HEMOSTASIA 1.

RECUENTO DE PLAQUETAS (METODO MANUAL)

Fundamento El recuento de plaquetas se efecta en sangre obtenida de puncin venosa anticoagulada con EDTA, y sometida a hemlisis por accin de una solucin hipotnica de oxalato de amonio en agua destilada. Materiales y reactivos Tubos plasticos Capsula de Petri Algodn Anticoagulante EDTA (0.342 mol/L) Diluyente: Oxalato de amonio 1% en agua destilada.

Procedimiento 1. Se obtiene sangre por puncin venosa en anticoagulante EDTA (0.342 mol/L), en tubos plsticos. 2. Se homogeiniza bien la muestra y se toman 100 ul que se colocan en otro tubo plastico que contenga 1.9 ml de oxalato de amonio 1%. 3. Incubar 10-15 min. para provocar la hemolisis. 4. Cargar la camara de Neubauer con el bemolizado y dejar que sedimenten las plaquetas en ambiente hmedo: se recomienda colocar la camara dentro de una capsula de Petri conteniendo un trozo de algodn humedecido. 5. Incubar 10-15 min. en atmosfera hmeda. 6. Efectuar el recuento en microscopio en el reticulado central de la camara (dividido en 400 cuadrados pequeos comprendidos en 1mm ). El recuento de plaquetas se realiza en el cuadrado central (al igual que el recuento de hemates), se eligen 5 de los cuadrados que se encuentran subdividos en 16 cuadraditos, como se muestra a continuacin Fig. 4.

Figura 4. Recuadro central

La superficie de este cuadrado central es de 1 mm y la camara tiene una profundidad de 0.1mm 7. Contar los 4 cuadrados de los extremos y el cuadrado central (por ende, sern 5 cuadrados con 16 cuadraditos c/u, o sea 80 cuadraditos) 8. Calculo: sumar las plaquetas contadas en los 5 cuadrados y multiplicar por 1000 para obtener el nmero de plaquetas por mm3. el factor 1000 surge del producto:

Donde 20 es el factor de dilucion, 400 son los cuadraditos totales y 80 los cuadraditos contados. El volumen total del cuadrante es de 0.1 mm . Observaciones Actualmente, en muchos laboratorios, los recuentos de plaquetas se realizan en forma automatizada en contadores hematolgicos o en contadores especficos, habindose logrado un alto nivel de precisin (incluso en trombocitopenia). El recuento manual suele efectuarse para la comprobacin de la cifra de plaquetas en trombocitopenia muy graves y en el caso de plaquetas gigantes en las que el recuento automtico no es fiable.

2. TIEMPO DE SANGRIA 2.1 METODO DE IVY

Fundamento Esta prueba valora la capacidad hemosttica global in vivo y consiste en medir el tiempo transcurrido desde la realizacin de una pequea incisin cutnea hasta que cesa la hemorragia. La prueba mide el tiempo necesario para obtener un tapn hemostatico eficaz y, por ende, representa una valoracin global y simultanea de la funcion plaquetaria (numero, adhesin, agregacin y degranulacion plaquetaria) y de la funcion vascular. Respecto al factor vascular, la prueba depende de la integridad de la pared vascular y de su capacidad constrictora. El mtodo original del corte en el lobulo de la oreja, introducido por Duke en 1910, es poco sensible y menos reproducible, por lo que no es aconsejable continuar utilizndolo hoy en dia. En 1935, Ivy introdujo la aplicacin de un manguito de presion en el brazo y la practica de la incison en la cara anterior del antebrazo. Este metodo, con la modificacion introducida por Borchgrevink, que sustituye la puncion con lanceta por un corte realizado con hoja de bistur, ha demostrado una alta sensibilidad. Por ultimo, la introduccin de plantillas o dispositivos automaticos para la realizacin de la incisin ha venido a uniformar y aumentar la reproducibilidad. Materiales y reactivos Dispositivos automaticos para la realizacin de la incisin: Simplate y Simplate II (Organ Tecknika) y Surgicutt (Ortho Diagnostics). Cronometro.

