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Practica 7 y 8 Laboratorio Hematologia I
Practica 7 y 8 Laboratorio Hematologia I
BIA-081-3
Maestra. Lic.Denny De la Rosa,MCS.
FUNDAMENTO
Mide la actividad funcional de las plaquetas, ya que estas guardan relación con la
formación de hilos de fibrina.
Esto lo podemos observar cuando una sangre total se deja coagular espontáneamente
en un tubo de vidrio, se observa que al principio ocupa todo el volumen, pero luego el
coágulo reduce su masa y exprime un líquido que es el suero.
La retracción del coágulo está relacionada por la cantidad y calidad de plaquetas,
siendo la proteína contráctil llamada Trombostenina, la responsable del trabajo
mecánico de la retracción.
Es necesario que existan valores de plaquetas superiores a los 100,000/mm³ de sangre
para que se efectúe una retracción normal.
Usualmente la retracción es deficiente o puede estar disminuida en la
Trombocitopenia, cuando el recuento de plaquetas es inferior a 50,000/mm³ de sangre
y en ciertas disfunciones plaquetarias congénitas y adquiridas como en Tromboastenia
de Glanzmann e insuficiencias renales.
El grado de retracción está relacionado por la concentración de fibrinógeno y por la
masa globular roja.
La prueba de retracción es útil para evaluar la actividad fibrinolítica. Ciertas patologías
cursan con valores normales de plaquetas, pero con retracción anormal, esto es
debido a alteraciones en otro de los factores que intervienen en la función de las
plaquetas, siendo el más importante en factor 3 plaquetario (FP-3).
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Concentración de fibrinógeno.
Hematocrito
Temperatura
Presencia de anticoagulantes exógenos circulantes.
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Trombocitopenia
Trombocitopatia
Tromboastenia de Glanzmann
Hepatopatía crónica
Ictericia obstructiva
Embarazo
Hiperfibrinogenemia
Policitemia
Mieloma múltiple
Leucemia aguda
Enfermedad de Hodgkin
Trombocitosis
Hipofibrinogenemia
Anemia
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2- RETRACCIÓN PARCIAL
Al finalizar la incubación, el coágulo se observa separado de uno de los lados y al fondo
del tubo.
3- RETRACCIÓN POBRE
Al finalizar la incubación, el coágulo se observa con una pequeña separación de los
lados y el fondo del tubo.
4- RETRACCIÓN NULA
Ausencia de retracción.
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Método: Cuantitativo
Muestra:
Baño Serológico
Cronometro Reloj
PROCEDIMIENTO
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7. Cálculo:
a. Ejemplo:
Hematocrito del paciente = 38% 40 %
Volumen de sangre extraído = 5 ml
Suero obtenido 2.1 ml = 0.8
Volumen plasmático en base al hematocrito=100-38 = 62
100-40-60
b. Investigamos el volumen plasmático que debe haber en la cantidad de sangre
tomada: 100--------60
100-------- 62 5.0---------X=3.0 mL.
5.0---------X X= 3.1 mL.
c. Relacionamos el volumen plasmático teórico de la muestra con el volumen de
suero obtenido mediante la retracción del coágulo:
Comentario:
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REPORTE
FECHA:______________________________
PRACTICA #:____________________________
DETERMINACIÓN:____________________________________________________
MÉTODO:___________________________________________________________
INTERVALO DE (SI)_________________________________________________
REFERECIA (UT)________________________________________________
(SI)_________________________________________________
APLICACIÓN CLÍNICA__________________________________________________
___________________________________________________________________
___________________________________________________________________
OBERVACIONES:_______________________________________________________
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Puede deberse a:
Activación de la protrombina.
Formación de la trombina.
Formación de la fibrina.
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Los plasmas son estables por 4 horas entre 18-24° C, sin embargo, es recomendable
realizar el análisis antes de 2 horas de haberse obtenido la muestra, si esto no es
posible se recomienda congelar el plasma y para usarlo descongelarlo en baño maría a
37° C, de 5 a 10 minutos. Los plasmas son estables un mes a -20° C y hasta seis meses a
-70° C.
Plasma adsorbido (PNA): Es un plasma que ha sido tratado con una sal inorgánica
insoluble como sulfato de bario o hidróxido de aluminio. El sulfato de bario es más
ampliamente usado, pero éste no es el más efectivo absorbente si el citrato se usó
como anticoagulante. La adsorción remueve protrombina y factores VII, IX, X y una
apreciable cantidad de factor XI.
El suero contiene factores VII, IX, X, XII y protrombin, la mezcla de PNA + suero provee
todos los factores.
