Universidad Autónoma del Estado de México

Facultad de Química
Licenciatura: Química Farmacéutica Biológica
Área de acentuación: Análisis Bioquímicos Clínicos
Unidad de Aprendizaje: Análisis Bioquímicos Clínicos
Especiales
Practica 4: perfil pancreático
Profesora: Dra. María del Socorro Camarillo Romero
Elaboró:
● Yair López Hernández
Fecha: 4 de noviembre del 2021
Grupo: 92
 Practica 4: perfil pancreático
• Objetivo:
El alumno aprenderá a usar la técnica adecuada para la determinación de amilasa y lipasa pancreática,
establecer los valores de referencia y comparar con los valores obtenidos de la muestra problema,
emitir un posible diagnóstico.
• Marco teórico:
La amilasa pancreática se produce en el páncreas y se elimina en el intestino, mientras que la amilasa
salival se sintetiza en las glándulas salivales y se libera en la saliva. La determinación de la amilasa
en suero se realiza para diagnosticar enfermedades pancreáticas y detectar el desarrollo de
complicaciones derivadas de estas.
En el caso de una pancreatitis aguda, la actividad de la amilasa en la sangre aumenta pocas horas
después del inicio del dolor abdominal, llega a su cota máxima después de 12 horas y vuelve a los
valores de referencia después de 5 días como máximo.
Se encuentra elevada en el suero de pacientes con pancreatitis aguda alcanzando los valores más
elevados entre las 24 y 30 horas posteriores al ataque, declinando luego para volver a los niveles
normales entre las 24 y 48 horas siguientes. También es posible encontrar valores aumentados en
cualquier caso de abdomen agudo o intervención quirúrgica en regiones próximas al páncreas.
La lipasa, escinde las uniones de los ésteres de glicerol de los ácidos grasos. La determinación de la
lipasa es útil para el diagnóstico y tratamiento de las patologías del páncreas como pancreatitis aguda
y obstrucción del conducto pancreático. La lipasa, junto con la bilis, descompone las moléculas de
grasa para que estas puedan ser absorbidas y usadas por el organismo.
• Pruebas:
El método que se usara para la determinación de amilasa es el método colorimétrico, mientras que,
para la determinación de lipasa se usara el método turbidimetrico.
• Fundamento del método:
Determinación de lipasa: la acción de la lipasa es sobre la trioleina, para generar monogliceridos y
acido oléico.
Trioleina + 2 H2O à Monoglicerido + 2 Ac. Oléico
Determinación de amilasa: la determinación de la amilasa se determina mediante la reacción siguiente
donde esta enzima cataliza la reacción:
Etiliden-G7pNP à Etiliden-G2-5 + G2-5pNP
 • Tipo de muestra:
Muestra de sangre de 5 mL obtenida por punción. Colocar la muestra en un tubo amarillo sin
anticoagulante, con gel separador.
• Material y reactivos:
Gradilla para tubos Guantes
Kit para determinar amilasa Termómetro
Kit para determinar lipasa Micropipetas de 10, 50, 100 y 1000 uL
Agua destilada Puntas para micropipetas
Jeringas estériles Pipetas graduadas de 1, 2, 5 y 10 mL
Tubos sin anticoagulante Perilla
Alcohol Torniquete
Algodón
• Equipo:
Espectrofotómetro.
Celdas para espectrofotómetro.
Baño de agua a 37º C.
Centrifuga.
• Procedimiento:
Determinación de amilasa: Kit Randox para amilasa
1.- Obtener 5 mL de sangre por punción y colocar en un tubo de tapa amarilla.
2.- Centrifugar a 3500 rpm por 10 minutos; separar el suero en otro tubo limpio.
3.- Reconstituir el vial de sustrato RIb con el volumen apropiado del vial de tampón RIa.
4.- Colocar el vial RIb en el baño maría a 37º C para que adquiera la temperatura de reacción.
5.- En una celda, colocar 20 uL de suero y 1000 uL del vial RIb.
6.- Mezclar, incubar y leer absorbancia a 340 nm inicial a los 60 segundos. Empezar a cronometrar
tiempo.
7.- Leer al cabo de 1, 2 y 3 minutos.
Determinación de lipasa: Kit Randox para lipasa
1.- Reconstituir el vial CAL con 3 mL de agua destilada y mezclar 30 minutos antes de usarse. Incubar
a 37º C.
2.- Reconstituir 2 viales de sustrato RIb con 2.5 mL de tampón RIa cada uno y colocar en incubación
a 37º C.
3.- Mezclar en un tubo 2.5 mL de vial RIb con 0.1 mL de vial CAL; en otro tubo mezclar 2.5 mL de vial
RIb con 0.1 mL de suero.
4.- Incubar ambos tubos a 37º C y leer absorbancia a 340 nm de ambos tubos después de 4 minutos.
(Abs 1)
5.- Incubar por otros 5 minutos y leer absorbancia de ambos tubos. (Abs 2)
• Cálculos de los resultados:
Cálculos para determinación de amilasa:
𝑈
= 4712(∆𝐴𝑏𝑠)
𝐿
Cálculos para determinación de lipasa:
∆𝐴𝑏𝑠./01234 6 742368 = 𝐴𝑏𝑠9 − 𝐴𝑏𝑠;
𝐴𝑐𝑡B42368
𝐹𝑎𝑐𝑡𝑜𝑟 =
∆𝐴𝑏𝑠742368
𝐴𝑐𝑡./01234 = 𝐹𝑎𝑐𝑡𝑜𝑟(∆𝐴𝑏𝑠./01234 )
• Intervalos de referencia:
Valores de referencia de amilasa:
Suero: <95 U/L a 37º C
Orina: <450 U/24 h
Valores de referencia de lipasa:
Suero: <190 U/L a 37º C
• Linealidad de la técnica:
Linealidad del kit para amilasa:
Es lineal hasta 880 U/L. Si las concentraciones son mayores, diluir a 1:9 en solución de NaCl al 0.9%
y multiplicar el resultado por 10.
Linealidad del kit para lipasa:
Si la actividad es mayor a 700 U/L, diluir la muestra 1:1 con NaCl al 0.9% y multiplicar el resultado por
2.
• Referencias:
1.- DiaSys Diagnostic Systems. (2019). Amilasa pancreática CC* FS **. noviembre 1, 2021, de DiaSys
Diagnostic Systems Sitio web
2.- Wiener lab. (2000). Amilasa 405. Noviembre 1, 2021, de Wiener lab Sitio web: https://www.wiener-
lab.com.ar/VademecumDocumentos/Vademecum%20espanol/amilasa405aa_liquida_sp.pdf
3.- Wiener lab. (2000). Lipasa. octubre 23, 2021, de Wiener lab Sitio web: https://www.wiener-
lab.com.ar/VademecumDocumentos/Vademecum%20espanol/lipasa_aa_liquida_sp.pdf
Referencias:
1.- Gómez Gutiérrez, A., Casas Gómez, M. and Gómez Tobón, P., 2014. Interpretación clínica del
laboratorio. 8th ed. Bogotá: Panamericana.
2.- SNYDER, L., 2020. Wallach - interpretación clínica de pruebas. wallach- clinical interpretation of
tests. 11th ed. Phyladelphia: WOLTERS KLUWER MEDICAL.