“AÑO DE LA UNIDAD, LA PAZ Y EL DESARROLLO”

UNIVERSIDAD PRIVADA ANTENOR ORREGO

FACULTAD DE MEDICINA HUMANA

BIOQUÍMICA PRÁCTICA

INFORME DE LABORATORIO – SEMANA 02

ALUMNA: Paz Villanueva Breycee Sarely

DOCENTES: -Zelada Feria Walter Humberto

-Milagros Violeta Mogollón García.

TITULO:

DETERMINACIÓN DE LA ACTIVIDAD ENZIMÁTICA. APLICACIÓN EN

MEDICINA DESHIDROGENASA LACTICA (LDH).

NRC: 9041

TURNO DE PRÁCTICA: miércoles 4:10 p.m. – 6:50 p.m. /jueves 1:25 p.m – 4:05p.m.
 INFORME – SEMANA 02

I.- INTRODUCCIÓN

En el presente informe detallare lo que se elaboró en el laboratorio del curso, este consistió
en realizar una prueba que mide el nivel de lactato deshidrogenasa (LDH), también
conocida como deshidroginasa del ácido láctico, en la sangre. La cual por ende se extrajo
una cantidad de sangre a un miembro del grupo, en este caso mi propia sangre como
voluntaria, con el objetivo de identificar como estudiantes de Medicina cuales son los
valores normales y ademas poder comprender el mecanismo de accion de la LDH dentro de
nuestro organismo, y asi poder explicar a nivel bioquimico las consecuencias que surgen si
existiera una disminucion o aumento de esta enzima. Comparando los niveles normales con
los resultados obtenidos y teniendo en cuenta la informacion explicada y compartida por
nuestro docente, ademas realizando una busqueda de fuentes bibliograficas de
complemento.

DETERMINACIÓN DE LA ACTIVIDAD ENZIMÁTICA. APLICACIÓN EN

MEDICINA LACTATO DESHIDROGENASA (LDH)

I.MARCO TEÓRICO

El lactato deshidrogenasa (LDH) es una enzima citosólica, responsable de la conversión del

piruvato a lactato empleando NADH. Cumple una función importante en la producción de
energía por el cuerpo, cuando se produce daño en los tejidos donde se encuentra, liberan
LDH en el torrente sanguíneo o en otros líquidos corporales. Cuando los niveles de LDH en
la sangre o en otros líquidos del cuerpo están altos, puede indicar que ciertos tejidos del
cuerpo han sufrido daño por una enfermedad o una lesión.
La LDH corresponde a la categoría de las oxidorreductasas, dado que cataliza una reacción
redox, en la que el piruvato es reducido a lactato gracias a la oxidación de NADH a NAD+.

Participando así en el metabolismo energético anaerobio de la vía glucolítica. La reacción

es reversible. Es una reacción bisustrato del tipo bi-bi secuencial ordenado. En primer
lugar, entra el NADH seguido por el piruvato y tras el paso catalítico se libera
secuencialmente lactato y NAD+.

La LDH (140 kDa) está formada por 4 subunidades, cada una de unos 35 kDa. Se conocen
tres tipos de subunidades: H (LDHB), M (LDHA) y X (LDHC), que presentan pequeñas
diferencias en su secuencia de aminoácidos. Los tipos H y M pueden asociarse
independientemente para formar tetrámeros, dando lugar a cinco isoenzimas (isoformas:
modificaciones postraduccionales de la enzima), correspondientes a las cinco
combinaciones posibles, cada una de las cuales se encuentra preferentemente en
determinados tejidos y puede identificarse mediante electroforesis.

LDH-1 (H4): en el músculo cardíaco y eritrocitos.

LDH-2 (H3M): en el músculo cardíaco y células sanguíneas.

LDH-3 (H2M2): en los pulmones.

LDH-4 (HM3): en los riñones, placenta y páncreas.

LDH-5 (M4): en el hígado y músculo esquelético.

II.- MATERIALES

- Espectrofotómetro a 30-37°C.
- Micropipeta y pipetas capaces de medir volúmenes indicados.

Reactivos:
 - A: NADH.
- B: Buffer tris y piruvato pH 7.2.

Se mezcla 4 partes de A y 1 parte de B para el reactivo final y se obtiene reactivo de

trabajo.

Muestra:

- Suero obtenido de sangre venosa

- Dejar coagular y centrifugar a 3500 rpm por 15 minutos. Se separa el suero.

III.PROCEDIMIENTO

1. Extraer una muestra sanguínea por grupo y colocarla en un tubo de ensayo.

2. Accionar la centrífuga del laboratorio para separar el plasma

3. En un tubo de ensayo nuevo, con la micropipeta de 1000 U/L colocar el reactivo A

4. Luego agregar con otra micropipeta (100 U/L) de menor concentración, 20 U/L de
plasma previamente separado en la centrífuga

5. Después colocar 250 U/L de reactivo B en el mismo tubo del paso anterior

6. Esperar 30 segundos

7. Llevar la muestra al espectrofotómetro para ver los resultados

8. Esperar en dos tiempos (Primer tiempo de 60s y segundo tiempo de 180s).

9. Ver los resultados. Datos normales: 200-400 U/L

IV.- RESULTADOS

Obtuvimos los siguientes resultados gracias al espectrofotómetro:

_Breycee Paz: 202.4U/L de LDH en sangre.

