El laboratorio de anatomía patológica

U.T. 1: EL LABORATORIO DE ANATOMÍA PATOLÓGICA

1. INTRODUCCIÓN ....................................................................................................... 2

2. INSTALACIONES E INFRAESTRUCTURAS ....................................................... 3

2.1 APARATOS, REACTIVOS Y MATERIAL FUNJIBLE .......................................... 4

2.1.1 APARATOS .......................................................................................................... 4

2.1.2 REACTIVOS ........................................................................................................ 4
2.1.3 MATERIAL FUNGIBLE ..................................................................................... 5

3. ESTUDIOS HISTOLÓGICOS Y CITOLÓGICOS ................................................ 6

3.1 HISTOTECNOLOGÍA ............................................................................................... 6

3.2 INTRAOPERATORIAS ............................................................................................. 7

4. GESTIÓN DE LA INFORMACIÓN: RECEPCIÓN, ETIQUETADO Y

DISTRIBUCIÓN DE LA MUESTRAS. ......................................................................... 8

4.1 RECEPCIÓN. ............................................................................................................... 8

4.2 ETIQUETADO ........................................................................................................... 9

5. ARCHIVOS DE INFORMES, BLOQUES, PORTAOBJETOS Y PIEZAS ........... 9

6. PROTOCOLOS. GARANTÍA Y CONTROL DE CALIDAD................................... 10

7. FUNCIONES DEL CITOHISTOTECNÓLOGO ................................................... 10

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1. INTRODUCCIÓN

El servicio de Anatomía Patológica (AP) es semejante a una empresa de

servicios del tipo de una asesoría o consultoría, en la cual, los clientes son médicos
que necesitan conocer el diagnóstico mediante la observación de imágenes a nivel
microscópico. Este diagnóstico sería, por tanto, histológico o citológico. El valor del
mismo es muy alto, por tener repercusiones terapéuticas y pronósticas del
desarrollo de la enfermedad.
Con las nuevas tecnologías el diagnóstico por la imagen a nivel macroscópico
(radiografía, RMN, TAC,…) ha alcanzado una importancia muy alta, pero en la mayor
parte de los casos debe ser confirmado por un diagnóstico a nivel microscópico
(citológico e histológico).
La base del servicio de anatomía patológica es su laboratorio.
El resto de los laboratorios de soporte de diagnóstico, son fundamentales
en el proceso clínico de elaboración del diagnóstico, pero los resultados que
aportan son complementarios y nunca decisivos.
Por todo ello, la importancia del Servicio de A.P. es crucial. Este tiene una
función asistencial, docente y de investigación:

 Función asistencial: atiende a los pacientes a través de sus

médicos especialistas proporcionando los recursos económicos y
el mantenimiento de las otras dos funciones.
 Función docente: actúa tanto sobre el personal como sobre
estudiantes, becarios y personal en prácticas.
 Función investigadora: es el motor que impulsa toda la actividad
del laboratorio de A.P. y evita la sensación tediosa que provoca la
realización repetitiva de diversas actividades.

El laboratorio de A.P. es a la vez un banco de muestras biológicas y un

archivo de información diagnóstica. Su importancia es vital, tanto para las
investigaciones realizadas en el laboratorio como para el apoyo de otros
investigadores que puedan solicitar la colaboración del laboratorio.

El material de trabajo son muestras, bien de tejidos o de células.

Los tejidos llegan en frascos especiales aún formando parte del órgano del
que proceden o bien, de parte de él. Las células llegan recogidas sobre un
portaobjetos (impronta), extendidas en el mismo (frotis) o en un frasco,
suspendidas en un fluido biológico (esputo, orina, líquido medular, líquido sinovial…)

Este material llega por distintas vías, y sólo en muy pocos casos acude el
paciente al servicio a llevarla personalmente. A veces, la muestra se obtiene
directamente en el servicio de AP, al que el paciente acude para que le extraigan
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líquido mediante punción de la zona sospechosa (técnica de punción-aspiración con

aguja fina, PAAF)

En cuanto a la metodología, la parte técnica la asume el citotécnico o

histotecnólogo, y la parte diagnóstica el patólogo (médico especialista en AP). De
todo este proceso, el elemento básico y crucial que forma parte de éste, es la
información, ya que el mínimo descuido en la información puede llevar a errores de
consecuencias nefastas (necesidad de sistema de trazabilidad de las muestras).
Por su propia naturaleza, la información es muy lábil (se destruye fácilmente) y en
general la importancia de la misma no está lo bastante valorada, por lo que debe
incidirse, en todas las fases del aprendizaje del personal de este laboratorio, en la
importancia del tratamiento de la información.

