ESCUELA PROFESIONAL DE FARMACIA Y BIOQUÍMICA

ANÁLISIS CLÍNICO II

PRÁCTICA N ° 5

TEMA: PRUEBAS DE FUNCIÓN HEPÁTICA: DETERMINACIÓN DE

PROTEÍNAS TOTALES Y FRACCIONES

DOCENTE: Q.F. Enrique León Mejía

TURNO: Mañana CICLO: VII

ALUMNOS:
Cerna Vázquez, Dilcer
Salvatierra Sulca, Alejandra

2018-II
 PRUEBAS DE FUNCIÓN HEPÁTICA: DETERMINACIÓN DE PROTEÍNAS
TOTALES Y FRACCIONES

I. INTRODUCCIÓN

Las proteínas son compuestos macromoleculares que se encuentran disueltos en

el plasma o suero y que desempeñan funciones tales como: actúan en defensa
contra agentes invasores formando los anticuerpos; transportan metabolitos,
hormonas y sustancias relativamente insolubles; actúan como elementos
estructurales y contribuyen a mantener la presión coloidosmótica del plasma. Se
observan hipoproteinemias en situaciones patológicas tales como desnutrición,
infecciones prolongadas y en casos de pérdidas renales. En estos casos se
observa también hipoalbuminemia. Las hiperproteinemias se presentan en casos
tales como el mieloma múltiple, y las hiperalbuminemias se relacionan con
estados de deshidratación.

Las proteínas son un constituyente muy importante de las células y los tejidos del
cuerpo humano. Se componen de aminoácidos. Hay diferentes tipos de proteínas
con diferentes funciones, son así proteínas los enzimas, algunas hormonas, la
hemoglobina, el LDL (transportadora de colesterol), el fibrinógeno, el colágeno, las
inmunoglobulinas, etc.

Las proteínas del suero se dividen en dos fracciones Albúmina y Globulinas. La

albúmina es la proteína de más concentración en la sangre. La albúmina
transporta muchas moléculas pequeñas (bilirrubina, progesterona, y
medicamentos), y tiene también la función de mantener la presión sanguínea ya
que favorece la presión osmótica coloidal para mantener líquidos en el torrente
sanguíneo y que no pasen a los tejidos, manteniendo un equilibrio. Las globulinas
se pueden dividir en alfa-1, alfa-2, beta y gamma globulinas. La albúmina
representa el 60% de las proteínas que contiene el suero, el resto son las
globulinas.

El resultado de la determinación de proteínas totales puede reflejar el estado

nutricional, enfermedad renal, enfermedad hepática, y otras varias condiciones. Si
las proteínas totales dan un resultado anormal deben practicarse pruebas
posteriores para identificar qué fracción proteica es la anormal, y así poder
proceder a un diagnóstico específico. También se solicita para investigar la causa
de una acumulación anormal de líquido en los tejidos (edema).
II. MARCO TEÓRICO:

2.1. Proteína total en plasma o proteína total

Las proteínas totales de nuestro organismo son un conjunto de compuestos

orgánicos macromoleculares, de un peso molecular elevado, que están
formadas por moléculas llamadas aminoácidos que se unen entre sí por
enlaces peptídicos. (1)

Las proteínas son compuestos orgánicos macromoleculares, ampliamente

distribuidos en el organismo, esenciales para la vida. Actúan como elementos
estructurales y de transporte y aparecen bajo la forma de enzimas, hormonas,
anticuerpos, factores de coagulación, etc.

En el plasma, las proteínas contribuyen a mantener el volumen del fluido

circulante, transportan sustancias relativamente insolubles y actúan en la
inactivación de compuestos tóxicos y en la defensa contra agentes invasores.

