UNIVERSIDAD DE ORIENTE NUCLEO BOLIVAR ESC. CCS. DE LA SALUD Dr. FRANCISCO BATTISTINI CASALTA DPTO.

DE BIOANALISIS ASIGNATURA HEMATOLOGIA II CODIGO 200-4483

PRACTICA N 2. RECUENTO DE PLAQUETAS

ELABORADO POR: PROF. CARMEN CUBA GARRIDO

CIUDAD BOLIVAR, OCTUBRE DE 2011

Elaborado por: Prof. Carmen Cuba Garrido. Docente Instructor.

GENERALIDADES: Las plaquetas son pequeos corpsculos discoides de 2-4 m de dimetro en extensiones teidas y de 5-7 fl de volumen (sangre citratada), de color rosa plido a lila, en los que se observan pequeas granulaciones. Circulan en la sangre durante 7-10 das.

FUNCIONES: actan en la hemostasia y en el mantenimiento de la integridad vascular, adems de participar en el proceso de coagulacin sangunea.

MTODOS DE RECUENTO: La valoracin inicial de laboratorio de las plaquetas incluye su recuento. Esta determinacin en la actualidad es un componente habitual del hemograma. Importancia del recuento de plaquetas: Permite descartar trastornos de la hemostasia relacionados con el aumento o disminucin del nmero de plaquetas. Para el recuento de plaquetas pueden utilizarse 3 procedimientos diferentes: a) directo (mtodo de referencia); b) indirecto, y c) automatizado. MTODO DIRECTO: En el mtodo de referencia se usa un microscopio con contraste de fase para realizar el recuento manual de plaquetas. stas son muy adherentes a los objetos extraos y entre s, lo que hace muy difcil contarlas. Tambin son pequeas y pueden confundirse con facilidad con detritos. En este procedimiento la sangre entera, con EDTA como anticoagulante, se diluye con oxalato de

Elaborado por: Prof. Carmen Cuba Garrido. Docente Instructor.

amonio al 1%, que lisa los eritrocitos no nucleados y evita la agregacin de las plaquetas. Las plaquetas pueden contarse luego con un microscopio de contraste de fase, como lo describieron Brecher y Cronkite. PRINCIPIO BSICO: La sangre se mezcla con un disolvente que causa la hemlisis de los eritrocitos. El lquido diluido obtenido se vierte en un hemocitmetro y se cuentan las plaquetas mediante un microscopio, a ser posible de contraste de fase, si se dispone de l. PROCEDIMIENTO: 1. Tomar una muestra de sangre venosa con EDTA como anticoagulante, siguiendo las normas establecidas por el NCCLS. 2. Realizar una dilucin de la sangre bien mezclada de la siguiente manera: a) Enrasar la pipeta dilutora (de recuento de eritrocitos) hasta la marca de 0,5 con sangre, limpiar la pared externa de la pipeta para eliminar el exceso de sangre. b) Se sigue aspirando oxalato de amonio al 1% hasta el enrase de 101. Para facilitar la aspiracin la pipeta se conecta por el extremo con un tubo de goma que lleva incorporada una boquilla. c) Una vez enrasado, se retira el tubo de goma y se obstruyen ambos lados de la pipeta con los dedos. Se homogeniza el contenido del bulbo, por agitacin suave, aproximadamente por 2-3 minutos.

d) Posteriormente, desechar las 3 primeras gotas y proceder a llenar el hemocitmetro, sin que la dilucin se derrame por los bordes. e) Cubrir el hemocitmetro en una placa de Petri que contenga una gasa o papel filtro humedecido (cmara hmeda) y se deja durante 15 minutos para permitir el depsito de las plaquetas en un plano ptico. La funcin de la cmara hmeda es evitar que la dilucin del hemocitmetro se seque. f) Colocar el hemocitmetro en el microscopio, enfocar con el objetivo de 40x y contar las plaquetas que se encuentran en los 5 cuadrados (4 de las esquinas y el del centro) del cuadrado mediano central. Se puede contar 1

Elaborado por: Prof. Carmen Cuba Garrido. Docente Instructor.

o 2 retculos. Las plaquetas se observan como puntos negros rodeados de un halo claro (refringencia). Este nmero obtenido de plaquetas llamado cuenta parcial se utiliza en los clculos.

