LDH

Lactato Deshidrogenasa ó Deshidrogenasa

Láctica (C.E. 1.1.1.27; Oxidorreductasa L-
lactato-NAD)

Dr. Eduardo Flores Juárez 1

 Determinación cuantitativa de lactato
deshidrogenasa (LDH)
MÉTODO: WACKER & AMADOR modificado Gay, Mc
Comb y Bowers

FUNDAMENTO DEL MÉTODO

La lactato deshidrogenasa (LDH) cataliza la reducción del
piruvato por el NADH, según la siguiente reacción:
LDH
Piruvato + NADH + H+ L-lactato + NAD+
340 nm

La velocidad de disminución de la concentración de NADH en el medio

determinado fotométricamente, es proporcional a la concentración
catalítica de LDH en la muestra ensayada

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 Enfoque Bioquímico
 Esta enzima corresponde a la categoría
Oxidoreductasas, dado que cataliza una reacción de
redox.
 El piruvato al ser reducido a lactato gracias a la
oxidación de NADH a NAD, participa de esta manera en
el metabolismo energético anaerobio.
 Participa en el metabolismo energético anaerobio
reduciendo el piruvato procedente de la glucolisis para
generar el NAD

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 Reactivos

R1 Imidazol 65 mmol/L

Tampón Piruvato 0,6 mmol/L

R2
NADH 0,18 mmol/L
Sustrato

Preparación
Reactivo de trabajo (RT):
Mezclar: 4 vol. (R1) Tampón + 1 vol. de
(R2) Sustrato
Estabilidad: 15 días a 2-8ºC ó 5 días a 15-25ºC.

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 Conservación y estabilidad

• Todos los componentes del kit son estables, hasta la

fecha de caducidad indicada en la etiqueta, cuando se
mantienen los frascos bien cerrados a 2-8ºC, protegidos
de la luz y se evita su contaminación.
• No usar reactivos fuera de la fecha indicada.
• Indicadores de deterioro de los reactivos:
• Presencia de partículas y turbidez.
• Absorbancia del Blanco a 340 nm < 1,00

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 Material Adicional

• Espectrofotómetro o analizador para lecturas a

340 nm.
• Baño termostatable a 25ºC, 30ºC ó 37ºC (±
0,1ºC)
• Cubetas de 1,0 cm de paso de luz.
• Equipamiento habitual de laboratorio.

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 Muestras

Suero. Separado lo antes posible de los

hematíes. No usar oxalatos como
anticoagulantes ya que interfieren en los
resultados.
No usar muestras hemolizadas. Estabilidad: 2 días
a 2-8ºC.

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 Procedimiento
1. Condiciones del ensayo:
•Longitud de onda: 340 nm
•Cubeta: 1 cm paso de luz
•Temperatura constante25ºC / 30ºC / 37ºC
2. Ajustar el espectrofotómetro a cero frente a agua destilada o aire.
3. Pipetear en una cubeta
25 a 30°C 37°C
RT ml 3 3
Muestra ul 100 50

4. Mezclar, incubar 1 minuto.

5. Leer la absorbancia (A) inicial de la muestra, poner en marcha el
cronometro y leer la absorbancia cada minuto durante 3 minutos.
6.Calcular el promedio de la diferencia de absorbancia por minuto
(A/min).
1.

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 Cálculos

25º- 30ºC A/min x 4925 = U/L LDH

37ºC A/min x 9690 = U/L LDH
Unidades: La unidad internacional (UI) es la
cantidad de enzima que convierte 1 µmol de substrato
por minuto, en condiciones estándar. La
concentración se expresa en unidades por litro (U/L).

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 CÁLCULOS:
Determinar el cambio de Absorbancia por minuto
(ΔA/min)
Actividad LDH (UI/L) = ΔA/min x 4925

Vt x 1000
FACTOR = ---------------------------------------------------------- = 4925

Σ NADH 340 x P x Vm

Vt: Volumen total de la reacción

Σ NADH 340: Coeficiente de extensión de NADH a 340 nm
P= Espesor del paso de luz en la cuveta
Vm= Volumén de muestra utilizado

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 Factores de conversión de temperatura
Los resultados pueden transformarse a
otras temperaturas multiplicando por

Temperatu Factor para convertir

ra de
Medición 25ºC 30ºC 37ºC

25ºC 1,00 1,33 1,92

30ºC 0,75 1,00 1,43

37ºC 0,52 0,70 1,00

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 VALORES DE REFERENCIA
25ºC 30ºC 37ºC
120-240 U/L 160-320 U/L 230-460 U/L
Estos valores son orientativos. Es recomendable que cada laboratorio
establezca sus propios valores de referencia.

CARACTERISTICAS DEL MÉTODO

Rango de medida: Desde el límite de detección 3,42 U/L hasta

el límite de linealidad 1600 U/L.
Si la concentración de la muestra es superior al límite de
linealidad, diluir 1/10 con NaCl 9 g/L y multiplicar el resultado final
por 10.

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 Significado Clínico
• La lactato deshidrogenasa (LDH) es una enzima,
distribuida por todo el organismo humano. Las mayores
concentraciones de LDH se encuentran en el hígado,
corazón, riñón, músculo esquelético y eritrocitos.
• El nivel de LDH en suero esta elevado en pacientes con
enfermedades del hígado, infartos de miocardio,
alteraciones renales, distrofias musculares y anemias
• El diagnóstico clínico debe realizarse teniendo en cuenta
todos los datos clínicos y de laboratorio.

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Niveles LDH están elevados en gran variedad de situaciones, reflejando su amplia
distribución tisular. Una concentración elevada de LDH puede observarse en:
 Anemia hemolítica
 Anemia perniciosa (anemia megaloblástica)
 Infecciones como mononucleosis infecciosa, meningitis, encefalitis, infección
por el VIH
 Sepsis
 Infarto intestinal o pulmonar
 Insuficiencia renal aguda
 Enfermedades hepáticas agudas
 Lesiones musculares agudas
 Pancreatitis
 Fracturas óseas
 Cáncer testicular, linfomas y otros cánceres

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Aumento de niveles de LDH indican ineficiencia
tratamiento frente a un cáncer (quimioterapia),
suele indicar peor evolución y menor supervivencia.
En algunas enfermedades crónicas y progresivas
los niveles de LDH persisten moderadamente
elevados a lo largo del tiempo.
Niveles bajos o normales de LDH no tienen
relevancia clínica; ejemplo, ingesta cantidad
importante de ácido ascórbico (vitamina C), los
niveles de LDH pueden estar disminuidos.

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 LDH en fluidos corporales
 LCR - niveles de LDH elevados indica probablemente la
meningitis es causa bacteriana, mientras que niveles bajos
o normales se asocian a meningitis víricas
 En líquido pericárdico, pleural o peritoneal, niveles
elevados de LDH, indican que líquido acumulado es
exudado mientras que niveles bajos asocia a trasudados.
Los trasudados estar causados por insuficiencia cardíaca
congestiva o por una cirrosis hepática. Las causas de los
exudados pueden ser variada y normalmente se requieren
pruebas adicionales para establecer su origen

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GRACIAS

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