Procedimiento 1. Es aconsejable colocar un esfigmomanmetro en el brazo del paciente y se regula a 40 mm de Hg, mantenindolo a esta presin a lo largo de toda la prueba. 2. Se extrae el dispositivo automtico de su reservorio estril y se sita en la parte superior de la cara anterior del antebrazo (previamente desinfectada), en una zona sin vello y alejada de las venas superficiales, a unos 3 cm por debajo del pliegue del codo y paralelo al mismo. 3. Se presiona el disparador del dispositivo y al mismo tiempo se pone en marcha el cronometro (el corte tendr un largo y profundidad determinados: 1cm x 1mm). 4. La sangre que brota espontneamente se va secando cada 30 segundos, sin tocar la incisin, anotandose el tiempo que tarda en cesar la hemorragia, que sera el resultado de la prueba. Cuando el tiempo se alarga mas de 20 minutos puede detenerse la prueba aplicando una compresa con material hemostatico Valores de referencia Hasta 6-8 minutos. Los tiempos superiores a 10 minutos son claramente patologicos.

2.2 METODO DE DUKE

Fundamento El mtodo original de Duke es, como dijimos antes, poco sensible y menos reproducible, pero se contina aplicando. Procedimiento 1. Se practica una incisin de 2 mm de longitud en el lobulo de la oreja utilizando una lanceta con tope, descartable. 2. La sangre que brota espontneamente se va secando cada 30 segundos, sin tocar la incisin, anotandose el tiempo que tarda en cesar la hemorragia, que sera el resultado de la prueba. Valores de referencia Inferior a 5 minutos. Interpretacin de resultados La prueba se prolonga por reduccin del numero de plaquetas o por alteraciones funcionales plaquetarias o plasmticas (enfermedad de Von Willebrand) relacionadas con los procesos de adhesin, agregacin o degranulacion plaquetarias. Esta alterado en trombocitopenia, trombopatias, trombastenias y deficit de fibrogeno. Se observan tiempos prolongados en uremias, mielomas, macroglobulinemia y despus de la ingesta de acido acetilsaliclico. En la enfermedad de Von Willebrand generalmente es alargado, pero si es normal no invalida el diagnostico de dicha enfermedad.

3. TIEMPO DE COAGULACION
Fundamento El tiempo de coagulacin de sangre total es una de las pruebas llamadas globales y abarca la activacion intrnseca de la protombina y el fibringeno. La sangre, al ser extrada sin mayor contaminacin con tromboplastina tisular, es capaz de coagular cuando se la deposita en un tubo de vidrio. El tiempo que tarda este proceso esta en relacion con el sistema de procoagulantes e inhibidores fisiolgicos o adquiridos, que influyen en la formacin de dicho coagulo. Este tiempo de coagulacin in Vitro reflejara mejor la eficacia del sistema in vivo, cuanto menos se modifique esta sangre (contacto con el vidrio, burbujas de aire, detergentes, etc.). Materiales y reactivos Tubos de vidrio, perfectamente limpios. Bao a 37 C Cronometro Procedimiento 1. Obtener 3 ml de sangre por puncion venosa, de primera intencion y con jeringa plstica. 2. Disparar el cronometro en el instante en que la sangre venosa se introduce en la jeringa 3. Desconectar la aguja y vaciar ordenadamente 1 ml de sangre en el primero de los tres tubos de vidrio perfectamente limpios, previamente colocados en gradilla de bao a 37 C 4. Inclinar el primer tubo cada 30 seg. por la misma cara hasta que la sangre se coagule (deja de escurrirse por las paredes del tubo). 5. De inmediato, inclinar el segundo tubo hasta que se coagule; luego, proceder de la misma forma con el tercer tubo. 6. Se toma como tiempo de coagulacin el valor obtenido en el tercer tubo. Interpretacin de resultados Valores de referencia a 37 C: 7-15 min. El rango normal debe establecerse en cada laboratorio, con un grupo suficiente de controles (20 como minimo). Conviene repetir un paciente normal semanalmente, para determinar cualquier variabilidad de los valores previamente obtenidos. Se considera alargado un tiempo de coagulacin que difiere en mas de 2 min del limite superior del rango normal, establecido en cada laboratorio (media +2 SD). Se trata de un metodo poco sensible, pues se prolonga solo en aquellos casos de deficit graves. Un tiempo de coagulacin normal no descarta la existencia de un trastorno de la coagulacin, pero un tiempo prolongado es siempre indice de un defecto severo de la misma, que puede deberse a una deficiencia de cualquiera de los factores que intervienen en la formacin del coagulo de fibrina, con excepcion de una deficiencia pura de los factores VII y XIII; pero el metodo es mucho mas sensible a los defectos de los factores que intervienen en la activacion por contacto y en la formacin del activador intrinseco de la protombina.

