Universidad Autónoma del Estado de México

Facultad de Química
Licenciatura: Química Farmacéutica Biológica
Área de acentuación: Análisis Bioquímicos Clínicos
Unidad de Aprendizaje: Análisis Bioquímicos Clínicos
Especiales
Practica 6: perfil muscular
Profesora: Dra. María del Socorro Camarillo Romero
Elaboró:
● Yair López Hernández
Fecha: 4 de noviembre del 2021
Grupo: 92
 Practica 6: perfil muscular
• Objetivo:
El alumno usara las técnicas apropiadas para determinar las enzimas fosfatasa acida y aspartato
aminotransferasa, los valores de referencia, establecer si hay alteraciones en estas en la muestra
problema y emitir un posible diagnostico.
• Marco teórico:
Las fosfatasas acidas se encuentran presentes en casi todos los tejidos del organismo, siendo
particularmente altas las cantidades de estas enzimas en próstata, estómago, hígado, músculo, bazo,
eritrocitos y plaquetas. La fosfatasa ácida prostática constituye un auxiliar en el diagnóstico precoz de
cáncer de próstata.
Se encuentran valores elevados de Fosfatasa ácida total (ACP) en algunas enfermedades
hematológicas (leucemia mielocítica, trombocitopenia idiopática) y óseas (enfermedad de Paget,
carcinoma óseo), así́ como en algunos tipos de cáncer y enfermedades hepáticas (hepatitis, ictericia
obstructiva).
La aspartato aminotransferasa es una enzima que se encuentra en el citoplasma y la mitocondria. Se
encuentra en mayor concentración en hígado y corazón. En el infarto agudo de miocardio, se observa
un aumento moderado de la enzima a las 6 u 8 horas de ocurrido el episodio, alcanza niveles máximos
alrededor de las 48 horas y retorna a la normalidad entre el 4º y 6º día. En pacientes con afecciones
hepáticas se observan las mayores elevaciones de AST, sobre todo en los casos de hepatitis con
necrosis.
• Pruebas:
Para la determinación de fosfatasa acida se utilizará un método colorimétrico para su cuantificación
en la muestra sanguínea y para la AST, se usará el método espectrofotométrico para la determinación
en suero.
• Fundamento del método:
Determinación de fosfatasa acida: la enzima cataliza la reacción siguiente, y la formación del colorante
azo será proporcional a la concentración de esta enzima.
1-naftilfosfato + H2O à Fosfato + 1-naftol
1-naftol + 4-cloro-2-metilfenildiazonio à Colorante azo
Determinación de AST: la enzima cataliza la siguiente reacción, por lo que la formación de oxalacetato
será determinante para establecer la cantidad de AST en la muestra.
 α -oxoglutarato + L-aspartato à L-glutamato + oxalacetato
• Tipo de muestra:
Se requerirá una muestra de sangre de 5 mL obtenida por punción, se debe colocar en un tubo sin
anticoagulante, con gel separador.
• Material y reactivos:
Gradilla para tubos Guantes
Kit para determinar fosfatasa acida Termómetro
Kit para determinar AST Micropipetas de 10, 50, 100 y 1000 uL
Jeringas estériles Puntas para micropipetas
Tubos sin anticoagulante Pipetas graduadas de 1, 2, 5 y 10 mL
Alcohol Perilla
Algodón Torniquete
Agua destilada
• Equipo:
Espectrofotómetro.
Celdas para espectrofotómetro.
Baño de agua a 37º C.
Centrifuga.
• Procedimiento:
Determinación de fosfatasa acida: kit randox
1.- Obtener 5 mL de sangre por punción y colocar en un tubo de tapa amarilla.
2.- Centrifugar a 3500 rpm por 10 minutos; separar el suero en otro tubo limpio.
3.- Reconstituir el vial R2 con 3 mL de tampón R1 e incubar a 37º C.
4.- Reconstituir otro vial R2 con 3 mL de tampón R1, mezclar y transferir a un vial de tartrato R3 e
incubar a 37º C.
5.- En un tubo, mezclar 0.2 mL de suero con 2 mL de vial R2 e incubar a 37º C por 5 minutos.
6.- Leer absorbancia a 405 nm y cronometrar tiempo.
7.- Volver a leer absorbancia al 1, 2 y 3 minutos. (Abs 2a)
8.- En otro tubo, mezclar 0.2 mL de suero con 2 mL de vial R3 e incubar a 37º C por 5 minutos.
9.- Leer absorbancia a 405 nm y cronometrar tiempo.
10.- Volver a leer absorbancia al 1, 2 y 3 minutos. (Abs 2b)
11.- Realizar los cálculos.
Determinación de AST: kit randox
1.- Reconstituir el vial RIb con 10 mL de tampón RIa e incubar a 37º C.
2.- En un tubo, mezclar 100 uL de muestra y 1000 uL de vial RIb e incubar a 37º C.
3.- Leer absorbancia a 340 nm al minuto y volver a leer después de 1, 2 y 3 minutos.
4.- Realizar los cálculos.
• Cálculos de los resultados:
Determinación de fosfatasa acida:
𝐹𝐴 #$%&' = ∆𝐴𝑏𝑠,& (743) = 𝑈/𝐿
𝐹𝑃 = ∆𝐴𝑏𝑠,& − ∆𝐴𝑏𝑠,8 (743) = 𝑈/𝐿
Determinación de AST:
𝑈
= ∆𝐴𝑏𝑠(1746)
𝐿
• Intervalos de referencia:
Valores de referencia de fosfatasa acida total:
Hombre: <4.7 U/L a 37º C.
Mujer: <3.7 U/L a 37º C.
Valores de referencia de fosfatasa acida prostática:
<1.6 U/L a 37º C.
Valores de referencia de AST:
Hombre: <37 U/L a 37º C.
Mujer: <31 U/L a 37º C.
• Linealidad de la técnica:
Linealidad de fosfatasa acida: si la variación de absorbancia supera 0.1 por minuto, diluir 0.2 mL de
muestra con 0.4 mL de NaCl al 0.9% y multiplicar resultado por 3.
Linealidad de AST: El método es lineal hasta 562 U/L, si la concentración de la muestra es mayor,
diluir 1:9 con NaCl al 0.9% y multiplicar resultado por 10.
• Referencias:
1.- Wiener lab. (2000). Fosfatasa Acida Total y Prostática cinética. noviembre 1, 2021, de Wiener lab
Sitio web: https://www.wiener-
lab.com.ar/VademecumDocumentos/Vademecum%20espanol/fosfatasa_acida_total_y_prostatica_ci
netica_sp.pdf
2.- Wiener lab. (2000). GOT(AST). noviembre 1, 2021, de Wiener lab Sitio web: https://www.wiener-
lab.com.ar/VademecumDocumentos/Vademecum%20espanol/got_uv_aa_sp.pdf
Referencias:
1.- Gómez Gutiérrez, A., Casas Gómez, M. and Gómez Tobón, P., 2014. Interpretación clínica del
laboratorio. 8th ed. Bogotá: Panamericana.
2.- SNYDER, L., 2020. Wallach - interpretación clínica de pruebas. wallach- clinical interpretation of
tests. 11th ed. Phyladelphia: WOLTERS KLUWER MEDICAL.