La determinación de proteínas totales es una prueba bioquímica para medir la

cantidad total de proteínas en plasma sanguíneo o suero; es útil para el
monitoreo de cambios ocasionados por diversos estados de enfermedad. En
condiciones patológicas como pérdidas renales, desnutrición, infecciones
prolongadas, etc., suelen presentarse hipoproteinemias, mientras que en otras
como mieloma múltiple, endocarditis bacteriana y hemoconcentración de
diversos orígenes, (ej.: deshidratación) se observan hiperproteinemias. (2)

2.2. Albúmina
La albúmina es una proteína sintetizada por el hígado con una vida media de
20 días por lo que no es útil como indicador de síntesis hepática en el fallo
hepático agudo. Los niveles de albúmina pueden estar disminuidos en
pacientes con cirrosis hepática, no obstante existen otras muchas causas
extrahepáticas que pueden afectar sus niveles séricos, tales como la
desnutrición, neuropatías, enteropatías pierdeproteínas, síndrome nefrótico o
trastornos hormonales. Por dicho motivo la hipoalbuminemia no es un indicador
específico de disfunción hepática aunque puede utilizarse como indicador
pronóstico en los pacientes con cirrosis hepática.(3)
Las proteínas son compuestos orgánicos macromoleculares, ampliamente
distribuidos en el organismo. La albúmina es el principal contribuyente de las
proteínas totales plasmáticas. Entre sus múltiples funciones se pueden
mencionar:
 - Transporta numerosas sustancias orgánicas e inorgánicas tales como
tiroxina, bilirrubina no conjugada, cortisol, estrógenos, ácidos grasos libres,
lípidos, vitaminas (A, B y E), hierro, calcio y magnesio, entre otras.
- Se fija en distintas regiones de la molécula de albúmina mediante enlaces
covalentes o disociables.
- Es responsable de 75 a 85% del mantenimiento de la presión oncótica
intravascular. (4)
Los aumentos anormales de albúmina son ocasionales y se relacionan casi
siempre con la deshidratación que provoca la reducción en el contenido del
agua plasmática. La hipoalbuminemia ocurre en condiciones patológicas tales
como pérdida excesiva de proteínas en el síndrome nefrótico, desnutrición,
infecciones prolongadas, quemaduras severas. Otras causas son disminución
en la síntesis por una dieta deficiente, enfermedad hepática o malabsorción.(5)

Albúmina

2.3. Globulinas

2.3.1. Globulinas α1
Los componentes más importantes de esta fracción son la antitripsina
alfa 1, glicoproteína ácida alfa 1, fetoproteína alfa y lipoproteína alfa. La
primera inhibe proteasas, como la elastasa y colagenasa, y contribuye
aproximadamente con 90% de las proteínas que se encuentran en esa
fracción, por lo que una disminución significativa de esa banda
electroforética es casi siempre debida a su deficiencia, con frecuencia
asociada a enfisema pulmonar y cirrosis hepática. Para ratificar la
disminución de antitripsina alfa 1 es importante cuantificarla por
nefelometría. (6)
2.3.2. Globulinas α2
Los componentes mayores de las globulinas alfa 2 son la haptoglobina,
la macroglobulina alfa 2 y la ceruloplasmina. La haptoglobina es la
 proteína transportadora de la hemoglobina, con la que se combina
cuando ésta es liberada a la circulación a consecuencia de hemólisis
intravascular, cumpliendo con ello una importante función de reciclaje,
al impedir la pérdida de hierro por la orina que podrá ser reutilizado en
la síntesis de nuevas moléculas de hemoglobina en la producción de
eritrocitos. (6)

