Guia de Práctica de Interpretación de Análisis Clínicos 2021 I

3B-2
Unidad académica: EAP DE FARMACIA Y BIOQUÍMICA
GUÍA DE PRÁCTICA
INTERPRETACIÓN DE ANÁLISIS CLÍNICOS
Autor: Q.F. Dr. Juan Manuel Parreño Tipian
2021
F-CV3-3B-2 Rev. Junio 2007

INTRODUCCIÓN
El laboratorio clínico dispone de los métodos de análisis clínicos, que estudia los diversos
procesos utilizados en la exploración clínica y hace la interpretación bioquímica y
patológica de los resultados.
Por su amplitud y por la evolución vertiginosa de especialización se ha dividido en:
hematología, inmunohematología, bioquímica clínica, microbiología clínica, parasitología
clínica y líquidos biológicos.

PROGRAMACIÓN DE PRÁCTICAS
Semana Práctica Contenido
1 1 Toma de muestra Sangre total. Suero. Plasma. Sangre desfibrinada.
Hematimetría. Recuento de glóbulos rojos. Dosaje de hemoglobina.
2 2 Hematocrito. Microhematocrito.
Leucometría. Recuento de glóbulos blancos.
3 3 Hemograma de Schilling.
Velocidad de sedimentación globular.
Recuento de plaquetas.
4 4 Recuento de reticulocitos.
Tiempo de coagulación. Tiempo de Sangría. Tiempo de protrombina,
5 5 Tiempo parcial de tromboplastina. Retracción de coagulo.
Grupos sanguíneos. Sistema ABO, Factor Rh.
6 6 Variante Du.
Aglutinaciones TO, TH, PA, PB y B
Pruebas Serológicas: VDRL. RPR.
7 7 Antiestreptolisinas O
Prueba de Proteína C Reactiva.
Prueba de látex.
8 Primer examen (E1)
Examen de orina completa:
9 8 Examen físico. Examen químico. Examen microscópico.
Examen del Líquido Seminal: Examen físico y microscópico.
Urocultivo. Coloración Gram. Pruebas bioquímicas. Antibiogramas.
10 9 Estudio de las Heces. Examen parasitológico. Método Directo.
Método de Faust. Técnica de Graham.
Determinación de glucosa. Determinación de Colesterol total.
11 10 Determinación de Triglicéridos.
Determinación de Fosfatasa Alcalina.
12 11 Determinación de Amilasa.
Determinación de Bilirrubinas totales, directa e indirecta.
13 12 Determinación de proteínas totales y fraccionadas.
Determinación de urea. Determinación de creatinina. Determinación
14 13 de calcio.
15 14 Determinación de HCG sub unidad beta cualitativo y cuantitativo.
16 Segundo examen (E2)
PRÁCTICA No. 1: Toma de muestra para los diversos líquidos biológicos. Sangre
total. Suero. Plasma. Sangre desfibrinada.

1.1. Marco Teórico
La toma de muestra de sangre o de cualquier fluido biológico tiene importancia en la
buena determinación de los análisis clínicos ya que constituyen el primer paso en todo el
proceso dependiendo de una serie de factores.
Líquidos Biológicos:
1. Sangre
2. Orina
3. Esputo
4. Jugo Gástrico
5. Contenido Duodenal
6. Líquido Cefalorraquídeo
7. Liquido sinovial
8. Líquidos serosos (pleural, peritoneal, articular)
9. Líquido amniótico y seminal
10. Heces
Las determinaciones hematológicas y bioquímicas pueden realizarse en sangre total,
suero o plasma.
1.2. Competencias
1. Distingue los diversos métodos para la toma de muestra de los diversos líquidos
biológicos
2. Explica las diferencias entre los líquidos de sangre total, plasma y suero sanguíneo.
1.3. Materiales y Equipos

 Materiales
1. Agujas descartables 20 G x 1 ½
2. Algodón
3. Alcohol
4. Tubos de ensayo
5. Viales con anticoagulantes
6. Perlas de vidrio
7. Matraz
8. Pipetas
 Reactivos Anticoagulantes:
De Wintrobe:
 Oxalato de Amonio ------ 1.2 gr.
 Oxalato de Potasio _------ 0.8 gr.
 Agua destilada --------- 100 mL.
 Formol al 40% --------- 1 mL.
Haskins Trotman: Oxalato de potasio al 2%

Citrato Trisódico al 3.8%
Oxalato de Sodio al 1.34%
Heparina al 0,75%
EDTA.

1.4. Procedimiento: Toma de muestra.
SANGRE VENOSA:
1. El paciente permanecerá sentado con el brazo extendido reposando sobre la mesa
apoyado sobre una almohadilla.
2. Se colocará una ligadura de goma a unos 7 cm. por encima del codo, teniendo la
precaución de no comprimir fuertemente. Esta ligadura colocada más de 2' provoca
una hemoconcentración con acumulaciones subproductos metabólicos.
Se elige la vena más prominente sobre la superficie de flexión del codo (VENA
MEDIANA CEFALICA)
3. Se desinfecta la región con una torunda de algodón empapada al alcohol yodado.
4. Se atraviesa la piel con la aguja manteniendo el bisel hacia arriba directamente
sobre la vena penetrando en ella.
5. Una vez lograda la cantidad de sangre necesaria se afloja la ligadura mientras la
aguja permanece aún en la vena.
6. Se saca la aguja y se aplica una torunda ligeramente humedecida en alcohol
flexionando el codo.
7. Para efectuar los frotises se tomará una gota de sangre tomada directamente de la
aguja antes de mezclarla con el anticoagulante sobre para objetos desengrasados y
secos.
8. En niños que no son muy palpables las venas se tomará la sangre de la vena
yugular.
SANGRE CAPILAR:
1. Se obtiene por punción cutánea y se utiliza cuando se requieren pequeñas cantidades
de sangre.
2. Debe utilizarse una lanceta
3. En la yema del dedo. En los niños en el lóbulo de la oreja o bien en el talón dilatado
y la sangre fluya espontáneamente.
Obtener los siguientes componentes:
1. SANGRE TOTAL Y PLASMA
En une vial con anticoagulante colocar 5 ml. de sangre, Mezclar. Colocar en un tubo
de ensayo y centrifugar 10 minutos a 1500 rpm.
2. SUERO
En un tubo de ensayo colocar 5 mL de sangre
Centrifugar 10 minutos a 1500 rpm.
3. SANGRE DESFIBRINADA
En un vaso pequeño o matraz que contiene perlas de vidrio, colocar 3 a 5 mL de
sangre sin anticoagulante. Se agita durante 15 minutos. La FIBRINA se deposita
sobre estos cuerpos en forma de filamentos elásticos y blancos.
El líquido que queda se denomina sangre desfibrinada y está constituida por suero y
glóbulos que se puede confirmar por centrifugación.
La fibrina es de color blanco y se observa lavando con agua destilada.
1.5. Resultados
Los alumnos reportaran en su informe los resultados obtenidos en ésta práctica.
1.6. Cuestionario

1. Desarrolle mapas conceptuales indicando los pasos para una toma de muestra de
sangre venosa, sangre arterial y sangre capilar.
2. ¿Qué diferencias existen entre suero y plasma?
3. ¿Qué utilidad tienen la sangre desfibrinada en el laboratorio clínico?
4. ¿Cuál es la composición química del anticoagulante de Wintrobe y cómo actúa en la
sangre evitando la coagulación de la misma, refiera bioquímicamente?
5. ¿Cuál es la ventaja de obtener sangre con tubos Vacutainer, mencione los diversos
tipos que existen?
1.7. Fuentes de información

1. Bernard J, Lévy JP. Manual de Hematologia. 7a ed. Barcelona: Toray Masson S.A; 2001.
2. Guerci A. Laboratorio métodos de análisis clínicos y su interpretación. 3a ed. Buenos Aires: El
ateneo; 1985.
3. Robbins S, Cotran R, Kumar V, Collins T. Manual de patología estructural y funcional. 6a ed.
Madrid: Mc Graw-Hill Interamericana; 1999.
4. Wintrobe M, Maxwell M. Hematología clínica. 6a ed. Buenos Aires: Interamericana; 1999.
PRÁCTICA No. 2: Hematimetría. Recuento de glóbulos rojos. Dosaje de

hemoglobina. Hematocrito. Microhematocrito.
A. HEMATIMETRIA: RECUENTO DE GLÓBULOS ROJOS.
2.1. Marco teórico

La hematimetría es un método para contar los glóbulos rojos de la sangre.
2.2. Competencias
1. Reconoce la cámara de Neubauer y los campos donde se efectúan los contajes
correspondientes de los elementos formes.
2. Opera con destreza el proceso del recuento de glóbulos rojos.
2.3. Materiales y equipos

 Materiales
 Cámara de Neubauer
 Pipeta de Thoma para glóbulos rojos
 Reactivos
 LIQUIDO DE DILUCIÓN:
 Las más conocidas son las de GOWER, HAYEM y MARCANO.
 Contenido de la SOLUCIÓN DE GOWER:
• Sulfato de Sodio ........ 12,5 gr.
• Ácido Acético Glacial …. 33,3 mL
• Agua destilada csp ....... 200 mL.
2.4. Procedimiento
1. Aspirar sangre hasta 0.5 ó 1 según la dilución 1 en 200 ó 1 en 100.

2. La sangre que moja la superficie externa de la pipeta se limpia rápidamente con
papel especial o con gasa.
3. Si la sangre pasa la marca de 0.5 ó 1 se retira por capilaridad tocando la punta de
la pipeta con gasa o algodón.
4. Completar con el líquido de dilución hasta la marca de 101.
5. Mientras se aspira el líquido de dilución, se hace girar la pipeta entre el pulgar y el
índice de la mano derecha.
6. Retirando la boquilla se imprimen movimientos durante 1 ó 2 minutos.
7. Desechar las primeras gotas y sin pérdida de tiempo tocar con una gota pequeña el
borde de la superficie pulimentada en que están en contacto la cuadricular de la
cámara y el portaobjeto.
8. Esta gota se insinúa por debajo del cubreobjeto por capilaridad.
9. La suspensión no debe escurrirse en los surcos laterales ni debe formarse burbujas
de aire.
10. Dejar transcurrir 3 minutos para que se depositen los glóbulos.
11. Llevar la cámara a la platina del microscopio. Iluminar bien. Comprobar si hay
uniforme distribución de hematíes.
12. Efectuar el recuento con el objetivo de gran aumento, manteniendo el condensador
bajo y el diafragma parcialmente cerrado, nunca se tocará el cubreobjeto con la
lente, ello induce a groseros errores al modificar la posición de los corpúsculos.
Para evitar toda confusión al contar los glóbulos, se incluyen los hematíes que tocan las
líneas divisorias izquierda y superior como si estuviera dentro de los cuadrados, los que
tocan los lados derecho e inferior no se toman en cuenta.
No debe haber diferencia de más de 18 unidades de número de glóbulos rojos entre los 5
cuadrados.
Cálculos:
Con la dilución al 1 en 200 contar los glóbulos comprendidos en 5 grupos de 16 luego se
aplica la siguiente fórmula: (Cálculo razonado)
N x 10 x 200 x 400
------------------------- = Hematíes por mm3 de sangre.
80
De donde:
N: número total de hematíes en 80 cuadraditos.
10: altura de la cámara.
200: dilución de la pipeta.
400: número total de cuadraditos.
80: para referir al número de cuadraditos en el que se ha llevado a cabo el
recuento.
O también: los glóbulos rojos de los 5 cuadrados se le agregan 4 ceros
Cifras normales:
En estado de salud existe aproximadamente 5’000,000 de hematíes por mm3 de sangre.
El número es un poco menor en las mujeres 4’500,000 por mm3.
Interpretación:
 La disminución de hematíes se denomina ANEMIA u OLIGOCITEMIA y se da
también en leucemia y después de hemorragias.

 El aumento se denomina POLICITEMIA o POLIGLOBULIA.
 Hay poliglobulia en el recién nacido hasta 7’000,000 y va descendiendo
gradualmente para llegar al del adulto hacia los 15 años.
 La policitemia carece de importancia y en patología es infrecuente.
2.5. Resultados
Los alumnos reportaran en su informe los resultados obtenidos en esta práctica.
2.6. Cuestionario
1. ¿Cuál es el fundamento del recuento de glóbulos rojos?
2. ¿Cómo actúan los componentes del líquido de Gower en la hematimetría?
3. Explique mediante un esquema el Reticulo de Thoma
4. Describa bioquímicamente ¿Cómo se produce la anemia ferropénica?.
5. ¿Por qué en las personas que habitan en alturas se encuentra Policitemia?.

ateneo; 1985.
B. DOSAJE DE HEMOGLOBINA (Hb)
2.1. Marco teórico

La Hemoglobina (Hb) es una molécula formada por 2 estructuras el grupo Hemo y la
Globina. Todas las moléculas de Hb se encuentran en el interior de los glóbulos rojos y su
función fundamental es la de transportar el O2 y el CO2.
La determinación de Hb en sangre es un parámetro que nos ayuda en el diagnóstico de una
anemia.
Fundamento
El Ferricianuro de potasio transforma la hemoglobina en metahemoglobina por conversión
del hierro ferroso al estado férrico. Posteriormente la metahemoglobina se combina con el
cianuro de potasio para producir cianometahemoglobina pigmentado estable, cuya
intensidad es proporcional a la cantidad de hemoglobina contenida en la muestra y que se
puede dosar colorimétricamente.
2.2. Competencias
1. Explica bioquímicamente el proceso para la determinación de la hemoglobina.
2. Determina en el laboratorio el dosaje de hemoglobina.
 Materiales
Micropipetas
Tubos de ensayos
 Equipos
Espectrofotometro
 Reactivos

a. REACTIVO DE DRABKIN:
 Bicarbonato de Sodio 1 gr.
 Cianuro de Potasio 50 mg.
 Ferricianuro de potasio 200 mg.
 Agua destilada csp 1000ml.
 Guardar en frasco oscuro, la solución de es de color amarillo pálido. Es un
reactivo tóxico.
 Preparación del reactivo de trabajo: Dilución 1:10
 1mL del Reactivo del trabajo (Reactivo de Drabkin)
 10 mL de agua destilada
b. SOLUCIÓN STANDARD:
 Solución de cianometahemoglobina titulada según las recomendaciones del
Comité Internacional para Estandarizar de Hematología. Contiene
preservantes.
2.4. Procedimiento
METODO DE LA CIANOMETAHEMOGLOBINA:
En dos tubos de ensayo rotular Blanco y Muestra, y realizar el siguiente proceso:
BLANCO MUESTRA
Reactivo de trabajo 2,5 mL 2,5 mL
Sangre total ------- 0,01 mL
 Mezclar e incubar 3 minutos a temperatura ambiente.

 Medir la absorbancia a 540 nm llevando a cero con el blanco del reactivo.
El standart está listo para leer en el espectrofotómetro llevando a cero con el
blanco.
 El color obtenido es estable por a lo menos 1 hora.
Cálculo:
Concentración del standard (Cc std) = 18 g/dL
Factor: Cc std / abs std
Hb (g/dL) = factor x Abs muestra problema

Valores normales:
 Nacimiento: 14 - 24 g/100 mL
 3 meses: 10.5 - 14.5 g/100 mL
 Adulto: sexo femenino 12-16 g/100 mL y sexo masculino 14-18 g/100 mL
Interpretación:
Aumento: hipercromemia: niños recién nacidos, personas que viven en altura,
procesos hematopoyéticos.
Disminución: hipocromemia u oligocromemia: anemias
2.5. Resultados
2.6. Cuestionario

1. Explique el fundamento del dosaje de Hemoglobina
2. ¿Cuál es la estructura bioquímica de la hemoglobina?
3. ¿Qué importancia clínica tiene la determinación de la hemoglobina?
4. ¿Cómo se relaciona el hematocrito con la hemoglobina?

1. Aiquel F. Manual de análisis clínicos. 7ª ed. Buenos Aires: Panamericana; 1997.
2. Gradwhol. Métodos y diagnóstico del laboratorio clínico. 8ª ed. Buenos Aires: Médica
Panamericana; 1986.
3. Guerci A. Laboratorio. Métodos de análisis clínicos y su interpretación. 3ª ed. Buenos Aires: Librería
El Ateneo; 1985.
4. Krupp M. Manual de diagnóstico clínico y de laboratorio. México DF: Manual Moderno S.A.; 1986.
C. DETERMINACIÓN DEL HEMATOCRITO Y MICROHEMATOCRITO
2.1. Marco teórico

El hematocrito (Hc) o volumen globular, es otra de las pruebas de laboratorio que ayuda en
el diagnóstico de las anemias corroborando los otros parámetros como el recuento de
glóbulos rojos y la hemoglobina.
2.2. Competencias
1. Determina los valores del hematocrito por el método correspondiente.
2. Realiza el procedimiento en el laboratorio del hematocrito.