4. RETRACCION DEL COAGULO

Fundamento La retraccin del coagulo depende de la actividad de trombodinmica de las plaquetas, por lo que se requiere un nmero mnimo de plaquetas normales y adecuados niveles de Ca . Procedimiento 1. Los tres tubos utilizados para determinar el tiempo de coagulacin deben dejarse en bao a 37C durante por lo menos 3 Hs. Al cabo de este tiempo, observaremos la mejor retraccin de los tres tubos, graduando de acuerdo a la magnitud de la retraccin por apreciacin visual del tamao del coagulo retrado y el suero libre en: a) b) c) d) Normal o completa Incompleta No retrae Hiperretrctil

Interpretacin de resultados Esta prueba depende del nmero de plaquetas, su actividad funcional y de la concentracin de fibrgeno, aunque no se relacione muy bien con el nmero de plaquetas (en ciertas condiciones da normal an con 30.000/mm3). Un aumento importante de fibrgeno reducir la retraccin por efecto de volumen, mientras que lo opuesto ocurre en casos de hipofibrinogenemia. En la trombastenia de Glanzman (alteracin funcional) se observan retracciones incompletas o nulas.

CORRECCION DE LEUCOCITOS POR LOS NORMOBLASTOS CONTADOS

Es el valor de leucocitos a regular 100 + # Normoblastos = R x # Leucocitos Este resultado se resta del # de Leucocitos lo que sale # Leucocitos = 25300

Ejemplo:

100 + 576 = 676 = 0.85 x 25300 = 21557

25.300 Leucocitos Corregidos = - 21557 El valor de Leucocitos = 3743

ORINA DE 24 HORAS
CALCIO Diluir la orina con solucin salina 1 en 1 Ej. (500 ul + 500 ul) Lo programamos en el HITACHI como si fuera suero lo que nos sale del equipo lo multiplicamos por el factor de dilucin que es 2. El resultado lo reportamos en mg/dl. Si es orina de 24 horas, el resultado del equipo lo multiplicamos por el factor de dilucin y a su vez el resultado lo multiplicamos por el volumen en decilitros de orina de 24 horas. El resultado se reporta en mg/24h. Para sacar los decilitros, dividir el volumen total para 100 = decilitros VN = 100 300 mg/24h PROTEINAS EN ORINA DE 24 HORAS La orina o el LCR. se miden con el reactivo U/CSF del equipo => el resultado lo procesamos directo lo que sale del equipo en mg/dl (en caso de orina ocasional o de liquido cefalorraqudeo). Cuando se trata de orina de 24 horas: * lo que nos sale es en mg/l x volumen total (en litros) = mg/da VR = ORINA = RANDOM = < 12 mg/dl ORINA DE 24 HORAS = < 150 mg/24h LCR = 150 450 mg/l Si se necesita convertir mg/l a mg/dl, solo se multiplica por 0.1 EJ: 150mg/l 15 mg/dl ACIDO URICO Diluir la muestra con solucion salina o agua destilada 1+10 (1000 ul de solucion salina o agua destilada + 100 ul de orina centrifugada; se la procesa en el HITACHI como cualquier muestra y el resultado lo multiplicamos por el factor de dilucin que es 11; se reporta directo en mg/dl cuando es orina ocasional; si es orina de 24 horas, el resultado del equipo se multiplica 1 por el factor de dilucin y luego se reporta en mg/24h. VR = ORINA DE LA MAANA ORINA DE 24 HORAS = 37 92 mg/dl 200 1 mg/24h 13 67 mg/dl

UREA EN ORINA DE 24 HORAS Lo que sale del equipo (dilucin 1:10) x 10 x el volumen en decilitros. VR = 10 35 g/24h 900 solucion salina 100 orina centrifugada

DEPURACION
DATOS QUE SE TIENEN QUE APUNTAR EN EL CUADERNO Depuracin de creatinina Creatinina en orina 24 horas Creatinina en orina Creatinina en suero Peso Talla Superficie corporal Volumen de muestra

PASOS: CREATININA EN ORINA Centrifugar la orina, (hacer dilucin 1000 de solucin salina + 100 de orina) Leer en el equipo como creatinina en suero el resultado se multiplica por 11.

