QU ES Y CMO SE CALCULA LA DL50 EN INSECTICIDAS

Gonzalo Silva Aguayo Ingeniero Agrnomo Mg Se Facultad de Agronoma Universidad de Concepcin

INTRODUCCIN Es muy normal escuchar o leer en los medios de comunicacin que los insecticidas son sustancias altamente txicas y que deberan estar prohibidas. En algunas ocasiones quienes lo sealan tienen toda la razn, sin embargo en otros casos no es as, ya que no todos los insecticidas son igualmente txicos y a veces incluso existen sustancias naturales que son mucho ms txicas o venenosas, que muchos insecticidas que se comercializan en el mercado nacional y mundial. Paracelso, el padre de la toxicologa, alrededor del 1500 dijo " la diferencia entre lo que cura y lo que mata es la dosis". Es decir, ningn compuesto es venenoso por naturaleza sino que depende exclusivamente de la concentracin en que se encuentre. Un ejemplo de esta afirmacin es el caso que en la medicina popular chilena se recomiende para la indigestin tomar un t de Boldo (Peumus boldus Molina: Monimiaceae). Si se sigue esta recomendacin lo ms seguro es que el malestar pase pero si se abusa de la infusin esta puede llegar a causar cncer gstrico, problemas con la presin arterial e incluso sntomas de aborto en embarazadas. En bas e a esto es que surge la pregunta; cundo podemos decir que un insecticida es ms o menos txico?. Esta pregunta se debe responder dependiendo de la Dosis (o Concentracin) Letal 50% ( DL50 o CL50), que en el fondo es lo que seala el grado de toxicidad de cualquier compuesto. En el presente manuscrito se explicar en forma sencilla que es la DL50 y como se puede calcular e interpretar con el objetivo de poder discriminar con una base tcnica que insecticida es ms o menos txico. DEFINICIN DL50 La Dosis letal 50% (DL50) es aquella concentracin del insecticida, que al ser administrada por cualquier va de ingreso (oral o dermal por ejemplo), en un periodo de tiempo definido mata el 50% de la poblacin de insectos evaluada. DOSIS VS DOSIFICACIN Anteriormente hacamos una diferenciacin entre Dosis Letal 50% (DL50) y Concentracin Letal 50% (CL50) y aunque a veces se utilizan como sinnimos conceptualmente constituyen dos cosas diferentes. Cuando se realiza una experimentacin para conocer la toxic idad de un insecticida sobre un determinado insecto o acaro puede ocurrir que se use una metodologa directa o una indirecta. Por ejemplo, si seleccionamos veinte individuos (moscas adultas por ejemplo) y con un microaplicador a cada insecto se le aplica u na gota de un volumen conocido de una solucin de concentracin conocida podemos decir que estamos utilizando una dosis

pues sabemos exactamente que cantidad de compuesto o solucin est recibiendo cada individuo. A su vez, si saturamos el medio como puede ser, por ejemplo, sumergir una hoja de manzano en la misma solucin conocida y posteriormente se colocan en su superficie veinte insectos; no se sabr con certeza que cantidad de insecticida est en contacto con cada organismo por lo que debemos hablar de dosificacin. Cuando utilizamos una dosis se debe hablar de DL50 y se expresa en g insecticida/ kg animal. En cambio, en la dosificacin se debe hablar de CL50 y se expresa en la misma unidad en que estaba la solucin evaluada (g/kg; cm 3/ha, etc...). CMO SE INTERPRETA? La interpretacin de la DL50 o CL50, segn corresponda, no es compleja ya que bsicamente es una comparacin con otros valores similares. En el Cuadro 1 se muestran algunos valores de DL50 de varios insecticidas, los cuales nos ayudarn a comprender mejor el concepto. Cuadro 1.- Dosis Letal 50% (DL50) oral para ratas de cinco insecticidas. INSECTICIDA Acrinatrina Aldicarb DDT Dimetoato Lindano DL50 (mg/k) 5000 0,9 87 250 76

Si observamos los valores del cuadro podemos ver que el insecticida ms txico es Aldicarb ya que es del que se necesita una menor concentracin para matar al 50% de la poblacin. Visto del modo contrario el menos txico es Acrinatrina ya que es del que se necesita la mayor concentracin, o dosis, para matar al 50% de los individuos evaluados.