Es muy importante corroborar el resultado obtenido por recuento directo, con la apreciacin del nmero de plaquetas a partir del examen del frotis sanguneo teido. CLCULOS: 1.- Factor Volumen (FV): se obtiene de las medidas del hemocitmetro. 0,2 mm (lado) x 0,2 mm (lado) x 0,1 mm (profundidad) = 0,004 mm3 Multiplicar por el nmero de cuadrados contados: 0,004 mm3 x 5 = 0,02 mm3 Corregir el volumen: 1/ 0,02 = 50 mm3, este es el factor volumen a utilizar en el resto de los clculos. Es necesario recordar que el FV puede variar segn el nmero de cuadrados contados. 2.- Factor Dilucin (FD): se obtiene de la dilucin de la sangre con el oxalato de amonio. FD = volumen del bulbo/ volumen de sangre aspirada FD = 100 / 0,5 = 200; este es el factor definitivo 1:200. Tambin puede variar de acuerdo al volumen de sangre aspirada. La dilucin de la sangre tambin puede realizarse en tubos de ensayo de la siguiente manera: 1,99 mL de oxalato de amonio + 10 L de sangre total. Se mezcla y el recuento se realiza de la misma forma. 3.- Factor Total (FT): este ltimo se multiplica por la cuenta de plaquetas obtenido en la cmara para obtener el recuento total de plaquetas. FT = FV x FD FT = 50 x 200 FT = 10.000/mm3 4.- Recuento total de plaquetas: FT x n de plaquetas obtenidas en la cmara. Por ejemplo, si se contaron 45 plaquetas; el recuento total sera: 10.000 x 45 = 450.000/ mm3.

Elaborado por: Prof. Carmen Cuba Garrido. Docente Instructor.

Otra frmula para realizar los clculos: Recuento (clulas/L) = N x D/A x 10 x 106 N: nmero de PLTs contadas; D: dilucin; A: rea total contada (en mm2); 10: factor para calcular el volumen en microlitros; 106: factor para llevar expresar el recuento en litros (109/L). Ejemplo: 45 x 200/0,2 x 10 x 106 El 0,2 sale de multiplicar el rea contada por los cuadrados, o sea, 0,2 x 0,2 x 5 VALORES DE REFERENCIA: Unidades convencionales: 150.000 400.000 /mm3 Unidades SI: 150 400 x 109/L CAUSAS DE ERROR: La mayora de las causas de error son las mismas que pueden ocurrir en los recuentos de eritrocitos y leucocitos. La sangre con EDTA es satisfactoria hasta 5 horas despus de su recogida a 20C y 24 horas a 4C, siempre y cuando se haya obtenido satisfactoriamente. 1. La mezcla inadecuada y la obtencin defectuosa de la muestra pueden provocar aglutinacin de las plaquetas en el hemocitmetro. Si el problema persiste despus de una dilucin nueva, es necesario tomar otra muestra. Una muestra obtenida por puncin digital es menos apropiada debido a la adherencia plaquetaria. 2. La suciedad en la pipeta, en el hemocitmetro o el lquido diluyente pueden producir recuentos inexactos. 3. El fenmeno de satelitismo plaquetario puede producirse cuando se usa EDTA como anticoagulante. El uso de citrato de sodio como anticoagulante debera corregir este problema. Debido a la dilucin sufrida en los tubos de citrato, es necesario multiplicar el recuento de plaquetas obtenido por 1,1 para que sea exacto.

Bibliografa: - Kitchen, S y McCraw, A. Diagnstico de la Hemofilia y otros trastornos de la coagulacin. Manual de Laboratorio. Londres. - Vives, J y Aguilar, J. (2004). Manual de tcnicas de laboratorio en hematologa. Ediciones Salvat. Barcelona, Espaa. - Rodak, B. (2004). Hematologa: fundamentos e implicaciones clnicas. Editorial mdica panamericana. Buenos Aires, Argentina.

Elaborado por: Prof. Carmen Cuba Garrido. Docente Instructor.

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