Biogénesis de la membrana externa.

Después de la síntesis en el prospecto interno de la

membrana interna (IM), tanto el lipopolisacárido (LPS) como los fosfolípidos (PL) se voltean al
prospecto externo del IM. Se requiere MsbA para la translocación de LPS y posiblemente
fosfolípidos a través del IM, pero también se ha demostrado que los dominios transmembrana
helicoidales translocan fosfolípidos. Sigue sin conocerse la forma en que el LPS y los
fosfolípidos viajan desde el IM a la membrana externa (OM), y cómo el LPS se invierte en su
panfleto externo, aunque se requiere la proteína OM (OMP) Imp para el ensamblaje del LPS.
Tanto las lipoproteínas OM como las OMP se sintetizan en el citoplasma y se translocan a
través del IM mediante el translocón Sec. Después de someterse a la modificación de los
lípidos y al procesamiento de la señal de señal (no se muestra), las lipoproteínas de OM
interactúan con el transportador de casete de unión ATP (ABC) LolCDE, que las entrega a la
chaperona periplásmica LolA. LolA acompaña a las lipoproteínas de OM a través del periplasma
y las envía al sitio de ensamblaje de OM, la lipoproteína de OM LolB. Después de la
translocación a través de la maquinaria Sec, las OMP se transportan a la OM mediante un
mecanismo desconocido, aunque las chaperonas periplásmicas Skp, DegP y SurA han sido
implicadas. En el OM, el complejo YaeT / YfgL / YfiO / NlpB ensambla OMPs por un mecanismo
desconocido.

Biosíntesis y transporte de componentes de OM.

Las OMP, como todas las proteínas bacterianas, se sintetizan en el citoplasma, mientras que
los fosfolípidos OM y los LPS se producen en la cara citoplásmica del IM (Figura 2). La síntesis
de estos componentes es bien entendida y no la discutimos más a fondo. Después de su
síntesis en el citoplasma (proteínas) o en el prospecto interno del IM (fosfolípidos y LPS), los
componentes de OM se desplazan a través del IM (proteínas) o hacia el prospecto externo del
IM (lípidos fosfolípidos y LPS) (FIG. 2). Tanto las OMP como las lipoproteínas se sintetizan con
una secuencia de señal N-terminal que las dirige al translocón SecYEG para la translocación a
través del IM. Después de la translocación, todas las lipoproteínas experimentan modificación
de lípidos, y la secuencia de señal de ambas lipoproteínas y OMP se procesa mediante
peptidasas de señal en la hoja externa del IM. Aunque hemos sabido sobre el transporte de
proteínas mediado por Sec a través del IM durante varias décadas, solo recientemente hemos
descubierto cómo el LPS se transloca a través de esta bicapa. El transportador ABC MsbA
invierte el LPS de su sitio de síntesis en el folleto interno al folleto externo del IM (Figura 2).
Los estudios que utilizaron un alelo de msbA sensible a la temperatura demostraron que, a una
temperatura no permisiva, ~ 90% del transporte de LPS y fosfolípidos a la OM se ve afectado.
Como la mayoría de la fosfatidiletanolamina recién sintetizada permanece en la hoja interna
del IM a una temperatura no permisiva, MsbA también podría transportar fosfolípidos a través
del IM de E. coli, aunque en Neisseria meningitidis, no se requiere MsbA para esta función.
Otro modelo propone que el flip-flop de fosfolípidos en el IM sea facilitado por los dominios
transmembrana helicoidales α de un subconjunto de proteínas IM (Figura 2).

Tránsito de componentes al OM.

