EJEMPLO DE CÁLCULOS PARA LA DETERMINACIÓN DE LA DL50

POR EL MÉTODO DE LITCHFIELD Y WILCOXON

A continuación se presenta un ejemplo de cálculo para la determinación de la DL50 por vía

oral de un plaguicida.

Ejemplo

Se realizó un estudio de toxicidad aguda para determinar el DL50 de un plaguicida en

ratones macho por vía oral, se trabajaron siete dosis distintas con 15 ratones inicialmente
para cada dosis. Transcurridas las 48 h de observación después de haber sido dosificados,
se obtuvieron los siguientes resultados (Tabla 1):

Tabla 1
Dosis Animales Animales % de mortalidad
(mg/kg p.c) tratados muertos observado
100 15 0 0.0
250 9 2 22.2
400 15 9 60.0
550 12 8 66.7
700 12 9 75.0
800 12 12 100.0
900 14 14 100.0

Cuando se encuentran dos o más valores de 100% y/o 0% de mortalidad se descartan los
datos de las dosis más altas (100%) y de las dosis más bajas (0%), quedando la tabla de
resultados de la siguiente manera:

Tabla 1.
Dosis Animales Animales % de mortalidad
(mg/kg p.c) tratados muertos observado
100 15 0 0.0
250 9 2 22.2
400 15 9 60.0
550 12 8 66.7
700 12 9 75.0
800 12 12 100.0

Para calcular el porcentaje de mortalidad observado, se considera que para cada lote el
número de animales tratados es el 100%, y a partir de este valor, se calcula a qué porcentaje
corresponde el número de animales muertos.

A continuación se procede a graficar las dosis contra los porcentajes de mortalidad

observados en el papel semilogarítmico-probabilidad omitiendo los valores de 0% y 100%, los
cuales se calcularán posteriormente (ya que en la escala de la gráfica no aparecen estos
puntos), de acuerdo a las fórmulas propuestas por Miller y Tainter.

Para 0% de mortalidad: 100 (0.25/n)

Para 100% de mortalidad: 100 [(n-0.25)/n]

En donde n es el número de animales en los lotes en donde se observó el 0 y el 100% de

mortalidad, respectivamente y deberán ser considerados como % mortalidad esperado:
Para 0 % n= 15 100 (0.25/15)= 1.7
Para 100 % n= 12 100 [(n-0.25)/12]= 97.9

Una vez que se han localizado los puntos en la gráfica se debe trazar una línea recta
provisional (color azul) que pase lo más cerca de todos los puntos, como se muestra en la
Figura 1.

FIGURA 1.

Mortalidad (%)
100

400

500

800
200

300

600
700

900
1000

Dosis (mg/kg p.c.) % observado

Una vez trazada la línea recta provisional se deberá encontrar el % esperado de mortalidad,
extrapolando los datos para cada dosis (Tabla 2).

Mortalidad (%)
100

400

500

800
200

300

600
700

900
1000

% observado % esperado para

0% y 100% de
Dosis (mg/kg p.c.) % esperado mortalidad
Dosis Animales Animales % de mortalidad % de mortalidad
(mg/kg p.c) tratados muertos observado esperado
100 15 0
250 9 2 22.2 36
400 15 9 60.0 56
550 12 8 66.7 70
700 12 9 75.0 78
800 12 12
 Tabla 2
Dosis Animales Animales % de mortalidad % de mortalidad
(mg/kg p.c) tratados muertos observado esperado
100 15 0 0 (1.7) 9.0
250 9 2 22.2 36
400 15 9 60.0 56
550 12 8 66.7 70
700 12 9 75.0 78
800 12 12 100 (97.9) 82

Una vez obtenido el gráfico y los valores de % de mortalidad esperado, es necesario realizar
la prueba de CHI2 para comprobar que la línea trazada es satisfactoria. Con los datos de la
Tabla 2 se calcula la CHI2 de acuerdo a la siguiente fórmula:

 n (%observado−%esperado)i2  N
(CHI ) = ∑ (%esperado)(100−%esperado) 
2
 
 i=1   K 
Donde:
N = número de animales tratados
K = número de dosis analizadas

 (1.7 − 9.0) 2 (22.2 − 36) 2 (97.9 − 82) 2   75 

 + + ... + ×
 9.0 × (100 − 9.0) 36 × (100 − 36) 82 × (100 − 82)   6 

CHI2= 4.20

La CHI2 experimental se compara con la CHI2 crítica (obtenida de una tabla con gl. = K – 2 y
p= 0.05). Si la CHI2 experimental es menor a la CHI2 crítica, los datos son homogéneos y la
recta se considera satisfactoria. En caso contrario, es necesario volver a trazar la gráfica y
realizar nuevamente los cálculos hasta obtener datos homogéneos.

En este ejemplo se trabaja con 6 dosis, por lo que los grados de libertad son 4. La CHI2
crítica para gl.= 4 y p = 0.05 es de 9.49 (Ver Figura 2). En este caso la CHI2 experimental es de
menor a la CHI2 crítica, por lo que se dice que los datos son homogéneos y la recta es
satisfactoria.
 FIGURA 2.

Una vez que se comprueba que los datos obtenidos son homogéneos, se calcula por
interpolación el valor de la DL50, DL16 y DL84 en la recta trazada. Los valores de DL16 y DL84
nos sirven para calcular el intervalo de confianza del DL50 y la pendiente (S) de la recta, de
acuerdo a la siguiente fórmula:
 DL84 DL50 + DL50 DL16
S=
2

Mortalidad (%)
100

400

500

800
200

300

600
700

900
1000

Dosis (mg/kg p.c.)

Dosis (mg/kg p.c.)

DL16 140
DL50 340
DL84 880
 880mg / kgpc 340mg / kgpc
+
340mg / kgpc 140mg / kgpc
S= = 2.51
2

Para obtener los límites de confianza para la DL50 con una p = 0.05, es necesario obtener el
siguiente factor (f):

2.77
N'
fDL50 = S
Donde:
f = factor para obtener el intervalo de confianza
N’= número de animales tratados entre 16 % y 84 % de respuesta esperada
S= función pendiente

Para Calcular N’

Dosis (mg/ kg pc) 100 250 499 550 700 800

Animales tratados 15 9 15 12 12 12
DL16 = 140 mg/kg pc DL84 = 840 mg/kg pc

Los animales tratados son 60

Por lo que:
2.77
60
fDL50 = 2.51 = 1.39

Límite superior = DL50 x fDL50

LS=340 mg/kg pc X 1.39 = 472.6 mg/kg pc

Límite inferior = DL50 / fDL50

LI=340 mg/kg pc /1.39= 244.6 mg/ kg pc

EL DL50 de este plaguicida en estudio es entonces de:

DL50 = 340 mg plaguicida/kg pc (244.6-472.6 mg/kg pc), para ratón macho por vía oral