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FORMATO PARA PRACTICAS DE LABORATORIO

PROCESO: GESTIÓN DE RECURSOS, INFRAESTRUCTURA Y


LABORATORIOS

LA-FM-007 Versión: 4 Fecha: 15/03/2019 Página 1 de 20

INFORMACIÓN BÁSICA

NOMBRE DE LA PRÁCTICA: Determinación de Sangre en muestras de


PRÁCTICA No.: 1
interés forense.
ASIGNATURA Biología y Genética Forense

TEMA DE LA PRÁCTICA: Determinar la presencia o ausencia de Sangre utilizando el método de


Inmunocromatografía en muestras de interés forense.
LABORATORIO A UTILIZAR Biología

TIEMPO: 2 horas TRABAJO GRUPAL: TRABAJO INDIVIDUAL:

CONTENIDO DE LA GUÍA
(Para elaborar por el Docente)
COMPETENCIAS DISCIPLINARES
1. Establece la interacción entre la ciencia, la tecnología, la sociedad y el ambiente, en el contexto
Penal frente a la Investigación de los Delitos.
2. Identifica los problemas, formula preguntas de carácter científico e investigativo y plantea las
hipótesis necesarias para encontrar la solución de la situación.
3. Verifica los resultados obtenidos en una investigación y los compara con sus hipótesis previas
y redacta sus conclusiones.

COMPETENCIAS INVESTIGATIVAS
1. Reconocer las características de la investigación científica y su diferencia con otros tipos de
conocimiento
2. Utilizar diversos métodos para abordar la solución de un caso a través de una investigación
basada en los principios técnicos, científicos y éticos, teniendo en cuenta las Leyes vigentes
en nuestro país.
3. Desarrollar una actitud positiva y critica frente a la actividad investigativa Valorar el rigor y la
responsabilidad ética como condición fundamental para la generación de ciencia y
tecnología, frente a la investigación de los Delitos.
MARCO TEORICO.
En muchas de las inspecciones judiciales el investigador encuentra y recolecta manchas que por su
color y aparentemente pueden ser sangre, estas pueden estar en diferentes soportes como son
prendas del agresor o la víctima, objetos y superficies, entre otros.

La determinación de la presencia de sangre o no, así como también poder establecer si es de origen
humano o animal, le permiten a los investigadores orientar sus investigaciones y tomar decisiones
mediante los análisis de la Genética Forense. Las técnicas que actualmente se usan son las que
permitan hacer un tamizaje en este caso empleando la prueba de piramidon y las que sean altamente
específicas como la inmunocromatografia, confirmando su naturaleza humana.
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Los análisis preliminares para determinar si las EF contienen sangre, si es humana y además se
realizan sobre una pequeña parte de las EF para definir de acuerdo al resultado que se obtienen, si
estas continuaran con su estudio de ADN que permita tipificar la muestra ya sea para cotejo con los
sospechosos y así determinar si ellos se excluyen o incluyen como el origen de la sangre o para incluir
el perfil Genético en la base de datos de ADN Criminal, con el fin de poder realizar búsquedas que
relacione las EF con otras investigaciones. Se utilizan pruebas de orientación que permiten hacer un
primer tamizaje y posteriormente pruebas de confirmación.

Las pruebas de orientación permiten saber si la EF contiene sangre, pero no diferencia entre humana
y animal, entre estas se encuentra la de THEVENON ROLAND PIRAMIDON .Se basa en la actividad
peroxidasa del grupo HEM de la hemoglobina presente en la sangre, por medio de una reacción de
tipo catalítico. Esta técnica se basa en reacciones químicas de oxido-reducción, las cuales se
fundamentan en la detección de peroxidasas, catalasas y/o agentes óxido reductores (como el hierro
presente en el grupo HEM de la hemoglobina) que tienen la capacidad de descomponer el peróxido
de hidrógeno en agua más oxígeno, este último oxida un substrato no coloreado del tipo leucobase
(aminofenazona-antipirina) para transformarlo en un compuesto coloreado, todo en un medio ácido
(ácido acético) que le da estabilidad a la reacción, de tal manera que se entiende como POSITIVA el
desarrollo de tonalidad de lila a morado sobre el soporte y como NEGATIVA la ausencia de desarrollo
de tonalidad lila a morado.

PRUEBA DE CONFIRMACIÓN
Denominada inmunocromatografia y se fundamenta en la detección de antígenos (proteínas) que se
unen a un conjugado marcado. El complejo antígeno-anticuerpo migra a lo largo de la nitrocelulosa y
es anclado por anticuerpos monoclonales específicos ubicados sobre la misma evidenciando su
presencia por una banda de color.