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PLASMA NORMALCONTROL
Comentarios:
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Factores de la coagulación
Plasma y Suero
I II V VII VIII IX X XI XII
Plasma Normal + + + + + + + + +
Plasma Normal
+ 0 + 0 + 0 0 ± ±
Absorbido
Plasma
+ + 0 + ± + + 2+ 2+
envejecido
Suero Normal 0 ± 0 + + + + + +
Suero Normal 0 0 0 0 0 0 0 + +
Suero envejecido 0 0 0 + 0 + + + +
+ Presente
0 Ausente
2+ Aumento con el almacenamiento
± Cantidad pequeña
Los factores Vitamina K dependiente son: II, VII, IX y las proteinas regulaciones C y S.
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OBTENCIÓN DE SUERO
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Materiales:
Equipo:
Centrifuga
Reactivos:
Solución de citrato de sodio 3,8 % 63,2 %
Alcohol isopropilico al 70%
Procedimiento:
Extraer 4,5 ml de sangre venosa del paciente mediante una punción limpia.
Depositar en un tubo de ensayo 13x100 mm de diámetro conteniendo 0,5 ml
de solución anticoagulante citrato de sodio al 3.2%
Mezclar por inversión varias veces.
Centrifugar a 1500-2000g (3,000 a 3500 rpm) de 10- 15 minutos, obteniéndose
así un Plasma Pobre en Plaquetas (PPP).
Decantar el líquido sobrenadante utilizando una pipeta Pasteur de plástico,
recolectar en tubo plástico.
Mantener a temperatura ambiente hasta su uso (no más de 2 horas).
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Esta prueba valora la vía extrinseca y la via común. Los resultados alteran por cambios
de fibrinógeno y terapia con anticoagulantes orales, déficit de vitamina K, déficit de
factor VII, y déficit de factores de la vía común, por lo que el resultado expresará
esencialmente, deficiencias de cualquiera de los siguientes factores: I, II, V, VII, X.
Actualmente las tromboplastinas comerciales se presentan ya mezcladas con el cloruro
de calcio (Tromboplastina cálcica).
Se utiliza esta prueba de rutina en los estudios de la Hemostasia para evaluar la
segunda fase de la coagulación, determina el sistema extrínseco o vía exógena,
permite la apreciación de la actividad protrombinica del plasma, la cual depende de los
factores:
Protrombina o factor II
Proacelerina o factor V (factor lábil).
Proconvertina o factor VII (factor estable).
Factor Stuart - Prower o factor X
Esta prueba se conoce con las siguientes terminologías: TP, PT, Tiempo de
X
V
Vía común
II
Fibrinógeno
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FUNDAMENTO
El plasma citratado para realizar la prueba de TP debe separarse del paquete globular
lo antes posible y realizar la prueba dentro de las primeras 2 horas de obtenida la
muestra.
Tromboplastina completa
+ Plasma Fibrina
Calcio Soluble
Citratado
↓
Tromboplastina cálcica
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UTILIDAD DE LA PRUEBA
INTERVALO DE REFERENCIA
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Método: Quick
Muestra: Plasma citratado (PPP) conservado a temperatura ambiente.
Material:
Agujas Vacutainer o Jeringuillas 5.0 ml de capacidad y agujas estériles.
Sistema de tubos al vacio (tapón color azul).val de
Tubos de 12x75 mm plin
Pipeta Pasteurew
Pipetas automáticas (100μl) y (200μl) de capacidad. o Puntas para pipetas
automáticas (Tips).
Equipo:
Centrifuga
Baño serológico a 37°C
Lámpara cuello de ganso
Cronómetro
Reactivos:
Tromboplastina cálcica (Solución comercial).
Plasma citratado controles, Normal, Low Adnormal (bajo), Hihg Alto.
Citratatado de sodio al 3,2% ó 3,8%.
Agua destilada.
Procedimiento:
Realizar la toma de muestra del plasma del paciente: colocar 0,5 ml de
anticoagulante citrato de sodio en un tubo 13x100 mm (o tomar la muestra con
tubos al vacío tapón azul).
Obtener por punción venosa 4,5 ml de sangre del paciente.
Mezclar cuidadosamente de 8 a 10 veces.
Centrifugar de inmediato 10 minutos a 3,000 rpm.
Decantar con pipeta Pastour el plasma sobrenadante a un tubo plástico 12x75
mm³.
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Técnica:
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REPORTE
FECHA:______________________________
PRACTICA #:____________________________
DETERMINACIÓN:____________________________________________________
MÉTODO:___________________________________________________________
INTERVALO DE (SI)_________________________________________________
REFERECIA (UT)________________________________________________
(SI)_________________________________________________
APLICACIÓN CLÍNICA__________________________________________________
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OBERVACIONES:_______________________________________________________
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