CREATININA EN ORINA DE 24 HORAS El resultado de creatinina en orina ya multiplicado por 11. Se multiplica por el volumen en decilitros (VOL./100= VOL. En decilitros) Se divide para 1000 y listo.

DEPURACION DE CREATININA El resultado de creatinina en orina ya multiplicado por 11. Se divide para la creatinina en suero el resultado. Se multiplica por el volumen total de muestra el resultado. Se divide para 1440 (constante) el resultado se Multiplica por 1.73 (constante) el resultado Se divide para la superficie corporal y listo.

CALCULO DE CREATININA EN ORINA DE 24 HORAS Creatinina en orina por factor de dilucin por volumen (dl) = Creatinina orina EJ: Creatinina en orina = 3.8 Factor de dilucin = siempre es 11 (1ml de solucin salina + 100 lambdas de orina centrifugada) Volumen = 2.680 ml 100 = 26.8 decilitros 3.8 x 11 x 26.80 = 1.120 mg/24h = 1.1 g/24h. VN: Hombres = 1.040 2.350 mg/24h. (1-2.3 g/24h) Mujeres = 740 1.570 mg/24h. (0.7-1.5 g/24h) SE REPORTA EN GRAMOS EN 24 HORAS. 1000 = g/24h DEPURACION DE CREATININA EN ORINA DE 24 HORAS Creatinina en orina x 11 (mg/dl) x Volumen de orina Creatinina en suero (mg/dl) 1440 minutos Estos valores deben corregirse con las variaciones de peso y talla de cada paciente (sacar la superficie corporal con la tabla adjunta) Depuracin x 1.73 Superficie corporal = D C E EJ. Creatinina en suero = 0.6 mg/dl Creatinina en orina = 35.2 mg/dl Volumen de orina en 24h. = 4100 ml Superficie corporal = 1.66 m2 CALCULO 35.2 mg/dl 0.6 mg/dl 58.6 x 4100 ml/24h 1440 min 2.84 = 166.4 ml/min = 173.4 ml/min

166.4 ml/min x 1.73 1.66

Valores referenciales: de 85 125 ml/min Si esta dentro de los valores referenciales o por encima, decimos que hay una buena depuracin, no as si esta por debajo de 85, tiene mala depuracin.

EXAMENES DE LIQUIDOS BIOLGICOS

LIQUIDOS PLEURALES, PERICARDICOS Y PERITONIALES COLOR: el color del lquido puede indicar el origen de la efusin: Rojo: sangre Verde: vescula, ulcera duodenal Lechoso: obstruccin linfticas ASPECTO: puede ser seroso, fibrinoso, purulentos, lechosos sanguinolentos o combinacin de ellos. Si el lquido es lechoso se alcaliniza con unas gotas de hidrxido de sodio y se sacude con ter, con lo que la grasa se disuelve. PH: debe medirse anaerbicamente como la sangre arterial, sin mucha tardanza hacer con tira de orina. DENSIDAD: refleja el contenido de protenas del lquido. Hacer con tiras de orina. Bioqumicas que se realizan: protenas glucosa y LDH. CONTAJE CELULAR: si las clulas son pocas en nmero se cuenta todos los campos. En este caso el nmero de celulas contadas es igual nmero de celulas mm3. Cuando hay muchas clulas se procede a hacer diluciones de acuerdo al aspecto lquido: Dilucin 1.2 1.4 1.8 1.10 1.20 1.40 1.80 1.160 cant. del lquido 100 ul 100 ul 100 ul 100 ul 25 ul 25 ul 25 ul 25 ul cant. sol. salina GR y liq. Glob. blancos 100 ul 300 ul 700 ul 900 ul 500 ul 1000 ul 2000 ul 4000 ul