Se utilizan casetes de inmunocromatografía en los cuales la reacción con la muestra forma un


complejo que es visualizado con una banda de color en la zona test (T) y en la zona control (C) cuando
es POSITIVA y ausencia de banda de color en la zona test (T) cuando la reacción es NEGATIVA.
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POSITIVA

NEGATIVA

INVALIDA

CONSULTA PREVIA.
1. Investigue sobre dos técnicas para determinar la presencia de sangre a usar en el lugar de
los hechos (DIFERENTES A LO VISTO EN CLASE) y elabore un mapa conceptual con el
programa Maps Tools o similar usando como mínimo 15 conceptos. Colocar la bibliografía
consultada.

PALABRAS CLAVE * Sangre, Inmunocromatografía, ADN

METODOLOGÍA. En Grupos de cuatro (4) estudiosos:


1. Ingreso de los estudiosos a la práctica (Cada uno debe tener sus elementos de bioseguridad:
Guantes, Gorro, Tapabocas, Bata y Gafas de seguridad).
2. Entrega de la consulta previa al docente.
3. Presentación de Qüíz sobre los objetivos, introducción, el marco teórico, la consulta previa,
fichas de seguridad de los reactivos y el procedimiento.
4. Explicación del procedimiento de la práctica por parte del docente.
5. Entrega del material de laboratorio para ejecutar la práctica.
6. Desarrollo de la práctica.
7. Devolución y revisión del material de Laboratorio.
Entrega del Informe de Laboratorio en la siguiente clase, el cuál DEBE ser enviado al AULANET
MATERIALES, EQUIPOS Y REACTIVOS A UTILIZAR (Indicar las cantidades)
Materiales y Equipos Reactivos Materiales Estudiante
Luces forenses 4 Kits Inmunocromatografía Bata de laboratorio manga
para determinación de Sangre larga Gafas de seguridad,
(tubo con buffer y Casette) - 4 Gorro, Tapabocas o careta,
Casettes Guantes desechables de nitrilo
Algodón Hipoclorito de sodio Cámara fotográfica
Testigo métrico
Tijeras y pinzas de acero
inoxidable
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Paquete con EF con formato Etanol Fichas de seguridad de los


Registro de cadena de reactivos a utilizar
custodia y Rótulo EF.
Hoja para cubrir el mesón Agua destilada Guía de la práctica impresa, no
se permite el ingreso de
computadores. Mínimo una
guia por grupo.
Aminofenazona
Ácido acético
Peroxido de hidrogeno
PRECAUCIONES Y MANEJO DE MATERIALES Y EQUIPOS. CONSULTA DE EQUIPO
ESPECIALIZADO.

1. USAR el equipo completo de bioseguridad durante todo el desarrollo de la práctica y seguir


las indicaciones del docente y lo descrito en esta guía.
2. NUNCA corra o juegue en el Laboratorio, puede ocasionar un accidente.
3. Los estudiosos DEBEN conocer el REGLAMENTO DE LABORATORIOS de la UMB.
4. No manipular los EF de origen biológico sin los elementos de bioseguridad.
5. Conocer y aplicar lo descrito en la FICHA DE SEGURIDAD DE LOS REACTIVOS a utilizar.
6. Dejar el lugar de trabajo limpio, seco y organizado al final de la práctica
7. Estudiosos sin todos los elementos de bioseguridad no podrán ingresar a la
práctica. Como Mínimo Bata, Guantes, Tapa Bocas o Careta, Gorro y Gafas.

PROCEDIMIENTO A UTILIZAR.

Recibir los EMP – Realizar el Registrar


paquete sellado, registro de cadena mediante
rotulado de custodia fotografía el EMP

MUESTREO
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Abrir el contenedor sobre


la superficie limpia e
Cubrir el área de trabajo
identificar en el EMP los Inspeccionar visualmente
con una hoja de papel
sitios con manchas el elemento recibido
limpio
presuntivas de contener
material biológico

Recolectar la mancha con Documentarlos mediante Identificar los sitios donde


tijeras o con escobillones fotografías o diagramas haya manchas de interés

Regresar el EMP de donde


tomo la muestra

PRUEBA THEVENON ROLAND PIRAMIDON PARA DETERMINAR PRESENCIA DE SANGRE:


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Colocar una mota de


algodón sobre un papel
limpio

Cortar un fragmento
pequeño (aprox. 0.5x0.5
cm) de la mancha
presuntiva y ponerlo
sobre la mota de algodón

