrlich o reactivo de
Kovac´s), calquiera de los dos
reacciona con el indol, formando
una sustancia de color rojo-fucsia
en forma de anillo en la superficie
del agar. Si el anillo color fucsia
aparece la prueba de indol se
interpreta como positiva.
Es una prueba para observar si
existe o no movimiento bacteriano.
Las bacterias que poseen flagelos
son las que dan esta prueba
positiva. Una prueba positiva se
pondrá en evidencia cuando se
observe turbidez, tanto en el
inóculo inicial, como alrededor de
este. En tanto que, las bacterias no
móviles solo se desarrollan en el
trayecto del inóculo inicial.
 CUADRO DE PRUEBAS BIOQUÍMICAS DE BACTERIAS

PRUEBAS BIOQUÍMICAS

Fenilalanina Agar
MIO LIA SIM TSI

SIMMONS
CITRATO

NITRATO
descarboxilasa

descarboxilasa
PICO / BASE
Catalasa
Oxidasa

SULFURO
UREA

Movilidad

Motilidad
Ornitina
BACTERIAS

INDOL
Lisina

BASE
PICO
VP RM

Indol

GAS

H2S
H2S
Escherichia coli - + - - + + (+) K/K (+) - + - + + - + A A + -
Klebsiella
- + + + - - - K/K + - + - - - + (-) A A + -
pneumoniae
Klebsiella oxytoca - + + + - + - K/K + - + - + - + - A A + -
Enterobacter
- + + - + - + K/K + - + - - + + - A A + -
aerogenes
Citrobacter
- + + (+) + + + K/A - - + - + + - + A A + +
diversus
Proteus mirabilis - + + + + - + R/A - + + + - + (-) + K A + +
Serratia marcesens - + + - + - + K/K + - + - - + + - KoA A - -
ANTÍGENOS
Variación en los antígenos de superficie. Una forma de evadir la acción de los anticuerpos del hospedero es
cambiar de un tipo de fimbria a otra, por lo tanto los anticuerpos preformados no se unen a la nueva fimbria formada.
La bacteria también cambia otras proteínas de superficie que pueden servir como blanco para los anticuerpos.
Algunas bacterias encapsuladas están compuestas de polisacáridos que no desencadenan la formación de anticuerpos
porque dichos polisacáridos se parecen mucho a carbohidratos que son ubicuos en los tejidos del hospedero (ácido
siálico y ácido hialurónico).

FACTORES QUE PROMUEVEN LA COLONIZACIÓN E INVASIÓN AL HOSPEDERO

Factor Comentario
Adhesinas fimbriales Se encuentra en bacterias gramnegativas y grampositivas
y sirve para la adherencia
Adhesinas no fimbriales En bacterias gramnegativas y grampositivas, su función
es la adherencia
Internalización en células M Invasividad
Movilidad y quimiotáxis Colonización y permanencia en el hospedero
IgA proteasa Disminuye la viscosidad del moco
Sideróforos Ayuda a sobrevivir a la bacteria
Cápsula Antifagocítica y factor de diseminación
Variación antigénica Evasión de la respuesta inmune

Antígenos bacterianos
Antígeno O: antígenos polisacáridos. Esta infectado por bacterias Gram-negativas, los lipopolisacaridos de la pared
celular se unen a un receptor de tipo Toll, y asi inducen la producción de una mezcla de citoquinas. • Dado que estas
citoquinas son toxicas, los lipopolisacaridos bacterianos también se denominan endotoxinas
Antígeno F o K: (Cápsula) Los pilis y las fimbrias son proyecciones cortas que cubren la superficie de algunas
bacterias Gram-negativas. Los anticuerpos frente a las fimbrias tienen una función protectora, dado que evita que
las bacterias se fijen a las superficies del organismo.
Antígeno H: antígenos flagelares.

Antigenos de la superficie celular:

Antigeno ABO
 BROTE CAUSADOS POR LA O157:H7

El serotipo O157:H7 ha causado más de 60 brotes de toxi infecciones alimentarias en los Estados Unidos. El
consumo de hamburguesas y derivados cárnicos poco cocinados y contaminados explica la mayoría de éstos, aunque
también se han descrito brotes producidos por el consumo de leche no higienizada en este país y en Canadá. La
higiene deficiente, junto con la diseminación secundaria por contacto interpersonal, constituye otra vía de
transmisión. En los últimos años, sin embargo, ha habido varios brotes producidos por el serotipo O157:H7 en los
que se ha implicado a ciertos vehículos de infección poco frecuentes, entre los que se incluyen los alimentos ácidos,
frutas, vegetales, yogur y agua.

- E. coli productora de toxina Shiga es una bacteria que puede causar graves enfermedades a través de los alimentos.
- El origen principal de los brotes de E. coli productora de toxina Shiga son los productos de carne picada cruda o
poco cocinada, la leche cruda y las hortalizas contaminadas por materia fecal.

Síntomas:

 Calambres abdominales y la diarrea, que puede progresar en algunos casos a diarrea sanguinolenta (colitis
hemorrágica).
 Fiebre y vómitos.
 Síndrome hemolítico urémico (SHU). El SHU se caracteriza por una insuficiencia renal aguda, anemia
hemolítica y trombocitopenia (deficencia de plaquetas).
 El periodo de incubación varía entre tres y ocho días, con una mediana de tres a cuatro días. Los pacientes se
recuperan en diez días.
 La tasa de letalidad es de 3%-5%.
 El SHU es la causa más común de insuficiencia renal aguda en los niños de corta edad.
 Complicaciones neurológicas (como convulsiones, accidente cerebrovascular y coma) en el 25% de los
pacientes con SHU, así como secuelas renales crónicas, generalmente leves, en aproximadamente un 50% de
los supervivientes.

CASOS:

1989 El agua de consumo como la de uso recreativo pueden servir como vehículo para la
Missouri transmisión de las infecciones por el E. coli O157:H7.
Es el primer brote hídrico asociado con este microorganismo. Los ajustes de la cloración
en el suministro de agua durante las reparaciones son, por tanto, decisivos en la
prevención de brotes de origen hídrico.
1991 Se realizó el seguimiento al brote del serotipo O157:H7 que afectó a 23 personas, hasta
llegar a implicar en el brote el consumo de sidra recién pisada.
El serotipo O157:H7 pueden tolerar condiciones ácidas y que algunas cepas persisten
en medios que tienen un pH incluso de 2, o en sidra enfriada (8 ºC) durante 10-31 días.
Se sospechó que las manzanas caídas estaban contaminadas por estiércol.
1993 Serie de brotes en restaurantes que se relacionaron con otro alimento ácido, el serotipo
O157:H7 tolera la acidez. La fuente de epidemiológia y otros datos apuntaban a la
mayonesa o a salsas similares, si bien se sospechó que la manipulación de la mayonesa
o la contaminación de la misma con caldos de carne o productos cárnicos podrá haber
sido su origen.
2011 Las fresas de Oregón han causado el primer brote de Escherichia.coli (E.coli)
descubierto en esta fruta en EE UU. La bacteria, de momento, ha causado la muerte de
una anciana y hubo 16 infectados.
2018 Canadá External, y la Administración de Alimentos y Medicamentos (FDA) de los EE.
UU. External investigaron un brote multiestatal de infecciones por Escherichia coli
O157:H7 (E. coli O157:H7) productora de la toxina de Shiga encontrado en lechuga
romana de las regiones de cultivo de la costa central del norte y del centro de California.
Veinticinco personas enfermas fueron hospitalizadas, incluidas dos que presentaron
síndrome urémico hemolítico, un tipo de insuficiencia renal. No se notificaron muertes.