UNIVERSIDAD MARÍA AUXILIADORA

FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD

Carrera Profesional de Farmacia y Bioquímica

PRÁCTICA N°8
Determinación de Proteínas Totales.
Curso : BIOQUIMICA

Docente : León Mejía Enrique

Alumna : Cerna Vásquez, Dilcer

De la cruz Tushupe, Cristina

Salvatierra Sulca, Alejandra

Ciclo : VI

Turno : Mañana

2018

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 PRACTICA N°8
Determinación de Proteínas Totales y albúmina

I. INTRODUCCION
Las proteínas son compuestos orgánicos macromoleculares, ampliamente

distribuidos en el organismo y esenciales para la vida. Actúan como

elementos estructurales y de transporte y aparecen bajo la forma de

enzimas, hormonas, anticuerpos, factores de coagulación, etc. La proteína

más abundante en plasma es la albúmina. Una de sus funciones más

importantes es la de permitir el transporte de ácidos grasos, hormonas

esteroides, bilirrubina, catecolaminas, que en forma libre son insolubles en

medio acuoso. La concentración de albúmina en plasma influye

notablemente en el mantenimiento de la presión coloidosmótica, lo que

estaría relacionado con su relativamente bajo peso molecular y su gran

carga neta. En condiciones patológicas como pérdidas renales, desnutrición,

infecciones prolongadas, etc., suelen presentarse hipoproteinemias,

mientras que en otras como mieloma múltiple, endocarditis bacteriana y

hemoconcentraciones de diversos orígenes, se observan hiperproteinemias.

En general, ambas situaciones se ven acompañadas también por

hipoalbuminemias. Los aumentos anormales de albúmina son ocasionales y

se relacionan casi siempre con deshidratación que produce el consecuente

aumento en el contenido proteico del plasma. (1)

2
II. MARCO TEÓRICO

1. Proteínas totales

Las proteínas totales de nuestro organismo son un conjunto de

compuestos orgánicos macromoleculares, de un peso molecular

elevado, que están formadas por moléculas llamadas aminoácidos que

se unen entre sí por enlaces peptídicos.(1)

Proteínas totales en suero

Cuando se hace referencia a las proteínas totales en suero, se trata una

medición aproximada de todas las proteínas presentes en la parte

líquida de la sangre. La prueba que determina las proteínas totales en

sangre, examina específicamente la cantidad total de dos tipos de

proteínas: globulinas y albúmina. Este examen a menudo se hace para

diagnosticar problemas nutricionales, enfermedad renal o enfermedad

hepática. Si los niveles de proteínas totales son anormales, por ejemplo

en caso de que el paciente presente proteínas totales bajas, es

necesario realizar exámenes adicionales con el fin de identificar el

problema específico.

Enfermedades relacionadas con las proteínas totales

Las proteínas totales son útiles a la hora de realizar el seguimiento de

los cambios en los niveles de proteínas que causan diversos estados de

enfermedad. Generalmente la comprobación de las proteínas totales se

realiza junto con otras pruebas como la electroforesis de proteínas, la

seroalbúmina o las pruebas de la función hepática. La determinación de

los niveles de proteínas totales es útil en la detección de:

3
 Hiperproteinemias causada por deshidratación, hemoconcentración o

aumento en la concentración de proteínas específicas.

Hipoproteinemias por hemodilución producida por un defecto en la

realización de la síntesis proteica, catabolismo proteico excesivo o

perdidas excesivas (hemorragias). La deshidratación, las enfermedades

hepáticas crónicas y el mieloma múltiple son estados que pueden

producir niveles altos de proteínas totales. El descenso de los niveles de

proteínas totales es propio del fallo hepático terminal y de la enfermedad

renal. Con frecuencia se calcula una proporción de albúmina/globulina a

fin de obtener información adicional. El diagnóstico clínico debe

realizarse teniendo en cuenta todos los datos clínicos y de laboratorio.