V- DISCUSIÓN:
Teniendo como refencia los valores de la Guía de practica dada por los docentes, lo normal
sería entre 230-450 U/L (LDH) en sangre, pero también considerando lo del Instituto
Nacional de Salud del Perú que tiene en cuenta la edad ,esta explica que entre los 12-18
años los valores normales serian 200-400 U/L (LDH), comparando esta informacion con
los resultados obtenidos 202.4U/L de LDH, podemos decir que en este caso se encuentra en
rango normal, la cual no estaría indicado un situación de alerta de un daño tisular, cabe
resaltar que teniendo en cuenta, no siempre el estar un poco disminuido que lo normal se
relaciona con enfermedad, en algunos casos proviene con el exceso de vitamica C o incluso
de medicamentos que contienen acido ascórbico , o de la misma alimentación diaria que
podrían haber influido en el resultado.

VI.- CONCLUSIONES

La LDH es una enzima perteneciente a la familia de las oxidorreductasas, que está presente
en todos los tejidos animales y vegetales y en muchos microorganisms.

❖ Esta enzima es importante porque es responsable de la fermentación del ácido láctico al

convertir el lactato en piruvato, por oxidación, y viceversa, al reducir, oxidar o reducir
NAD + y NADH.

❖ La actividad de lactato deshidrogenasa se puede determinar mediante

espectrofotometría o inmunohistoquímica.

❖ La LDH es crucial en el diagnóstico clínico, ya que proporciona información sobre la

ubicación, el tipo y la gravedad del daño tisular y, por lo tanto, se pueden diagnosticar una
variedad de problemas médicos, ya que la LDH elevada, especialmente las isoenzimas
elevadas, permitirán la localización del daño.

VI.- ANEXOS
VII. CUESTIONARIO

● ¿A qué via pertenece la LDH?

Vía glucolítica. Forma parte de la glucolisis (metabolismo)en las reacciones finales para
la formacion del lactato.

● ¿Qué factores afectan la actividad de la enzima determinada en el laboratorio?

La actividad enzimatica puede verse afectada por diversos factores como temperatura,
pH y concentración. Generalmente al aumentar la temperature la reaccion se acelera, sin
embargo si se pone temperatura extremas puede que se denaturalize la enzima.
Respecto al pH de las enzimas, cada una valor optimo, y en cuanto a la concentración,
si se aumenta la concentracion de la enzima la reaccion se acelera al igual que en el
caso de aumentarse el sustrato.

● ¿Qué son isoenzimas?

Las isoenzimas son proteínas con una diferente estructura pero que catalizan la misma
reacción, así como se van a desplazar de manera diferente a la electroforesis.
Principalmente las isoenzimas son oligómeros de diferentes cadenas peptídicas y
normalmente van a diferir en los mecanismos de regulación en las características
cinéticas.

● ¿Cuáles son las isoenzimas de la LDH y cuál es su distribución en los tejidos? ¿Cuál
isoenzima predomina en el corazón?
 La LDH posee ciertas variedades o isoformas cada una con pequeñas diferencias en su
estructura según el tejido de donde provengan, entre ellas temenos:

- La LDH1: corazón, músculos y glóbulos rojos(hematíes).

- La LDH2: sistema retículo endotelial y los leucocitos (glóbulos blancos).

- La LDH3: principalmente en los pulmones.

- La LDH4: tanto en los riñones, placenta como en el páncreas.

- La LDH5: en el hígado y los músculos

-En el Corazón predomina LDH1

●¿ Cómo interpreta los resultados del paciente?

Al haber sufrido un infarto hace poco tiempo el LDH1 seguira aumentando, ya que el
infarto teoricamente se produjo por el aumento de LDH causando un daño tisular a
nivel del miocardio. Es decir ha habido una lesión por lo que las enzimas se han
liberado al torrente sanguineo, en el cual hace que los resultados esten aumentados.

● ¿Cuáles son las principales aplicaciones de la LDH en el diagnóstico médico?

Nos aporta iformación para el diagnostico de varias patologias ya que como sabemos su
ubicacion es diversa y son distintas isoenzimas.

VII. BIBLIOGRAFIA

●Wikipedia. Lactato deshidrogenasa [Internet]. USA; 20 sep 2011 [Consultado el 19 abril

2023]. Disponible en: https://es.wikipedia.org/wiki/Lactato_deshidrogenasa

● Harper, Bioquímica ilustrada, 30 edición, 2016.

●Huamán-Saavedra J. Laboratorio Clínico. Procedimientos e interpretación, 2 da edición,

Editorial Universitaria UNT, Trujillo, 2018

● Examen de isoenzimas del lactato deshidrogenasa (LDH) [Internet]. Medlineplus.gov.

[citado el 25 de septiembre de 2022