2. INSTALACIONES E INFRAESTRUCTURAS

En función del volumen y tipo de trabajo que desarrollen los laboratorios de

AP, deberían cumplir unas normas básicas de iluminación, ventilación y seguridad.
Se suelen encontrar en los sótanos, debido a la cercanía de los mortuorios y la
instalación del microscopio electrónico.
Entre las dependencias con las que debe contar un laboratorio de AP se
encuentran:

 Recepción: donde se reciben y registran las muestras y volantes de

petición.
 Secretaría: se encuentra el material administrativo, ordenadores,...
 Laboratorio de procesado de muestras y tinciones.
 Sala de espera para la consulta de PAAF y ésta misma.
 Archivos, almacén, despachos de diagnóstico para patólogos.
 Aula de formación.

El archivo puede ser un cuarto cerrado, pero el almacén y el laboratorio de

procesado deben tener una buena ventilación.
Las dimensiones y el número de salas vienen marcadas por el volumen de
trabajo y la cantidad de personal.
Si se encuentran poco separados los aparatos, perjudica al ritmo de
trabajo, y los numerosos reactivos tóxicos, inflamables, cancerígenos, etc., se
acumulan en el ambiente de manera peligrosa, por lo que conviene trabajar en
condiciones de espacio y ventilación abundante. Además, se dispone de protección
adicional como campanas extractoras (vitrinas de gases con filtros para
disolventes orgánicos o componentes con flujo laminar).
Así mismo, el laboratorio debe tener implantado un sistema de gestión de
residuos adecuado, ya que tanto las piezas orgánicas que se procesan como los

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líquidos que se utilizan en su procesado, deben ser eliminados de manera especial,

tratándose como residuos contaminantes y peligrosos.

2.1 APARATOS, REACTIVOS Y MATERIAL FUNJIBLE

2.1.1 APARATOS

 Microtomos/baños  Estufas
flotación  Instrumentos de
 Microscopio/lupa evisceración y tallado
estereoscópica  Frigoríficos-congelador
 Procesador tisular  Centrífuga
 Estación tallado  Balanza
 Estación de parafina
 Montador de cubreobjetos
 Teñidores automáticos
 Campanas extractoras
 Agitador
 Phmetro
 Ordenador-impresora

De todo este aparataje, merecen especial mención los congeladores que

deben alcanzar los –300 C.
Si se realizan estudios más sofisticados, como bancos de muestras
biológicas, se utilizan congeladores que alcanzan de -70º C a –80º C, o se meten
en nitrógeno líquido. Estos congeladores deben estar conectados a un grupo
electrógeno por si se va la luz, para que las muestras no se deterioren.

2.1.2 REACTIVOS

Los más utilizados para las distintas fases son:

 Fijación: formol tamponado, alcoholes, B5, Bouin

 Deshidratación e hidratación: alcoholes de distinta graduación, xilol
(sustituto), tolueno
 Inclusión: parafina
 Tinción: distintas sustacias colorantes

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 Montaje de portaobjetos: bálsamos comerciales (DPX, Acritol, Bálsamo

de Canadá)

De todos estos reactivos, el formol y el xilol son los más tóxicos

El formol es el fijador más utilizado. Pese a tener un nombre que hace

referencia a un alcohol (terminación “ol”) es un aldehído, el formaldehído.
Suele adquirirse al 40%; hay que diluirlo a 1/10 (4%). Es un producto que
tiene una concentración final baja, pero resulta muy irritante para la piel y las
mucosas, y ha resultado ser cancerígeno en animales de experimentación. No
obstante, unas adecuadas medidas de seguridad son suficientes.