 Materiales
Tubo de Wintrobe
Capilares con heparina
Capilares sin heparina
 Equipos
Centrifuga para capilares
 Reactivos
Anticoagulante de Wintrobe
2.4. Procedimiento
A. Toma de muestra.
 SANGRE VENOSA:
La Sangre venosa obtenida y que se encuentra mezclada con el anticoagulante de
Wintrobe llenar con la pipeta capilar el tubo de Hematocrito hasta la marca 10.
Centrifuga a 3,000 rpm durante 30 minutos.
Cálculos:
Para calcular el Hc la altura de la columna de hematíes sedimentados dado en mm se
multiplica por 10.
Valores normales:
Mujeres: 42 mL%
Hombres: 45 mL%
Interpretación:

Están disminuidas en las anemias, en los casos de hemodilución tales como la hidremia
fisiológica (exceso de agua en la sangre) del embarazo.
Es alto en las poliglobulias genuina a una hemoconcentración debida a considerables
perdida de agua como en la deshidratación, quemaduras y schock.
 SANGRE CAPILAR:
MICROHEMATOCRITO: Método de Guest-Wichsebaun
Hoy en día se está difundiendo el uso del microhematocrito que utiliza sangre obtenida
por punción digital.
Materiales y reactivos
Tubos capilares de 7 cm de largo por 1mm de diámetro interior cubiertos interiormente
con heparina al 1/1000 se tapona con arcilla moldeable (plastilina).
Procedimiento:
Se llena con sangre por capilaridad las tres cuartas partes del capilar.
Centrifugar en la microcentrifuga y leer sobre los normogramas que viene en cada equipo.
Cuando no se dispone de dicho equipo se pone el tubo dentro de un tubo de ensayo y se
centrifuga por 10 minutos a 2000 rpm. Luego se aplica la siguiente formula:
a
x 100=mL %
b
a= longitud de la columna roja en ml

b= longitud total de sangre que llena el tubo capilar
100= para referirse al Hc en mL%
2.5. Resultados
2.6. Cuestionario
1. ¿Qué diferencias se pueden encontrar entre el microhematocrito y el hematocrito de
Wintrobe?
2. ¿Cuál es el fundamento bioquímico de la velocidad de la sedimentación?
3. ¿Cuál es el fundamento bioquímico del hematocrito?
4. ¿Cómo se relaciona el hematocrito con el recuento de glóbulos rojos?
1. Bernard J, Lévy JP. Manual de Hematología. 7a ed. Barcelona: Toray Masson S.A; 2001.
ateneo; 1985.
PRACTICA No. 3: LEUCOMETRIA: RECUENTO DE GLÓBULOS BLANCOS

3.1. Marco teórico
La leucometría es una de las técnicas para realizar el recuento de los leucocitos, que
corresponde al número de elementos celulares por unidad de volumen presente en una
muestra de sangre después de provocar la lisis de los hematíes. Diversas son las causas o
patologías que pueden aumentar (Leucocitosis) o disminuir (Leucopenia) los glóbulos
blancos e influenciar en el diagnóstico clínico.
3.2. Competencias
1. Conoce el procedimiento para el recuento de glóbulos blancos.
2. Diferencia los recuentos de glóbulos blancos y rojos.
3. Aplica fórmulas para el recuento de glóbulos blancos.
3.3. Material y equipos

 Materiales
Pipeta de Thoma para el recuento de Leucocitos
 Reactivos
Líquido de Turck:
Violeta de genciana 1 mL.
Ácido Acético glacial 3 mL.
Agua destilada csp. 100 mL.
3.4. Procedimiento
1. Aspirar sangre hasta 0.5 ó 1 (1:20 ó 1:10) según la dilución en la pipeta de
Thoma. Limpiar la punta para eliminar el exceso de sangre.
2. Completar con diluyente hasta 11, haciendo girar la pipeta.
3. Dejar en reposo de 5 a 15 minutos para la completa destrucción de los hematíes y
perfecta tinción de los núcleos leucocitarios.
4. Cargar la cámara cuenta glóbulos, esperar 5 minutos para que se depositen los
leucocitos sobre el retículo.
5. Llevar a la platina del microscopio, comprobar con débil aumento la uniforme
distribución celular y verificar el recuento.
Con el objetivo de menor aumento contar los leucocitos contenidos en los 4 campos
cuadrados situados en las esquinas de retículo.
Se consideran los elementos que se encuentran en los interiores de la derecha y de arriba,
pero se omiten las que se hallan sobre la línea de izquierda.
Se volverá a repetir el procedimiento si la diferencia entre 2 cuadrados sea mayor de 8
células.
Cálculos:
La cantidad encontrada en los 4 cuadrados se divide entre 2 y al resultado se añade 2
ceros (o se multiplica por 50)
También:
N x 10 x 20=Leucocitos por mm 3 de sang ℜ
N = Total de leucocitos en 4 cuadrados dividido entre 4
10 = Para referir al mm3
20 = Dilución cuando se aspira sangre hasta 0.5

Valores normales:
6,000 a 9,000 por mm3 de sangre.
Interpretación:
La disminución de leucocitos se denomina LEUCOPENIA y se presenta en algunas
enfermedades infecciosas como ocurre en la angina agranulocítica o granulocitopenia
idiopática, anemia perniciosa, clorosis, mala nutrición, fiebre tifoidea, malta, virales:
rubéola, sarampión, hepatitis, parotiditis, etc.
El aumento de denomina LEUCOCITOSIS. Existe una leucocitosis fisiológica con
neutrofilia entre 12,000 y 14,000 en el recién nacido, durante el embarazo en el 9º mes,
durante el parto, durante la digestión. De orden patológico: la leucocitosis se debe a la
quimiotaxia y al estímulo de los órganos hematopoyéticos (la quimiotaxia es la propiedad
que tiene ciertos agentes de atraer o repeler células vivas) Una inflamación tiene poder
quimiotáctico de atraer muchos leucocitos, lo mismo ocurre con las bacterias y alguno
tóxico sé que atraen leucocitos a la circulación general.
3.5. Resultados
3.6. Cuestionario
1. ¿Cuál es el fundamento del reactivo de Turck en el recuento de leucocitos?
2. ¿Qué dificultades considera Ud. se pueden encontrar al realizar un recuento de
leucocitos?
3. ¿Qué importancia clínica tendría el recuento de leucocitos?
4. Fisiológicamente ¿Cuándo se presenta leucopenia y cuando leucocitosis?

ateneo; 1985.
FÓRMULA LEUCOCITARIA. HEMOGRAMA DE SCHILLING
3.1. Marco teórico

Es el método analítico más frecuentemente solicitado en la práctica médica diaria, no solo
para el diagnóstico, valoración y seguimiento de las diversas patologías hematológicas,
sino también de las que no lo son, pero que curan con alguna alteración valorable del
mismo. Su facilidad de realización y rápida modificación en muy diversas circunstancias
fisiológicas y patológicas hacen también de él un método analítico de práctica casi
obligada. El hemograma incluye la cuantificación de los elementos formes que contiene
la sangre por unidad de volumen, recuento porcentual de los leucocitos (habitualmente
compuestos sólo por linfocitos, monocitos, y granulocitos, neutrófilos, eosinófilos y
basófilos), además informa sobre valores o índices relacionados con el contenido
hemoglobínico de los glóbulos rojos y el tamaño de éstos y el de las plaquetas. La

fórmula leucocitaria indica la presencia relativa de los diferentes tipos de leucocitos en la
sangre periférica y se expresa en porcentajes sobre el total.
3.2. Competencia
1. Utiliza el colorante adecuado para la identificación de los elementos formes en
sangre coloreada.
2. Identifica los diversos tipos de leucocitos de acuerdo a su forma, tamaño y color.
3. Aplica el método más conveniente para el recuento de los diversos tipos de
leucocitos.

 Materiales
Laminas portaobjetos
 Reactivos
Colorantes:
En general los colorantes hematológicos que más se utilizan son los derivados de
Rowanowsky, entre los que tenemos el de Giemsa, Leishman, Wright y Hastings.
Colorante de Wright:
Es una combinación especial a base de azul de metileno y eosina que, para los
trabajos de rutina da excelentes resultados.
Pesar 0,4g. de colorante Wright en polvo, agregar 194 mL de alcohol metílico libre
de acetona, añadir 6 ml. de glicerina. Agitar enérgicamente. Conservar en frasco
oscuro agitando un minuto diario durante una semana. Finalmente filtrar cada vez
que ha de usarse, después de cumplida la semana. Dura seis meses.
3.4. Procedimiento
Método de tinción:
1. Colocar los frotis de sangre completamente secos en los portalaminas.
2. Cubrir el portaobjetos con el Reactivo de Wright
3. Tras 1 minuto, añadir un volumen igual de agua desionizada, agua destilada o
solución tampón y mezclar bien soplando con cuidado sobre el portaobjetos.
4. Tras 6 minutos aclarar bien con agua de caño y secar al aire.
5. Llevar la lámina a la platina del microscopio y observar con objetivo de 100x,
colocando una gota de aceite de cedro.
Estudio citomorfológico de extendidos coloreados:
Métodos para el examen del extendido sanguíneo en el recuento diferencial:
Es indispensable para obtener el porcentaje de cada tipo de leucocito que estos se hallen
uniformemente distribuidos en el extendido sanguíneo. Como los granulocitos
generalmente están en los márgenes del extendido y los linfocitos en el centro, se
recomienda el método aconsejado por Schilling, que consiste en tomar 4 puntos marginales
distintos recorriendo el campo en zigzag desde el borde hacia la parte central y contar 25 o
50 elementos en cada uno de los 4 puntos.
Debe anotarse el tamaño celular; en el núcleo: forma, posición, color, estructura de la
cromatina, membrana nuclear, presencia o ausencia de nucleolos; en el citoplasma:
cantidad relativa (cociente núcleo citoplasma), color, presencia o ausencia de zona
perinuclear clara y características de los gránulos: número, color, tamaño y distribución,
granulación tóxica, vacuolas o degeneración del citoplasma.

Fórmula leucocitaria
Nos permite conocer la cantidad de cada tipo de célula, y para ello se procede a contar 100
leucocitos, en un frotis bien coloreado, anotando por separado cada variedad celular.
Procediendo en estar forma a determinar la llamada FÓRMULA RELATIVA, o sea el
porcentaje de cada tipo de leucocitos.
Se recorre el preparado en la forma que aconseja SCHILLING, siguiendo el método
serpenteando los cuatro campos.
Hemograma de Schilling
El hematólogo Von Schilling estableció un cuadro para el recuento diferencial de
leucocitos. Clasifica además a los neutrófilos en dos grupos fundamentales: neutrófilos no
lobulados e incompletamente lobulados y neutrófilos completamente lobuladados (2 ó más
lóbulos).
El hemograma normal según Schilling es el siguiente:
Tipo de leucocitos Porcentajes

Neutrófilos Mielocito 0
Metamielocito 0-1
Núcleo en cayado 3-5
Núcleo segmentado 55-65
Eosinófilos 2-4
Basófilos 0-1
Linfocitos 20-30
Monocitos 4-8
Interpretación:
Se denominarán los aumentos de los tipos de leucocitos denominándose eosinofilia,
basofilia, linfocitosis, monocitosis.
Según Arneth se habla de desviación hacia la izquierda del hemograma cuando aumentan
las formas no segmentadas o inmaduras de los neutrófilos; y se dice que hay desviación
hacia la derecha, cuando aumentan las células maduras o adultas.
3.5. Resultados
3.6. Cuestionario
1. Dibuje y coloree los diferentes tipos de leucocitos.
2. ¿En qué patologías se presentan linfocitosis, monocitosis, neutrofilia, eosinofilia y
basofilia?
3. ¿Cuál es la diferencia entre el Hemograma de Schilling y el Esquema de Arneth?
4. ¿Qué importancia clínica tiene el Esquema de Arneth?
5. ¿Cuándo se habla de desviación a la izquierda y desviación a la derecha?

1. Aiquel F. Manual de análisis clínicos. 6a ed. Buenos Aires: Médica
panamericana; 1999.
2. Gónzales De Buitrago JM. Técnicas y métodos de laboratorio
clínico. 2a ed. Barcelona: Masson; 2005.
3. Muñoz J. Fundamentos y técnicas de análisis hematológicos y
citológicos. Madrid: Masson; 2005.

4. Merck Sharp Dohme. El Manual Merck.11a ed. Madrid: Elsevier;
2007.
5. Turgeon ML. Hematología clínica. Teoría y procedimientos. México
D.F.: Manual moderno, 2006.
6. Vives JLL, Aguilar JLL. Manual de técnicas de laboratorio en
hematología. 3a ed. Madrid: Elsevier-Masson; 2006.
VELOCIDAD DE SEDIMENTACIÓN GLOBULAR
3.1. Marco teórico

Prueba de laboratorio inespecífico importante para evaluar el curso de una enfermedad; es
inespecífico porque no sirve para el diagnóstico etiológico de una enfermedad.
Esta sencilla prueba es utilizada como índice de la presencia activa de enfermedades
diversas
3.2. Competencia
1. Utiliza con precisión el tubo de Wintrobe para la lectura del hematocrito y la
eritrosedimentación.
2. Realiza la lectura de la velocidad de sedimentación utilizando la escala adecuada.

 Materiales
Tubo de Wintrobe
 Reactivos
3.4. Procedimiento
A. Metodo de wintrobe y landsberg
La eritrosedimentación se determina con el tubo de Wintrobe en la siguiente forma:
Recoger 5 mL de sangre con anticoagulante.
Llenar el tubo de Wintrobe hasta la marca "O" de sangre utilizando la pipeta de Wright y
antes de que la muestra tenga más de dos horas de extraída.
Mantener el tubo en posición vertical tapar con un capuchón de goma y esperar una hora
para hacer una sola lectura o con intervalos frecuentes para expresar en gráficas.
Valores normales:
Hombre: 1 - 11 mm
Mujeres: 1 - 15 mm
Determinada la velocidad de sedimentación puede centrifugarse a 3000 rpm durante 30
minutos para comprobar el volumen globular.
En esta forma se corrige la eritrosedimentación si existen alteraciones ocasionadas por
anemia.
En el mismo tubo puede medirse el volumen de leucocitos, plaquetas y el índice ictérico.
B. Método de Cutler
Se emplea el tubo de sedimentación de Cutler que tiene 1 ml. de capacidad, 5mm de
diámetro interno y está graduado en 40 divisiones con el "O" a nivel del "Y que
representan milímetros.
Procedimiento:

1. Llenar el tubo con sangre con anticoagulante. Colocar en posición vertical y hacer
la lectura a la hora, cada 5 minutos para construir la gráfica.
2. Es mejor trabajar con sangre citratada en la siguiente forma:
3. Con una jeringa de 2 mL. aspirar 0.1 mL. de solución de citrato de sodio al 3.8 g
% y completar a 1 mL con sangre venosa.
4. Mezclar llenar el tubo de Cutler, tapar con un tapón de goma y mantener en
posición vertical.
5. En el nuevo tubo modificado de Cutler, se deposita 0.5 ml de anticoagulante
citrato de sodio 3.8% y se completa a 5ml con sangre venosa en la marca "O". la
cantidad insuficiente de citrato aumenta la VSG y un exceso disminuye o retarda.
Valores normales:
Las cifras normales a la hora de lectura son de:
 2 - 10 mm para mujeres
 2 8 mm para hombres.
Estas cifras deben estar en líneas casi horizontal cuando se gráfica a intervalos de 5
minutos.
El carácter de la curva en estado patológico se interpreta según su forma:
Si la línea es diagonal, apartándose ligeramente de la curva normal, indica proceso leve o
en quietud.
Cuando la curva sigue diagonal con gran descenso indica estado morboso activo o
recaídas de mucho cuidado.
Si la curva es caso vertical se trata de una enfermedad muy grave.
Se debe indicar el método, tiempo en minutos, índice de sedimentación en mm y el
carácter de la gráfica.
Interpretación clínica:
Prescindiendo del embarazo, la determinación de la VSG, está aumentada en los estados
patológicos más dispares, sin ser esto específico de ninguno en particular.
La VSG aumenta sobre todo, cuando existe un foco inflamatorio en estrecha conexión
con el árbol vascular; por ello son especialmente aceleradores los focos vecinos a las
serosas
(Infarto al miocardio, focos pulmonares, etc). Todas las infecciones generales de cierta
intensidad, salvo raras excepciones evolucionan con VSG aumenta principalmente
cuando coinciden los períodos de fiebre y anemia.
En las inflamaciones locales agudas (por ej. apendicitis) la velocidad no está alterada,
sobre todo en las fases iniciales.
Las neoplasias malignas al principio no modifican la eritrosedimentación, pero si la
aceleran cuando hay lisis de los tejidos derivados de la proliferación neoplásica.
La VSG está más o menos aumentada en todos los tipos de anemias. En el curso del
embarazo la VSG se acelera, debido a una hemodilución de la sangre circulante.
En la mujer normal la menstruación produce variaciones muy ligeras de la velocidad.
Por último los focos sépticos muy aislados del torrente sanguíneo (caries dentarias,
sinusitis, amigdalitis crípticas) apenas aumentan la VSG.
3.5. Resultados

3.6. Cuestionario
1. ¿Cuál es la importancia clínica de la determinación de la velocidad de sedimentación?
2. ¿Qué diferencias existen en la utilización de los métodos de Wintrobe y Cutler para determinar la
eritrosedimentación?
3. ¿Cuál es el fundamento físico químico de la eritrosedimentación?
4. Explique Ud. el método del tubo capilar para determinar la eritrosedimentación.
5. ¿Por qué la diferencia de valores en la eritrosedimentación en varones y en mujeres?

ateneo; 1985.
PRÁCTICA No. 4: Recuento de plaquetas, recuento de reticulocitos
RECUENTO DE PLAQUETAS
4.1 Marco teórico

Es el contaje de las plaquetas o Trombocitos por milímetro cúbico de sangre. La
actividad plaquetaria esencial es la de conformar el tapón hemostático primario en los
mecanismos de la coagulación (Hemostasia). La visualización de una extensión de sangre
permite descubrir ciertas alteraciones de la serie plaquetaria y su cuantificación para
determinar si existe una disminución (Trombocitopenia) ó un aumento (Trombocitosis).
4.2 Competencia
1. Distingue los métodos directos e indirectos para el recuento de plaquetas
2. Aplica el método más conveniente para el recuento de plaquetas
4.3 Materiales y equipos

 Materiales
1. Pipeta de Thoma para glóbulos rojos
2. Cámara de Neubauer
3. Laminas portaobjetos
 Reactivos
1. Reactivo de Sulfato de Magnesio al 14%
2. Colorante de Wright
3. Reactivo de Rees-Ecker:
 Citrato de sodio 3.8 gr.
 Formaldehído al 40% 0.2 mL.
4. Azul brillante de cresil 0.05 gr.
Los métodos para el recuento se pueden clasificar en:
Métodos indirectos:
Se basa en determinar la relación entre plaquetas y eritrocitos
 M. de Fonio
 M de Clef
 M. de Demeshek