Si se trata de un hisopo,
Retornar el remanente
preservar el remanente
de la mancha analizada de algodón que contiene
al sobre de papel el resto de la muestra

Al algodón con muestra


agregar sobre la mancha-
una (1) gota de
Aminofenazona

Dejar en reposo en
luego adicionar tres (3) condiciones ambientales
gotas de ácido acético finalmente adicionar
del laboratorio durante
glacial una (1) gota de 10 minutos y registrar
Peróxido de los resultados
hidrógeno
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INMUNOCROMATOGRAFIA PARA DETERMINAR PRESENCIA DE SANGRE HUMANA:

Cortar el fragmento de prenda


Marcar el casete y el o escobillón en pequeños Agitar el tubo para Dejar en reposo a Partir la punta del Realizar la lectura
tubo del buffer con el fragmentos (0.2 x 0.2 cm que el buffer actúe y temperatura tubo del buffer y del resultado a los
número del caso y la aproximadamente) y pasarlos la muestra sea ambiente durante 10 dispensar dos gotas diez minutos y
muestra al tubo que viene con el extraída del soporte minutos en el casete. registrarlo
casette

INTERPRETACIÓN DE RESULTADOS

•Se considera que el resultado de la prueba es positivo cuando se


Resultado positivo evidencia la aparición de dos (2) bandas color púrpura (zona T y C) en
la ventana de lectura del casette

•Se considera que el resultado de la prueba es negativo cuando se


Resultado negativo evidencia la aparición de una (1) sola banda de color púrpura (zona C)
en la ventana de lectura del casette

Prueba inválida •Se considera que la prueba es inválida cuando no aparece la banda
púrpura de control en la ventana del casette

INTERFERENCIAS / FALSOS POSITIVOS / FALSOS NEGATIVOS


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FALSO POSITIVO FALSO NEGATIVO


Se reportan falsos La ausencia de una
positivos con la banda de color antes
sangre de Mono de diez (10) minutos
Macaccus Rhesus de realizada la
(Macaca mulata) prueba indica un
falso negativo

BIBLIOGRAFÍA RECOMENDADA. Artículos

Budowle B., Leggitt JL., Defenbaugh DA, Keys KM, Malkiewicz, SF. The Presumptive Reagent
Fluorescein for Detection of Dilute Bloodstains and Subsequent STR Typing of Recovered
DNA. J Forensic Sci. 2000; 45(5): 1090-1092.

Gisbert JA., Villanueva E. Medicina legal y toxicología. 6a Ed. Masson, Barcelona, 2004.

Cox M. A Study of the Sensitive and Specificity of Four Presumptive Tests for Blood. J Forensic
Sci. 1991; 36(5): 1503-1511.

Libros

ABACUS DIAGNOSTICS INC. ABAcard Hematrace for the forensic identification of human blood.
Inmunoassay for the qualitative detection of human blood at crime scenes and in forensic
laboratories

LABORATORIOS HUMAN, Hexagon, OBTI. Prueba inmunológica para sangre oculta. Prueba
inmunocromatográfica de 1 paso para la detección de sangre oculta en materia fecal

CASTELLO A., VERDÙ F., Critical Revisión of presumptive test for bloodstains. Forensic Science
Communication.U.S. Department of Justice F.B.I. July 1999 Vol.1. Number 2.

Manual

Manual de cadena de custodia vigente

Páginas Web

www.bioeden.com; www.glosario.net. Actualizado 2007-04-18


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ELABORÓ REVISÓ APROBÓ

Grupo o Programa de: Director de Programa de: Jefatura de Laboratorios


Tecnología en Investigación Tecnología en Investigación
Criminal. Criminal.
Fecha: Fecha: Fecha:

INFORME DE LABORATORIO
(Para elaborar por el Estudiante)
ASIGNATURA:
ESTUDIANTES: Biología y Genética Forense

▪ Erika Castañeda Escobar GRUPO: TC1
▪ Brayan Esneider Ospina
▪ NOTA:

CARRERA: TRABAJO GRUPAL: TRABAJO INDIVIDUAL:

FORMULE TRES HABILIDADES QUE DESEE ADQUIRIR O DESARROLLAR A TRAVÉS DE LA PRÁCTICA DE


LABORATORIO. El estudiante formulará desde la revisión de la guía las habilidades que desarrollará a
través de la práctica
● Correcta manipulación de los elementos del laboratorio para obtención de resultados idóneos
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● Desarrollar el conocimiento para realizar correctamente la prueba de identificación


● Reconocer el estado de una prueba identificar si es positivo, negativo o inválido.