El xilol, tampoco es un alcohol, es un hidrocarburo aromático que se emplea,

en AP, como líquido “aclarante” durante el procesado de tejidos. Actualmente, está
siendo reemplazado por los llamados “sustitutos del xilol”, de toxicidad escaso o
nula.
El reciclado de los reactivos se realiza mediante la recolección de los
mismos en envases específicos para cada uno de ellos y posterior recogida por
parte de empresa gestora. NO DEBEMOS ELIMINAR NUNCA LOS RESIDUOS
QUÍMICOS POR EL DESAGÜE. Hay que hacer especial hincapié en el formol y el
xilol (menos importante en caso del sustituto de xilol); ambos son irritantes y con
acción cancerígena demostrada, debiéndose recoger en recipientes especiales.
También se desechan en recipientes especiales los restos orgánicos fijados
con formol, la parafina utilizada, los alcoholes y colorantes.

2.1.3 MATERIAL FUNGIBLE

Podemos encontrar:

 Cuchillas de bisturí
 Cuchillas de afeitar
 Papel de fumar para envolver las muestras muy pequeñas
 Papel de filtro
 Guantes
 Cápsulas de inclusión o cassettes, que posteriormente formarán parte
del bloque de parafina.
 Material para la elaboración de reactivos químicos para las tinciones
 Probetas
 Pipetas
 Matraces aforados y Enlenmeyer
 Vasos de precipitados
 Vidrios de reloj
 Cubetas de tinción horizontales (Schiefferdecher)
 Jarras de Koplin (en vertical)
 Portaobjetos y cubreobjetos

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Salvo el material de vidrio que sea indispensable, se tiende a utilizar

material desechable (pipetas Pasteur, cuchillas de los microtomos, cassettes o
cápsulas de inclusión, moldes de parafina).
Para todo el material desechable con muestras biológicas procedentes del
laboratorio de AP, debe eliminarse en cubos biológicos que deberán ir etiquetados
con la leyenda “restos con formol”.

3. ESTUDIOS HISTOLÓGICOS Y CITOLÓGICOS

3.1 HISTOTECNOLOGÍA

Ciencia que estudia los fundamentos técnicos y la secuencia de

manipulaciones necesarias para llevar a cabo los análisis de los tejidos de los seres
vivos. Para ello es imprescindible la utilización del microscopio.
Últimamente las técnicas de estudio biológico se han ido ampliando a otros
métodos, como son los cultivos biológicos celulares, inmunohistoquímica y la biología
molecular. La inmunohistoquímica es la que mayor auge tiene en el diagnóstico,
mientras que los otros dos tienen su mayor aplicación en la investigación.
Según la procedencia de los tejidos se distingue entre material histológico y
material anatomopatológico.
El material histológico es el que se obtiene de un ser sano para investigar la
estructura y la composición normales.
El material anatomopatológico procede de seres enfermos para el
diagnóstico u origen de la enfermedad (etiología).
Los tejidos normales se obtienen de cadáveres mediante la realización de
una necropsia, y los materiales anatomopatológicos a partir de necropsias, biopsias,
extensiones citológicas y de la patología experimental (animales).
Una BIOPSIA es una porción de tejido obtenida de un individuo vivo para su
estudio anatomopatológico. Según el objetivo perseguido hay dos tipos de biopsias,
biopsias de diagnóstico y las biopsias de piezas quirúrgicas.

1. De diagnóstico: tienen como objetivo principal, el diagnóstico

histopatológico (microscopio) de una enfermedad al cual no se ha llegado
mediante los métodos clínicos habituales. En general, se caracterizan por
ser de pequeño tamaño (cilindros obtenidos por punción de órganos), y por
no comprender la totalidad de la lesión, sino sólo una porción de la misma
(biopsias hepáticas y renales, las cutáneas y las muestras obtenidas por
fibrobroncoscopia y endoscopia digestiva).

2. Las piezas quirúrgicas son de mayor tamaño y a menudo incluyen toda la

lesión. Se obtienen habitualmente en intervención quirúrgica por el cirujano,

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para confirmar un diagnóstico, realizar un tratamiento de una enfermedad,

establecer un pronóstico y planificar un tratamiento posterior.

Una EXTENSIÓN CITOLÓGICA es un conjunto de células independientes,

procedentes de un tejido y extendidas sobre un portaobjetos en forma de capa
unicelular, que permite su observación al microscopio. Se puede obtener mediante
extensión con escobillón (citobrush) o torunda (hisopo). También a partir de
muestras líquidas por centrifugación, generalmente en citocentrífuga. Otra forma
de obtener células puede ser por exfoliación (raspado) sobre todo en epidermis,
depositándolas posteriormente en un portaobjetos.