Valores normales de proteínas totales

El rango normal de proteínas totales es de 6.0 a 8.3 gr/dl (gramos por

decilitro). La cantidad considerada como valor normal de proteínas

totales puede variar ligeramente entre pruebas realizadas por distintos

laboratorios.(2)

2. Albúmina

La albúmina sérica constituye más de la mitad de las proteínas

sanguíneas (aproximadamente un 600 /0 Ó 4.2 gr/100 mI), y en una

forma muy general representa aproximadamente el 500 /0 de la actividad

sintética del hígado.

La albúmina humana es una pequeña proteína relativamente simétrica

con un peso molecular aproximadamente de 66.000 a 69.000 Ángstrom.,

y que siendo la principal proteína del plasma, es una molécula altamente

4
soluble, que a pesar de su elevada carga negativa puede ligarse

reversiblemente tanto con cationes como con aniones, lo que hace

posible que su situación plasmática sea óptima para poder transportar o

inactivar una serie de sustancias como metales pesados, drogas,

tinturas, ácidos grasos, hormonas y enzimas.

La albúmina es sintetizada en las células hepáticas y se ha calculado que

existe entre 200 y 500 microgramos de albúmina por cada gramo de

tejido hepático. Hay una serie de factores que influyen sustancialmente

en las síntesis hepáticas de albúmina y entre los más importantes se

incluyen la nutrición, el ambiente, algunas hormonas y la presencia o no

de enfermedad. Entre las hormonas que se han demostrado que tienen

efecto sobre la síntesis hepática de la albúmina, están la hormona

tiroidea, la insulina, la hormona de crecimiento, la testosterona, la ACTH

y los corticoides adrenales. Una vez sintetizada la molécula de albúmina,

tiene dos rutas para pasar a la circulación: puede pasar directamente a

través de la pared de las células hepáticas a los sinusoides, o

alternativamente puede pasar al espacio conocido como espacio de

Disse, que está situado entre la célula hepática y la pared sinusoidal,

pasando desde ahí a los linfáticos hepáticos, al conducto torácico y

finalmente al compartimento intravascular.(3)

Control de la albúmina

La albúmina es una proteína, que contiene el 55-65 % de la cantidad

proteica en el plasma. Tiene un peso molecular de 66,248 Ángstrom.
Cuyas funciones son:

- Transporta en la sangre numerosas sustancias como: ácido graso

libre, bilirrubina, muchas hormonas, calcio, numerosos fármacos.

5
 - Otra función importante es la de regular la presión osmótica.
- La concentración normal sérica es de 3,5-5,0 g/dl. La cual representa
2/5 parte de toda la albúmina presente en el organismo.
- Los neonatos y ancianos tienen una cantidad de albúmina más baja.
- Se habla de hipoalbuminemia, cuando el contenido de albúmina está
debajo de 3,2g/dl, y de manifestaciones edematosas, debajo de 2,5-
3,0g/dl.
La determinación de la albúmina sérica es importante en el diagnóstico
de hipoalbuminemia. Las principales causas son:
a) Disminución de síntesis (hepatopatía grave, cirrosis, etc.).
b) Disminución alimenticia y mala absorción.
c) Eliminación por causas endógenas (diarrea masiva, síndrome
nefrótico, etc.) y exógenas.
d) (Quemaduras).(4)

III. MATERIALES
– Punzones
– Tubo de ensayo
– Aguja
– Algodón
– Alcohol
– Micropipeta
– Tips

IV. PARTE EXPERIMENTAL

Determinación de proteínas totales

Fundamento:
Para la determinación de proteínas totales se utilizó el reactivo de Biuret en
cuya reacción se forma un quelato entre el ión Cu+2 y los enlaces peptídicos
de las proteínas en medio alcalino con la formación de un complejo
coloreado violeta cuya absorbancia se mide fotométricamente. La intensidad

6
 del color producido es proporcional a la concentración de proteínas en la
muestra.
Procedimiento:

Determinación de albúmina
Fundamento:
Método BCG.
Este kit se basa en el que la albúmina se une con el BCG y provoca un
cambio en el espectro de absorción del tinte. El complejo tinte-albúmina
formado tiene un pico de absorbancia a 625 nm, que es proporcional a la
concentración de albúmina presente en la muestra.
Reactivo para la dosificación cuantitativa de la albumina en el plasma o el
suero humano.
Reacción en 3 minutos a temperatura ambiente.
Lectura a punto final a 625 nm (absorbancia)

Procedimiento:

V. RESULTADOS

VI. CONCLUCIONES

VII. CUESTIONARIO
1. Composición química del reactivo de Biuret

El Reactivo de Biuret es aquel que detecta la presencia de proteínas,

péptidos cortos y otros compuestos con dos o más enlaces peptídicos en
sustancias de composición desconocida.