Métodos directos:
Se basa en contar directamente las plaquetas de la sangre diluida en una cámara
hemocitométrica.
 M. Rees - Ecker
 M. Wright
4.4 Procedimiento
Método de fonio:
1. Sobre la yema del dedo limpio, seco y desinfectado colóquese una gota grande de
solución esterilizado de sulfato de magnesio al 14% para que la sangre no tome
contacto con el aire. A través de la gota puncionar la piel con una lanceta de tal
manera que salga espontáneamente una pequeña gota de sangre a razón de 1:5
aproximadamente.
2. Mezclar con el borde de un portaobjeto para homogeneizar e impedir la
aglutinación de las plaquetas.
3. Con la misma lanceta llevar una gota de la suspensión sobre un portaobjetos y
verificar el frotis como si tratara de sangre sola.
4. Al sacar la preparación toma un brillo aterciopelado y casi incoloro al trasluz, teñir
con Wright en la forma habitual dejando actuar el colorante un tiempo mayor de
dedicado a la formula leucocitaria.
5. Con objetivo de inmersión y aceite de cedro contar en varios campos
simultáneamente los glóbulos rojos y las plaquetas hasta completar 1000 a 2000
hematíes.
Cálculos
Para los cálculos se multiplica el número de plaquetas, contadas en el frotis, por el
número de hematíes por mmc. y dividir entre el número de eritrocitos contadas en la
extensión.
Hematimetria: 4'8000,0000 por mm3 de sangre.
50 x 4'800,000
----------------- = 240,000 plaquetas por mm3.
1000
Método de Rees-Ecker:
Se debe operar con suma rapidez y limpieza para evitar la aglutinación y para no
confundir impurezas con los trombocitos.
1. Aspirar líquido de dilución hasta la marca de 0.5 con la pipeta para glóbulos rojos
2. Llenar con sangre capilar hasta completar con líquido de dilución hasta la marca de
101.
3. Dejar en reposo por espacio de 5 minutos.
4. Cargar la cámara cuenta glóbulos y dejar en reposo de 15 a 20 minutos para que
sedimente las plaquetas.
5. Con el objetivo potente contar en todo el cuadrado central de retículo para hematíes
(25 cuadrados de 16 cuadraditos cada uno)

Cálculos: N X 10 x 200 = plaquetas por mm3.
N : número de plaquetas en el mm central de retículo
10 : para referir al 1 mm3
200 : dilución cuando se toma sangre hasta 0.5
Las plaquetas se presentan redondeadas, ovales, alargadas, en forma de cono o poliédricas
e irregulares.
Se las ve muy refringentes, plateada, veces de color lila.
Valores normales: 150,000 a 400,000 plaquetas por mm3 de sangre
Interpretación:
Las variaciones fisiológicas se presentación la ingestión de alimentos, actividad muscular,
menstruación, etc.
TROMBOPENIAS:
Por debajo de 30,000 dan manifestaciones hemorrágicas. Estados alérgicos, anemia
aplástica, leucemia linfática, intoxicaciones crónicas, atrofia de la medula ósea, púrpura
trombopénica esencial.
TROMBOSIS O TROMBOCITOSIS: (escasa significación clínica)
Hemorragias copiosas, anemia poshemorrágica, después de las intervenciones
quirúrgicas, anemia hemolítica, policitemia genuina, leucemia mieloide crónica,
traumatismo, esplenomegalia, infecciones crónicas, fiebre reumática.
4.5 Resultados
4.6 Cuestionario
1. Mencione los principales métodos directos e indirectos para el recuento de
plaquetas.
2. Explique el fundamento del método de Fonio.
3. Explique el fundamento del método de Rees-Ecker.
4. Mencione las patologías en que se presenta aumenta o disminución de las
plaquetas.
5. ¿En qué se diferencia la determinación del recuento de glóbulos rojos y el recuento
de plaquetas al utilizar la cámara de Neubauer?
4.7 Fuentes de información

1. Aiquel F. Manual de análisis clínicos. 6a ed. Buenos Aires: Médica panamericana; 1999.
2. Gónzales De Buitrago JM. Técnicas y métodos de laboratorio clínico. 2a ed. Barcelona: Masson;
2005.
3. Muñoz J. Fundamentos y técnicas de análisis hematológicos y citológicos. Madrid: Masson; 2005.
4. Merck Sharp Dohme. El Manual Merck.11a ed. Madrid: Elsevier; 2007.
5. Turgeon ML. Hematología clínica. Teoría y procedimientos. México D.F.: Manual moderno, 2006.
6. Vives JLL, Aguilar JLL. Manual de técnicas de laboratorio en hematología. 3a ed. Madrid:
Elsevier-Masson; 2006.
RECUENTOS DE RETICULOCITOS
4.1 Marco teórico

Son hematíes jóvenes inmaduros pero de tamaño superior (macrocitos), reconocibles en
las extensiones de sangre por tinción especial, se observa en las anemias hemorrágicas y
hemolíticas.
4.2 Competencia
1. Utiliza el método en forma conveniente para el recuento de reticulocitos.
2. Realiza el recuento de reticulocitos y aplica los cálculos correspondientes.
4.3 Material y equipos

 Materiales
 Reactivos
Según el método humedo en tubo:
Azul brillante de cresil 0.25 gr.
Citrato de Sodio 0.1 gr.
Formol al 40% 0.05 mL.
Soluc. Fisiológica cps. 25 mL.
Según El método de Wolfer:
Azul cresil brillante....... 0.5 gr.
Alcohol absoluto........... 100 mL
4.4 Procedimientos
Método húmedo en tubo:
En un tubo de Kahan se mezclan 2 gotas de sangre venosa o capital y 2 gts del reactivo.
Se tapa el tubo y se mantiene a la temperatura ambiente por el término de 2 a 30 minutos.
Luego se extrae 1 gota de la mezcla y se hace un frotis delgado, se seca al aire y se
práctica el recuento utilizando el objetivo de 100x y aceite de cedro para su observación.
Cálculos:
Se cuentan 1000 hematíes anotando todos los que tienen filamentos azules de reticulos.
Dividir por 10 para obtener el porcentaje.
Ej. 20/10 = 2%
Método de Wolfer
Procedimiento:
1. Sobre portaobjetos hace extensiones de la solución de azul cresil brillante. Secar al
aire.
2. Depositar 1 gota de sangre capilar y hacer un frotis sobre el cresil, cuyo alcohol se
ha evaporado. Dejar en reposo 10 minutos.
3. La sustancia retículo gránulo filamentoso de los reticulocitos se tiñe de azul claro
con este colorante supravital y ofrece el aspecto de madeja.
4. Mientras más tenues son las capas de la solución alcohólica y de las sangres mejor
será la lectura.
5. Después del desecado las muestras son ligeramente teñidas por Wright
6. Se observa con objetivo de inmersión.
Valores Normales
 Adultos:0.5 -2.5%
 Niños: 5-10%

Interpretación:
Aumento: Recién nacidos hasta 2 a 5 días después del nacimiento. Anemias
hemolíticas constitucionales Anemias que evolucionan con regeneración por tratamiento
específico de vit. B 12 en la anemia perniciosa, Ácido fólico en anemia megaloblásticas
del sprue Hierro, anemia microcítica e hipocrómica ferroprivas. Anemia hemolítica
hereditaria (10-20%). Cuando la sangre se regenera rápidamente después de una
hemorragia (aumenta hasta constituir el 50% de hematíes)
Disminución: Anemia aplástica (falta absoluta) anemias que evolucionan con
insuficiencia e hiperactividad funcional de la medula ósea (anemia perniciosa muy
avanzada)
4.5 Resultados
4.6 Cuestionario
1. ¿Cuál es la importancia clínica del recuento de reticulocitos?
2. ¿Describa las características de un reticulocito.
3. Indique y describa los tipos de reticulocitos.
4. Mencione y explique el fundamento de los métodos para el recuento de
reticulocitos.
5. ¿En qué patologías se presenta reticulocitos aumentados?

Panamericana; 1986.
3. Guerci A. Laboratorio. Métodos de análisis clínicos y su interpretación. 3ª ed. Buenos Aires:
Librería El Ateneo; 1985.
4. Krupp M. Manual de diagnóstico clínico y de laboratorio. México DF: Manual Moderno S.A.;
1986.
PRÁCTICA No. 5: Tiempo de coagulación, Tiempo de sangría, Tiempo de

protrombina, Retracción del coagulo y Dosaje de fibrinógeno
5.1. Marco teórico

Debido a la enorme complejidad de todos los procesos que intervienen en el hecho
hemostático, resulta imposible determinar la verdadera capacidad hemostática in vivo de
un individuo mediante la realización de pruebas en el laboratorio. Sin embargo, la
realización y valoración de unas cuantas técnicas puede ser suficientes muchas veces para
presuponer, con un alto margen de seguridad, la existencia, o no de un riesgo
hemorrágico. Atendiendo a los puntos fundamentales de la fisiología de la coagulación de
la sangre, se deduce que la valoración rutinaria de la hemostasia debe englobar por lo
menos la prueba de Quick, el tiempo de coagulación sanguínea, cuantificación del
fibrinógeno y de las plaquetas.
5.2. Competencia
1. Aplica las técnicas apropiadas para determinar el tiempo de coagulación, tiempo de

sangría y de protrombina.
2. Hace la interpretación clínica y correlacionar las coagulopatias.
3. Utiliza el método espectrofotométrico para el dosaje de fibrinógeno.

 Materiales
Cronometro
Tubos capilares
Tira de papeles secantes
Tubos pequeños
Tubo cónico graduado
Equipos
Baño María
 Reactivos
Reactivo de Tromboplastina
Reactivo de Protrombina
5.4. Procedimiento
1. Tiempo de coagulación:
A. Método de Burker: 2' - 8'
1. En una lámina portaobjeto colocar 2 gotas de sangre
2. Dejar en reposo 3'. Con el estilete a la 1ra. gota levantar c/ 30". Hasta formar la
FIBRINA.
3. Luego de 30" pasar a las 2da gota. Levantar hasta formar la FIBRINA.
4. Anotar dicho tiempo.
NOTA: El índice de coagulación está dado por el tiempo trascurrido entre colocar
la gota y la formación de fibrina
B. Método de Sabraze: 3' - 8'
1. Se trabaja con 2 tubos capilares (8 en. de largo)
2. Obtener sangre capilar, eliminar las 2 primeras gotas en la 3ra cargar los capilares.
3. Se deja en reposo 3'. Luego romper su trozo c/ 30' hasta que al romper se forme un
filamento de FIBRINA. Toma el tiempo.
C. Método de Lee y White: 5' - 10'
1. Se obtiene Sangre venosa (3,5 ml) verter en 2 tubos 1 mL de sangre cada uno.
2. Anotar el tiempo cuando la sangre fluye.
3. Se inclina uno de los tubos c/ minuto con un ángulo de 45° hasta que la sangre
coagulada no se desplace. Anotar el tiempo.
4. Para el otro tubo hacer la misma operación. Anotar el tiempo, se recomienda
reportar la lectura del 2do tubo, porque la agitación y manipulación aceleran la
coagulación.
2. Tiempo de sangría o de hemorragia
Método de Duke: 1' - 3'
1. Desinfectar el lóbulo de la oreja y pinche con una profundidad de 3 mm.

2. C/30" límpiese con papel de filtro la gota de sangre que fluye el papel no debe
rozar la piel.
3. Cuando ya no haya hemorragia toma el tiempo no debe haber menos de 2
manchas ni más de 6.
4. Se recomienda hacer 2 determinaciones.
NOTA: El lapso transcurrido entre la aparición de la 1ra. gota y la toma de la
última es el tiempo de sangría.
3. Tiempo de protombina (TP) o Tiempo de Quick
Método de Soluplastin
REACTIVO: Viales conteniendo tromboplastina, cloruro de calcio y cloruro de sodio.
(Soluplastin). Se debe reconstituir con agua destilada.
MUESTRA: Plasma
Procedimiento:
1. Colocar el plasma en baño maría a 37oC durante 2 a 3 minutos.
2. En un tubo pequeño colocar: 0,2 mL de Reactivo reconstituido y preincubar a
37oC durante 2 a 3 minutos.
3. En el tubo que contiene 0,2 mL del Reactivo reconstituido, pipetear 100 uL del
plasma preincubado. TOMAR EL TIEMPO.
4. Mantener el tubo dentro del baño, sacar el tubo inclinando suavemente una o dos
veces por segundo y detener el cronometro.
5. Luego retirar el tubo y observar la formación de un coagulo blanquesino.
Valores normales: 10 a 14 segundos.
Método Ortho-Brain
1. En un tubo de prueba de 13 x 100 mm colocar 0,5 ml de solución de oxalato de sodio
0.1 M y adicionar 4.5 mL de sangre venosa recién obtenida, mezclar y separar el
plasma mediante centrifugación.
2. En otro tubo de 13 x 100 mm depositar 0.2 ml de tromboplastina activada + cloruro
de calcio 0.02 M.
3. Incubar los tubos del plasma y del reactivo a 37oC por 2'.
4. Con una pipeta terminal de un mL graduada en décimos, medir 0.1 mL de plasma
oxalatada y agregar rápidamente al tubo que contiene el reactivo de tromboplastina,
el agregado debe hacer desde una distancia de 2 cm. soplando el contenido,
simultáneamente poner en marcha el cronómetro, el contenido debe mezclarse por
movimientos laterales del tubo dentro del agua a 37oC.
5. Observar la formación de una masa de coagulo que es el final de la reacción de
protrombina.
Valores normales: 10 segundos a 12 segundos.
4. Valor Protombinico o Índice protrombinico
Se obtiene dividiendo el Tiempo de Protrombina Normal entre el tiempo de
Protombina encontrado y multiplicado por 100.
V.P. = T.P.N. x 100

T.P.E.
5. Tiempo Parcial de tromboplastina (APTTest)
REACTIVO A: Contiene cefalina
REACTIVO B: Contiene solución de cloruro de calcio

Procedimiento:
En un tubo de hemolisis colocar:
Muestra problema: 100 uL
Reactivo A: 100 uL
Mezclar e incubar por 3 minutos a 37 oC luego adicionar:
Reactivo B: 100 uL
Tomar el tiempo manteniendo durante 25 segundos en B.M.
Luego retirar el tubo y observar la formación de un coagulo blanquesino.
Valores normales: 33 a 48 segundos
6. Tiempo de retracción del coagulo
La retracción del coagulo es la contracción espontánea de la sangre total, obteniéndose

una masa sólida con todo los componentes sanguíneos y la exudación de suero; dicha
actividad es función retráctil de las plaquetas y del Fibrinógeno para formar fibrina.
METODO DE MAC FARLAND.
El método utiliza un tubo de centrífuga graduada en divisiones de 0.1 mL; un alambre de
1 mm de espesor, 12 cm. de longitud con un ensanchamiento en forma de botón de 1.2
cm. de diámetro en un extremo; un corcho que se adapta a la boca del tubo, el corcho
debe tener un orificio para dar paso al alambre del extremo opuesto al botón.
1. En un tubo de centrífuga graduado depositar 5 mL de sangre venosa recién
extraída.
2. Colocar la varilla de alambre de modo que quede el ensanchamiento dentro de la
sangre, adopte el corcho en la boca del tubo.
3. Llevar el tubo a un baño de agua a 37oC y observar de tiempo la coagulación de la
sangre.
4. Permanezca el tubo dentro del agua a 37oC por una hora después de la formación
del coagulo.
5. Con cuidado retirar el alambre con el coagulo hacia arriba, dejar escurrir el suero
dentro del tubo por 1 ó 2 minutos.
6. Leer el volumen del suero que ha quedado en el tubo sobre la escala graduada.
Cálculos:
El tiempo de retracción del coagulo se expresa en función del volumen del suero
obtenido, multiplicado por 100 y dividido entre el volumen de sangre total obtenido.
Ejemplo:
Se ha obtenido 5 ml de sangre venosa y después de coagular ha dejado 3 ml de suero, la
retracción porcentual será:
3 x 100 = 60%
5
Valores normales: De 44 - 67%
3. DOSAJE DE FIBRINÓGENO
Fundamento:
Se basa en determinar las proteínas totales por el método de Biuret en plasma y suero, la
diferencia determinará la cantidad de fibrinógeno que tiene el paciente.

Muestra:
Obtener suero y plasma sin hemolisis del mismo paciente.
5.4 Procedimiento
BLANCO STANDART MUESTRA MUESTRA SUERO

PLASMA
Muestra (mL) -- ----- 0,02 0,02
Standart (mL) --- 0,02 --- ----
Reactivo de Biuret (mL) 1 1 1 1
 Mezclar e incubar por 5 minutos a temperatura ambiente.

 Leer las absorbancias a 540 nm llevando a cero el espectrofotómetro con el blanco
del reactivo.
 El color es estable por lo menos por 30 minutos.
Cálculos:
Proteinas totales (g/dL) = Factor x abs muestra
Factor = Concentración del std
Abs del Std
Proteinas totales del plasma -

Proteinas totales del suero
FIBRINÓGENO en gr %
Se convertirá a mg%
Valores normales
Fibrinógeno: 200 - 400 mg. %
5.5 Resultados
5.6 Cuestionario
1. ¿Cuál es el fundamento del tiempo de coagulación?
2. ¿Cuál es el fundamento del tiempo de sangría?
3. ¿Cuál es el fundamento bioquímico del proceso de retracción del coagulo?
4. ¿Cuál es el fundamento para la determinación del fibrinógeno?

5. A través de un mapa conceptual, explique la Teoría de Morawitz.
5.7 Fuentes de información:

2005.
5. Turgeon ML. Hematología clínica. Teoría y procedimientos. México D.F.: Edit. Manual moderno,
2006.
PRÁCTICA No. 6: DETERMINACIÓN DE GRUPOS SANGUÍNEOS:

SISTEMA ABO, VARIANTE DU
DETERMINACIÓN DE GRUPOS SANGUÍNEOS: SISTEMA ABO Y FACTOR

Rh.
6.1 Marco teórico:

El polimorfismo más significativos de los eritrocitos depende de las características
inmunológicas, basándose en la presencia o ausencia de las propiedades químicas en
la superficie de los hematíes que permiten diferenciarlos y clasificarlos en un gran
número de grupos sanguíneos bien definidos por sus reacciones con las
hemaglutininas específicas.
6.2 Competencias:
1.-Distingue los diversos grupos sanguíneos del sistema ABO
2.- Diferencia el Rh positivo del negativo
3.-Aplica la Variante Du para la comprobación del Rh negativo.