SE DEBEN CONTAR HEMATIES Y LEUCOCITOS FORMULA: NUMERO DE CELULAS CONTADAS X DILUCION X 10 NUMERO DE CUADRADOS CONTADOS DIFERENCIAL: se centrifuga la muestra durante 15 minutos. Se elimina el sobrenadante dejar 0.5 ml de sobrenadante para suspender el sedimento. Se tie con Wright 3 minutos. CARACTERISTICAS NORMALES Color pajizo. Aspecto transparente. Ph. 7.4 densidad: 1016 Protenas: 1 2 g/dl Glucosa: 70 110 mg/dl. Contaje de clulas: pocos o ningn diferencial: algunos linfocitos y clulas mezote lales. LIQUIDO CEFALORAQUIDEO: Si se tiene que compartir un volumen pequeo de LCR, la muestra puede ser centrifugada: el sedimento puede ser usado para cultivo y tincin de Gram y Wright (excepto el Contaje celular) y el sobrenadante puede ser usado para las pruebas bioqumicas. Si se recibe menos de 0.5 ml de muestra entera no concentrada es usada para cultivo y examen microscpico. SE INFORMA: COLOR, ASPECTO, CONTAJE CELULAR (la frmula igual que los otros lquidos, y debe realizarse lo mas posibles ya que se deterioran rpidamente) Diferencial bioqumicas: glucosa y micro protenas.

El doctor puede solicitar cloro, urea, de rutina no lo hacemos. Solo si lo solicitan y debe facturarse. EL LCR NORMAL: es incoloro (cristal de roca) aspecto: transparente. Glucosa 45 60 mg/dl. Protenas 20 40 mg/dl cloro 116 127 mEq/l urea 8 28 mg/dl. LIQUIDO SINOVIAL: LA MUESTRA DEBE VENIR HEPARINIZADA SE INFORMA COLOR, ASPECTO, CONTAJE CELULAR (la formula igual que los otros lquidos. Diferencial bioqumicas: glucosa protenas totales y Ac.rico. El lquido sinivial normal: es incoloro o de color pajizo. El aspecto es transparente. Glucosa a 70 110 mg/dl protenas 1.07 2.13 g/dl. En enfermedades spticas de las articulaciones puede ser turbio o purulento. En enfermedades inflamatorias permanece claro o solo tiene ligera turbidez. A causa de la carencia de fibringeno y de otros factores de coagulacin normal no coagulada. Los procesos inflamatorios permiten el paso de factores de coagulacin del plasma el lquido articular y por eso se coagula, el coagulo se forma espontneamente cuando el lquido articular que no se ha tratado, se deja en reposo. Por eso hay que heparinizarlo inmediatamente. SE DEBE INFORMARSE EN TODOS LOS LIQUIDOS LA CANTIDAD DE HEMATIES Y DE LEUCOCITOS.

OSMOLARIDAD PLASMATICA
Para calcular la osmoralidad plasmtica, necesitamos los valores de: sodio glucosa urea en sangre toda. La formula es: Osm. Plasmat. = (Na x 2) + ( Valor referencial = 280 - 295 m Osm/l )

OSMOLARIDAD URINARIA
Osm. Urinaria = (1.86 x Na) + ( Valor Referencial = 50 - 1.400 m Osm / Kg ) + ( orina urea) + 9

CALCULOS Y VALORES REFERENCIALES EN ORINA DE 24 HORAS

GRUPO NUMERO 1: el clculo se realiza de la siguiente manera: El resultado obtenido

(mg/dl) se multiplica por el volumen de orina en dl. (Normalmente el volumen de orina lo medimos en ml, para transformarlo en dl. Se divide para 100) U 100 R x VO = R 100 Este resultado a su vez se divide para 1000 = g/da. Pues dichas pruebas se reportan en el da. EJ. UREA EN ORINA DE 24 HORAS: Resultado que da el equipo: 119 mg/l Volumen de orina: 1740 ml Volumen de orina: 1740 ml dividido para 100 = 17.4 dl 119 mg/dl x 17.4 = 2070 mg/da dividido para 1000: resultado: 2.0 g/da EXAMENES QUE COMPRENDEN: UREA: V.R. 26 43 g/da FOSFORO: V.R. 0.4 1.3 g/da PROTEINAS: el valor que sale se reporta en alt 92, en g/da sin valor referencial <150mh/24h En orina random V.R. < 12 mg/dl Aqu se reporta lo que sale del equipo mg/l x volumen total (litros) = mg/d se reporta en gramos/d. VR = < 0.15 g/24h.