7
 Está hecho de hidróxido potásico (KOH) y sulfato cúprico (CuSO4), junto
con tartrato de sodio y potasio (KNaC4O6·4H2O). El reactivo, de color
azul, cambia a violeta en presencia de proteínas, y vira a rosa cuando se
combina con polipéptidos de cadena corta. El hidróxido de potasio no
participa en la reacción, pero proporciona el medio alcalino necesario
para que tenga lugar.

Se usa normalmente en el ensayo de Biuret, un método colorimétrico

que permite determinar la concentración de proteínas de una muestra
mediante espectroscopía ultravioleta-visible a una longitud de onda de
540 nm (para detectar el ion Cu2+).(5)

Composición Del Reactivo De Biuret

Ingredientes activos Concentración
Sulfato de cobre II 12 mmol/L
Tartrato doble de sodio y potasio 32 mmol/L
Yoduro potásico 30 mmol/L
Hidróxido sódico 600 mmol/L
pH 13,5 ± 0,1 a 20°C.

2. ¿Qué son las globulinas y cuáles son sus clases?

La globulina es una proteína de la sangre que puede actuar como
enzima o como portadora de hormonas a diversas partes del organismo.
Sirve principalmente para hacer frente a infecciones y mejorar el proceso
de coagulación de la sangre.

Hay cuatro tipos: gamma globulinas, globulinas beta, alfa-2 globulinas y

alfa-1 globulinas. Tienen una relación directa con el sistema inmune, ya
que es el responsable de la secreción de una parte de estas proteínas,
mientras que el hígado es responsable de la otra.

Entre las globulinas más importantes destacan las seroglobulinas (de la

sangre), las lactoglobulinas (de la leche), las ovoglobulinas (del huevo),
la legúmina, el fibrinógeno, los anticuerpos (α-globulinas) y numerosas
proteínas de las semillas.

8
2.1. Tipos de globulinas
A. Globulinas alfa

Constituyen aproximadamente el 14 % de las globulinas, siendo

su concentración normal de 0,3 a 0,7 g/dl. Se subdividen a su
vez:

a) Globulina alfa 1

Se llama también alfa 1-antitripsina, esta globulina presenta 4

funciones bien marcadas y para cada función en particular se
la denomina en forma diferente:

 Alfa 1-antitripsina: cumple la función de control de las

enzimas lisosomales.
 Orosomucoide: es un reactivo de fase aguda que ha sido
sintetizado en el hígado y que actúa en respuesta en caso
de daño o inflamación tisular.
 RPB: esta es la hormona encargada de fijar la vitamina A.
 TBG: es la encargada de fijar a la hormona tiroidea y de
transportar a los T3 y T4.
b) Globulina alfa 2

El grupo de las globulinas alfa 2 está compuesto por las

siguientes:

 La macroglobulina (alfa 2): La función primordial de ésta es

neutralizar las enzimas proteolíticas.
 La haptoglobina: Es la encargada de fijar la Hb plasmática
de los eritrocitos, y la transporta al hígado para que no se
excrete por la orina.
 La ceruloplasmina: Transporta y fija el 90 por ciento del
cobre sérico. El otro 10 por ciento es transportado por la
albúmina.

9
  La protrombina: participa en el proceso de la coagulación
transformándose en trombina que transforma el fibrinogeno
en fibrina (coágulo).
B. Globulinas beta

Se encuentran en este grupo gran número de proteínas,

enzimas y hormonas. Constituyen el 13 % de las proteínas
plasmáticas. La concentración normal es de 0,4 a 0,8 g/dl y son
de síntesis hepática.