LA IMPRONTA es la capa unicelular sobre un portaobjetos, obtenida por

contacto directo con la superficie de sección del órgano.

Para su diferente procesamiento y su distinta interpretación diagnóstica, en

todo laboratorio de AP se distinguen dos tipos de estudios:

- Histológicos:
o Biopsias
o Autopsias (o necropsias)

- Citológicos:
o Citología exfoliativa
o Citología ginecológica
o Improntas,
o Citología de líquidos y secreciones
o PAAF: punción y aspiración con aguja fina.

En todos, el objetivo es común, pero el procesado es diferente; también

varía el método de tallado y muestreo para autopsias y biopsias, pero
coincide la técnica, ya que se estudian tejidos en ambos casos.

El conjunto de manipulaciones y métodos que tienen por objeto la obtención

de preparaciones histológicas, recibe el nombre de procesado básico de tejidos,
que comprende los siguientes pasos: fijación, recepción de la pieza en el
laboratorio, tallado, procesado para inclusión en parafina, corte, tinción y montaje.
El proceso por el cual se obtienen preparaciones citológicas se denomina
citopreparación.

3.2 INTRAOPERATORIAS

La intraoperatoria es la única urgencia en el laboratorio de AP, ya que el

resto de casos se sigue con el ritmo de trabajo normal.

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El corte se obtiene por congelación, siendo necesario para ello el criostato

(tipo de microtomo de congelación). La técnica se realiza cuando el paciente está
en quirófano y el cirujano necesita una confirmación de un diagnóstico previo, para
resolver qué hacer. Se obtiene una muestra de tejido fresco, que el histotecnólogo
congela inmediatamente, corta en el criostato y tiñe rápidamente para que el
anatomopatólogo pueda comunicar el resultado por el interfono, lo antes posible
(aprox. en 15 min.).
La biopsia intraoperatoria tiene indicaciones específicas como son: la
identificación de un tejido, la demostración de la presencia y naturaleza de una
lesión, la definición de los márgenes quirúrgicos (extensión de la enfermedad) y la
determinación de que el material extirpado es suficiente para el diagnóstico
posterior, incluyendo el tejido en parafina, porque el diagnóstico en congelación es
de menor sensibilidad, aunque suele admitirse una fiabilidad del 94-98% para este
método de fijación del tejido y en estas condiciones de trabajo.

4. GESTIÓN DE LA INFORMACIÓN: RECEPCIÓN, ETIQUETADO Y

DISTRIBUCIÓN DE LA MUESTRAS.

Todos los procedimientos y técnicas deben estar protocolizados. Deben

figurar con claridad las instrucciones de cómo rellenar los impresos, en los que
debe figurar el nombre y dos apellidos del paciente, con letra legible y la fecha de
nacimiento.
Es objetivo fundamental una comunicación libre de errores u omisiones y en
esa comunicación se debe primar cada uno de los eslabones, desde que la muestra
se registra hasta que se elabora un diagnóstico de la misma.

4.1 RECEPCIÓN.

Es la primera operación que se realiza en un laboratorio de AP. Es muy

importante comprobar que la numeración asignada a los volantes de petición y las
muestras coincidan, para conseguir una correcta identificación. Esta numeración se
debe poner con etiquetas o sello (actualmente con ordenador) evitando escribir a
mano, porque induce a más errores.
Existen tres tipos de muestra: biopsias, citologías ginecológicas o no
ginecológica y autopsias.
Para el etiquetado se utiliza este criterio: Muestra/ Año/ N° de orden, por
ej.:
Biopsia: B/ año/ n° orden
Autopsias: A/ año/ n° orden
Citologías: C/ año/ n° orden
C. ginecológica: CG/ año/ n° orden

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Si del mismo paciente hay varias muestras, al n° de orden se le añaden unas

letras: A, B, C…
Se debe comprobar siempre la debida cumplimentación de los volantes e
impresos, donde debe figurar el nombre del facultativo que solicita el análisis, el
servicio al que pertenece y si el paciente tiene algún tratamiento previo o cualquier
dato a tener en cuenta para un posterior diagnóstico. En cuanto al paciente, si
falta algún dato se debe intentar conseguirlo antes de devolver la muestra. Una
vez comprobado todo lo anterior, se emparejan volante y muestra y se procesa.