 Materiales
Láminas de porcelana
Tubos de ensayo
 Reactivos
6.4 Procedimiento
Método Indirecto de Beth Vincent:
SISTEMA ABO:
1. Colocar una gota de sangre en un portaobjeto.
2. Agregar 1 gota del suero tipificado anti-A y 1 gt. del suero tipificado anti-B,
mezclar y observar.
Si no hay aglutinación el grupo será CERO.
Si hay aglutinación en la gota de sangre con el suero anti-A será GRUPO A

Si hay aglutinación en la gota de sangre con el suero anti-B: grupo B.
Si hay aglutinación en ambos el grupo será AB.
FACTOR Rh:
En un portaobjeto se coloca 1 gota de sangre más 1 gota del anti-Rho (D). Mezclar y
observar.
Si hay aglutinación es Rh positivo.
6.5 Resultados
VARIANTE Du DETERMINACION DEL ANTIGENO Rho DEBIL O Du
6.1 Marco teórico

El término Du se refiere a la expresión débil del antígeno D normal es decir, la menor
concentración del antígeno D por glóbulo rojo esta es una característica heredada.
Como entre los anti-D existen ligeras diferencias la potencia de la reacción de los
eritrocitos Du varia con el suero utilizado.
6.2 Competencias
1. Aplicar la variante Du para la comprobación del Rh negativo.
2. Realiza el proceso para la determinación de la variante Du
6. 3 Materiales y equipos
 Materiales
Tubos de ensayo
 Reactivos
Suero antihumano de Coombs
6.4 Procedimiento
1. Hacer una suspensión globular al 2% en SSF.
2. En un tubo pequeño depositar:
1 gota de suero anti-Rh + 2 gotas de la suspensión globular al 2%.
3. Incubar a 37 oC por 60 minutos para sensibilizar a las células.
4. Sacar el tubo de la incubadora y lavar las células 3 veces en tubo de ensayo llenos
de solución salina hasta cerca del borde del tubo.
Decantar completamente después del último lavado, acercando a la boca
del tubo un papel de filtro para absorber el líquido. (Centrifugación a 2,000rpm
por 5 minutos)
5. Agregar 2 gotas del suero antihumano de Coombs. Agitar bien el tubo para
homogenizar.
6. Centrifugar a 1000 rpm por 1 minuto.
7. Retirar el tubo y suspender nuevamente las células empaquetas mediante agitación
moderada y examinar si existe aglutinación o no.
Si hay aglutinación: Du es Rh positivo
Si no hay aglutinación: Du es Rh negativo

6.5 Resultados
6.6 Cuestionario
1. ¿Qué importancia clínica tiene la determinación de los grupos sanguíneos?
2. ¿Qué aplicación Ud. le daría a la determinación de los sistemas MN y P ?
3. ¿Porque es importante la determinación de la Variante Du?
4. ¿Qué diferencias encuentra entre la prueba de Coombs Directa y la prueba de
Coombs indirecta?
5. ¿Qué son las pruebas cruzadas directa e indirecta?
2005.
PRACTICA No 7: PRUEBAS SEROLÓGICAS: DETERMINACIÓN DE

FIEBRE TIFOIDEA, PARATIFOIDEA, MALTA, SIFILIS
AGLUTINACIONES
7.1 Marco teórico

Las pruebas inmunológicas son muy útiles para el diagnóstico de muchas patologías a
través de los métodos cualitativos y cuantitativos.
Los antígenos febriles se utilizan para efectuar diagnósticos rápidos de las fiebres
tificas, paratificas y brucellosis. Se utilizan en la prueba rápida de aglutinación en
lámina mediante la reacción antígeno-anticuerpo con el objeto de detectar la
presencia en suero de anticuerpos que los pacientes producen durante las
enfermedades mencionadas.
7.2 Competencias
1. Realiza las determinaciones inmunológicas de las pruebas de aglutinaciones.
2. Explica los resultados obtenidos a través de las pruebas cualitativas y cuantitativas.

 Materiales
Lamina de vidrio
 Reactivos
a. Antígenos febriles

o Suspensiones de cepas bacterianas estabilizadas y standarizadas:
tifico O, tifico H, paratífico A, paratífico B y brucella abortus.
7.4 Procedimiento
Las determinaciones comprenden dos etapas:
1. Prueba presuntiva:
Con una pipeta serológica o una micropipeta depositar una gota de suero problema en
cada cuadrado.
A cada gota de suero se le añade una gota de cada antígeno previa agitación.
Mezclar con un palillo mondadientes para cada cuadrado y leer en el término de uno a
tres minutos.
Lectura: La reacción es positiva cuando aparece aglutinación en uno de los 5 cuadrados.
2. Prueba de titulación:
Se preparan 5 cuadrados limpios y con una pipeta depositar en cada uno el volumen de
suero:
0,08, 0,04, 0,02, 0,01 y 0,005 mL de suero respectivamente.
Los títulos serán: 1/20, 1/40, 1/80, 1/160 y 1/320.
Agregar a cada suero una gota del antígeno. Mezclar.
Luego hacer la lectura.
Los resultados se expresan en términos de la más alta dilución que presenta aglutinación.
7.5 Resultados
7.6 Cuestionario
1. ¿Cuál es la importancia clínica de la determinación de las pruebas de aglutinación?
2. ¿Cómo se relacionan las pruebas positivas de las aglutinaciones con el Hemograma
de Schilling?
3. ¿A qué se denominan los portadores sanos?
4. ¿Qué patologías dan falsos positivos para las aglutinaciones (Pruebas cruzadas)?.
7.7 Fuente de información

2005.
DIAGNÓSTICO DE SIFILIS
7.1 Marco teórico

La sífilis es una enfermedad de transmisión sexual causado por una bacteria
espiritada, el Treponema pallidium. Para el diagnóstico se emplean pruebas

serológicas treponémicas y no treponémicas, dentro de las no treponémicas: VDRL
y RPR.
7.2 Competencias
1. Determina los anticuerpos del Treponema pallidium a través de los métodos
serológicos no treponémicas.
2. Realizar una correcta interpretación de los resultados de las pruebas serológicas.
 Materiales
Equipos
Rotador eléctrico
Microscópio
Baño María
 Reactivos
1. Solución antigénica de VDRL
2. Solución salina al 0,9%
3. Sueros controles
7.4 Procedimiento
A. MÉTODO DE VDRL
 VDRL CUALITATIVO EN SUERO
1. Numerar los anillos de la lámina
2. Cargar 0.05mL de los sueros control reactivo y no reactivo al primer y tercer
anillo respectivamente
3. En el segundo anillo cargar la muestra problema.
4. Añadir con la micro pipeta 0.05mL de solución antigénica preparada sobre el
suero contenido en cada uno de los anillos de la lámina.
5. Colocar la lámina serológica con las muestras en un rotador a 1800 rpm por
4 min.
6. Terminada la rotación examinar la lámina inmediatamente usando un
microscopio con objetivo de 10x.
LECTURA E INFORME
1. Reactivo (R)- grumoso grandes y medianos
2. Reactivo débil (RD) grumos pequeños
3. No reactivo (NR) sin grumos.
 VDRL CUANTITATIVA EN SUERO
1. Colocar 0.05ml de solución salina al 0.9% a 6 anillos de la lámina
serológica
2. Añadir 0.05ml de suero problema en el anillo 1.
3. Mezclar la solución salina y el suero del anillo uno y transferir de este
anillo, 0.05mL al anillo dos.
1. Mezclar el contenido del anillo dos y transferir 0.05ml al anillo tres.
2. Y así sucesivamente hasta el anillo seis.

3. Añadir con una micropipeta 0.05 mL de la solución antigénica sobre el
contenido de cada anillo de la lámina serológica. Del anillo 1 al 6.
4. Colocar la lámina con las muestras sobre el rotador a 180 rpm por 4 min. o
rotarlo manualmente.
5. Examinar al microscopio con objetivo de 10x.
6. De obtener reactivo sobre el título del sexto anillo continuar con las
diluciones.
7. Los títulos correspondientes serán 1:2, 1:4, 1:8, 1:16, 1:32 y así
sucesivamente.
LECTURA E INFORME
Se considera positiva el título que da la máxima precipitación.
 B. MÉTODO DE RPR
Es una prueba serológica plasmática de floculación macroscópica
RPR CUALITATIVO EN PLASMA
1. Colocar 0.05ml de los sueros a evaluar o una gota utilizando el aplicador del
kit no olvidar colocar los sueros control.
2. Con ayuda del aplicador extender la muestra dentro del círculo sin salir del
margen.
3. Agregar 0.017ml del antígeno con micropipeta o una gota con el gotero del
kit sobre la muestra a evaluar.
4. Colocar la tarjeta con las muestras sobre el rotador, por 8 min a 100 RPM, o
hacerlo manualmente.
5. Luego de los ocho minutos hacer la lectura con ayuda de la lámpara de luz.
6. Realizar la LECTURA e INFORME
7. Reactivo.-(R) Grumos grandes medianos, o pequeños pero definidos
8. No reactivo (NR) Sin grumos si se observa grumos definidos o pequeños
debe realizarse la prueba cuantitativa.de igual manera que para VDRL .
7.5 Resultados
7.6 Cuestionario
1. ¿En qué se diferencian las pruebas de VDRL y RPR?
2. ¿Cuáles son las pruebas confirmatorias de análisis clínicos de un VDRL positivo?
3. ¿Cómo se relaciona el Hemograma de Schilling con un VDRL positivo?
4. ¿Qué es el fenómeno de prozona?
5. ¿Qué patologías dan falsos positivos para VDRL?
7. 7 Fuentes de información
2005.

ANTIESTREPTOLISINAS O (ASTO o AS0)
7.1 Marco teórico

La antiestreptolisina “O” es una prueba que a menudo se designa con el nombre de
ASTO, es útil para el diagnóstico y tratamiento de la fiebre reumática , la glomérulo
nefritis aguda y otras infecciones por estreptococo beta hemolítico del grupo A.
Un título alto de antiestreptolisina O significa infección estreptocócica pasada o actual y
concretamente debido a estreptococos beta hemolíticos del grupo serológico A
(Excepcionalmente de los grupos C y D de la clasificación de Lancefield) amigdalitis,
escarlatina, sepsis puerperal, erisipela etc. Pero tienen especial interés en los procesos
estreptocócicos que aparecen como segunda enfermedad: fiebre reumática y glomérulo
nefritis aguda. No es por, lo tanto una prueba específica de fiebre reumática, pero apoya
su diagnóstico cuando la historia y los signos clínicos la sugieren.
7.2 Competencias
1. Explica el fundamento de la determinación de antiestreptolisina.
2. Realiza el proceso para determinar antiestreptolisina.
3. Interpreta los resultados cuantitativos para un ASTO positivo.

Materiales
Tubos de ensayo
Pipetas automáticas.
Reactivos
1. Suspensión de latex de antiestreptolisina O.
7.4 Procedimiento
1. Se coloca una gota de suero del paciente en uno de los círculos de la placa de fondo oscuro.
2. Luego, se agrega una gota de reactivo.
3. Se mezcla con una varilla por 2 a 3 minutos y se procede a realizar la lectura.
4. Si hay aglutinación la prueba se considera positiva y como tal realizar las diluciones para
determinar el valor cuantitativo. Si no hay aglutinación se considera la prueba negativa.
Interpretación. La presente determinación es útil para el diagnóstico y tratamiento de la
fiebre reumática y sirve para la comprobación serológica de las antitoxinas de defensa
contra las toxinas bacterianas, es decir para la comprobación de una
infección existente o pasada por estreptococos beta hemolítico de los grupos serológicos
humanos A, C y G.
PROTEINA C REACTIVA (CRP):

• La Proteína C reactiva es una glucoproteína (globulina gamma anormal) que
reacciona con el mucopolisacárido C de muchos neumococos.
• Normalmente no se encuentra en la sangre.
• La CRP, en su fase aguda clásica, es sintetizada en los hepatocitos.
POSITIVO:

• En neumonía neumocócica, siendo considerada como un anticuerpo
antineumocócico.
• La prueba para la proteína C reactiva, también se utiliza para el control de la
actividad inflamatoria aguda en la fiebre reumática y en la artritis reumatoide.
• Suero; CRP: (“Ag”) globulina gamma.

• Reactivo: Anti-CRP (Ac). Latex CRP (suspensión de partículas uniformes de
poliestireno recubierta con anticuerpo monoespecífico humano anti-CRP humana).
• Procedimiento cualitativa (Screening):
1 gota reactivo (50uL) + 1 gota suero (50uL).
Interpretación:
Resultado negativo: una suspensión lechosa uniforme no agulutinada.
Resultado positivo: aglutinación visible de la mezcla
PRUEBA SEMI-CUANTITATIVA:
Diluciones 1:2, 1:4, 1:8, 1:16, 1:32, etc.
Título: inversa de la máxima dilución a la que se produce aglutinación visible
macroscópicamente.
PRUEBA A.R. (ARTRITIS REUMATOIDE)

ó PRUEBA DE LATEX para la determinación selectiva del FACTOR
REUMATOIDEO
• La A.R. es una enfermedad sistémica crónica de etiología desconocida.

• Se caracteriza frecuentemente por hinchazón y dolor en las articulaciones periférica
y por procesos inflamatorios y degenerativos que implican el cartílago, la membrana
sinovial o el tejido muscular.
• Una característica de la A.R. es la presencia en la sangre y el líquido sinovial de un
grupo reactivo de proteínas conocidas colectivamente con el nombre de Factores
Reumatoides (RF). Se trata de macroglobulinas con un p.m. de aproximadamente 1
millón.
• Los RF son generalmente de tipo IgM anti-IgG, es decir que reaccionan con las
fracciones Fc de las IgG.
• Los R.F. son dirigidos contra gamma globulinas humana alterada.
• Los R.F. de tipo IgM se encuentran en el 70-100% de casos de artritis reumatoidea.
• Los RF se encuentran en un 2 al 3% en la osteoartritis o la fiebre reumática.
PRUEBA A.R. (ARTRITIS REUMATOIDE)

ARTRITEST ó PRUEBA DE LATEX
• Suero: R.F. (“Ag”) anti-IgG.

• Reactivo: Ig G (Ac). Latex RF: suspensión de partículas de poliestireno recubierta
de IgG humana.
• Procedimiento:

1 gota reactivo + 1 gota suero.
• Negativo: suspensión homogénea.

• Positivo: Aglutinación que aparece dentro de los dos minutos.
PRUEBA SEMI-CUANTITATIVA:
Diluciones 1:2, 1:4, 1:8, 1:16, 1:32, etc.
Título: inversa de la máxima dilución a la que se produce aglutinación visible
macroscópicamente.
7.5. Resultados
7.6 Cuestionario
1. ¿Cuál es el fundamento de la prueba de ASTO?
2. Mencionar los estados fisiológicos y medicamentos que interfieran con la prueba
de antiestreptolisina.
3. ¿Cuáles son los fundamentos para las pruebas de PCR y LATEX?
4. ¿Qué importancia clínica tienen las determinaciones de ASO, PCR y LATEX?

1. Davidson I, Bernard J. Diagnóstico clínico por el laboratorio. 9a ed. Barcelona:
Salvat Editores S.A.; 2001.
2. Deska K, Pagana T. Guía de pruebas diagnósticas y de laboratorio. 8a ed.
Barcelona: Elsevier España SL; 2008.
3. Henry J. El laboratorio en el diagnóstico clínico. Madrid: Marbán libros s.l.;
2007.
4. Platt W. Atlas de hematología en color. 4a ed. Barcelona: JIMS; 1992.
5. Talaska F. Manual de pruebas diagnósticas. 7a ed. México D.F.: McGraw –Hill
Interamericana; 2002.

PRACTICA Nº 8: EXAMEN DE ORINA COMPLETA: EXÁMEN FÍSICO,
QUÍMICO y MICROSCÓPICO, ESTUDIO DEL LIQUIDO SEMINAL:
EXAMEN FISICO y MICROSCOPICO
EXAMEN DE ORINA COMPLETA:
8.1 Marco teórico

La utilidad del análisis de orina tiene una doble vertiente: por un lado, permite la
valoración directa del propio aparato urinario, por otra, más indirecta, resulta ser un
reflejo de determinadas situaciones bioquímicas de la sangre. A estas ventajas hay que
añadir, además la facilidad de su recogida, que habitualmente no representa ninguna
molestia valorable para el paciente .el examen de orina completa significa que se realizara
varias pruebas física (densidad, pH, color. Etc.), bioquímicas (glucosa, proteínas, nitritos,
pigmentos biliares, etc.) Y microscópicas del sedimento urinario (leucocitos, hematíes,
cilindros, bacterias, cristales, etc.)
8.2 Competencias
1. Aplica el proceso físico-químico para el examen de orina
2. Identifica los diversos elementos en el examen microscópicos de la orina
3. Explica la interpretación clínica de los resultados del examen de orina

Materiales
Tubos de ensayo
Equipos
Microscopio
Centrifuga
Reactivos
Tiras reactivas para determinaciones bioquímicas en orina
8.4 Procedimiento
Según la finalidad del análisis y no mediando indicaciones especiales del médico se
instruirá al paciente acerca de cómo procederá para la recolección de muestra de orina,
teniendo en cuenta:
Par los exámenes de rutina, es suficiente una muestra de reciente micción salvo en los
casos en que se necesario practicar determinaciones casos es preciso realizar los
exámenes en un muestra correspondiente a la mezcla de la orina total de 24 horas, es
decir que compensa el metabolismo de un almuerzo o de una cena. Para reunir esta

muestra, el paciente iniciará la recolección a las 8 a.m. vaciando la vejiga y desechando
esa primera micción. Luego las distintas micciones se recogerán en un recipiente de boca
ancha y perfectamente limpio incluyendo la micción de las 8 de la mañana del día
siguiente.
El recipiente conteniendo la muestra deberá conservarse en un ambiente fresco como para
impedir la descomposición prematura de la orina.
Para el examen microscópico del sedimento, se utiliza preferentemente una muestra de
reciente micción y en especial la obtenida por la mañana al levantarse el paciente.
Se prefiere las primeras muestras de la mañana, que suelen ser las más concentradas.
En todo examen de orina se tomará en cuenta:
1. EXAMEN FISICO:
Color
Olor
Espuma
Reacción
Densidad
2. EXAMEN QUIMICO: Determinación de:
Proteínas
Glucosa
Cuerpos cetónicos
Urea
Urobilinógeno
Pigmentos biliares
Hemoglobina
Hoy en día existe en el mercado la utilización de tiras reactivas para el análisis de
orina que facilita la determinación cualitativa y cuantitativa de los componentes
químicos de la orina.
3. EXAMEN MICROSCOPICO DE SEDIMENTO:

El sedimento se obtiene centrifugando 10 ml. de orina a 1500rpm durante 5 minutos,
transcurrido dicho tiempo se vuelca el líquido sobrenadante y se suspende el sedimento
en el líquido remanente o sea que queda adherido a las paredes del tubo de centrífuga. Se
coloca entre porta y cubreobjetos se observa al microscopio con objetivo de menor
aumento y luego con el de mayor aumento.
Los constituyentes del sedimento urinario pueden agruparse dentro de 3 grupos: no
organizados, organizados y cuerpos extraños.
Sedimento no organizado:
En la orina normalmente no hay cristales y su presencia en orina no tiene significado
clínico salvo si se trata de cristales de oxalato, uratos o de cistina.
Sedimento organizado:
 Células epiteliales:
 Escamosas o pavimentosas
 Células redondas o poliédricas
 Células de transición
 Cilindros
 Cilindroides

 Leucocitos y Piocitos
 Eritrocitos
8.5 Resultados
8.6 Cuestionario
1. ¿Cuáles son las condiciones para una buena toma de muestra de orina?
2. ¿En qué casos se presentan proteínas positivas en un examen de orina?
3. ¿Explique el fundamento de la prueba de Thevenon?
4. ¿Cuáles son las pruebas bioquímicas que se utilizan para el examen de orina?
5. ¿Cuál es la importancia clínica al encontrar piocitos en una muestra de orina?.

