Laboratorio 2

DETERMINACIÓN DE LA ACTIVIDAD ENZIMÁTICA. APLICACIÓN EN MEDICINA

DESHIDROGENASA LACTICA (LDH)

Introducción

Enzima responsable de la conversión del piruvato a lactato empleando NADH. Enzima

citosólica.

Distribución: amplia. Hígado, músculo, corazón. Isoenzimas por subunidades H y M.

Determinación: colorimétrica o cinética. Al alcance de cualquier laboratorio de mediana

complejidad. Existen métodos automatizados

Valores normales: depende de metodología

Inicio de elevación en Infarto de miocardio agudo: 12 a 24 horas. Pico: 2-3 días. Duración: 8-
10 días. Empleo: diagnóstico tardío.

También se usa en líquidos serosos como el pleural para diferenciar exudado de trasudado
cuando LDH de líquido/ LDH suero >0.6 ó LDH del líquido pleural >2/3 parte del valor
normal del LDH sérico

Método espectrofotométrico cinético

Para información se describe método espectrofotométrico cinético

Fundamento

Piruvato + NADH+ H+ ----------------Lactato + NAD+

La conversión del NADH a NAD+ se mide a 340 nm

Reactivos

A: Buffer tris y piruvato pH 7.2

B: NADH

Se mezcla 4 partes de A y 1 parte de B para el reactivo final y se obtiene reactivo de trabajo

Muestra

Suero obtenido de sangre venosa, con el procedimiento establecido. Dejar coagular y

centrifugar a 3500 rpm por 15 minutos. Se separa el suero

Procedimiento
Colocar en una cubeta 1ml de reactivo en un espectrofotómetro a 30-37°C, se preincuba 3
minutos. Se añade 20 ul de suero (o cantidades múltiples proporcionales) m se espera 30
segundos. Se hace lectura inicial a 340 nm y luego a 1, 2 y 3 minutos. Se obtiene las
diferencias respecto a la lectura previa cada minuto y se obtiene un promedio. Se multiplica
por el factor correspondiente a esa temperatura.
Valores de referencia: 37 °C de 230 a 450 UI

Resultados: De un paciente que tuvo hace una semana un infarto de miocardio se hace una
determinación y se obtiene 1,000 UI.

Cuestionario

1. ¿A que vía pertenece la LDH?

2. ¿Qué factores que afectan la actividad de la enzima determinada en el laboratorio?
3. ¿Qué son isoenzimas?
4. ¿Cuáles son las isoenzimas de la LDH y cuál es su distribución en los tejidos? ¿Cuál
isoenzima predomina en el corazón?
5. ¿Cómo interpreta los resultados del paciente?
6. ¿Cuáles son las principales aplicaciones de la LDH en el diagnóstico médico?

Referencias bibliográficas

1. Harper, Bioquímica ilustrada, 30 edición, 2016.

2. Vademecum Wiener Lab, Rosario, Argentina.

3. Huamán-Saavedra J. Laboratorio Clínico. Procedimientos e interpretación, 2 da

edición , Editorial Universitaria UNT, Trujillo, 2018