PRÁCTICA 5.

TINCIÓN SIMPLE
Fecha de realización: 15/10/21
OBJETIVOS: Aprender a realizar un frotis bacteriano y una tinción simple. Observar
morfologías celulares y bacterianas. Practicar con el manejo del microscopio.

1º PARTE: TINCIÓN SIMPLE DE LEVADURAS.

Procedimiento

1- Se deposita una gota de la muestra de levaduras en un portaobjetos, preparada con

anterioridad para la observación en fresco.

2- Se extiende la muestra con un asa de siembra, esterilizada antes y después de su uso.

3- Se coloca el portaobjetos al lado del mechero bunsen hasta que se seque por
completo.

4- Después del secado se pasa por encima del mechero bunsen tres o cuatro veces.

5- Se procede a colocar colorante azul de metileno de manera abundante y dejar actuar

por dos minutos.
 6- Luego se inclina el portaobjetos y se aplica agua empezando por la parte superior para
eliminar el exceso de colorante.

7- Esperar unos minutos hasta que el agua se evapore o secarlo sin frotar para que la
muestra no se dañe.
8- Observar en el microscopio.

RESULTADOS EXPERIMENTALES

En estas imagenes se observan muchos círculos de color violeta.

 RESULTADOS FINALES

Primera tinción realizada Segunda tinción realizada el día 15 /10/21

Se puede observar que no se realizó de Ahí se puede observar mejor las levaduras

Manera correcta la extensión y por eso porque se pudo realizar mejor la extensión.

Las levaduras se ven así de encimadas. Con esto se puede constatar de lo importante

que es realizar de manera correcta una

extensión. Fue observada con un aumento

total de 40x. Y se utilizó el colorante azul de

metileno dejándolo actuar por dos minutos.

Los círculos de color violetas que se ven en ambas imágenes son las levaduras.

Materiales utilizados:

- Pipeta Pasteur - Colorante azul de metileno.

- Portaobjetos - Frasco lavador
- Cubreobjetos - Microscopio
- Asa de siembra - Mechero
- Mechero Bunsen
- Soporte de tinciones.
Procedimiento de encendido del mechero bunsen

1-Conectar un extremo del tubo de goma a la boca de toma de

gas con la llave cerrada y el otro extremo del mismo a la
entrada de gas ubicada en la base del mechero.

2-Verificar que la entrada de aire del mechero se encuentre

cerrada.

3-Encender un fósforo teniendo la precaución de hacerlo

alejado del cuerpo.

4-Acercar el fósforo encendido a unos 5 cm por encima de la

boca del mechero y en simultáneo abrir la llave de salida de
gas, en ese momento se forma una llama de color amarillo. Una llama de estas características
nunca debe ser usada para calentar.

5- A medida que ingresa más oxígeno la llama se vuelve azulada

Procedimiento de esterilización de asa de siembra.

El asa de siembra debe de esterilizarse a la llama antes de usarla y después de haber
sido usada. Debe de esterilizarse antes para evitar la contaminación de los
microorganismos en estudio con otros microorganismos que estuvieran presentes en
el filamento metálico. Debe de esterilizarse después de su uso para evitar que los
microorganismos que hemos tomado contaminen el laboratorio o sean incluso un
riesgo biosanitario.
Para esterilizar el asa de siembra ponerla lo más vertical posible y acercar el
filamento a la llama del mechero Bunsen. Cuando todo el filamento se haya puesto al
rojo vivo se habrá conseguido la esterilización. En ese momento retirarla y dejar enfriar
antes de tomar la muestra, para evitar
que el calor destruya a los
microorganismos. asa de siembra.

OBSERVACIONES Y CONCLUSIONES.
Durante esta práctica se tuvieron que volver a repetir ya que la muestra estaba muy
concentrada y primero se tenía que hacer una dilución. Al concluir este trabajo me
pude dar cuenta de lo importante que es hacer una dilución para lograr que la tinción
salga perfectamente.
2º PARTE: TINCIÓN SIMPLE DE CEBOLLA.
Fecha de realización: 19/10/21

Procedimiento de tinción simple de la cebolla.

1- Se separa y se corta un trozo de cebolla

2- Se coloca en un portaobjetos y después se deposita una gota de agua para

evitar pliegues .

3- Se coloca un par de gotas de colorante azul de metileno y se deja actuar

dos minutos.

4- A continuación, eliminamos el exceso de colorante y lavamos la

preparación dejando caer agua sobre ella mientras la mantenemos
inclinada sobre la cubeta de tinciones
 5- Se tapa con el cubreobjetos y se seca el exceso de agua.

6- Se observa la muestra en el microscopio.

RESULTADOS EXPERIMENTALES

Se observan unas rayas alargadas y grandes con restos de azul de metileno .

RESULTADOS FINALES

Se observan perfectamente las células vegetales, la membrana celular celulósica se

destaca muy clara, teñida por el colorante
Fue observado con un aumento total de 400x
Se usó el colorante azul de metileno.
Materiales utilizados
- Portaobjetos - Cebolla (muestra)
- Cubreobjetos - Cubeta de tinciones
- Pinza - Mechero
- Azul de metileno (colorante) - Microscopio
- Frasco lavador - Levadura (muestra)

OBSERVACIONES Y CONCLUSIONES.
En esta práctica se pudo observar perfectamente las células de la cebolla y por sobre
todo a aprender a hacer una tinción.
 3º PARTE: TINCIÓN SIMPLE DE MOHOS.
Fecha de realización: 19/10/21
Procedimiento de tinción de mohos
1- Se prepara un portaobjetos y se deposita dos gotas del colorante lactofenol .

2- Con un trozo de la medida de un portaobjetos se presiona sobre la colonia para

tomar una porción.
3- Posteriormente se pega en el portaobjetos preparado con anterioridad
empezando por extremo llegando hasta la final.

4- Y por último se procede a llevar la muestra al microscopio para ser observado.

Resultados de las tinciones realizadas el día 19/10/2021.
RESULTADOS EXPERIMENTALES
Moho de aguacate 40x10=400x Moho de uva 4x10=40x

Moho de queso 40x10=400x

- Muestra 1 (Aguacate) : se observan una especie de rama de color azul por el

colorante.
- Muestra 2 (uva) : también se observa una especie de rama de color azul por el
colorante .
- Muestra 3 (queso): Se observan como una especie de manchas .
 RESULTADOS FINALES.

Moho de aguacate 40x10=400x Moho de uva 4x10=40x

Moho de queso 40x10=400x

- Muestra 1 (Aguacate): se logra ver el hongo Cladosporium .

- Muestra 2 (uva) : se observa el penicilium perfectamente.
- Muestra 3 (queso): se observan el Aspergillus , un hongo que normalmente
ataca al queso.
Materiales
- Portaobjetos
- Cinta adhesiva
- Moho de queso, uva y aguacate (muestras)
- Colorante azul de lactofenol
- Microscopio

CONCLUSIONES Y OBSERVACIONES
Durante esta práctica se tuvieron que volver a repetir algunas como la tinción del
queso porque al principio no se lograba observar nada . Gracias a esta práctica pude
aprender a hacer otro tipo de tinción con otro colorante que es el azul de lactofenol ,
sin olvidar de lo mucho que aprende en este tipo de prácticas porque además vas
conociendo algunos tipos de hongos que atacan a alimentos que normalmente
consumimos .