TINCIONES MICROBIANAS

Introducción
Los rasgos morfológicos de los organismos superiores se han utilizado durante
muchos años para clasificar a éstos de una manera bastante efectiva. Debido a
que los rasgos anatómicos de estos organismos son tan diferentes, resulta muy
fácil utilizarlos como método de clasificación.
En cambio, los microorganismos lucen de una manera muy similar todos al
ponerlos bajo la luz de un microscopio. Aunque la morfología de los
microorganismos no los clasifica de una manera tan efectiva, si que sirve para
identificarlos fácilmente.
Existen diferentes tipos de tinciones microbianas, que permiten que los
microorganismos no luzcan todos por igual bajo la luz del microscopio, y así
poder clasificarlos en función de algunas de sus características estructurales.

Tarea
Los alumnos realizarán en el laboratorio dos tipos de tinciones microbianas:
-Tinción de Gram
-Tinción de Ziehl – Neelsen o Ácido – Alcohol Resistente (BAAR)
Una vez realizadas estas tinciones, el alumno deberá clasificar las bacterias en
función de los resultados obtenidos para cada tipo de tinción.
Por último, se proporcionarán al alumno distintas preparaciones de bacterias ya
teñidas y deberá reconocer al microscopio el tipo de tinción utilizado en cada
caso y el tipo de bacterias según cada tinción.
 Proceso
Para llevar a cabo todas las tinciones, primero será necesario fijar la muestra.
Para ello seguiremos los siguientes pasos:
- Colocaremos en un porta una gota de agua corriente.
- Con un asa, previamente esterilizada, cogeremos una muestra de la colonia de
bacterias que queremos analizar, y la extenderemos por el porta con ayuda de
la gota de agua. Este proceso se realizará cerca de una llama para mantener la
preparación en condiciones de esterilidad.
- Luego calentaremos el porta sobre un mechero de alcohol hasta que el agua
se evapore. Es muy importante mantener el porta a cierta distancia del mechero
y siempre en movimiento para no quemar las bacterias; el agua del porta nunca
debe llegar a hervir. Para sujetar el porta encima de la llama sin quemarnos
utilizaremos unas pinzas de madera.
La muestra ya estará fijada para poder llevar a cabo las tinciones.
Todas las tinciones se llevarán a cabo colocando el porta en una rejilla dispuesta
sobre un bol de vidrio o de plástico.

Tinción de Gram:
- Primero se cubre por completo el porta con la muestra, del colorante cristal
violeta, y se deja actuar durante 1 minuto.
- Transcurrido el tiempo se aclara el colorante que no se haya fijado con
abundante agua corriente, evitando que el agua golpee directamente sobre la
muestra.
- A continuación se aplica sobre la muestra lugol durante 1 minuto. Éste actuará
como mordiente, permitiendo que el cristal violeta se fije a las bacterias.
- Transcurrido el tiempo se vuelve a aclarar con agua abundante.
- El siguiente paso es decolorar la muestra con etanol; para ello inclinaremos el
porta y echaremos 3 gotas de etanol en la parte superior, permitiendo que
resbalen por todo el porta hasta la parte inferior de éste. Una vez que lleguen a
la parte inferior aclararemos la muestra con abundante agua corriente.
Es importante realizar este paso lo más rápido posible, ya que el etanol arrastrará
a su paso el colorante que no se haya fijado a la muestra, pero si se deja actuar
más tiempo del debido, la destruirá.
- Por último, aplicaremos safranina, un colorante de contraste, durante 30
segundos a la muestra y aclararemos con abundante agua corriente.
- Para secar la muestra utilizaremos papel normal, presionando la muestra contra
éste sin frotar. Una vez seca se pone un cubre sobre la muestra y observamos
al microscopio:
Si el etanol no ha eliminado el primer colorante, las bacterias se verán de color
morado, y diremos que nos encontramos ante bacterias Gram+.
Si por el contrario el etanol si ha eliminado el cristal violeta, las bacterias se
observarán de un color rosado correspondiente a la safranina, y nos
encontraremos ante bacterias Gram-.