1. Aiquel f. Manual de análisis clínicos. 6a ed. Buenos aires: médica panamericana; 1999.
2005.
EXAMEN DEL LÍQUIDO SEMINAL
8.1 Marco teórico

El análisis de semen es uno de los aspectos más importantes de la investigación de la
fertilidad, ya que la causa de incapacidad femenina para concebir radica con frecuencia
en el varón. Un análisis simple de esperma, sobre todo si indica infertilidad no es
concluyente, ya que el recuento de espermatozoides varía de unos días a otros. El
análisis de semen debe repetirse al menos dos veces. Además de su importancia en el
estudio de la fertilidad, el análisis de semen también es útil para documentar la
esterilización adecuada tras la vasectomía.
8.2 Competencias
1. Adquiere experiencia en el manejo de otros líquidos biológicos.
2. Identifica elementos anormales en una muestra de semen.

 Materiales
1. Gradillas
2. Tubos de ensayo
3. Baguetas
4. Pipeta de Thoma para glóbulos blancos
5. Camara de Neubauer

6. Microscopio
8.4 Procedimiento
Recolección
Los médicos que solicitan el examen del semen en el estudio de la esterilidad deben
respetar el código moral que su religión impone a cada paciente.
De no haber dificultades desde el punto de vista religiosos, se instruye al paciente para
que recoja la muestra con no menos de cuatro días de abstinencia sexual.
El procedimiento de obtención del material por masturbación, o bien con preservativo,
debe desecharse categóricamente por antinatural.
Además, las muestras recogidas en preservativos no son satisfactorias, aun cuando éstos
fueran lavados previamente, ya que corrientemente se los trata con sustancias químicas
(polvo, licopodio, talco, etc), de energía acción espermicida y que, además, deforman las
imágenes del semen durante su observación posterior.
El procedimiento aconsejable para la obtención del material es por relación sexual
normal, de tal modo que una vez producida la eyaculación y la más mínima parte del
semen haya impregnado la vagina, se recoge el resto en un frasco bien limpio, seco, de
boca ancha, con tapa de vidrio de cierre esmerilado y preferentemente de color caramelo,
en el que se pegará un rótulo con la siguiente información, que el paciente llenará:
 Nombre y apellidos del paciente

 Edad y forma que se obtuvo el material (eyaculado)
 Día y hora de la eyaculación.
 Día de abstención sexual.
Una vez obtenida la muestra, el paciente debe llevarla al laboratorio, lo más pronto
posible (de preferencia antes de una hora), poniéndola en contacto con su cuerpo
durante este tiempo, a fin de evitar que la temperatura descienda mucho.
Notas.- El protocolo se debe registrar: a) abstinencia previa; b) la hora de la eyaculación,
y la hora de recepción en el laboratorio.
Con referencia al recipiente donde se recibe la muestra, debe ser de boca ancha para que
no surjan inconvenientes al recoger el eyaculado. En ambientes hospitalarios,
generalmente se usan frascos de crema o desodorante, por lo que es importante que estén
bien lavados con agua caliente y detergente, pues los restos de estas sustancias poseen
una acción negativa sobre la motilidad.
Lo mismo acontece si no están secos, pues el agua, además de aumentar el volumen de la

muestra, modifica la tonicidad de la misma alterando la motilidad.
Debe descartarse totalmente el seco de envases térmicos para el traslado del material, ya
que esto contribuye a que los espermatozoides consuman las sustancias nutritivas.

EXAMEN FISICO
VOLUMEN
El volumen de una eyaculación depende, ante todo, de la secreción prostática y de las

vesículas seminales, ya que la fracción segregada por las glándulas de Cowper y el
epidídimo es pequeña y menor aún, el testicular.
Normalmente, el volumen oscila entre 2 y 6ml, aproximadamente, después de tres días de
abstinencia como mínimo.
Para determinar el volumen, se pasa la totalidad del mismo a una probeta graduada de 10
ml y se lee el volumen con una aproximación de 0,1 ml.
Cuando el volumen es muy pequeño se informa sin medirlo: “menos de 0,5 ml” o “ unas
pocas gotas”.
Interpretación
A los fines de la fertilidad masculina se catalogan como “dudoso” los sémenes con
concentración espermática, morfología y motilidad normales pero cuyos volúmenes son
inferiores a 1,5 mL.
La falta de semen se denomina aspermia. Cuando es menor de 1,5 ml se denominas
hipospermia.
Es frecuente el hallazgo de volúmenes aumentados de semen. Se catalogan como
“sospechosos” los sémenes con volúmenes mayores de 5 mL, siempre que la
concentración espermática esté por debajo de 60 millones por ml.
Aspecto
Normalmente es homogéneo y opaco.
Interpretación
El aspecto es heterogéneo cuando se observan restos groseros de material sin licuar.
Es traslúcido cuando hay pocos espermatozoides y no hay células de la
espermatogénesis, leucocitos, hematíes o gérmenes.
Color
Normalmente es blanco grisáceo, opalescente. Puede presentar un tinte ligeramente
amarillento después de una prolongada abstinencia sexual.
Interpretación
Un color amarillo (amarillo canario intenso) se observa en los casos que hay pus
(piospermia). Generalmente no hay relación entre la cantidad de leucocitos y la
intensidad del color amarillo del semen. La causa se debe a procesos infecciosos de las
vías seminales.
Un color herrumbre se debe a sangre hemolizada como se observa en casos de vesiculitis
seminal o prostatitis.
Un color rojo se debe a la presencia de sangre (hemospermia) que se observa en casos

de prostatitis o traumatismo.
Un color verdoso se debe a infecciones con bacilo piociánico.
Viscosidad
El líquido seminal normal presenta una considerable viscosidad recientemente
eyaculado, pero inmediatamente comienza su licuación que se completa a los 15-30
minutos.

El semen recién eliminado suele mostrar granos espesos de mucus que decantan por
reposo; posteriormente y debido al fenómeno de mucólisis, toma un aspecto uniforme y
poco denso con escasas partículas visibles en suspensión.
La viscosidad, según Hotchkis, tiene cierta importancia sobre todo el cuidado las
espermatozoides presentan vitalidad y movilidad inferior a lo normal.
Este auto recomienda un método sencillo para su estimación. Consiste en agitar
vivamente el semen con una varilla de vidrio, colocando 2 mL de la muestra, temperatura
ordinaria, en un tubo de ensayo de 10cm de largo por 1,5 cm de diámetro
aproximadamente, retirando luego con suavidad la misma. En condiciones normales,
cuando el extremo inferior de la varilla llega al borde del tubo de ensayo, ya se habrá
cortado el filamento del semen. En condiciones de viscosidad elevada se comprobará la
integridad de éste.
Otro procedimiento consiste en introducir la varilla de vidrio en el semen contenido en
el frasco y se la retira suavemente, observando si hay formación de filamento de semen.
En este caso se acepta como valor normal una filancia de 2 a 5 mm.
La licuación depende de la fibrinolisina potente presente en condiciones normales.
Interpretación
La viscosidad disminuida se observa generalmente en sémenes con muy poco
espermatozoides.
La viscosidad aumentada según algunos autores puede interferir el movimiento de los
espermatozoides in vitro. Es común observar viscosidad aumentada en prostatitis
crónica y en vesiculitis seminales.
Reacción
El pH del semen recién eyaculado es alcalino, oscilando entre 7,3 y 7,5.
En contacto con el medio ambiente se va alcalinizando a medida que transcurre el tiempo
por escape de anhídrido carbónico, pudiendo alcanzar un pH de 8.
Examen microscópico directo

Examinar entre porta y cubreobjetos después de la fluidificación. Apreciar el número por
campo microscópico de: leucocitos, hematíes, células epiteliales y de espermatozoides.
Hace constar la presencia o no piocitos y de cristales.
Recuento celular
El recuento se efectúa en la misma forma que para los glóbulos sanguíneos. Puede
utilizarse cualquiera de los líquidos de dilución que se mencionan.
Técnica. Con una pipeta para glóbulos blancos se aspira semen hasta la marca 0,5, y
luego, el líquido de dilución hasta la marca 11 (dilución 1: 20). Si el número de
espermatozoides es muy bajo, conviene aspirar semen hasta la marca 1 de la pipeta. Se
agita vigorosamente la pipeta hasta que el líquido en la porción ampular sea homogéneo.
Se desechan las dos primeras gotas y se carga la cámara cuenta glóbulos y se cuentan los
espermatozoides en 1 mm2; para el cálculo se multiplica por la dilución y por la altura de
la cámara (X10) para obtener la cifra por mm3 y finalmente por 1000 para obtener la
cifra por mililitro.
Notas. En el líquido de Macomber y Sauders, el bicarbonato de sodio provee un medio
alcalino en el cual se solubilizan las proteínas del semen permitiendo obtener una

distribución homogénea de los espermatozoides en la pipeta cuentaglóbulos. El formol
los mata, inmovilizándolos.
Antes de cargar la pipeta cuentaglóbulos, la muestra debe homogenizarse perfectamente
puesto que en el semen hay espermatozoides móviles e inmóviles, sedimentado estos
últimos en el frasco. La homogeneización debe hacerse por rotación cuidadosa, evitando
la formación de espuma.
Cuando los sémenes son muy viscosos es necesario rotar mucho la muestra para
homogenizar lo mejor posible y cargar dos pipetas promediando los resultados.
Interpretación
Resulta conveniente familiarizarse con la terminología que hace a las cifras de
espermatozoides del eyaculado en distintas situaciones, propuestos por la mayoría de los
autores que se han ocupado del tema:
Normospermia: Corresponde a cifras comprendidas entre 60 y 90 millones por mililitro.
Hiperespermia: Por arriba de 90 millones /mL.
Hipospermia: por debajo de 60 millones /mL.
Oligospermia: Cifras menores de 30 millones / mL.
Movilidad
Tiene muchísima importancia comprobar el grado y duración de la movilidad de los
espermatozoides. Para ello, se hacen preparaciones húmedas entre porta y cubreobjetos,
de hora en hora, durante 5 ó 6 horas, manteniendo la muestra a la temperatura ambiente.
El porcentaje de espermatozoides móviles se establece fácilmente, si se coloca un
disco de papel negro en el ocular del microscopio después de haber practicado un
pequeño cuadrado en el centro de aquél, de tal modo que sólo permita ver un
cuarto del campo microscópico.
La apreciación del número de espermatozoides móviles se hace contando en el cuarto del
campo microscópico, durante 10 segundos, todos los espermatozoides activos e
inactivos, multiplicando los resultados por 4 para determinar la cantidad que corresponde
a todo el campo.
Interpretación
Normalmente, antes de las dos horas de la eyaculación se encuentra una gran movilidad
en el 70% de los espermatozoides, con desplazamiento progresivo.
Una buena muestra seminal mantiene una considerable actividad, aún al cabo de 5 ó 6
horas de permanencia a la temperatura ambiente.
Cuando la motilidad es elevada pero está reducida a espermatozoides móviles “in situ” (1
+) o traslativos lentos (2+), no existiendo espermatozoides traslativos rápidos (3 ó 4 +),
el semen no tiene capacidad fecundante y se habla de una astenozoospermia absoluta.
Se habla simplemente de astenozoospermia cuando el porcentaje de espermatozoides de
movimiento traslativo rápido (4+) se encuentra disminuido en valores menores a un 30%.
La ausencia y motilidad se conoce con el nombre de azoospermia.
Morfología
Es estudio morfológico tiene por objeto comprobar la presencia de espermatozoides
anormales y establecer su porcentaje en relación a los normales.

La siguiente técnica de coloración permite diferenciar claramente la cabeza, sección
media y la cola.
Se cuentan de 100 a 200 espermatozoides, que no este método de coloración se presentan
con el núcleo azulado y el citoplasma rojizo.
Se establece el porcentaje de formas anormales con respecto al tamaño, forma y
disposición nuclear.
Notas. También puede teñirse el preparado con May-Grünwald-Giemsa empleado agua
tamponada a pH 7-7,2 y dejando actuar el colorante de Giemsa durante 20 minutos.
Como se ha manifestado en un comienzo, el frotis debe ser bien delgado para que se
seque rápidamente; si el frotis es grueso, tarda mucho en secar produciéndose
alteraciones morfológicas de los espermatozoides, que en ocasiones son difíciles de
evaluar. No debe emplearse calor para secar el preparado, pues se producen
morfológicos de las colas (se enroscan).
Interpretación
Normalmente no deben encontrarse anomalías morfológicas (doble cabeza,
macrocefalia, microcefalia, piriforme, cuerpo o cola defectuosos, etc) en más de 25% de
espermatozoides, no debiendo hallarse más de 2 células de la espermatogénesis cada 100
espermatozoides.
PRUEBA DE LA VITALIDAD DE LOS ESPERMATOZOIDES INMOVILES
Método de Hurgop y Di Paola

Se basa en la propiedad de la eosina de colorear únicamente las células muertas y no las
vivas.
Reactivo
 Eosina azul. 0,5 g.
 Solución fisiológica 100 mL
Técnica
En un portaobjetos se coloca una gota de semen y una gota del reactivo. Se mezcla y se
deposita en un cubreobjetos. La observación microscópica se hace dentro de las dos
primeras horas.
Se cuentan 200 elementos, teniendo en cuenta las tres categorías siguientes:
1. Espermatozoides muertos coloreados.
2. Espermatozoides vivos inmóviles no coloreados.
3. Espermatozoides vivos móviles no coloreados.
Interpretación. Los diversos autores dan como valores normales las siguientes cifras:
1. Espermatozoides muertos coloreados: 0 a 5%
2. Espermatozoides vivos inmóviles no coloreados: hasta un 40%.
3. Espermatozoides vivos móviles no coloreados: hasta un 60%.
Nota. En lugar de la eosina azulada puede utilizarse una solución de pirrol o azul cresil
al 0,5%.
Una vez mezclado el semen con el reactivo, se espera 5 minutos y se observa al
microscopio. La observación corresponderá a:
1. Espermatozoides muertos coloreados.
2. Espermatozoides vivos inmóviles no coloreados.

3. Espermatozoides vivos móviles no coloreados.
Test de Williams
Este test permite también distinguir los espermatozoides muertos (necrospermia) de los
espermatozoides vivos (astenospemia): los primeros se colorean con una solución de
eosina – nigrosina, mientras que los segundos permanecen incoloros.
Reactivos
1. Solución acuosa de nigrosina al 10%.
2. Solución acuosa de eosina al 5%.
Técnica.
Sobre un portaobjetos se colocan separadamente; en un extremo 1 gota de la solución
de nigorsina y en el optar; 1 gota de la solución de eosina y 1 gota de semen o esperma.
Mezclar la gota de semen con la de eosina, y luego la gota de nigrosiana con la mezcla
precedente. Se opera con rapidez (15 a 20 segundos). Hacer un extendido, secar
rápidamente al calor y examinar al microscopio.
Interpretación
Sólo se colorean de rojo los espermatozoides que estaban muertos en el momento de la
mezcla.
8.5. Resultados
8.6 Cuestionario
1. Explique Ud. las diferentes evaluaciones que se emplean en la actualidad para
descartar una infertilidad en el hombre.
2. ¿En qué casos se puede solicitar la prueba de la determinación de líquido
seminal?
3. ¿Qué factores alterarían la prueba del espermatograma?
4. ¿Cuáles son los requisitos que debe tener en cuenta todo pacientes que será
sometido a una prueba de determinación de líquido espermático?

1. Krupp M. Manual de diagnóstico clínico y de laboratorio. México D.F.: Manual moderno S.A;
1986.
2. Lluis VJ. Manual de técnicas de laboratorio. Hematología. 2ª ed. Barcelona: Masson S.A.; 1997.
3. Instituto Nacional de Salud. Ministerio de Salud. Manual de procedimientos de laboratorio.
Lima. Impresora Amarilys e,i,r,l,; 1997.
4. San Miguel JF y Sanchez-Guijo F. Cuestiones en hematología, 3ª ed. Madrid: Harcourt Brace
S.A.; 1997.
5. Pagana-Pagana. Pruebas diagnósticas y de laboratorio. 2da. ed. Barcelona: Mosby- Doyma
Libros, SA; 1996.
PRÁCTICA No. 9: UROCULTIVO: COLORACIÓN GRAM, PRUEBAS

BIOQUÍMICAS, ANTIBIOGRAMA.
9. 1 Marco teórico
El urocultivo es uno de los métodos de análisis microbiológico de suma importancia
para el diagnóstico de las enfermedades infecciosas del tracto urinario y asi dar un
tratamiento adecuado y oportuno
9.2 Competencias
1. Aplica técnicas de laboratorio para la determinación del urocultivo y coprocultivo.
2. Utiliza los medios de cultivo adecuado para el desarrollo de los microorganismos
3. Interpreta los hallazgos de laboratorio

Materiales
Tubos de ensayo
Asa de Kole
Placas Petri
Reactivos
1. Colorante Gram
Cristal violeta alcalino:
Sol. A: cristal violeta 1g. Agua destilada csp. 100 mL.
Sol. B: bicarbonato de sodio 5g. Agua destilada csp 100mL.
Sol. De yodo 1g. Ioduro de potasio 2g. Agua destilada csp 200mL.
Sol. Decolorante: eter 1 vol. Acetona 3 vol.
Colorante de contraste: safranina 0.5g agua destilada csp 100 mL.
2. Medios de cultivo:
Agar Mac Conkey ó EMB
Agar Azida Sangre
Agar Chapman
3. Coloración de Ziehl-Nelsen (bacilos ácido-resistente)
4. Sol. A: fucsina básica 0.3g alcohol de 95º. 10ml.
5. Sol. B: fenol 5ml. Agua destilada csp. 95ml.
6. Mezclar las soluciones a y b
7. Sol. Alcohólica de ácido clorhídrico
8. Sol. De azul de metileno
12.4 Procedimiento
RECOLECCION DE MUESTRAS:
1. La muestra para cultivo debe ser material del verdadero sitio de infección y debe
recogerse con un mínimo de contaminación de tejidos, órganos o secreciones
adyacentes.
2. Establecer periodos óptimos para la recolección de muestras a fin de tener la
mejor oportunidad de aislar los microorganismos causantes.
3. Obtener suficiente cantidad de muestra para llevar a cabo las técnicas de cultivo
solicitada.
4. Utilizar dispositivos de recolección, recipientes para las muestras y medios de
cultivo adecuados para asegurar el óptimo aislamiento de microorganismos.
5. Siempre que sea posible obtener las muestras antes de la administración de
antibióticos.