 La hemopexina: Es la que fija y transporta el grupo hemo de

la hemoglobina (Hb) hacia el hígado.
 La transferrina: Transporta hierro del intestino a depósitos de
ferritina en diferentes tejidos, y de allí a donde sean
necesarios.
 El complejo C3 del complemento: Son proteínas séricas que
actúan en inmunidad inespecífica, provocando la lisis de
distintas bacterias.
C. Globulina gamma

Desde el punto de vista fisiológico están relacionadas con la

función de inmunidad humoral, por lo que se las denomina
inmunoglobulinas (Ig). Constituyen el 11 % de todas las
proteínas plasmáticas y su concentración normal se encuentra
entre 0,6 y 1,1 g/dl.

 Corresponden a las inmunoglobulinas séricas o anticuerpos

(IgA, IgE, IgG, IgM, IgD).
 Son proteínas de enorme peso molecular. Se encuentran en
el plasma realizando funciones defensivas.(6)

3. Describa los métodos de dosaje tanto químicos como enzimáticos

para proteínas totales, albúmina y globulina.
Existen diferentes métodos de valoración cuantitativa de proteínas:
Análisis de nitrógeno por el método de Kjendahl; precipitación

10
controlada, absorción de ultravioletas, métodos colorimétricos.. etc. Los
más frecuentemente utilizados en la clínica son estos últimos, entre los
que se encuentran el método del Biuret y el método de Lowry, cuya
sensibilidad en la valoración cuantitativa oscila entre 1 - 200
microgramos para el método de Lowry y 0,25-200 miligramos para el
método del Biuret.(7)
Los principales métodos empleados para la determinación de proteínas
totales, albúmina y globulinas son los siguientes:

A. Método de Biuret

En solución alcalina el Cu+2 reacciona con el enlace peptídico de

las proteínas dando un color purpúreo que se cuantifica
espectrofotométricamente (540nm). Como estándar se utiliza una
solución de albúmina.

Proteína + Cu+2 Complejo Cu-Proteína (púrpura)

Muestra: suero o plasma (heparina o EDTA). Separar el suero del

coágulo o el plasma de las células antes de 3h. Si el paciente está
acostado durante la extracción el resultado será menor.(2)

B. Método de Lowry
Dependen de la concentración de tirosina y triptófano de la muestra.
Consiste en dos reacciones:
a) Reacción de Biuret
b) Reacción de Folin: característica de los grupos –OH reductores de
los aminoácidos tirosina y triptófano que, junto con los complejos
Cu+2, reducen el reactivo de Folin generando un color azul. Está
sujeto a muchas interferencias. Se utiliza fundamentalmente en
orina.
C. Turbidimetría
Medición de la turbidez resultante de la precipitación de proteínas.

D. Absorción en el ultravioleta

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 Se mide la absorbancia a 270nm originada fundamentalmente por
los anillos aromáticos de triptófano y tirosina.
NOTA: para semicuantificar la concentración de proteínas en orina
se utilizan tiras reactivas.

E. Método colorimétrico
El método está basado en la unión específica del verde de
bromocresol (VBC), un colorante aniónico, y la proteína a un pH
ácido con el consiguiente desplazamiento del espectro de absorción
del complejo. La intensidad del color formado es proporcional a la
concentración de albúmina en la muestra.(8)

pH 4.3
VBC + albúmina Complejo VBC-albúmina

F. Electroforeis
La electroforesis es una técnica muy empleada para la separación
de proteínas en función, entre otros factores, de su carga eléctrica.
Las proteínas, moléculas anfóteras, adquieren en medio básico una
carga global negativa que hace que migren del cátodo hacia el
ánodo. En particular, la electroforesis sobre membranas de acetato
de celulosa es la más empleada en los análisis rutinarios de
proteínas en líquidos biológicos, como las realizadas con fines
diagnósticos en sangre y orina. Sus ventajas principales son la
reproducibilidad y la sencillez. Su resolución, sin embargo es menor
que la obtenida con otras técnicas electroforéticas.
A partir del plasma sanguíneo se obtienen habitualmente 5
fracciones:
- Albúmina
- 1 globulinas
- 2 globulinas
-  Globulinas
-  Globulinas