CMO SE CALCULA? Lo primero que debemos sealar es que cualquier investigacin que tenga como objetivo evaluar las propiedades de un compuesto en base a la respuesta que provoca en un ser vivo se llama bioensayo. Deb ido a esto se dice que todo bioensayo tiene dos componentes; el estmulo y la respuesta. Cuando se planea un bioensayo, como puede ser la efectividad de un insecticida, se debe tener en cuenta que no se puede evaluar una sola dosis o concentracin sino que debe probarse un grupo de ellas en forma de progresin aritmtica como podra ser, por ejemplo, 5, 10, 15, 30 y 60. Finalmente los resultados obtenidos (% de mortalidad) deben transformarse a logaritmo ya que la Ley de Weber y Fechner seala que el cambi o en magnitud o intensidad de una respuesta biolgica es proporcional no al cambio aritmtico en el estmulo sino que a su logaritmo.

Transformacin de una lnea sigmoide a una lnea recta Si se grfica el estmulo contra la respuesta, se obtendr una lnea sigmoide asimtrica con la curvatura inferior muy pequea cuyos valores son de muy difcil interpretacin. Al transformar la dosis a la funcin Log dosis, la respuesta se vuelve una lnea sigmoide simtrica (figura 1). A pesar de ello, resulta compli cado analizar estadsticamente lneas curvas; adems, arriba del 95% de respuesta, no se sabe con certeza la direccin que tomar dicha curva. Para obtener una lnea recta, adems de realizar la transformacin antes indicada, es menester que la respuesta se transforme a unidades Probit, Anglit o Logit y estar en posibilidades de realizar un anlisis paramtrico (Figura 2).

Figura 1.- Relacin Dosis respuesta

Figura 2.- Relacin dosis respuesta con transformacin Probit

Transformacin Probit Probit es una palabra que viene de la contraccin de probability unit; a pesar de ello, no son unidades de probabilidad, sino unidades de desviacin estndar incrementadas en cinco con la finalidad de evitar el uso de nmeros negativos. Esta transformacin asume que la respuesta de los individuos se distribuye en forma normal, correspondiendo la curva de respuesta a una sigmoidea o funcin de distribucin normal acumulativa (Gil -Criado y Muiz, 1978). Esta curva normal solo se diferencia de la tradicionalmente usada, en que tiene una media de 5 y no 0, valor que corresponde a un umbral proporcional de respuesta del 50% (Infante y Caldern, 1994). La transformacin probit es, sin lugar a dudas, la ms utilizada. Transformacin Logit Algunos autores sostienen que la respuesta no se distribuye en forma normal sino que de forma sigmoide o logstica, por lo que sugieren que se utilice la siguiente ecuacin (Infante y Caldern, 1994):

e_{a+bx)

Transformacin Anglit o Angular. La transformacin angular se usa principalmente cuando los valores obtenidos experimentalmente se expresan en trminos de una proporcin (p), cuyo valor oscila entre 0 y 1. Esta transformacin presenta el problema que puede sobrevalorar los datos extremos de la evaluacin. CUL TRANSFORMACIN USAR? Segn Rustom et al. (1989), la decisin sobre cual transformacin utilizar debe estar sustentada sobre condiciones tericas y sobre el conocimiento previo del tipo de distribucin que manifiesta la respuesta biolgica. A las distribuciones normales, logsticas o binomiales, se les debe aplicar una transformacin probit, logit o angular, respectivamente. El problema se vuelve complicado cuando se desconoce la distribucin de la respuesta. Finney en 1971 (citado por Gil -Criado y Muiz, 1978) estudi la relacin entre las tres curvas de distribucin antes sealadas y demostr que entre la distribucin normal y la logstica hay diferencias mnimas en el tramo correspondiente entre el 1 y 99% de respuesta. La distribucin norm al con la angular tiene nfimas diferencias en el tramo entre el 5 y 95%. Estos ltimos autores sealan que la transformacin a utilizar no reviste mayor importancia; pudindose, inclusive, usar ms de una a la vez y trabajar posteriormente con la que pre sent una menor varianza.

EJEMPLO Para comprender mejor como se calcula la DL50 (CL50) vamos a tomar el caso hipottico del cuadro 2 en que se evalu un insecticida para el control de una plaga determinada arrojando los valores de mortalidad que ah se sealan. Cuadro 2.- Valores de mortalidad obtenidos experimentalmente en la evaluacin del insecticida A para el control de la plaga B. CONCENTRACIN (g/litro) 0,5 1 2 4 8 16 MORTALIDAD
(%)

7 23 58 79 95 99

Paso 1.- Transformacin de las dosis a logaritmos y del porcentaje de mortalidad a valores probit segn tablas de transformacin. Cuadro 3.- Datos transformados CONCENTRACIN MORTALIDAD Probit Logaritmo (%) (gr/litro) Dosis* 0,5 0.6989 7 3.5239 1 1.0000 23 4.2614 2 1.3010 58 5.2015 4 1.6020 79 5.8062 8 1.9030 95 6.6452 16 2.2041 99 7.3268 * Si los valores del logaritmo son negativos, se recomienda sumar una unidad (1) a todos los valores, sean positivos o negativos, de modo de trabajar solamente con valores positivos. Paso 2.- Se hace una regresin lineal (Y= a+bx) entre el logaritmo de la dosis (x) y los valores probit (y).