Elabore un Mapa conceptual del tema a tratar en la Práctica de Laboratorio. El estudiante construirá un mapa
conceptual a partir de las palabras claves suministradas por el docente
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RESULTADOS.

1. Diligencie la siguiente lista de chequeo

SI NO
Existe registro de cadena de custodia X
El formato de cadena de custodia esta diligenciado X
El embalaje de las EF esta alterado X
La información del rotulo es suficiente para identificar X
lo recibido
La información del rotulo coincide con lo registrado en X
el registro de cadena de custodia

2. Elabore un informe de acuerdo con los siguientes parámetros:

Dibujos o fotografías que muestran lo obtenido y observado en el laboratorio. Deben estar


numerados y referenciadas en el texto.
Análisis: Es una discusión razonada de las gráficas y los datos, enfatizando en las características
sobresalientes de los datos. En la discusión los datos deben ser interpretados de acuerdo con lo
enunciado en la introducción (teoría).

PRUEBA DE
MUESTRAS SANGRE HUMANA* FOTOGRAFIA
DESCRIPCION DE ORIENTACION
TOMADAS
LA EF Piramidón* SI NO
Trozo de gaza 1 trozo de gaza
impregnada impregnada de
Si
presuntamente en supuesta sangre para Negativo
sangre realizar estudio Casette,

*El resultado se reporta como positivo o negativo

CUESTIONARIO.
1. ¿Qué criterio utilizó para la escoger la muestra que corto y que analizó? Explique.
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Rta: Criterio procidimental.

2. ¿Las técnicas utilizadas afectan la disponibilidad de la EF para una futura prueba de ADN?
Justifique su respuesta.
Rta: No, ya que se cortó solo una pequeña porción de 2cm X2 cm para el análisis, quedando
así el resto de la muestra para futuros análisis

3. ¿Cuál de las dos técnicas utilizadas requiere menos muestra?


Piramidón.

CAUSAS DE ERROR Y ACCIONES PARA OBTENER MEJORES RESULTADOS. El estudioso describirá las
variables que a su consideración dificultaron el alcance de las habilidades propuestas

Mal manejo de los elementos.

CONCLUSIONES. El estudiante consignará en este espacio la síntesis de los logros alcanzados a través del
desarrollo de la práctica de Laboratorio.

1. Logramos aprender cómo se realiza el desarrollo correcto de la práctica


2. Reconocemos de manera eficiente el resultado de un análisis y podemos clasificarlo como
positiva negativa o invalida.

APLICACIÓN PROFESIONAL DE LA PRÁCTICA REALIZADA. Exponga en este espacio la relación de


las competencias y habilidades desarrolladas con el ejercicio de su futura profesión.

Podremos trabajar en un laboratorio de genética y realizar muestras de orientación e identificación de sangre,


lo que nos será útil en cualquier investigación donde se obtengan residuos biológicos que puedan ser sangre.
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BIBLIOGRAFIA UTILIZADA. Utilizando las normas APA

ANEXOS. En este espacio presente los anexos si la práctica lo requiere


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RUBRICA DE EVALUACIÓN. (Criterios a evaluar por cada competencia, se diseña de acuerdo a la


necesidad del programa)
1. Competencia Procedimental
2. Competencia Cognitiva
3. Competencia Socio-afectiva
4. Competencia Comunicativa
5. Competencia Investigativa