12
Una vez obtenida la separación de distintos tipos de fracciones
proteicas, se mide la cantidad de colorante que se combina con cada
una de ellas, una vez que se ha eliminado la coloración de fondo. En
el aparato de medida (densitómetro) se hace pasar a través de la tira
una radiación luminosa, cuya intensidad se mide en una fotocélula,
después de atravesar la tira. La absorción de radiación es
proporcional al grosor o densidad de las bandas y, por tanto, a la
concentración de proteínas en plasma.(7)

Significado clínico

El contenido sérico de proteínas solubles, aquellas que circulan en

fluidos extra e intracelulares, se emplea en clínica como un
marcador de ayuda diagnóstica, siendo las principales pruebas
analíticas las que están relacionadas con la medición de las
proteínas totales y de la albúmina. Las proteínas del suero y de la
albúmina se hallan mayoritariamente y en forma conjunta, implicadas
en el mantenimiento de la normal distribución del agua entre los
tejidos y la sangre siendo responsables de la regularización de la
presión oncóntica del plasma además del transporte de muchas
sustancias, incluyendo macromoléculas. La hiperproteinemia o
hiperalbuminemia por lo general ocurre en el mieloma múltiple,
causado por altos niveles de inmunoglobulinas monoclonales,
deshidratación, excesiva pérdida de agua, como en vómitos severos,
diarrea, enfermedad de Addison y diabetes acidósica. La
hemoconcentración, descenso en el volumen de agua plasmática, se
refleja como una hiperproteinemia relativa, al verse aumentadas en
el mismo grado las concentraciones de todas las proteínas
plasmáticas individuales. La hipoproteinemia o hipoalbuminemia se
presenta en casos de malnutrición, edema, síndrome nefrótico,
malaabsorción y cirrosis hepática severa. Al estar la albúmina
presente a tan alta concentración el simple descenso de esta
proteína puede ser causa de hipoproteinemia.(8)

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 4. Cuál es el fundamento del método para determinar proteínas totales
Fundamento para la determinación de Proteínas Totales. Método de
Reacción del biuret. En medio alcalino regulado, los enlaces peptídicos
de las proteínas reaccionan con los iones cúpricos del reactivo, dando
un complejo de color azul- violáceo cuya intensidad medida
fotométricamente a 540 nm, es proporcional a la concentración de
proteínas totales de la muestra.(2)
5. Cuál es el fundamento del método para determinar albúmina
Fundamento para la determinación de Albúmina. Método Unión a
colorantes. En el medio de reacción tamponado a PH 3,6 y con
adecuada fuerza iónica, la albúmina presente en la muestra se une
específicamente con el colorante verde de BromoCresol. El cambio en
las propiedades ópticas que muestra el complejo albúmina colorante
traducido en un incremento de la absorbancia medida a 625 nm respecto
de la solución del colorante libre, permite cuantificar fotomé- tricamente
a la albúmina de forma proporcional a su concentracíón en la muestra.
(2)
6. Cuáles son los valores normales de proteínas totales, albúmina y
globulinas.
Valores normales de:(9)
Proteínas totales: 6,7 - 8,6 g/dL (67 - 86 g/L)
Albúmina: 3,5 - 5,5 g/dL (50 - 60%) (35 - 55 g/L)
Globulina (totales): 2,0 - 3,5 g/dL (40 - 50%) (20 - 35 g/L)
- Globulina Alfa1: 0,2 - 0,4 g/dL (4,2 - 7,2%) (2 - 4 g/L)
- Globulina Alfa2: 0,5 - 0,9 g/dL (6,8 - 12%) (5 - 9 g/L)
- Globulina Beta: 0,6 - 1,1 g/dL (9,3 - 15%) (6 - 11 g/L)
- Globulina Gamma: 0,7 - 1,7 g/dL (13 - 23%) (7 - 17 g/L)

REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS

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14
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