Y= 1,77 + 2,54X Paso 3.- Se estima con el modelo calculado el valor para un 50% de mortalidad. En unidades probit 50% corresponde a 5. 5= 1,77+2,54X X= 5-1,77 2,54 X= 1,27 Paso 3.- Se resta la unidad sumada X=(l,27-1) X= 0,27 Paso 4.- Se aplica antilogaritmo X= 0,27/antilog X= 1,86

Paso 5.- En consecuencia CL50= 1,86 (gr/litro) APLICACIN PRCTICA Se han desarrollado una serie de escalas en base a la DL50 de los insecticidas pero la que se utiliza en el pas es la que se muestra en el Cuadro 4. El Servicio Agrcola y Ganadero (SAG) es quien controla el registro de todos los insecticidas que se comercializan en Chile y uno de los datos requeridos para permitir su uso en el pas es la DL50 oral y dermal del insecticida en ratas. De acuerdo a este valor el insecticida se clasifica en uno de los cuatro grupos de toxicidad que se diferencian por un nmero romano. En base a esta escala la etiqueta lleva una banda de color en la parte inferior de modo que el comprador pueda reconocer en forma rpida y sencilla el nivel de toxicidad al que pertenece. Cuadro 4.- DL50 aguda (ratas) mg/kg de plaguicida formulado Clasificacin la Sumamente Peligroso Ib Muy Peligroso II Moderadamente Peligroso III Poco Peligroso IV Normalmente no ofrece peligro. Va Oral Slido Lquido
50 o menos 20 o menos

Va Cutnea Slido Lquido

10 rnenos 40 o menos

Color Etiqueta Rojo Rojo Amarillo

Mas de 5 Hasta 50 Mas de 5 Hasta 500

Mas de 20 Hasta 2000 Mas de 200 Hasta 2000

Mas de 10 Hasta 100 Mas de 10 Hasta 1000

Mas de 40 Hasta 400 Mas de 400 Hasta 4000

Mas de 500 Hasta 2000 Mas de 2000

Mas de 2000 Hasta 3000 Mas de 3000

Mas de 1000

Mas de 4000

Azul Verde

LITERATURA CONSULTADA Busvine, R. J. 1971. A critical review of the technique for testing insecticides. Commonwealth Agricultural Bureaux. Slugh. UK. 345p. Gil-Criado, A., y M. Muiz. 1978. Nuevas transformaciones en experimentos biolgicos basados en la respuesta cuantal. Bol. Ser. Plagas 4:89 -229. Infante, S y L. Caldern. 1994. Manual de anlisis Probit. Centro de Estadstica y Cmputo Aplicado. Colegio de Postgraduados. Montecillo. Texcoco . Mxico. 108p. Lagunes, A y J. Villanueva. 1994. Toxicologa y manejo de insecticidas. Instituto de Fitosanidad. Colegio de Postgraduados. Montecillo. Texcoco. Mxico. 108p Lagunes, A y M. Vzquez. 1994. El Bioensayo en el manejo de insecticidas y acaricidas. Instituto de Fitosanidad. Colegio de Postgraduados. Montecillo. Texcoco. Mxico. 159p Miller, T. 1999. Bioassay In: Insect Toxicology (ENT 128). http://web.ucr.edU/web/schools/CNAS/entm/tmiller/l/modules/page20.html. Department of Entomology. University of California. Riverside. Robertson, J, K. Smith, N. Savin y R. Lavigne. 1984. Effects of Dose selection and sample size on the precisin of lethal dose estimates in dose-mortality regression. J. Econ. Entomo.l 77:833-837. Rustom, A., B. Latorre y M. Lolas. 1989. Mtodo para una correcta comparacin de la efectividad de nuevos fungicidas In: Latorre B. (Ed) Fungicidas y Nematicidas. Avances y Aplicabilidad. p 149-16. Silva,G, R. Hepp. 2003. Bases para el Manejo Racional de Insecticidas. Universidad de Concepcin/Facultad de Agronoma. Fundacin para la Innovacin Agraria (FIA). Chillan. Chile. 31 Op.