6. El envase recolector de la muestra debe estar correctamente rotulado.
UROCULTIVO:
Primer día: Recolección de la muestra.
- Examen de orina completo: físico, químico, microscopio, sedimento.
- Coloración Gram del sedimento.
- Sembrar en: Agar Mac Konkey ó EMB
Agar Azida Sangre
Agar Chapman
- Si el sedimento se observará además de leucocitos, bacilos y en la coloración
estos últimos aparecen teñidos, entonces se práctica una coloración de Ziehl-
Neelsen (bacilos ácido-resistente)
Segundo día: Lectura del recuento microbiano. Si hay más de 100 colonias.
No existe infección. Si hay entre 10 a 1000 colonias realizar nuevamente la técnica.
No. de colonias X 1000 = bacterias / mL de orina
1. Crecimiento en agar Mac Conkey:
Coloración gram negativo
Siembra en diferenciales: LIA,TSI,CS,SIM-INDOL, UREA.
Siembra en agar MH o TSA por diseminación general.
(usar discos antibióticos para gram negativos)
2. Crecimiento en Agar Azida Sangre
Coloracion gram positivo
Observar si hay hemolisis.
Observar si hay crecimiento en Agar Chapman (Positivo)
 Si hay crecimiento en Azida Sangre y Agar Chapman es: Stf sp (si las
colonias son amarillas son Stf aureus)
 Si hay crecimiento en Azida Sangre y no en Agar Chapman: existe
hemólisis, puede ser Stp. (puede demorar 36 a 48 horas).
Resembrar (cuarta parte) en agar Chapman colonias sospechosas del Azida Sangre.
Diferenciales para Stp:
Resembrar (en la cuarta parte) de colonias sospechosas: por diseminación y colocar
discos de Optoquima y Bacitracina. Observar a las 24 horas.
Sembrar por diseminación en Agar MH o TSA y usar discos de antibióticos para gram
positivos.
Tercer día:
1. Lectura de diferenciales: identificacion de Enterobacterias
2. Lectura: sensible a la optoquima: Stp pneumoniae Sensible a la bacitracina:Stp
tipo A.
3. Sea 1 o 2 leer antibiograma y definir.
Antibióticos:
A: SENSIBLE
B: MEDIANAMENTE SENSIBLE
C: RESISTENTES
9.5 Resultados

9.6 Cuestionario
1. ¿Cuáles son los medios de cultivo utilizados en la identificación de
microorganismos gram negativos?
2. Desarrolle un mapa conceptual de un coprocultivo.
3. ¿Cómo es el proceso para la toma de muestra de un hemocultivo?
4. ¿Qué importancia tiene el antibiograma?
5. ¿Qué importancia tienen los medios de enriquecimiento en un coprocultivo?

1. Davidson I, Bernard J. Diagnóstico clínico por el laboratorio. 9a ed. Barcelona: Salvat Editores
S.A.; 2001.
2. Deska K, Pagana T. Guía de pruebas diagnósticas y de laboratorio. 8a ed. Barcelona: Elsevier
España SL; 2008.
3. Henry J. El laboratorio en el diagnóstico clínico. Madrid: Marbán libros s.l.; 2007.
4. Platt W. Atlas de hematología en color. 4a ed. Barcelona: Editorial JIMS; 1992.
5. Talaska F. Manual de pruebas diagnósticas. 7a ed. México D.F.: McGraw –Hill Interamericana;
2002.
ESTUDIO DE LAS HECES: EXÁMEN PARASITOLÓGICO. METODO

DE FAUST
9.1 Marco teórico
En la patología parasitaria tiene importancia la investigación de los parásitos intestinales
en las heces, utilizando técnicas del laboratorio más usadas como las del método directo,
método de concentración de faust,, jarabe fenolado, willis, método de sedimentación de
teleman, etc. De esta manera se contribuye al mejor conocimiento de la sintomatología,
diagnóstico, tratamiento y prevención de la parasitosis intestinal.
9.2 Competencias
1. Identifica los parásitos mas frecuente en muestro medio utilizando las
técnicas de examen directo y concentración
2. Relaciona el parásito hallado con el fármaco a utilizar para el tratamiento

CONSERVADORES
Cuando las muestras provienen de lugares lejanos o no van a ser examinados
inmediatamente, se aconseja conservarlos mediante diversas formas:
Conservación por el frío.
Son para huevos de helmintos y quiste de protozoarios, así podemos mencionar:
a. Solución fijadora y conservadora por el agua formolada.
La aplicación y conservación de esta solución, varía según las consistencia de
las heces, así por ej:
Las heces duras emplean agua formolada al 5%.
Las heces pastosas emplean agua formolada al 10%
Las heces conteniendo huevos de helmintos muy resistentes, emplean agua
formolada al 20%.
La cantidad que se utiliza para cualquiera de las 3 formas volúmenes de agua
formolada por 1 volumen de muestra de heces.
b. Líquido de Deschiens:
Glicerina 100 mL.
Formaldehído al 40% 100 mL
Agua destilada 800 mL
c. Solución de De la Plaza:
Formaldehído al 40% 12.5 mL
Glicerina 12.5 mL
Sol. de Ringer o sol. fisiológica 250 mL
Sol. de Ringer ClNa 6g
ClK 75 g
Cl2Ca 100 mg
HCO3Na 100 mg
Agua destilada csp 1000 mL
Existe otros conservadores tales como: Sol. MIF (Mertiolato-Yodo-Fromaldehido) de
Sapreso y Lawles.
Sol de PVa (Alcohol Polivinilico)
REACTIVO DE FAUST:
Sulfato de Zinc al 33% (D>1,180)
REACTIVO DEL JARABE FONOLADO:

Reactivo:
Azúcar granulada 400 g
Agua destilada 300 mL
Fenol 1 g
Disolver el azúcar en agua caliente de 80 a 90 oC (No debe hervir) hasta consistencia de
jarabe y añadir 1g de fenol como conservador.
9.4 Procedimiento
El estudio debe identificarse en las heces:
 Las formas vegetativas
 Huevos
 Larvas
 Quiste de los parásitos.
RECOLECCION DE LAS MUESTRAS
El paciente colocará la primera deposición sin mezclar con la orina en un recipiente de
vidrio de boca ancha limpia y seca, rotulará su nombre y será remitido inmediatamente al
laboratorio cerrándole herméticamente, no debe utilizar recipientes porosos; ya será de
papel o de cartón.
Cuando se quiere investigar protozoarios en su forma vegetativa se requiere muestra
fresca. Las muestras formadas son mejores para encontrar quiste, en cambio las líquidas
nos permite identificar trofozoitos y deben se examinadas de inmediato o pueden ser
conservadas.

Ciertos parásitos para ser investigados requieren procedimientos especiales, por ej. Por el
método de Graham (cinta adhesiva) para Enterobius vermicularis.
En todo examen de heces para la búsqueda de parásitos deben considerarse el siguiente
orden:
1. EXAMEN MACROSCOPICO:
Este examen consiste en buscar por simple observación visual y minuciosa la consistencia
de las heces, mucus, sangre y formas adultas de parásitos tales como: Enterobius
vemincularis, Tenias, Ascaris Lumbricoides, Ancylostoma duocenales, Trichuris
trichiura, etc.
Cuando las heces son blancas o líquidas, las larvas o formas adultas de los parásitos
pueden encontrarse ocultos en medio de la masa fecal, en esta caso se filtrarán la muestra
a través de un tamiz y se hará la observación.
2. EXAMEN MICROSCOPICO:
En este examen parasitológico obligatoriamente debe realizarse dos procedimientos:
1. Examen por el método directo de heces frescas, empleando sol. de lugol
parasitológico y sol fisiológica de cloruro de sodio.
2. Examen por el Método de Concentración, empleando un método de rutina.
METODO DIRECTO
Permite encontrar mayoría de los parásitos, quiste de protozoarios con núcleos teñido de
amarillo, las vacuolas de color pardo, larvas y huevos de helmintos.
En dos láminas portaobjetos limpios y secos, colocar en uno de ellos dos gotas de sol. de
lugol, en la otra lámina 2 gotas de sol. fisiológica y con la ayuda de un mondadientes
colocar una porción de muestra a ambas láminas preparadas, mezclar homogéneamente,
cubrir con un cubreobjeto y observar al microscopio con objetivo de menor y mayor
aumento.
METODO DE CONCENTRACION:
Tiene por objeto reunir en un pequeño volumen a los elementos parasitarios inicialmente
dispersos en una gran masa de heces.
Los métodos de concentración son muy numerosos, clasificándose en dos grupos:
I.METODOS FISICOS:
A. Por sedimentación y por flotación.
Método de Faust
Método del Jarabe Fenolado
Método de Willis
B. Método de sedimentación de Teleman
METODOS DIFASICOS:
Comprende dos etapas:
a. Fases de separación residuos más voluminosos
b. Fase de concentración y enriquecimiento de los elementos parasitarios:
Método de Ritchie
Método de Carles-Barthelemy
METODOS DE SEDIMENTACION Y FLOTACION:
METODO DE FAUST:
1. En un recipiente adecuado, se prepara una suspensión de materia fecal mezclado
una parte de heces con 10 partes de agua tibia.

2. Filtrar la mezcla sobre una gasa en 4 dobleces colocado en un embudo y se
recoge 10 ml en un tubo de centrifuga.
3. Centrifugar a 2000 rpm durante 2 minutos, retirar de la centrifugadora y decantar
el líquido sobrenadante.
4. Al sedimento obtenido agregar 3 ml de agua tibia, mezclar bien.
5. Centrifugar y decantar el líquido sobrenadante repitiendo la operación por 3
veces hasta que el agua del sobrenadante permanezca límpida.
6. Después de la centrifugación se decanta el líquido sobrenadante, y añadir 3 a 4
ml. de; la sol de sulfato de zinc al 33% agitar bien durante un minuto y
centrifugar al 2500 rpm durante 1 o 2 minutos.
7. Con el asa de platino recoger la película superficial donde se encuentra flotando
los quistes de protozoario y huevos de helmintos colocar sobre un portaobjeto
limpio y seco agregar una pequeña gota de lugol parasitológico y efectuar el
examen al microscopio.
METODO DEL JARABE FENOLADO (Flotación)
1. En un vial colocar el jarabe fenolado hasta la mitad y agregar con una bagueta
unos 2 g de heces.
2. Mezclar bien las heces con el jarabe fenolado hasta observar uniforme la
suspensión.
3. Adicionar más jarabe fenolado hasta el borde del vial
4. Al borde del vial aplicarle un portaobjeto y dejar en reposo por 20 minutos como
tiempo mínimo.
5. Retirar el portaobjeto y sobre la muestra aplicarle un cubreobjeto efectuar el
examen microscópico.
Por este método se observan larvas y huevos de los helmintos.
9.5 Resultados
9.6 Cuestionario
1. ¿En qué consiste la Técnica de Graham?
2. ¿Cuáles son las condiciones para la toma de muestra de heces para un paciente
que se sospecha parasitosis?
3. ¿Desde el punto de vista patológico como se adquiere una tricuriasis?
4. ¿Cuál es el fundamento del Método del jarabe fenolado?
5. Dibuje los quistes y huevos de los parásitos más encontrados en nuestro medio.

S.A.; 2001.
España SL; 2008.
3. Henry J. El laboratorio en el diagnóstico clínico. Madrid: Marbán libros s.l.; 2007.
4. Platt W. Atlas de hematología en color. 4a ed. Barcelona: JIMS; 1992.
5. Talaska F. Manual de pruebas diagnósticas. 7a ed. México D.F.: McGraw –Hill Interamericana;
2002.

PRACTICA No. 10: GLUCOSA, COLESTEROL y TRIGLICÉRIDOS.
DOSAJE DE GLUCOSA, PRUEBA DE TOLERANCIA A LA GLUCOSA,

GLUCOSA POST PRANDIAL.
10.1 Marco teórico

La determinación de glucosa sérica es útil para el diagnóstico de numerosas enfermedades
metabólicas (diabetes mellitus). Los niveles séricos, de glucosa deben interpretarse de
acuerdo con la hora, día en la que se tomo la muestra. La concentración de glucosa en los
líquidos extracelulares se mueve en una banda de tolerancia que es regulada a la baja de
insulina (acción hipoglucemiante y la alza mediante el glucagón, cortisol, catecolaminas y
hormona de crecimiento), las determinaciones de glucosa en pacientes recientemente
diagnosticados de diabetes se deben realizar con frecuencia para controlar de cerca la
dosis de insulina que debe administrarse.
10.2 Competencias
1. Utiliza métodos bioquímicos para la determinación de la glucosa en sangre
2. Interpreta los resultados y correlacionarlos con otras determinaciones
solicitados en análisis clínicos

Materiales
1. Gradillas
2. Tubos de ensayo
3. Pipetas volumétricas
4. Pipetas automáticas
5. Baguetas
6. Centrifuga
7. Espectrofotómetro
 Reactivos
1. Reactivo enzimático
2. Standard de glucosa: una solución de glucosa 100mg/dl que contiene
preservantes y estabilizadores. Mantener en refrigeración.
10.4 Procedimiento
METODO ENZIMÁTICO COLORIMÉTRICO:
Preparar 3 tubos y agregar en ellos:
BLANCO STANDARD MUESTRA
(mL) (mL) (mL)
Standard - 0.01 -
Suero - - 0.01
Reactivo constituido 1.0 1 .0 1.0
Mezclar suavemente.
Incubar por 5 minutos a 37oC
Leer absorbancia a 505nm contra el blanco. El color es estable por 1 hora.

Cálculos:
Glucosa (mg/dL) = 100
--------------------- x A muestra problema
A standard
A= valor de absorbancia obtenido.

Valores normales:
Suero o plasma: 65 – 110 mg/dL
10.5 Resultados
10.6 Cuestionario
1. ¿En qué consiste la prueba de la tolerancia a la glucosa?
2. ¿Qué importancia clínica tiene la determinación de la hemoglobina glicosilada?
3. ¿Cuál es el fundamento del método enzimático para determinar glucosa en
sangre?

España SL; 2008.
S.A.; 2001.
ateneo; 1985.
4. Kumar V, Cotran R, Robbins S. Patología humana. 7a ed. Madrid: Elsevier; 2004.
5. Widmann F. Interpretación clínica de las pruebas de laboratorio. 4a ed. Barcelona: JIMS; 1997.
COLESTEROL TOTAL
10.1 Marco teórico

El colesterol es un esteroide muy abundante en las células de los animales en los que se
desarrolla diversas funciones, como componte estructural fundamental de las membranas
celulares, contribuyendo a sus propiedades fisicoquímicas, como precursor de las
hormonas sexuales y de la corteza suprarrenal, participa en la síntesis de ácidos biliares,
de hecho, la bilis es la única vía de eliminación del colesterol. El colesterol circula en la
sangre unido a las lipoproteínas de manera las de bajo densidad (LDL) transportan el
70%, las de alta densidad (HDL) el 15 y 20 % y el resto circula unida a las de muy baja
densidad (VLDL) y a los quilomicrones. Por ello es el principal lípido relacionado con la
enfermedad vascular arteriosclerótica.
10.2 Competencias
1. Determina e interpreta las pruebas de función lipídica en muestras de suero o
plasma utilizando las técnicas de laboratorio para su análisis, cumpliendo y
haciendo cumplir las normas de bioseguridad y ética.

2. Determina el colesterol por métodos espectrofotométricos conociendo sus
propiedades físico-químicas, a partir de una muestra de sangre (suero
sanguíneo)

 Materiales
2. Tubos de ensayo
3. Gradillas
4. Centrifuga
METODO ENZIMATICO COLORIMETRICO PARA LA DETERMINACION

EN SUERO
 Reactivos
1. REACTIVO ENZIMATICO:
2. Mantener en congelación hasta el momento de su reconstitución.
3. El reactivo, después de reconstruirse contiene:
4. 4- amino-antipirina 0.40 mmol/L, colesterol esterasa = 2,000 U/L, activadores,
estabilizadores y buffer.
5. STANDARD DE COLESTEROL
Contiene 200 mg/dL de colesterol en etilen glicol mono metileter y
surfactantes. Refrigerar (2-8°C).
10.4 Procedimiento
PROCEDIMIENTO PARA LA DETERMINACION DE COLESTEROL EN SUERO.
Blanco Standard Muestra

(mL) (mL) (mL)
Standard --------- 0.01 --------
Suero --------- ---------- 0.01
Rvo. Reconstituido 1.0 1.0 1.0
Mezclar suavemente.
Incubar por 5 minutos a 37°C.
Leer la absorbancia a 500 nm contra el blanco.
El color es estable por una hora.
Cálculos:
A Suero
Colesterol (mg/dL) = --------------------- x 200
A Standard
A= Valor de absorbancia obtenido

MANEJO DE LA MUESTRA Y REACTIVOS
 El reactivo reconstituido es estable por 30 días a 4°C y debe ser protegido de
la luz.
 En caso que se requiera obtener un volumen final mayor de 1.0 ml, se puede
agregar inmediatamente antes de realizar la lectura, hasta 1.2 ml de agua
destilada en todos los tubos, incluyendo el blanco.
 El método es lineal hasta 500 mg/dL.
Menos de 200 mg/dL. Valor deseable
200 a 239 mg/dL. Valor frontera
Mayor de 240 mg/dL. Valor alto
10.5 Resultados
10.6 Cuestionario
1.¿Cómo explica Ud. las reacciones que ocurren en la determinación de colesterol
total por el método enzimático?
2.¿Qué precauciones se debe tener con respecto a la toma de muestra para la
determinación del colesterol?
3.¿Qué lipoproteínas transportan al colesterol?
4.¿Por qué es importante la determinación de colesterol en una persona de edad
avanzada?
5.Bioquimicamente como relaciona el colesterol con la glucosa.