GRUPO NUMERO 2: el resultado obtenido (mg/dl) se multiplica por el volumen de orina

en dl (normalmente el volumen de orina lo medimos en ml, para transformarlo en dl se divide para 100) mg/da = mg/dl x volumen de orina en dl. EXAMENES QUE COMPRENDEN: CALCIO: V.R. 100 - 300 mg/da MAGNESIO: 73 - 122 mg/da CREATININA: 800 - 2800 mg/da GLUCOSA: <500 mg/da AC. URICO: 250 - 750 mg/da

GRUPO NUMERO3: el resultado obtenido se multiplica por el volumen de orina pero en

litros, para esto se divide el volumen que medimos para 1000. EJ. Potasio 30 mEq/L Volumen de orina: 2000 ml 2000 dividido para 1000 = 2 L 30 x 2 = 60 mEq/da EXAMENES QUE COMPRENDEN: POTASIO: 25 - 125 mEq/da SODIO: 40 - 220 mEq/da

V. REFERENCIALES PARA ORINAS RANDOM, SOLO PARA ORINA DE 24 HORAS EXCEPTO PARA PROTEINAS QUE SI HAY
OSMORALIDAD URINARIA: Se hace Glucosa, Sodio y Urea Formula (1.86 x Sodio) + (Glucosa/18) + Urea + 9 VR: (50 - 1400 mOsm/Kg.) DEPURACION DE CREATININA: Creatinina en orina (mg/dl) Creatinina en plasma volumen de orina ml/24h 1440 min

Los valores asi obtenidos deben corregirse con las variaciones interindividuales de peso y la talla. Buscar en la superficie corporal Depuracin x 1.73 Superficie corporal Creatinina en sangre: 0.6 mg/dl Creatinina en orina: 38.3 mg/dl Volumen de orina: 4400 ml Superficie corporal: 1.69 m2 38.3 mg/dl 0.6 mg/dl 4400 ml/24hs 1440 min = 63.83 x 3.05 = 194.68 ml/min

Correccin con la superficie corporal: 194.68 ml/min X 1.73 = 199.2 ml/min 1.69 VR.85 - 125 Si el valor esta debajo de 85 nos habla de que hay una mala depuracin. Si dentro del rango o por encima de 125 esta bien.

ELECTROLITOS EN ORINA
(2 partes) + (1 parte) - 2ml de diluyente + 1 ml de orina centrifugada o 400 ul de diluyente + 200 ul de orina EN EL EQUIPO= LISTO NO NO MUESTRA QC/STD DIALIZADO/ORINA YES Luego poner NO hasta que salga MUESTRA DE ORINA? YES pasar la muestra preparada anteriormente VN= Na = 40 - 135 mEp/L K = 25 - 135 mEp/L Cl = 46 - 168 mEp/L Calcio = 50 - 300 mg/24h SI NO SALE EL RESULTADO, DE ESTA DILUCION TOMAMOS: 200 ul y mezclamos con 400 ul de agua destilada y lo pasamos en el equipo siguiendo el mismo procedimiento. El resultado se multiplica por el factor de dilucion que es 3. OJO LES INDICO ESTOS VOLUMENES POR QUE ES MEJOR QUE SOBRE MUESTRA DILUIDA PARA EL EQUIPO Y POR SI ACASO NO LO LEE, SE PUEDE PREPARAR OTROS VOLUMENES PERO SIEMPRE GUARDANDO LA RELACION 2 partes de diluyente + 1 parte de orina = factor de dilucion = 3 Creatinina en orina Random (orina ocasional) Hombres: 39 - 259 mg/dl Mujeres: 28 - 217 mg/dl Orina de 24 h: lo que sale del equipo x el factor de dilucin 10 x volumen en decilitros. VR= 1040 a 2.350 mg/24h 1 - 2.3 g/h