Tinción de Ziehl – Neelsen:

- En primer lugar teñiremos la preparación con fucsina fenicada, dejando actuar
al colorante 5 minutos. Durante este tiempo se calentará la muestra con un
mechero del mismo modo que realizamos la fijación de las preparaciones,
añadiendo más colorante cuando sea necesario para que la muestra no se
seque.
- Transcurrido este tiempo aclararemos con abundante agua corriente.
- A continuación decoloraremos la preparación con ácido-alcohol, dejándolo
actuar durante 30 segundos aproximadamente.
- Cuando la preparación tome un color rosado, aclararemos el exceso de
disolvente con abundante agua corriente.
- Por último, teñiremos la muestra con azul de metileno, dejándolo actuar durante
1 minuto.
- Luego aclararemos con agua corriente y secaremos la preparación como en la
técnica anterior.
Después de poner un cubre, al microscopio observaremos:
Si las bacterias son ácido-alcohol resistentes, no permitirán que el azul de
metileno entre en sus estructuras, y se observarán de color rosa. (BAAR+)
En cambio, tomarán el color azul del azul de metileno si no son ácido-alcohol
resistentes. (BAAR)

Recursos
Podrá consultar por su cuenta todos los medios que estén a su alcance: libros,
páginas web, videos, etc.
Aquí dejo el enlace a algunas páginas de internet que pueden ser interesantes
para el alumno, y cito algún libro que puede ser de gran ayuda:

http://www.revistaciencias.com/publicaciones/EElpZEVkykPMncqxmd.php
https://books.google.es/books?id=MfW3TuHLa4gC&pg=PA30&lpg=PA30&dq=ti
ncion+acido-
alcohol+resistente&source=bl&ots=4m1dRE&hl=es#v=onepage&q&f=false

http://www.microinmuno.qb.fcen.uba.ar/SeminarioTinciones.htm

Evaluación
El 50% de la nota final de esta práctica consistirá en la realización de una de las
tres tinciones. La tinción que se realice será elegida por el docente.
El otro 50% de la nota consistirá en la identificación al microscopio de 5
preparaciones bacterianas. Será necesario indicar el tipo de tinción y el tipo de
bacteria según la tinción utilizada para cada una de las 5 preparaciones.

Conclusión
El objetivo que se persigue con esta práctica es que el alumno sepa realizar las
tinciones microbianas básicas, y que sea capaz de reconocer estas tinciones al
verlas ya hechas.
Además de saber identificar diferentes tipos de bacterias en función de las
características estructurales que se ponen de manifiesto con estas tinciones.
 BACTERIOLOGÍA

Introducción:
La bacteriología como ciencia que estudia las bacterias sus actividades, forma,
estructura y fisiología y metabolismo, debemos conocer cada parte de ellos y
conocer su comportamiento. Y para esto debemos tratar de hacer un una
investigación sobre el comportamiento de los microorganismo.

Tarea:
Para estudio de las bacterias debemos saber los siguientes aspectos que son:
1-su estructura y fisiología
2-cuales son la parte obligatoria y espéciale de su estructura
3- conocer el diferente tipo de microorganismo
4-Determinar su aspecto metabolico.
Para tener constancia de nuestro trabajo haremos mentefactos, organizamos l
diferente grupo de cuatro, cada uno trabajara una parte de la investigación y
después lo pondremos en común para construir el mentefacto.
Uno del grupo trabajara con el aspecto estructural, otro grupo con la fisiología y
metabolismo, otro con la clasificación del microorganismo y el cuarto con
comportamiento metabolico.
Proceso:
Actividad 1:
Haremos grupo de cuatro personas. El primer grupo en la investigación de la
estructura de los microorganismos,
El segundo grupo trabajara con la fisiología y metabolismo el tercer grupo
sobre la clasificacion y el otro sobre la parte bioquímica,
Actividad 2:
obtener datos e imagen de la pagina
Recurso utilizado:
Internet
Pagina Web.
https://books.google.com.bo/books?id=TdsoWPEYaoUC&printsec=frontcover&
dq=bacteriologia+clinica&hl=es-
419&sa=X&ved=0ahUKEwiC2fL7n8faAhWQzlkKHUzyA1YQ6AEILzAB#v=onep
age&q=bacteriologia%20clinica&f=false
http://www.fmed.uba.ar/depto/microbiologia/catedra2/sem101.pdf

Evaluación:
Se puede evaluar el desempeño de cada uno del estudiante en su
investigación
Se puede evaluar la habilidad del estudiante con el uso el recurso.

Conclusión:
Al finalizar esta tarea pude conocer que los microorganismo tiene diferente
comportamiento y que son de gran relevancia, por que tiene una gran relación
con los seres vivo, como es el humano, las planta y el medio ambiente. Puesto
que se encuentran en todo el ecosistema.