2.3.3. Globulinas β
La beta globulina es un conjunto de proteínas presentes en la sangre
que sirven para el transporte de diferentes sustancias (hormonas,
colesterol o hierro).
Cuando se emplean ciertos medios de soporte para efectuar la
electroforesis, es frecuente que la fracción beta se subdivida en dos
bandas: la beta 1 y la beta 2. En este grupo de proteínas se encuentra
la transferrina, las lipoproteínas de baja densidad, el complemento, la
hemopexina y la microglobulina beta 2. La microglobulina beta 2,
componente de cadena ligera de los antígenos del complejo principal
de histocompatibilidad de clase I (HLA-I ), se filtra libremente por el
glomérulo y 99% de ella se reabsorbe en los tubos renales. La
proteinuria tubular determina un incremento de la concentración de
microglobulina beta 2 en la orina y sus niveles en suero se elevan
cuando la población de linfocitos B se incrementa, particularmente en
padecimientos linfoproliferativos malignos como el mieloma múltiple y
el linfoma. (6)
2.3.4. Globulinas gama γ
En esta región del proteinograma se encuentran la proteína C-reactiva
y las inmunoglobulinas mayores IgG, IgA, IgM, IgD e IgE.

Globulinas gamma: inmunoglobulinas

2.4. DETERMINACIÓN DE PROTEÍNAS TOTALES
2.4.1. Reactivo Biuret
a) Principio del método
En medio alcalino, las proteínas dan un intenso color violeta
azulado en presencia de sales de cobre; contiene yoduro como
antioxidante. La intensidad del color formado es proporcional a la
concentración de proteína total en la muestra ensayada. (7)
Los enlaces peptidicos de las proteínas reaccionan con el ion
cúprico en medio alcalino, para dar un complejo color violeta con
máximo absorción a 540nm, cuya intensidad es proporcional a la
concentración de proteínas totales en la muestra.

2.5. DETERMINACIÓN DE ALBÚMINA

Métodos de determinación.
2.5.1. Reactivo verde bromocresol
La albúmina tiene la propiedad de ligarse a una gran variedad de
aniones orgánicos y moléculas complejas de colorantes.
El sistema de medición se basa en la desviación del pico de
absortividad máxima de un colorante complejo (verde de bromocresol)
cuando se liga a la albúmina. El color formado es medido
colorimétricamente entre 600 y 640 nm, siendo proporcional a la
cantidad de albúmina en la muestra hasta la concentración de 6,0 g/dL.
(8)
2.5.2. Electroforesis:
La albúmina se separa de las demás proteínas en un campo eléctrico y
la cuantificación se realiza multiplicando el porciento de coloración de
la fracción albúmina por el valor da la proteína total. Es un método de
referencia, útil para detectar defectos cualitativos (bisalbuminemia).
Inmunoquímica: Existen varios como la electroinmunodifución (EID),
RID, los cuales consisten en: (a)- migración de la albúmina por un
medio que contiene un anticuerpo específico contra ella y (b)- difusión
de la albúmina a través de un medio que contiene un anticuerpo
específico contra la misma. Tienen la desventaja de ser métodos de
largo período de incubación, pero son comparables con los métodos de
referencia, aunque laboriosos.
2.5.3. Turbidimetría:
Es una inmunoquímica de nueva generación en los cuales están
incluidos la turbidimetría y la nefelometría. La turbidimetría consiste en
la reacción de un Ac específico contra la albúmina con la formación de
un complejo Ag-Ac, que apagan el paso de la luz de lectura. La
nefelometría es lo mismo pero la luz no atraviesa el medio sino que se
dispersa a su paso por él, como consecuencia del efecto Tyndall de los
inmunocomplejos formados por la albúmina-antialbúmina.
2.5.4. Unión a colorantes:
El colorante per se posee una longitud de onda a la que absorbe luz, al
unirse a la proteína esta longitud de onda cambia y hace posible su
determinación. El metil naranja no es específico de la albúmina (λ =
550 nm), el HABA, específico para esta proteína es pobremente
sensible y muchas drogas causan interferencia, el púrpura de
bromocresol es específico para la albúmina, pero las albúminas
animales no se unen al mismo de modo equivalente a la humana. (λ =
603).
III. PARTE EXPERIMENTAL

Materiales y Equipos a usar:

1. Tubos de ensayo vários.

2. Gradilla de metal.
3. Pipetas.
4. Algodón.
5. Micropipetas.
6. Espectrofotómetro.
7. Agujas.
8. Centrifuga.
9. Ligadura.
10. Suero sanguíneo.