LIQUIDOS BIOLOGICOS
Pueden ser: Lquidos LCR Pleural Sinovial Asctico Ovrico Pericrdico Aspirado traqueal (no se realiza en bioqumica, solo citologa) Lavado gstrico (no se realiza bioqumico, solo citologa) Los lquidos biolgicos deben ser procesados en forma inmediata. El lquido sinovial debe ser heparinizado al momento en que se lo recibe para evitar su coagulacin. En forma general los lquidos biolgicos se procesan de la siguiente manera. 1.- Envasar el lquido en un tubo limpio y seco; cuando solicitan cultivos deben venir de recipientes estriles y por separado para examen fsico-qumico. 2.- Observar: color: van desde incoloro (lquido cefalorraqudeo) hasta amarillo rojizo. (los lquidos pleural, pericrdico) aspecto transparente ligeramente turbio- turbio purulento) Presencia de cogulos de fibrina, restos de tejidos etc. Anotar si se observan sedimentos a simple vista. De acuerdo al color y aspecto de la muestra se realizar el contaje celular por ejemplo. Si es un lquido transparente, o ligeramente turbio se lo cuenta directo en la cmara de newbawer; en cambio en un lquido turbio, blanquecino, etc. Se necesitara realizar una dilucin que puede ser. 1:10 1.000 ul de solucion salina 100 ul de muestra 1:20 1.000 ul de solucin salina 50 ul de muestra 1:40 1.000 ul de solucin salina 25 ul de muestra 1:50 1.000 ul de solucin salina 20 ul de muestra 1:100 1.000 ul de solucin salina 10 ul de muestra Al realizarla dilucin, mezclamos en un vortex y cargamos la cmara de newbawer. Dejamos reposar la cmara por 5 minutos en cmara hmeda cmara de petricar papel filtro (una hoja) y humedecida con agua destilada- sin exceso de agua y procedemos al contaje celular tanto de leucocitos como hemates en cada cuadrado del rea reticulada. Aplicamos la frmula. Nmero de clulas = numero de clulas contadas x dilucin x 10 (el 10 es 1 contraste) nmero de cuadrados contados. Ejemplo.- en 2 cuadrados se contaron (24 leucocitos 12 hemates) - dilucin 1:40 Leucocitos = 24 x 40 x 10 = 4.800 2 Hemates = 12 x 40 x 10 = 2.400 2 Total de clulas 4.800 2.400

7.200 clulas mm El contaje en lquidos claros es directo y contando todos los cuadrantes. En el reporte tambin anotar si se observan levaduras, bacterias, parsitos en fresco. EXAMEN BIOQUIMICO.- Centrifugar muestra para lquidos en general, se realizaran pruebas de glucosa y protenas (microprotenas para LCR protenas totales para el resto de lquidos). Adems para lquidos pleural = LDH Asctico = Amilasa Articular = Acido rico

HEMATOZOARIOS En una placa porta objeto aplicar 1 gota de 1cm de dimetro de sangre sin anticoagulante, dejar secar. Introducir la placa en un recipiente que contenga azul fosfatada por 3 segundos, a continuacin introducir la placa en un recipiente que contenga buffer de hematozoarios por 3 segundos; luego introducir la placa en 1 recipiente donde previamente se prepar 1 ml de buffer de hematozoarios + 1 gota de colorante giemza (1 gota giemza por cada ml de buffer). Dejarlo por 7 minutos y posteriormente sacar la placa y dejar secar para observarla en lente de 100 x con aceite de inmersin. Se reporta positivo o negativo.

EXAMEN COPROLOGICO La muestra de materia fecal se la realiza de la siguiente manera: 1.- Color: amarillo, caf, verdosa, blanquecina, rojiza. 2.- Consistencia: lquida blanda, semiblanda, dura. 3.- Presencia de: moco, sangre, parsitos visibles etc. COPROPARASITARIO FRESCO.- En un porta objetos colocamos una pequea cantidad de heces en 2 lugares diferentes; sobre la primera colocamos una gota de solucin salina y en la segunda una gota de lugol, sobre cada mezcla ponemos una laminilla cubreobjetos y observamos al microscopio primero con lente de 10x en busca de parsitos, restos de alimentos. Luego observamos con lente de 40x observando presencia de hemates, leucocitos (reportar nmero de campo). Flora bacteriana (normal o aumentada o disminuida) Presencia de parsitos (tipo de parsitos si es quiste o trofozoito se reporta por levaduras, hemates (por campo). En caso de haber mas de 10 leucocitos por campo, es mandatario realizar el examen de MOCO FECAL que consiste en: realizar 1 frotis con las heces teirla con colorante wrights y observar al microscopio con objeto de 100x (mononucleares o polimorfonucleares) y reportarlo en porcentaje: Ejemplo: 80% mononucleares 20% polinucleares El examen de moco fecal va tambin reportado el color, consistencia, ph, glucosa (si el mdico solicita azcares reductores).