4.2 ETIQUETADO

La rotulación en portas (en la banda mate) y casetes (en dos lados) se debe
hacer con lápiz y en ambos se escribe nombre y dos apellidos del paciente y el n°
de orden o historia asignado en el registro. Si llega más de una muestra de órganos
distintos de un paciente se deben agrupar los volantes por pacientes, por centro o
por facultativo, para facilitar la introducción de datos en el ordenador.
Actualmente, se está desarrollando métodos de etiquetado más sofisticados
y con mayor grado de trazabilidad. Con estos métodos, el etiquetado se lleva a
cabo con etiquetas QR, que son insertadas en portas, casetes y botes de muestra
de tal manera que en todo momento podemos saber donde se encuentra una
determinada muestra de un paciente utilizando el ordenador provisto del software
necesario y el correspondiente lector de la etiqueta.
Es muy importante disponer del historial del paciente y de estudios previos
existentes.

5. ARCHIVOS DE INFORMES, BLOQUES, PORTAOBJETOS Y PIEZAS

Todas las preparaciones que se realizan en el laboratorio de AP se archivan.

Los archivos son el mayor tesoro de AP. Deben mantenerse actualizados y en
orden, para que sean operativos, porque un material mal archivado se considera
prácticamente perdido. Se archivan por años y n° de orden y aunque es función del
técnico, a veces se delega en el celador.
Es norma importante que un informe no se extraiga de la carpeta,
realizando la revisión del mismo en el archivo.
Los bloques se archivan todos, porque se pueden hacer nuevos estudios en
cualquier momento que interese.
Estos archivos ocupan poco espacio, pero pesan mucho, por eso suelen estar
en plantas bajas.
Las piezas se deben guardar durante tres meses y a partir de ese tiempo se
guardan las que interesen y las demás las recoge una empresa encargada de
destruir muestras biológicas. Algunos laboratorios guardan de forma permanente
todo el material de las autopsias, en formol, revisando periódicamente la
integridad de las mismas y la cantidad de fijador adecuado. Se suelen guardar

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piezas de interés didáctico, ya que la macrofotografía no siempre sustituye a la

pieza en realidad.

6. PROTOCOLOS. GARANTÍA Y CONTROL DE CALIDAD

Todas las actividades que se desarrollen en el laboratorio de AP tienen que

estar protocolizadas. Es una garantía de calidad para el laboratorio y el personal
que allí trabaja. También se debe valorar el material que llega, según criterios de
calidad, referidos a la conservación y a la identificación de muestra y facultativo.
Cada cierto tiempo se debe hacer un informe donde se reflejen todos estos
criterios y remitirlo al servicio correspondiente que esté llevando a cabo el control
de calidad en el hospital, con el grado de cumplimiento, además de expresar en
observaciones las deficiencias más notables.
El histotecnólogo ocupa una posición clave en la cadena de actuaciones
dentro del laboratorio de AP. Debe ser consciente de la importancia de su trabajo,
desde la recepción del material hasta el diagnóstico del mismo, con responsabilidad
y eficacia. Para conseguir un buen nivel de calidad, el diagnóstico de la muestra no
debe superar dos días, desde su recepción.

7. FUNCIONES DEL CITOHISTOTECNÓLOGO

- Registrar y etiquetar las muestras

- Colaborar en el tallado de las muestras
- Colaborar en Macro y Microfotografía
- Fijación de las muestras y comprobación de las que llegan ya fijadas
- Preparación de reactivos, control y reposición de los mismos
- Realización de la inclusión en parafina, mantenimiento, limpieza y orden
diario de la estación de parafina
- Confección de bloques de parafina
- Obtención de cortes, tinción y montaje de las preparaciones
- Realizar la citopreparación
- Establecer un criterio de prioridades, si hay mucha demanda: 1° biopsias
de diagnóstico, 2° piezas quirúrgicas procedentes de cirugía, 3° piezas
de autopsias e investigación
- Comprobación del buen funcionamiento de todos los aparatos, lavar y
ordenar todo el material
- Archivo y control de las muestras, bloques y preparaciones
- Control del almacén y condiciones de conservación de reactivos
- Ser responsable del trabajo que realiza, firmando las muestras que
procesa

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