Muestra: suero sanguíneo

Reactivo: Biuret
Solución estándar: [4,0 d/L]
PROCEDIMIENTO

1. Preparamos todo el material para realizar la práctica.

2. Centrifugamos la sangre durante 15 minutos a 1500 rpm para obtener el

suero y lo ponemos en eppendorf.

3. Ajustamos el espectrofotómetro a cero frente a agua destilada

4. Pipetear en una cubeta:

blanco estándar muestra

Reactivo Biuret 1ml 1ml 1ml
Solución estándar - 10ul -
Suero sanguíneo - - 10ul

Mezclar e incubar, dejamos a temperatura ambiente durante 10 minutos.

5. Leemos la absorbancia del patrón y la muestra frente al blanco del reactivo a

550 nm. El color es estable durante unos 60 minutos.

CÁLCULOS:

Proteínas (g/dL) = F x Abs.M =……x 0,216=……

F = [4,0]/abs.st = 4,0 /…… = …….

VALORES DE REFERENCIA:

Rango de referencia
Valores Normales: 6,6-8,3 g /dL

RESULTADOS:

En el examen realizado en el laboratorio, se puede decir que nuestro

compañero Dilcer presentó un valor de …….. miligramos por decilitro de sangre
( mg/dL) considerado un valor óptimo en cuanto a sus resultados de proteínas
totales y teniendo en cuenta los valores normales que se logran ver en la tabla
1 nos damos cuenta que si ese resultado hubiese dado por encima de los 8,3
mg/dL estaríamos hablando de proteínas totales elevados y la recomendación
sería visitar a un consultorio médico para que reciba su tratamiento no
farmacológico y/o farmacológico para evitar el riesgo de posibles
complicaciones en cuanto al funcionamiento del hígado.
IV. INTERPRETACIÓN:

La prueba de función hepática es un análisis que se utiliza para determinar el nivel

de proteínas totales en la sangre, así como también para evaluar la función
hepática y un posible riesgo en estos.

La importancia de realizar la determinación de las proteínas totales es porque

estos …………...

En conclusión, los resultados están dentro de los valores normales; por lo que se
afirma que el paciente no estaría en riesgo de padecer alguna enfermedad
hepática por los niveles de proteínas elevadas.

V. CUESTIONARIO DE PROTEÍNAS TOTALES

1. ¿Cuál es el fundamento de la determinación de proteínas?

Los enlaces peptídicos de las proteínas reaccionan con el ión cúprico en medio
alcalino, para dar un complejo color violeta con máximo de absorción a 540 nm,
cuya intensidad es proporcional a la concentración de proteínas totales en la
muestra.

2. ¿Qué métodos existen para determinación de proteínas totales y

fraccionadas?
 Los principales métodos empleados para la determinación de proteínas totales
son los siguientes:

a) Método del Biuret:

En solución alcalina el Cu+2 reacciona con el enlace peptídico de las

proteínas dando un color purpúreo que se cuantifica
espectrofotométricamente (540nm). Como estándar se utiliza una solución
de albúmina.

Proteína + Cu+2 Complejo Cu-Proteína (púrpura)

Muestra: suero o plasma (heparina o EDTA). Separar el suero del coágulo

o el plasma de las células antes de 3h. Si el paciente está acostado
durante la extracción el resultado será menor.

b) Método de Lowry:

Dependen de la concentración de tirosina y triptófano de la muestra.