Panamericana; 1986.
3. Guerci A. Laboratorio. Métodos de análisis clínicos y su interpretación. 3ª ed. Buenos Aires:
Librería El Ateneo; 1985.
4. Krupp M. Manual de diagnóstico clínico y de laboratorio. México DF: Manual Moderno S.A.;
1986.
TRIGLICERIDOS
10.1 Marco teórico

Los triglicéridos están formados por la esterificación de la glicerina con tres ácidos
grasos. Se depositan en el tejido graso, desde donde constituyen una reserva importante
de energía. Su síntesis se produce a partir de diversas fuentes: una erógena, constituida
por la dieta, y otra endógena que corresponde a su formación hepática. Los primeros se
vehiculizan por la sangre por medio de los quilo micrones; los segundos se transportan
mediante las lipoproteínas de muy baja densidad .Cuando los niveles sanguíneos son
excesivos, los triglicéridos se depositan en el tejido graso. La determinación de
triglicéridos forma parte del perfil lipídico, El perfil lipídico se emplea para evaluar el
riesgo de enfermedad coronaria y vascular periférica.

10.2 Competencias
1. Determina e interpreta las pruebas de función lipídica en muestras de suero o
plasma utilizando las técnicas de laboratorio para su análisis, cumpliendo y
haciendo cumplir las normas de bioseguridad y ética.
2. Determina los triglicéridos por métodos espectrofotométricos conociendo sus
propiedades físico-químicas, a partir de una muestra de sangre (suero sanguíneo).

 Materiales
2. Tubos de ensayo
3. Gradillas
4. Centrifuga
METODO ENZIMATICO COLORIMETRICO PARA LA DETERMINACION

DE TRIGLICERIDOS EN SUERO
 Reactivos
Mantener en congelación hasta el momento de su reconstitución.
STANDARD DE TRIGLICERIDOS
Solución a base de glicerol, equivalente a 200 mg/dL de trioleína. Contiene
perseverantes y estabilizadores. Conservar en refrigeración.
10.4 Procedimiento
PROCEDIMIENTO PARA LA DETERMINACION DE TRIGLICERIDOS EN SUERO
Blanco Standard Muestra

(mL) (mL) (mL)
Standard --------- 0.01 ----------
Suero --------- ---------- 0.01
Rvo. Reconstituido 1.0 1.0 1.0
Mezclar suavemente.
Incubar por 5 minutos a 37°C
Leer la absorbancia a 520 nm contra el blanco. El color es estable por 1 hora.
Cálculos:
A Suero
Triglicérido (mg/dL) = ---------------- x 200
A Standard
A = valor de absorbancia obtenido.

MANEJO DE LA MUESTRA Y REACTIVOS

 En caso que se requiera obtener un volumen final mayor de 1.0 mL, se puede agregar
inmediatamente antes de realizar la lectura, hasta 1.2 mL de agua destilada en todos
los tubos incluyendo el blanco.
 La coloración rosa del reactivo reconstituido es normal. Reactivos con blancos hasta
0.4 unidades de absorbancia puede ser empleados.
 Si se desea que el blanco del reactivo reconstituido imprescindible mantenerlo bajo
refrigeración (2-8°C) el mayor tiempo posible.
 Debido a que con el transcurrir del tiempo el reactivo reconstituido va oscureciéndose
ligeramente, es importante que siempre se realicen las lecturas contra el blanco de
reactivo.
 El método es lineal hasta 700 mg/dL.
Valores normales:
 Menores de 30 años 10 – 140 mg/dL
 Entre 30 y 39 años 10 – 150 mg/dL
 Entre 40 y 49 años 10 - 160 mg/dL
 De 50 años a más10 – 190 mg/dL
10.5 Resultados
10.6 Cuestionario
1. ¿Qué importancia clínica tiene la determinación de los triglicéridos?
2. ¿Cómo trabajaría Ud. Un suero lipémico, para la determinaciones bioquímicas?
3. ¿Qué recomendaciones daría Ud. al paciente para obtener una buena muestra de
sangre para determinar triglicéridos?
4. ¿Cuál es el fundamento de la determinación de triglicéridos?

1. Amorós M. Barrero L. Análisis bioquímico. Madrid; Editorial Sintesis; 2016.
2. Angel G. Interpretación Clínica del Laboratorio. 8ª. Edic. Madrid: Edit. Médica Panamericana; 2014.
3. Antonozzi I. Gulletta E. Medicina de Laboratorio. Fundamentos y aplicaciones en el diagnóstico
clínico. México D.F: Editorial Medica Panamericana; 2016.
4. Balcells G. Interpretación Clínica del Laboratorio. 22ª Edic. Barcelona: Edit Masson S.A; 2015.
5. Gaw A, Murphy M, Srivastava R, Cowan R. Bioquímica Clínica. Barcelona: Edit. Elsevier; 2015.
6. Mérida F, Moreno E. Manual para Técnico Superior de laboratorio clínico y biomédico. Madrid:
Edit. Medica panamericana; 2015.
7. Ruiz G, Ruiz A. Fundamentos de Interpretación Clínica de los exámenes de laboratorio. 3ª Ed.
Ciudad de México: Edit. Medica Panamericana; 2017.
8. Simes L, Brich T. Bioquímica orientada al análisis clínico. Córdoba: Edit. Jorge Sarmiento; 2015.
PRACTICA No 11 ENZIMAS
11.1 Marcos teórico

Las fosfatasas son enzimas de especificidad relativamente amplia que son capaces de
reaccionar sobre un cierto número de sustratos de estructura relacionada, como son la
fosfatasa alcalina, que actúa en medio alcalino, su determinación es importante en
pacientes con enfermedades hepáticas y óseas. La fosfatasa ácida conocida como

fosfatasa ácida prostática se encuentra en la próstata, se utiliza para diagnosticar y
determinar el estadio de carcinoma prostático.
La prueba de determinación sérica de la amilasa se lleva a cabo con facilidad y rapidez y
se usa con frecuencia para diagnosticar la pancreatitis y realizar el seguimiento del
tratamiento de este trastorno.
Las enzimas constituyen un grupo de proteínas que tienen como función catalizar
sustratos específicos. Estos compuestos se encuentran en el organismo humano formando
parte de un órgano o ubicado en varios órganos.
Las enzimas sirven para el diagnóstico clínico de muchas enfermedades en razón a la
cantidad de sustancia presente en sangre.
11.2 Competencias
1. Determina e interpreta las pruebas enzimáticas en muestras de suero o plasma.
2. Utiliza las técnicas de laboratorio para su determinación, cumpliendo y haciendo
cumplir las normas de bioseguridad y ética

 Materiales
1. Gradillas
2. Tubos de ensayo
4. Centrífuga
METODO COLORIMETRICO PARA LA DETERMINACION DE FOSFATASA

SERICAS ALCALINA.
Determinación de Fosfatasa Alcalina (punto final) VALTEK
 Reactivos
 Reactivo No 1
 Reactivo No 2
 Solución standard
 PREPARACIÓN DEL REACTIVO REVELADOR:
El reactivo No 2 se proporciona concentrada.
Debe diluirse con agua desionizada completando el volumen indicado en la
etiqueta del frasco. Una vez diluido, conservar entre 2º y 8º C en botella de
plástico.
11.4 Procedimiento
TUBO BLANCO STANDARD MUESTRA
Reactivo No.1 mL 0,5 0,5 0,5
Preincubar 3 minutos a 37 oC
Agua destilada 0.05 -- --
Solución Standard -- 0,05 --
Muestra mL -- -- 0,05
Mezclar e incubar EXACTAMENTE 10 minutos a 37º C
Reactivo No 2 (Revelador) mL 2,5 2,5 2,5
Mezclar y leer las absorbancias a 590 nm llevando a cero el instrumento con el blanco reactivo.

Cálculos:
• ACTIVIDAD PAL (UI/L) = FACTOR X Absorbancia muestra
• Factor = 100
Abs standard
Valores referenciales:
• Suero: 30 a 125 UI/L a 37º C
DETERMINACIÓN FOTOMÉTRICA DE LA AMILASA EN SUERO

Método colorimétrico (valtek)
Reactivos:
• Reactivo No. 1: Almidón, buffer, preservantes y estabilizantes.
• Reactivo No. 2: Iodo y HCl
• Reactivos listos para su uso.
Muestra
Suero o plasma heparinizado libre de hemolisis. La amilasa es estable por 7 dias
conservada entre 18 y 25oC. y 2 meses a 4°C.
Procedimiento:
REFERENCIA DESCONOCIDO
Reactivo No. 1 mL 0,50 0,50
Preincubar 3 a 5 minutos a 37º C
Muestra mL -- 0,01
Incubar EXACTAMENTE 7 ½ minutos a 37 oC
Agua desionizada mL 4,0 4,0
Reactivo No. 2 mL 0,5 0,5
Mezclar suavemente por inversión y leer a 600 nm contra blanco de agua dentro del plazo de una hora.
Cálculos:
Amilasa (U/dL) = Abs Referencia – Abs Desconocido x 1000
Abs Referencia
Rangos de referencia: en suero
Normal: 16-118 U/dL
Pancreatitis aguda: 250 – 10,000 U/dL
Pancreatitis crónica: 119 a 250 U/dL
11.5 Resultados
11.6 Cuestionario
1. ¿Explique qué otras pruebas bioquímicas corroboran los resultados elevados de
fosfatasas acidas?
2. ¿Qué precauciones debemos tener con la muestra sanguínea (suero) cuando
realizamos las pruebas de fosfatasa tanto alcalina como ácida?
3. ¿Qué otras pruebas de laboratorio corroboran una amilasa aumentada?
4. ¿Qué importancia clínica tiene la determinación de lactato deshidrogenasa?
5. Indique las pruebas enzimáticos que se utilizan en un infarto al miocardio.

Edit. Médica panamericana; 2015.
Ciudad de México: Edit. Médica Panamericana; 2017.
PRÁCTICA No 12 PRUEBAS DE FUNCION HEPATICA
A. DETERMINACION DE BILIRRUBINAS:
12.1 Marco teórico

La bilirrubina es producida por la destrucción de la hemoglobina por las células del
sistema reticuloendotelial. En condiciones normales la concentración de bilirrubina en la
sangre es baja, un incremento ocurre en los casos de ictericia.. Varías son las causa de
este incremento, fundamentalmente cuando el hígado no es capaz de depurar la
bilirrubina producida en grandes cantidades, sobre todo cuando hay daño del parénquima
hepático., en otros casos se debe a una obstrucción del tracto biliar. La bilirrubina directa
o conjugada y la bilirrubina total, se determinan por una serie de métodos, cuyo
fundamento principal es la formación de un complejo azobilirrubina.
12.2 Competencias
1. Determina e interpreta las pruebas de función hepática en muestras de suero o
plasma
2. Utiliza las técnicas de laboratorio como la espectrofotometría para su
determinación, cumpliendo y haciendo cumplir las normas de bioseguridad y
ética.

 Materiales
1. Gradillas
2. Tubos de ensayo
4. Centrifuga
MUESTRA: suero o plasma libre de hemolisis.
 Reactivo:
Composición química:
Acido sulfanilico, HCl, DMSO, Nitrito de Sodio
Reactivo de trabajo:

Agregar al momento de utilizar:
Por cada 1 mL de reactivo + 1 gota de reactivo nitrito de sodio. Mezclar.
12.4 Procedimiento
BILIRRUBINAS TOTALES:
DESCONOCIDO CALIBRADOR BLANCO REACTIV
MUESTRA (mL) 0,10 ----- ----
Calibrador (mL) --- 0,10 -----
Reactivo de 1 1 1
trabajo (mL)
Agua destilada --- ---- 0,10
(mL)
 Mezclar e incubar 10 minutos a temperatura ambiente, llevando a cero el

instrumento con el blanco reactivo a una longitud de onda de 560 nm. El color
resultante es estable por 30 minutos.
 ∆ Abs. = Abs muestra - Abs blanco
 Factor = Concentración del calibrador
∆ Abs del calibrador
Concentración de muestra (mg/dL) = Factor x ∆ Abs muestra problema
Valores normales de B.T. en adulto: hasta 1,2 mg /dL
BILIRRUBINA DIRECTA – DIAZO ACIDO
 MUESTRA: SUERO O PLASMA LIBRE DE HEMOLISIS.

Reactivo:
Composición química:
Acido sulfanilico, HCl, Nitrito de Sodio
Agregar al momento de utilizar:
Por cada 1 mL de reactivo Sulfanílico , 1 gota de reactivo nitrito de sodio. Mezclar.
DESCONOCIDO BLANCO REACTIVO
Muestra (mL) 0,10 ------------
Reactivo de trabajo (mL) 1 1
Agua destilada (mL) ------------ 0,10

 Mezclar e incubar EXACTAMENTE 3 minutos a temperatura ambiente, llevando
a cero con el blanco reactivo, a una longitud de onda de 560 nm
Cálculos:
 Factor = Concentración del Standard
∆ Abs del Standard
Concentración de muestra (mg/dL) = Factor x ∆ Abs muestra problema
Valores Normales:
 Bilirrubina Directa: 0 a 0,3 mg/ dL.
 BILIRRUBINA TOTAL = BILIRRUBINA DIRECTA + BILIRRUBINA

INDIRECTA
 BILIRRUBINA INDIRECTA = BILIRRUBINA TOTAL – BILIRRUBINA
DIRECTA
12.5 Resultados
12.6 Cuestionario
1. ¿Qué métodos existen para la determinación de bilirrubina?
2. ¿Cuál es la importancia clínica de las bilirrubinas conjugada y no conjugada ?.
3. En la ictericia hemolítica ¿cuál de las bilirrubinas se encuentra alterada y porqué?
4. ¿En una anemia hemolítica ¿cuál de las bilirrubinas se encuentra alterada y por
qué?
5. ¿Qué importancia clínica tiene en las pruebas hepáticas completas la determinación
de proteínas totales y colesterol?

B. DETERMINACION DE PROTEINAS TOTALES Y FRACCIONADAS
12.1 Marco teórico

El hígado juega un papel importante en la producción de proteínas
plasmáticas. La determinación de proteínas totales y fraccionadas, a menudo es una
información muy útil en el tratamiento de las enfermedades crónicas del
hígado. En etapas avanzadas de la enfermedad, se produce una disminución de la

albúmina con incremento de la globulina, de tal manera que se produce una
inversión de la relación A/G. En la fase temprana de la hepatitis, pueden encontrarse
concentraciones normales de proteínas. El método más exacto para la
determinación de proteínas es el método de Kjeldahl.
La determinación de sólo proteínas totales, tiene poco valor como prueba aislada,
debido a que la alteración en una de sus fracciones puede ser balanceada por una
alteración opuesta de otra fracción, por lo que es importante determinar también
sus fracciones, albúmina y globulina.
12.2 Competencias
1.Determina e interpreta las pruebas de función hepática en muestras de suero o
plasma.
2.Utiliza las técnicas de laboratorio como la espectrofotometría para su
determinación de las proteínas totales y fraccionadas., cumpliendo y haciendo
cumplir las normas de bioseguridad y ética.
 Materiales
1. Gradillas
2. Baguetas
3. Tubos de ensayo
5. Centrifuga
12.4 Procedimiento
METODO DE BIURET PARA DETERMINACION DE PROTEINAS
TOTALES
a. Fundamento. Las proteínas debido a sus enlaces peptídico reaccionan, en
medio alcalino con el ión cúprico del Reactivo de Biuret, estabilizado
con el tartrato, formando un complejo de color violeta. La intensidad del
color es proporcional a la concentración de proteicas existentes en el suero, la
absorbancia se mide a longitud de onda de 555 nm.
b. Reactivos:
1. Reactivo de Biuret para proteínas.
2. Standard de proteínas 3.4 g/dL
c. Equipos: 1. Espectrofotocolorimetro.
Disponer en una gradilla tres tubos de prueba y trabajar como sigue:
BLANCO CALIBRADOR DESCONOCID
Muestra -- --- 0,01

(mL)

Calibrador ---- 0,01 ---------
( mL)
Reactivo 1 1 1
( mL)
 Mezclar e incubar 20 minutos a temperatura ambiente. Leer las absorbancia a 540

nm llevando a cero con el blanco de reactivo. El color resultante es estable por lo
menos 30 minutos.
Abs del Standard
PROTEINAS TOTALES (gr/dL) = Factor x Abs muestra problema
VALORES NORMALES: 6 a 8 g/dL
12.5 Resultados
12.6 Cuestionario
1. ¿Cuál es el fundamento para la determinación de las proteínas?
2. ¿Qué métodos existen para determinar proteínas totales y fraccionadas?
3. ¿Utilizar un standard de proteínas con una concentración por debajo de las cifras
normales, lleva a resultados poco exactos?
4. ¿Qué importancia clínica tiene la determinación de las proteínas totales?
5. ¿En qué casos se solicitan determinación de proteinas en orina?

C. DETERMINACION DE ALBUMINA CON EL VERDE DE BROMOCRESOL
12.1 Marco teórico

Fundamento. Las proteínas debido a sus enlaces peptídico reaccionan, en medio
alcalino con el ión cúprico del Reactivo de Biuret, estabilizado con el
tartrato, formando un complejo de color violeta. La intensidad del color es
proporcional a la concentración de proteicas existentes en el suero., la absorbancia
se mide a a longitud de onda de 555 nm.

12.2 Competencia
1. Conoce el método de laboratorio para determinar de albúminas
2. Explica el procedimiento para la determinación de albúminas

a) Reactivos: Reactivo de albúmina de verde de bromocresol en buffer de succinato
pH 4,2 , estabilizado.
b) Standard de albúmina de 3.2 g/dL. Refrigerar.
c) Equipos: Espectrofotómetro.
12.4 Procedimiento
1. Disponer en una gradilla tubos de prueba y proceder como sigue:
Blanco calibrador
Muestra (mL) -- -------------

--
Calibrador (mL) -- 0,01
--
Reactivo (mL) 1 1
 Mezclar e incubar 3 minutos a temperatura ambiente. Leer las absorbancias a 620

nm llevando a cero el espectrofotómetro con el blanco de reactivo.
Abs del Standard
Concentración de muestra (g/dL) = Factor x Abs muestra problema
Valores normales: 3,5 a 5,0 g /dL.
 PROTEINAS TOTALES = ALBUMINA + GLOBULINAS

 GLOBULINAS = PROTEINAS TOTALES - ALBUMINAS
12.5 Resultados
12.6 Cuestionario
1. ¿Considera que las globulinas pueden interferir el dosaje de albúmina por el
Método de verde de bromocresol?.
2. ¿Cómo se determinan las globulinas en el laboratorio. A su criterio cual es el
mejor método para determinar globulinas?.
3. ¿Cuál es la importancia clínica de la determinación de las globulinas?

