OBSERVACIÓN DE LEVADURAS AL MICROSCOPIO

Carmen Sandes

El objetivo es observar la morfología de las levaduras y su división por gemación mediante una
tinción convencional.

Fundamento
La levadura se reproduce por gemación; en la célula madre se forma y crece una yema que, cuando
alcanza el tamaño adulto, se separa dando vida a una nueva célula.
Las levaduras dentro del grupo de microorganismos tienen un papel muy importante en la
producción y deterioro de los alimentos, tecnológicamente, son los responsables e intervienen en la
fabricación de tres de los alimentos más comercializados: el pan, el vino y la cerveza. Las levaduras
comúnmente utilizadas en la industria son las que corresponden a los géneros Saccharomyces,
Candida y Kluyveromyces, de las cuales Saccharomyces tiene más importancia comercial.
Estas se adaptan al crecimiento sobre medios que contengan azúcares ya que necesitan el azúcar
para vivir. Consume azúcar y en su lugar produce dióxido de carbono.

Material
- Portaobjetos
- Asa de siembra
- Pipeta pasteur
- Vaso de precipitados
- Microscopio óptico
- Mechero bunsen
·Reactivos:
- Colorante de azul de metileno
- Azúcar

Procedimiento
1. Preparación de la muestra para su posterior visualización:
1.1 Añada levadura de panadería (Saccharomyces) en un vaso de precipitados.
1.2 Añada bastante agua.
1.3 Añada azúcar, las levaduras son un ser microscópico que necesita azúcar para vivir.
1.4 Agita hasta que la solución quede disuelta y con un aspecto homogéneo.
1.5 Incube en una estufa a 37º 24 h para que la levadura se divida por gemación.
2. Observación in vivo:
2.1 Deposita una gota con una pipeta Pasteur de la solución del vaso de precipitados sobre
un portaobjetos limpio.
2.2 Tapa con un cubreobjetos.
2.3 Observa al microscopio.
3. Observación con la muestra fijada:
3.1 Deposita una gota con una pipeta Pasteur de la solución del vaso de precipitados sobre
un portaobjetos limpio.
3.2 Extienda suavemente la gota sobre toda la superficie del porta con un asa estéril.

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 3.3 Fija la extensión pasándola suavemente 3 o 4 veces sobre la llama del mechero bunsen.
3.4 Coloca el portaobjetos, en el soporte y cubra con colorante azul de metileno durante 15
minutos.
3.5 Lava con agua para arrastrar el exceso de colorante.
3.6 Deja secar y observa al microscopio.

Observación tras incubación:

4. Observación in vivo:
2.1 Deposita una gota con una pipeta Pasteur de la solución del vaso de precipitados sobre
un portaobjetos limpio.
2.2 Tapa con un cubreobjetos.
2.3 Observa al microscopio.
5. Observación con la muestra fijada:
3.1 Deposita una gota con una pipeta Pasteur de la solución del vaso de precipitados sobre
un portaobjetos limpio.
3.2 Extienda suavemente la gota sobre toda la superficie del porta con un asa estéril.
3.3 Fija la extensión pasándola suavemente 3 o 4 veces sobre la llama del mechero bunsen.
3.4 Coloca el portaobjetos, en el soporte y cubra con colorante azul de metileno durante 15
minutos.
3.5 Lava con agua para arrastrar el exceso de colorante.
3.6 Deja secar y observa al microscopio.

Resultados

Fig.1 Observación microscópica x40 de levaduras in vivo

Se observan células de distintos tamaños, las pequeñas corresponden a células recién formadas por
gemación que aún no han alcanzado su tamaño normal.

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Fig. 2 Observación microscópica x40 de levaduras con la muestra fijada y teñida con azul de
metileno

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 CULTIVO DE HONGOS FILAMENTOSOS

El objetivo es conocer e identificar mediante aspectos morfológicos los distintos tipos de hongos que
se pueden encontrar. Se basa en el examen microscópico de la colonia y en sus características
microscópicas. Semejanzas macroscópicas como la forma de la colonia, el color de la superficie, la
textura y la producción de pigmentos son muy útiles para la identificación.

Fundamento:
Los hongos son microorganismos eucariotas de mayor tamaño y complejidad que las bacterias. Los
hongos se pueden dividir en dos grupos: mohos (hongos filamentosos) y levaduras.
Los mohos presentan una estructura vegetativa denominada micelio, el cual está formado por una
serie de tubos rígidos ramificados, dentro de los cuales se encuentra el citoplasma multinucleado.
Estos tubos reciben el nombre de hifas. De esta forma a partir de una espora en germinación se
desarrolla una hifa, esta se ramifica y forma un micelio.

Material:
- Placa con hongos crecidos
- Portaobjetos
- Cubreobjetos
- Asa de picadura
- Celo
· Reactivos:
- Agar Saboraud
- Agar sangre
- Azul de metileno
- Azul de lactofenol

Procedimiento
1. Genera una zona aséptica libre de partículas con el mechero bunsen.
2. Esteriliza la asa de siembra con el mechero bunsen antes de recoger los hongos.
3. Toma una muestra de una placa de colonia de hongos que ya han crecido.
4. Siembra en dos placas de agar Sabouraud cuatro puntos de la placa con la asa de picadura.
5. Repita el paso anterior pero con una placa de agar sangre.
6. Incuba 7 días a 35ºC.
7. Deposita dos gotas de azul de lactofenol o de azul de metileno sobre un portaobjetos limpio.
8. Pega un trozo de celo en un extremo de una asa estéril.
9. Pasa el celo por el borde exterior de la colonia que ha crecido y pegala en el portaobjetos
sobre el colorante.
10. Cubra la preparación con un cubreobjetos.
11. Observa al microscopio y describe lo que esté visualizando.

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Resultados:

Fig.1 . Observación microscópica x40 de hifas teñidas con azul de metileno.

Fig 2. Observación microscópica x40 de hifas teñidas con azul de metileno.

Su forma es filamentosa y de tipo tubular con paredes celulares, pudiendo presentar tabiques o no y
que contienen en su interior citoplasma junto con pequeñas estructuras con morfologías y funciones
determinadas organoides.

Fig 3. Placa de agar de chocolate con levaduras aisladas

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Observaciones:

Fig 4. Levaduras observación in vivo x40

Tras la incubación no obtuvimos hongos filamentosos sino levaduras

Fig 5. Observación de levaduras con la muestra fijada x40 mediante azul de lactofenol

Conclusión común:
Los hongos al igual que las bacterias son seres vivos microscópicos ya que estos también poseen
una estructura morfológica lo cual es indispensable para que puedan subsistir. Los hongos son
dependientes de otros factores para desarrollarse, tal como la humedad. Es importante determinar
los hongos, en caso de contaminación, de qué especie se trata, ya que es vital para saber la fuente si
no pertenece a la flora propia del entorno.