Consiste en dos reacciones:

1. Reacción de Biuret
2. Reacción de Folin: característica de los grupos –OH reductores de los
aminoácidos tirosina y triptófano que, junto con los complejos Cu+2 ,
reducen el reactivo de Folin generando un color azul. Está sujeto a
muchas interferencias. Se utiliza fundamentalmente en orina.
b) Turbidimetría

Medición de la turbidez resultante de la precipitación de proteínas

c) Absorción en el ultravioleta
Se mide la absorbancia a 270nm originada fundamentalmente por los
anillos aromáticos de triptófano y tirosina.
d) Métodos de unión a colorantes

NOTA: para semicuantificar la concentración de proteínas en orina se

utilizan tiras reactivas. (9)

3. ¿Qué importancia clínica tiene la determinación de proteínas totales?

Las proteínas son compuestos orgánicos macromoleculares, ampliamente
distribuidos en el organismo, esenciales para la vida. Actúan como elementos
estructurales y de transporte y aparecen bajo la forma de enzimas, hormonas,
anticuerpos, factores de coagulación, etc. En el plasma, las proteínas
 contribuyen a mantener el volumen del fluido circulante, transportan sustancias
relativamente insolubles y actúan en la inactivación de compuestos tóxicos y en
la defensa contra agentes invasores. La determinación de proteínas totales es
útil para el monitoreo de cambios ocasionados por diversos estados de
enfermedad. En condiciones patológicas como pérdidas renales, desnutrición,
infecciones prolongadas, etc., suelen presentarse hipoproteinemias, mientras
que en otras como mieloma múltiple, endocarditis bacteriana y
hemoconcentración de diversos orígenes, (ej.: deshidratación) se observan
hiperproteinemias. (2)

En general, ambas situaciones se ven acompañadas también por

hipoalbuminemias. Los aumentos anormales de albúmina son ocasionales y se
relacionan casi siempre con deshidratación que produce el consecuente
aumento en el contenido proteico del plasma.

4. ¿En qué casos se solicita determinación de proteínas totales?

Se trata de una medición aproximada de todas las proteínas que se encuentran
presentes en la parte líquida de la sangre, y del que se pueden sacar
conclusiones y cómo se recomienda proceder en casos de padecer unos
determinados síntomas. Entre estos se encuentran:

 Pérdida de peso repentina

 Fatiga y cansancio
 Aparición de edema
 Problemas renales

VI. CUESTIONARIO DE ALBÚMINA

1. ¿Cómo se determina las globulinas en el laboratorio; a su criterio cuál es

el mejor método para determinar globulinas?
Los análisis de globulinas son pruebas de sangre. Un médico o profesional de
la salud le toma una muestra de sangre de una vena de un brazo usando una
aguja pequeña. Después de insertar la aguja, extrae una pequeña cantidad de
sangre y la coloca en un tubo de ensayo.
El valor de globulinas séricas (GLOB) se obtiene restando los valores de
albúmina a las proteínas totales.
 Proteínas totales (gr/dL) – Albúmina (gr/dL) = Globulinas (gr/dL)

2. ¿Qué son las globulinas y cuál es su importancia clínica de su

determinación?
El término globulinas hace referencia precisa a las proteínas que poseen
estructura globular y que son de la más variada naturaleza, pero en el caso de
las globulinas, como término analítico, se hace referencia al valor de proteínas
que resulta de la resta de las proteínas totales y la albúmina. Son globulares la
PCR, la ceruloplasmina y las inmunoglobulinas entre muchas otras.
De especial importancia clínica es la cuantificación de las gammaglobulinas o
anticuerpos, pues en la mayoría de los casos de inmunodeficiencia humoral,
sólo podemos dar el diagnóstico de certeza si la cuantificación es baja o a
veces hay ausencia de alguna subclase (deficiencia selectiva).
Muchas de las globulinas tienen funciones bien conocidas y ha sido tipificadas
y caracterizadas gracias a sus propiedades particulares o al hecho de que han
sido descubiertas en separaciones electroforéticas usando otros soportes como
el gel de agarosa y las cromatografías.
Estas globulinas pueden ser más o menos abundantes razón por la cual se han
denominado globulinas componentes mayores y globulinas componentes
menores. Las mayores son de gran peso molecular y se separan del resto de
las fracciones fácilmente por lo que pueden ser detectadas al colorearlas luego
de separadas en electroforesis en gel o estándar mientras que las menores por
el contrario no son detectables dado su bajo nivel en el plasma o suero.
Cada una de ellas está bien caracterizada en cuanto a sus funciones biológicas
por lo cual su utilidad en tanto que determinaciones de laboratorio está bien
definida, al menos en la mayoría.
Los niveles bajos de globulinas pueden ser un signo de enfermedad del hígado
o de los riñones. Los niveles altos podrían indicar infección, enfermedad
inflamatoria, enfermedades del sistema inmunitario o ciertos tipos de cáncer,
como mieloma múltiple, enfermedad de Hodgkin o linfoma maligno. Sin
embargo, las causas de los resultados normales también pueden ser ciertos
medicamentos, deshidratación u otros factores.