FISICO QUIMICO DE ORINA.- Envasamos la orina en 1 tubo de ensayo y observamos. FISICO.- Color, amarillo, mbar, rojo, incoloro, verdoso, medicamentoso. QUIMICO.- Aplicamos la tirilla reactiva para determinar: Glucosa: Ph: Densidad: Nitritos: Leucocitos: Protenas: Sangre: Cuerpo cetnico: Bilirrubina: Urbilingeno: Comparamos el color de cada parmetro con el del envase y marcando en cruces de acuerdo al reactivo. SEDIMENTO.- Luego de 10 minutos de centrifugacin a 2.000 rpm eliminamos el sobrenadante y aplicamos 1 gota de sedimento en una placa porta objeto para observar al microscopio con lente de 40x. Observamos lo siguiente: - Clulas epiteliales: Clulas transicionales, escasas, moderadas, abundantes. - Filamentos mucosos: Escasos, moderados, abundantes. - Cristales: de oxalate de calcio, acido rico, fosfatos, uratos amorfos, etc.(cruces) - Hemates: trazas 5 - 6 xc 6 - 10 10 - 20 25 - 35 Leucocitos: trazas: 5 6 10 25 6 xc -10 - 20 - 30 moderadas ++ abundantes +++

Bacterias: escasas +

Otros: cilindros: tricomonas

HEMOSTASIA PRUEBAS DE COAGULACION La muestra para hemostasia debe ser en tubo con anticoagulante citrato de sodio (tubo para celeste) PRUEBA DE TIEMPODE COUGULACION TIEMPO DE PROTOMBINA.(TP).- en un tubo tomar 200 ml de reactivo de protrombina, encubar 3 minutos en bao Mara a 37 grados centgrados, luego adicionar 100 ul de muestra (plasma) y ponemos el cronmetro a correr, cuando empieza a formarse el coagulo paramos el tiempo y anotamos los segundos. 12.7 TIEMPO DE SANGRIA En el pulpejo del dedo pulgar realizar un pinchazo con lanceta en la pel previamente limpia, anotar el tiempo en que deja de sangrar. VN: 2 - 5 minutos TIEMPO DE COAGULACION. Tomar una muestra de sangre sin anticoagulante, tomar el tiempo en que se form el coagulo. VN: 1 - 6 minutos

TINCION DE BARR TINCION DE ZIEHL NELSEN 1.- Hacer frotis de muestra (esputo) (lquidos biolgicos previamente centrifugados a 1500 rpm durante 20 minutos). 2.- Cubrir con papel filtro la regin del frotis 3.- Cubrir generosamente con fuccina fnica toda la extensin del papel filtro. 4.- Flanear al calor de la llama del mechero a la distancia de altura que no queme el papel pero que salgan vapores de la superficie del colorante durante 5 minutos. Si la fuccina se esta secando aumentar para que se mantenga hmeda. 5.- Concluido el tiempo eliminar el papel, enjuagar la superficie de la tincin con agua de la llave, luego dejar caer en la superficie del frotis unas gotas de alcohol cido para que se elimine el colorante. 6.- Cubrir el frotis con azul de metileno durante 1 minuto, enjuagar con agua, dejar secar el frotis y observar con lente de inmersin. OBSERVACION: El campo microscpico se vera de color azul y los bacilos alcohol cido resistentes se observaran como bastones de color rojo, ya sea individualizados o agrupados. Antes de reportar negativo, recorrer absolutamente el frotis de la placa (500 campos microscpicos)

LIQUIDOS BIOLOGICOS CONDUCTA A SEGUIR.A todos los lquidos se les deber realizar contaje bacteriano y tincin directa de gram. la siembra para realizar el contaje bacteriano es la siguiente:

Los lquidos de cavidades cerradas (LCR, liq. Pericrdico, liq. Pleural, liq. Sinovial, liq. Asctico.) deben sembrarse en: agar Sangre Agar Mackonkey aerobios

En frascos pequeos de tioglicolato (como hemocultivo) Anaerobios (con jeringuilla aspirar 1 a 2 cm aproximadamente de lquido, al momento de sembrar cambiar la aguja todo bajo la llama. Tambin es mandatario realizar a todo lquido cefalorraqudeo una prueba de la tinta china, para lo cual depositamos en una placa portaobjetos 50 ul de LCR sobre la cual ponemos una gota de tinta china, colocamos una laminilla cubreobjetos y observamos al microscopio con objetivo de 10x y 40x se reporta como positivo o negativo.