Como todas las membranas, el OM no se sintetiza de novo; en cambio, crece a partir de una
plantilla. Como ninguno de los componentes de la OM (proteínas, fosfolípidos o LPS) se
producen en la OM, una de las preguntas fundamentales en la biogénesis de la OM es cómo
cada uno de estos componentes llega a su destino final. Se han considerado tres posibles
escenarios para el tránsito de componentes entre el IM y OM: el tránsito mediado por
vesículas, el tránsito en los sitios de contacto (o fusión) entre el IM y OM, y el tránsito mediado
por la chaperona a través del periplasma. La idea del tránsito mediado por vesículas a través
del periplasma ha sido abandonada debido al pequeño tamaño del periplasma, el hecho de
que el peptidoglicano carece de la porosidad necesaria y porque no se ha observado
microscópicamente ninguna vesícula periplásmica. Sin embargo, si los componentes alcanzan
el OM a través de puentes entre el IM y el OM o están acompañados por chaperonas solubles
es un debate de larga data. En la década de 1960, Manfred Bayer utilizó microscopía
electrónica para descubrir sitios de contacto entre el IM y OM de células plasmáticas. Se
sugirió que estos sitios, denominados con el nombre "Parches de Bayer" o "Puentes de Bayer",
son posibles lugares donde los componentes de OM se podrían transportar desde el IM. De
hecho, se demostró que el LPS recién sintetizado aparecía en sitios discretos en el OM que a
menudo se encontraban en zonas de adhesión entre las dos membranas. Los estudios
bioquímicos también apoyan la idea de que el LPS se transporta a través de la envoltura de la
célula en los sitios de contacto entre el IM y el OM. Asimismo, se ha sugerido que los
fosfolípidos también podrían ser transportados por zonas de adhesión ya que, después de la
incorporación de fosfolípidos marcados exógenos en el OM, se transportan rápidamente al IM
y, eventualmente, estas moléculas alcanzan el equilibrio entre el IM y el OM. Sin embargo,
este transporte bidireccional de fosfolípidos entre membranas contrasta con el transporte
unidireccional de LPS, y la posibilidad de que las proteínas periplásmicas solubles medien este
transporte de fosfolípidos intermembrana nunca se ha refutado. A pesar de la evidencia
bioquímica y microscópica que respalda la existencia de sitios de adhesión a la membrana,
este modelo sufrió cuando Kellenberger desafió la existencia de sitios de adhesión a la
membrana y propuso que eran un elemento de la técnica de fijación que Bayer utilizó durante
la preparación de muestras para microscopía electrónica. Aunque Bayer presentó una
refutación a los argumentos de Kellenberger, la existencia de sitios de adhesión a la membrana
sigue siendo controvertida.

Con respecto al transporte de OMP al OM, el modelo preferido es que, después de su

translocación a través de la maquinaria Sec, el procesamiento de la secuencia de señal libera
OMPs en el periplasma, donde interactúan con chaperonas y factores de plegamiento de
proteínas (Figura 2). Aunque se han identificado varias proteínas periplásmicas que están
involucradas en la biogénesis de la OMP, como Skp, SurA, FkpA y DegP, su papel preciso en el
transporte o el plegado de la OMP queda por aclarar. Se ha propuesto que una de estas
chaperonas periplásmicas, Skp, se une a las OMP ya que están siendo desplazadas a través del
IM por la maquinaria Sec para evitar su agregación en el periplasma. Como Skp también se une
al LPS, y este enlace es necesario para la asociación del complejo Skp-OMP a las bicapas,
también se ha propuesto que Skp entregue OMP al OM y que el ciclo entre la forma libre Skp y
Skp-OMP sea modulado. por enlace LPS. Sin embargo, los mutantes skp son viables y solo
tienen defectos leves en la biogénesis de OMP. Por lo tanto, si este modelo es correcto, no
puede ser la única, ni siquiera la vía principal, para la orientación de OMP al OM. De hecho, la
letalidad sintética (RECUADRO 1) de los mutantes dobles skp surA y surA degP indica que
puede haber vías paralelas que lleven a la OMP a la OM. Claramente, aún nos queda mucho
por aprender sobre cómo se transportan e insertan las OMP al OM, pero el descubrimiento de
un complejo de proteínas en el OM que es necesario para el ensamblaje de la OMP representa
un gran paso adelante, como se explica a continuación.