3. ¿Qué son las albúminas y cuál es su importancia clínica de su

determinación?
Las proteínas son compuestos orgánicos macromoleculares, ampliamente
distribuidos en el organismo. La albúmina es el principal contribuyente de las
proteínas totales plasmáticas. Entre sus múltiples funciones se pueden
mencionar: - transporte de una amplia variedad de sustancias como hor-
monas esteroides, ácidos grasos, bilirrubina, catecolami- nas, que en forma
libre son insolubles en medio acuoso; - mantenimiento de la presión
coloidosmótica, que estaría re- lacionado con su bajo peso molecular y su gran
carga neta. Los aumentos anormales de albúmina son ocasionales y se
relacionan casi siempre con la deshidratación que provoca la reducción en el
contenido del agua plasmática. La hipoalbuminemia ocurre en condiciones
patológicas tales como pérdida excesiva de proteínas en el síndrome nefrótico,
desnutrición, infecciones prolongadas, quemaduras severas. Otras causas son
disminución en la síntesis por una dieta deficiente, enfermedad hepática o
malabsorción. (5)
Proteína útil en él diagnóstico de insuficiencia hepática, deshidratación aguda,
pérdida de proteínas. Es un buen marcador para detectar el déficit nutricional
crónico. Daño o infección renal cuando está presente en la orina. Diversas
patologías cuando está aumentada en líquido cefalorraquídeo.
VII. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS

1. Sánchez L. Trabajos médicos [Internet]. Disponible en:

http://trabajosmedicos.blogspot.pe/2012/07/determinacion-de-proteinas-
totales.html
2. Cétola VE. Proteínas Totales. Wiener Lab SAIC Riobamba 2944 2000 [Internet].
Disponible en: http://www.wiener-
lab.com.ar/VademecumDocumentos/Vademecum
espanol/proteinas_totales_aa_sp.pdf
3. A GB, Daza EF, Juan EF, Parciales E, Tizzano EF. Hígado. Med y Lab.
2008;14(11-12):2009-2009.
4. Gonzales Martínez M. Laboratorio clínico y nutrición. México, D.F: Editorial El
Manual Moderno; 2012.
5. Wiener lab. Albúmina. 2000;3. Disponible en: http://www.wiener-
lab.com/VademecumDocumentos/Vademecum espanol/albumina_aa_sp.pdf
6. Reyes GR. Proteinas. Fundam Interpret Clínica los Exámenes Lab [Internet].
:p1-14. Disponible en: http://media.axon.es/pdf/80043.pdf
7. Colorimétrico B. Proteínas Totales. 01(55):7746. Disponible en:
http://www.spinreact.com.mx/public/instructivo/QUIMICA
CLINICA/LIQUIDOS/1001291 PROT TOT.pdf
8. Rogamos LES, Lean QUE, Documento E, Antes D, Sistema EL. Instrucciones
de uso. 2009;1-14.
9. Anónimo. Métodos para el análisis de proteínas. 2006;12. Disponible en:
http://www4.ujaen.es/~esiles/TEMA3PROTEINASalumno.pdf