1. Abbas, Abul K. Inmunología Celular y Molecular. 7ª Edic. Madrid: Edit. Elsevier; 2012.

clínico. México D.F: Editorial Médica Panamericana; 2016.
3. Herrera E, Ramos M, Roca P. Bioquímica Básica. Madrid: Edit. Elsevier; 2014.
4. Gaw, A. Bioquímica Clínica. 5ª Edic. Madrid: Edit Ediciones Harcourt; 2015.
5. Martinez L, Gallego D, Ramirez S, Jaramillo L, Älvarez L. Hematología. Medellin: Editorial
Universidad Pontificia Bolivariana; 2016.
7. Muñoz J. Fundamentos y Técnicas de Análisis Hematológicos y Citológicos. 4ª. Ed. Barcelona: Edit.
Masson; 2012.
Ciudad de México: Edit. Médica Panamericana; 2017.
PRACTICA No. 13 PRUEBAS DE FUNCION RENAL
A. DETERMINACIÓN DE UREA
13.1 Marco teórico

Una de las pruebas más comunes para determinar la función renal en pacientes que
padecen de alguna patología renal ya sea de tipo ambulatorio como hospitalizado es la
Urea y Creatinina en sangre. La Urea es el producto final del catabolismo de las
proteínas, tras sintetizarse en él, hígado, la urea pasa a la sangre y de aquí es eliminada
finalmente por el ríñanla concentración de urea en el filtrado glomerular es idéntica a la
del plasma, dado que se filtra libremente por los glomérulos y que el riñón es su único
punto de eliminación.
La creatinina que es el producto resultante del catabolismo muscular, formándose a
partir del fosfato de cretina que contiene el músculo, tras pasar a la sangre se elimina en
su mayoría por el riñón. Las causas de aumento de estos dos parámetros que miden la
función renal, nos darán una clara idea como está funcionando el riñón, o también nos
permitirá monitorizar drogas nefrotoxicas.
13.2 Competencias
1. Determina e interpreta las pruebas de función renal en muestras de suero o
plasma Y orina utilizando las técnicas de laboratorio para su análisis,
cumpliendo y haciendo cumplir las normas de bioseguridad y ética.
2. Permite al estudiante la oportunidad de aplicar sus conocimientos y practicar
con muestras clínicas la monitorización de algunos fármacos nefrotóxicos.

 Gradillas
 Pipetas automáticas
 Baguetas
 Centrifuga
 Espectrofotometro
Material biológico:
Suero obtenido estando el paciente en ayunas.
Reactivos:
1. Solución de ácido picríco al 0.05M. Estable a temperatura ambiente

2. Solución de hidróxido de sodio al 0.75 N.
3. Standard de creatinina 2 mg/dL . Refrigerar.
13.4 Procedimiento
DETERMINACIÓN DE UREA SALICILATO (UREASA)
VALTEK
Reactivos:
 Reactivo No 1: Ácido salicílico y nitroprusiato.
 Reactivo No 2: Hipoclorito e Hidróxido de Sodio.
 Reactivo No 3: Ureasa
Preparación del Reactivo de Trabajo:

 Mezclar 1 mL del reactivo No 1 con 50 uL del reactivo No 3.
 ó ( 30 mL del Reactivo No 1 con 1,5 mL del reactivo No 3.)
Blanco Calibrador Desconocido
Muestra (mL) -- -- 0,01
Calibrador (mL) -- 0,01 --
Reactivo de trabajo (mL) 1,00 1,00 1,00
Mezclar e incubar 5 minutos a temperatura ambiente ó 3 minutos a 37oC. Luego

agregar:
Reactivo No 2 1,00 1,00 1,00
 Mezclar e incubar 10 minutos a temperatura ambiente o 5 minutos a 37º C.

 Leer las absorbancias a 600 nm.
Cálculos:
Factor = Concentración del calibrador
Absorbancia del calibrador
UREA (mg/dL) = Factor x Abs muestra problema
Valores Normales de Urea en suero:

 10 a 50 mg / dL

 Para expresar los valores obtenidos como nitrógeno ureico (mg/dL) multiplicar el
valor obtenido por 0,455
 Nitrógeno ureico : 4,5 a 22,7 mg/dL.
13.5 Resultados
13.6 Cuestionario
1. ¿Cuál es el fundamento para la determinación de la Urea por el método de la ureasa?
2. ¿Qué otros métodos existen para determinar urea?
3. ¿Qué relación hay entre la urea y la creatinina?

Masson; 2012.
B. DETERMINACION DE CREATININA
13.1 Marco teórico

La creatinina es un producto de desecho, del metabolismo de la creatina, cuya
valoración es una medición de gran importancia y un índice excepcionalmente útil de la
función renal.
En condiciones normales, la cantidad diaria de creatinina producida es prácticamente
constante y depende del índice metabólico y del tamaño corporal. Tan pronto se
forma la creatinina se difunde pasivamente en el torrente sanguíneo, de donde es
extraída por la filtración glomerular del riñón, luego pasa a través del sistema
tubular, de donde una pequeñísima cantidad es reabsorbida a través de los túbulos
renales. La prueba de depuración de la creatinina tiene la ventaja sobre la
depuración de urea, en que la de creatinina es afectada muy poco por la ingesta
dietética y porque su excreción se hace totalmente por filtración glomerular, sin una
contribución celular de valor, de tal manera que la filtración glomerular refleja la
concentración sérica de creatinina.
13.2 Competencias

1. Determina e interpreta las pruebas de función renal en muestras de suero o
plasma Y orina utilizando las técnicas de laboratorio para su determinación,
cumpliendo y haciendo cumplir las normas de bioseguridad y ética.
2. Permite al estudiante la oportunidad de aplicar sus conocimientos y practicar
con muestras clínicas la monitorización de algunos fármacos nefrotóxicos.

Para realizar la depuración se requiere:
a) Material biológico :
1. Orina de 5 o 24 horas según indicación médica
2. Suero obtenido estando el paciente en ayunas.
DETERMINACIÓN DE CREATININA
(Jaffé punto final) Wiener
 Reactivo A: Acido pícrico

 Reactivo B: Buffer alcalino
MUESTRA: Suero o plasma
Desproteinizado:
 A 0,7 mL de suero agregar 3,50 mL de reactivo A.
 Mezclar por inversión.
 Dejar en reposo por 10 minutos
 Centrifugar a 3000 rpm. X 5 minutos.
Desproteinizado (mL) -- -- 3
Calibrador (mL) -- 0,5 --
Agua (mL) 1 0.5 ---
R A (mL) 2 2
R B (mL) 0,5 0,5 0,5
 Mezclar por inversión e incubar 20 minutos a temperatura ambiente.

 Leer las absorbancias a 510 nm llevando a 0 el instrumento con el blanco del
reactivo.
Cálculos:

Factor = Concentración del calibrador
Absorbancia del calibrador
CREATININA (mg/dL) = Factor x Abs muestra problema
Valores normales:
 Suero : 8 a 14 mg/dL
13.5 Resultados
13.6 Cuestionario
1. ¿Qué tipo de muestras biológicas se requieren para la depuración de creatinina?
2. ¿Por qué la orina se diluye previamente al 1/10 con agua destilada ?
3. ¿Cuál es la interpretación clínica y los valores normales de la depuración de
cratinina?
4. ¿Cuál es la interpretación clínica del incremento de la creatinina?

Masson; 2012.
ELECTROLITOS: CALCIO
A. CALCIO
13.1 Marco teórico

La determinación del calcio sérico se utiliza para evaluar la función paratiroidea y el
metabolismo del calcio mediante análisis directo de la cantidad total de calcio en la
sangre. Cuando el nivel sérico de calcio esta elevado en al menos tres determinaciones
separadas, el paciente tienen hipercalcemia. Sabemos que el calcio existe dentro de la
sangre en forma libre (calcio ionizado) y ligado a proteínas (con albúmina).La
determinación del calcio sérico mide ambas formas.
13.2 Competencia

1. Determina e interpreta las pruebas por espectrofotometría de los principales
electrolitos en muestras de suero, plasma y orina.
2. Analiza e interpreta los resultados relacionando con las diversas enfermedades
que se presentan cuando hay disminución o incrementos.

 Materiales
1. Gradilla
2. Tubo de centrifuga
3. BAguetas
4. Centrifuga
5. Espectrofotometro
13.4 Procedimiento
Reactivos:
 Reactivo 1: Buffer alcalino
 Reactivo 2: Cresolftaleina.
 Std.
 MUESTRA : suero o plasma heparinizado.
Mezclar 1 mL de Buffer alcalino con 1 gota (50uL) de Reactivo CFC.
BLANCO CALIBRADOR MUESTRA
CALIBRADOR --- 0,01 mL
MUESTRA -- -- 0,01 mL
REACTIVO DE 1 mL 1 mL 1 mL
TRABAJO
Mezclar e incubar a lo menos 60 segundos y leer las absorbancias a 570 nm contra

blanco de reactivos. El color es estable por lo menos 1 hora.
Cálculos:
Factor = Concentración calibrador
Absorbancia calibrador
CALCIO (mg/dL) = Factor x Abs muestra
Valores normales:
 suero o plasma:
 Adultos: 8,8 a 10,7 mg/dL
 Niños : 10,0 a 12,0 mg/dL
13.5 Resultados

13.6 Cuestionario
1-¿Cuáles son los electrolitos más comunes que se solicitan al laboratorio de
análisis clínicos?
2.-¿Qué recomendaciones se le debe hacer al paciente antes de la toma de muestra
para determinar electrolitos?
4.-¿Qué papel cumplen los electrolitos en la sangre y que relación tienen con las
hormonas?
5. ¿Cómo se determina Magnesio en suero y que importancia clínica tiene?

Masson; 2012.
PRACTICA Nº 14 HORMONAS
DETERMINACIÓN DE HCG: PRUEBA DE EMBARAZO MONOCLONAL
B. PRUEBA DIRECTA EN LAMINA PARA LA DETECTACION ESPECIFICA DE

HCG EN ORINA O SUERO
14.1. Marco teórico

La prueba inmunológica, se basa en la presencia en la orina o en suero de la mujer
embarazada de gonadotrofina coriónica humana(HCG), que estimula la producción
de anticuerpos específicos demostrables en vivo. Se han descrito diversas pruebas
inmunológicas., y actualmente se dispone de preparados comerciales para detectar
la HCG urinaria. Se basan en la inhibición de la aglutinación de las partículas de
látex, que recubiertas con HCG sirven como antígeno capaz de reaccionar con un
suero inmune anti-HCG (de conejo).
14.2 Competencias

1. 1.Utiliza los diferentes métodos de detección para el diagnostico de embarazo
adquiriendo destreza.
2. 2.Analiza e interpreta los resultados obtenidos.
 Suero o plasma (EDTA o heparina).

 Orina
 Fundamento: Tipo “sándwich”
 La muestra es incubada con el conjugado enzimático y los anticuerpos
unidos a la fase sólida simultáneamente.
 En presencia de hCG, se forma un complejo que queda unido a la pared
del pocillo. Una vez eliminado el conjugado enzimático no ligado el pocillo es
incubado con el sustrato.
Materiales:
Pocillos sensibilizados: 48 pocillos separables individualmente con anticuerpo policlonal
anti-hCG adsorbidos en su superficie.
Enzima-Conjugado: un frasco gotero con 2.5 ml de anticuerpo monoclonal anti-βhCG
conjugado con peroxidasa. El reactivo posee un colorante rosado en su composición para
facilitar la visualización de su agregado en cada pocillo.
Reactivo A: un frasco gotero conteniendo 4 ml de solución de peróxido de hidrógeno.
Reactivo B: un frasco gotero conteniendo 4 ml de solución de tetrametilbenzidina en
buffer fosfatos-citrato 50 mmol/l, pH = 5.0
Control Negativo: un frasco gotero conteniendo 1 ml de una solución proteica de,
aproximadamente, 25 mUI/ml hCG
Control Positivo: un frasco gotero conteniendo 1 ml de una solución proteica de reacción
negativa para hCG Solución lavadora: 2 frascos goteros conteniendo, cada uno, 60 ml de
solución salina tamponada a pH = 7.4 Accesorios: Un soporte para los pocillos.
PROCEDIMIENTO:
Pocillos sensibilizados 1 2 3
Control negativo 1 gota --- -----
Control positivo -- 1 gota -----
Muestra -- ----- 1 gota
Enzima Conjugado 1 gota 1 gota 1 gota
 Mezcle por movimientos laterales.

 Incube a temperatura ambiente por 3 minutos no inferior a 20 oC.

 Elimine el contenido de los pocillos por inversión y sacudiendo enérgicamente
para favorecer el vaciado.
 Lave 5 veces con solución lavadora (agua destilada).
 Escurra el contenido remanente en los pocillos sobre papel absorbente.
Reactivo A 1 gota 1 gota 1 gota
Reactivo B 1 gota 1 gota 1 gota
 Mezcle por movimientos laterales del pocillo.

 Mantenga a temperatura ambiente por 2 minutos no inferior a 20 oC.
 La lectura se realizará entre los 2 a 5 minutos.
• El desarrollo de un color azul indica la presencia de hCG en la muestra.
14.5 Resultados
14.6 Cuestionario
1. ¿Qué métodos conoce Ud. para la determinación de HCG?
2. ¿Qué otras patologías se puede diagnosticar con la determinación de la HCG?
3. ¿Cómo es el proceso para la determinación de HCG cuantitativo?.
4. ¿Cuál es el fundamento de la determinación de HCG por el método indirecto?
5. ¿Cuál es el fundamento de la determinación de HCG por el método de ELISA?

1. Abbas, Abul K. Inmunología Celular y Molecular. 7ª Edic. Madrid: Edit. Elsevier;
2012.
2. Antonozzi I. Gulletta E. Medicina de Laboratorio. Fundamentos y aplicaciones en el
diagnóstico clínico. México D.F: Editorial Medica Panamericana; 2016.
5. Martinez L, Gallego D, Ramirez S, Jaramillo L, Älvarez L. Hematología. Medellin:
Editorial Universidad Pontificia Bolivariana; 2016.
6. Mérida F, Moreno E. Manual para Técnico Superior de laboratorio clínico y
biomédico. Madrid: Edit. Medica panamericana; 2015.
7. Muñoz J. Fundamentos y Técnicas de Análisis Hematológicos y Citológicos. 4ª. Ed.
Barcelona: Edit. Masson; 2012.
8. Ruiz G, Ruiz A. Fundamentos de Interpretación Clínica de los exámenes de
laboratorio. 3ª Ed. Ciudad de México: Edit. Medica Panamericana; 2017.


Guia de Práctica de Interpretación de Análisis Clínicos 2021 I

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3B-2

Unidad académica: EAP DE FARMACIA Y BIOQUÍMICA

INTERPRETACIÓN DE ANÁLISIS CLÍNICOS

Autor: Q.F. Dr. Juan Manuel Parreño Tipian

F-CV3-3B-2 Rev. Junio 2007

F-CV3-3B-2 Rev. Junio 2007

16 Segundo examen (E2)

F-CV3-3B-2 Rev. Junio 2007

1.3. Materiales y Equipos

Haskins Trotman: Oxalato de potasio al 2%

F-CV3-3B-2 Rev. Junio 2007

F-CV3-3B-2 Rev. Junio 2007

1.7. Fuentes de información

PRÁCTICA No. 2: Hematimetría. Recuento de glóbulos rojos. Dosaje de

A. HEMATIMETRIA: RECUENTO DE GLÓBULOS ROJOS.

2.1. Marco teórico

2.3. Materiales y equipos

F-CV3-3B-2 Rev. Junio 2007

F-CV3-3B-2 Rev. Junio 2007

2.7. Fuentes de información

B. DOSAJE DE HEMOGLOBINA (Hb)

2.1. Marco teórico

F-CV3-3B-2 Rev. Junio 2007

 Mezclar e incubar 3 minutos a temperatura ambiente.

Hb (g/dL) = factor x Abs muestra problema

F-CV3-3B-2 Rev. Junio 2007

2.7. Fuentes de información

C. DETERMINACIÓN DEL HEMATOCRITO Y MICROHEMATOCRITO

2.1. Marco teórico

2.3. Materiales y equipos

F-CV3-3B-2 Rev. Junio 2007

a= longitud de la columna roja en ml

PRACTICA No. 3: LEUCOMETRIA: RECUENTO DE GLÓBULOS BLANCOS

F-CV3-3B-2 Rev. Junio 2007

3.3. Material y equipos

F-CV3-3B-2 Rev. Junio 2007

3.7. Fuentes de información

FÓRMULA LEUCOCITARIA. HEMOGRAMA DE SCHILLING

3.1. Marco teórico

F-CV3-3B-2 Rev. Junio 2007

3.3. Material y equipos

F-CV3-3B-2 Rev. Junio 2007

Tipo de leucocitos Porcentajes

3.7. Fuentes de información

F-CV3-3B-2 Rev. Junio 2007

VELOCIDAD DE SEDIMENTACIÓN GLOBULAR

3.1. Marco teórico

3.3. Material y equipos

F-CV3-3B-2 Rev. Junio 2007

F-CV3-3B-2 Rev. Junio 2007

3.7. Fuentes de información

PRÁCTICA No. 4: Recuento de plaquetas, recuento de reticulocitos

4.1 Marco teórico

4.3 Materiales y equipos

F-CV3-3B-2 Rev. Junio 2007

Hematimetria: 4'8000,0000 por mm3 de sangre.

F-CV3-3B-2 Rev. Junio 2007

4.7 Fuentes de información

4.1 Marco teórico

F-CV3-3B-2 Rev. Junio 2007

4.3 Material y equipos

F-CV3-3B-2 Rev. Junio 2007

4.7 Fuentes de información