RUBRICA DE EVALUACIÓN BIOLOGÍA Y GENÉTICA FORENSE


INDIVIDUAL CRITERIOS DE EVALUACIÓN
NOTA
Estudiante 0–1 1,1 – 2,0 2,1 - 3,0 3,1 - 4,0 4,1 - 5,0
1.
2.
Habilid 3.
ad
4.
5.
6.
GRUPAL % 0–1 1,1 – 2,0 2,1 - 3,0 3,1 - 4,0 4,1 - 5,0 NOTA
P Son Son
No son Son
r organizados y Son precisos y organizados,
Organiza los resultados obtenidos a precisos o no organizados y
o algunas veces ayudan a la precisos y
través del uso de mapas ayudan a la ayudan a la
c ayudan a la comprensión ayudan a la
conceptuales, gráficas y tablas comprensión entendimiento
e comprensión del tema entendimiento
del tema del tema
d del tema del tema
i
m
e
n
t
a
l
( 2
c a 0
Infiere la
o p % Hace
Se limita a la Analiza la información
m r Hace uso correcto de los conceptos Hace referencia relaciones
recopilación de información obtenida y la
p e al momento de aplicarlos en la a la información básicas de la
la información relacionada con relaciona con su
e n práctica de Laboratorio en la práctica información con
solicitada la práctica realidad en la
t d la práctica
práctica
e e
n r
c a
i h
a a
c
e
r
)
No tiene claro Tiene claro entre
C No Tiene claro Tiene claro
entre EF, EMP Tiene claro EF, EMP y/o
o entre EF, EMP entre EF, EMP
y/o prueba, así entre EF, EMP prueba, conoce
g y/o prueba, y/o prueba,
como también y/o prueba, y aplica
n 3 conoce y no conoce y aplica
Establece las diferencias entre EF no conoce y no conoce y aplica adecuada y
i 0 aplica los los
y/0 EMP de origen Biológico, su aplica los los correctamente
t % procedimientos procedimientos
recolección, embalaje y tratamiento en procedimientos procedimientos los
i de cadena de de cadena de
general en lo que respeta al manejo de cadena de de cadena de procedimientos
v custodia custodia,
del Lugar de los hechos custodia custodia de cadena de
a ajustados a la
custodia,
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normatividad ajustados a la
( vigente normatividad
a vigente
p
r
e Conoce las
n No conoce las Conoce las Conoce las posibles fuentes
No conoce las
d posibles posibles posibles de ADN, tiene
posibles
e Tiene claro cuáles son las partes que fuentes de fuentes de fuentes de claro la
fuentes de
r constituyen la célula, teniendo en ADN, tiene ADN, tiene ADN, tiene importancia del
ADN, así como
a cuenta los más importantes para claro la claro la claro la núcleo y de la
también no
c nuestro estudio como son el Núcleo y importancia del importancia del importancia del mitocondria, y
tiene claro la
o la Mitocondria, en los cuales se núcleo y de la núcleo y de la núcleo y de la aplica y
importancia del
n encuentra contenido el ADN mitocondria, mitocondria, y a mitocondria, y adecuadamente
núcleo y de la
o pero no aplica veces aplica los aplica los los conceptos
mitocondria
c los conceptos conceptos conceptos para la solución
e de las hipótesis
r
)
S Participa
Hace parte del Participa en el
o activamente en
Parcialmente trabajo trabajo
c Desarrolla habilidades de trabajo en No hace parte el trabajo
hace parte del propuesto por propuesto por
i equipo, priorizando la toma de del trabajo propuesto por el
trabajo el equipo de el equipo de
o decisiones y la escucha de diferentes propuesto por equipo de
propuesto por acuerdo a manera
a hipótesis el equipo manera
el equipo parámetros responsable y
f responsable y
básicos puntual
e puntual
c
t
i
v
a 1
A veces
( 0 Frecuentement
muestra una Muestra una Muestra una
a % e reprocha el
actitud de actitud de Muestra una sobresaliente
p trabajo de sus
interés frente a interés frente a buena actitud actitud frente a
r Cuida, respeta y exige respeto frente pares y
la clase y se la clase e frente a la clase la clase e
e a la interacción con sus pares y docente, y
limita a interactúa e interactúa interactúa
n docentes justifica sus
responder por ocasionalmente con sus pares y frecuentemente
d carencias en el
las condiciones con sus pares y docente con sus pares y
e trabajo en
básicas del docente docente
r grupo
trabajo
a
s
e
r
)
C Construye el
Construye el Construye de
o Practica el uso de lenguaje escrito y informe de
No construye el informe de Construye un manera
m verbal como medio de identificación y Laboratorio de
informe de Laboratorio de buena informe sobresaliente el
u diferenciación en la elaboración de acuerdo a los
Laboratorio manera de Laboratorio informe de
n informes de laboratorio requerimientos
incompleta Laboratorio
i mínimos
c
a
t
i
v
a
1
(
0 Ocasionalment Hace un buen Hace un uso
a No hace uso de Hace uso de un
% e hace uso de uso del sobresaliente del
p Utiliza lenguaje científico para un lenguaje lenguaje
un lenguaje lenguaje lenguaje
r referirse a los diferentes conceptos científico científico
científico científico científico
e que relaciona en la práctica del apropiado para apropiado para
apropiado para apropiado para apropiado para
n Laboratorio la práctica de la práctica de
la práctica de la práctica de la práctica de
d Laboratorio laboratorio
Laboratorio Laboratorio Laboratorio
e
r
a
c
o
n
v
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i
v
i
r
)
I
n Las fuentes de
Las fuentes de
v Las fuentes de información son
Las fuentes de Las fuentes de información son
e información son restringidas o
información son información son variadas y
s Busca la bibliográfica en fuentes pocas o con poca
relevantes e variadas e pertinentes.
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