UNIVERSIDAD AUTÓNOMA DE NUEVO LEÓN

FACULTAD DE MEDICINA

Laboratorio de Bioquímica
Período Enero – junio 2024
Grupo: 01

Abordaje Clínico-tecnológico
E4: Lactato Deshidrogenasa

Nombre Matrícula Carrera

Elizondo Ocañas Andrea 2096175 IB
Flores Teillery Alejandro Francisco 2101406 IB
García Rodríguez Romina 2096828 IB
Garza Sepúlveda Marco Antonio 2042835 IB
Godina Silva Gregorio Emiliano 2094829 IB
López Rodríguez Alan Zahir 2103115 IB

15/04/24
 Marco teórico
La lactato deshidrogenasa (LDH) es una enzima intracelular catalizadora de
clase 1: oxidoreductasa, que se encuentra prácticamente en todos los tejidos
del cuerpo humano; las mayores cantidades de esta enzima son localizadas
en los músculos, el hígado, los riñones y los glóbulos rojos.
La LDH se puede dividir en cinco isoenzimas distintas, las cuales son formas
variantes de la enzima que difieren en su estructura y propiedades
bioquímicas, pero comparten una misma función catalizadora, la LDH es una
enzima tetramérica, la cual se puede dividir en dos subunidades esenciales:
LDH-H para el corazón y la LDH-M para el músculo.
En los humanos existen 5 tipos de isoenzimas que se distribuyen en diversos
tejidos y cada una presenta diveros tipos de patologías:

Isoenzima LDH-1 LDH-2 LDH-3 LDH-4 LDH-5

(HHHH) (HHHM) (HHMM) (HMMM) (MMMM)
Localización -Corazón -Corazón -Pulmón -Músculo -Músculo
tisular -Eritrocitos -Eritrocitos -Linfocitos esquelético esquelético
-Vesícula -Hígado -Hígado
-páncreas
Patologia -Infarto al -Anemia -Embolismo -Daño hepático -Daño a
miocardio megaloblástica pulmonar o inflamación músculo
-Anemia -Infarto renal -Neumonía esquelético
hemolítica agudo pulmonar -Daño
-Espécimen -Linfocitosis hepático
hemolizado -Carcinoma
de páncreas

La determinación de lactato deshidrogenasa en un suero o plasma es

considerada una herramienta invaluable en la práctica médica debido a su
capacidad para proporcionar información sobre la salud y el funcionamiento
del organismo.
La LDH actúa como un marcador sensible del daño tisular, dado que esta
enzima se encuentra en casi todos los tejidos, su liberación al torrente
sanguíneo aumenta en respuesta al daño celular; por lo que los niveles
elevados de LDH pueden significar una variedad de condiciones médicas,
desde enfermedades cardiovasculares hasta trastornos hepáticos,
musculares y hematológicos.
Un alto porcentaje de LDH en la sangre puede significar en diversas
patologías como:
 • Anemia perniciosa
• Desordenes hemolíticos
• Hepatitis viral o cirrosis
• Infarto agudo al miocardio
• Infarto pulmonar

La determinación de LDH desempeñó un papel crucial en el seguimiento de

la respuesta al tratamiento en pacientes con enfermedades como el cáncer,
los niveles de LDH pueden usarse como indicadores de la eficacia de algún
tratamiento; una disminución en los niveles de LDH después de la terapia
puede ser un indicador de una respuesta favorable a dicho tratamiento.
La LDH ofreció información valiosa sobre la actividad muscular, su medición
puede ser muy útil en la evaluación de lesiones musculares y el seguimiento
de la recuperación después del ejercicio intensivo o lesiones deportivas, los
niveles elevados del LDH pueden indicar daño muscular, lo que puede ser
especialmente relevante en atletas y personas que participan en actividades
físicas intensas.
Los valores normales de la lactato deshidrogenasa suelen oscilar entre 140 y
280 unidades por litro en adultos. Sin embargo éstas pueden variar
ligeramente dependiendo del laboratorio y de la población de referencia
utilizada; ya que estos valores pueden variar dependiendo de la edad, el sexo
y las condiciones fisiológicas individuales, además de que los valores de LDH
pueden aumentar temporalmente en respuesta a diversas situaciones como
ejercicio intenso, estrés, lesiones musculares, entre otras; por esto es
importante evaluar los resultados del LDH en el contexto clínico específico de
cada paciente.
La determinación de la actividad de lactato deshidrogenasa es fundamental
en diversos campos de la investigación biomédica y clínica debido a su
relevancia en el metabolismo celular y su implicación en diversas patologías.
En este sentido el análisis de la LDH se realiza comúnmente mediante
ensayos bioquímicos que requieren una serie de reactivos específicos para
su ejecución.
Entre los reactivos empleados en los ensayos del LDH se incluyen:
1. Buffer de reacción: Usado para mantener el nivel de pH óptimo para
favorecer la actividad enzimática del LDH asegurando la estabilidad de los
resultados
2. Sustrato: El lactato se emplea como sustrato principal en la reacción
catalizadora por la LDH. La conversión del lactato al piruvato por la accion
enzimatica de la LDH es crucial para la medición de su actividad.
 3. Coenzima: El NADH se usa como coenzima en la reacción de conversión
del lactato al piruvato, El NADH se oxida a medida que el piruvato se
forma, generando una señal detectable para determinar la actividad
enzimatica
4. Reactivo para la detención de NADH: Después de su oxidación se
emplea un reactivo específico para detectar el cambio resultante en la
absorbancia o fluoresencia lo que permite la cuantificación de la actividad
de LDH
5. Reactivo de detención de reacción: Para interrumpir la reacción
enzimática en el momento adecuado y evitar interferencias posteriores, se
usa un reactivo diseñado para detener la actividad enzimática de manera
efectiva
6. Reactivo de medición :Se emplea un reactivo especifíco para la medición
cuantitativa del producto generado en la reacción enzimática, Esto puede
implicar la detección y cuantificación del piruvato formado o la evaluación
del NADH oxidado, dependiendo del diseño del ensayo y los objetivos del
estudio

La enzima lactato deshidrogenasa cataliza la conversión reversible del ácido

pirúvico en lactato y viceversa; estas son las reacciones catalizadas por la LDH
en ambos sentidos:

1.- De lactato a piruvato (oxidación)

En esta reacción la LDH cataliza la oxidación del lactato a piruvato, utilizando
NAD+ como aceptor de electrones, el resultado es la formación de piruvato y la
reducción de NAD+ a NADH, acompñado por la liberación de un protón

2.- De piruvato a lactato (reducción)

La LDH cataliza la reducción del piruvato a lactato utilizando NADH como
donante de electrones. El resultado es la formación de lactato y la regeneración
de NAD+ a partir de NADH con la captura de un protón
 Metodología no automatizada
Materiales:
1. Espectofotómetro
2. Microcentrífuga
3. Pipetas volumétricas
4. Pipetas automáticas
5. Tubos de ensayo
6. Reactivos:
a) Buffer
b) Lactato (sustrato)
c) NADH (coenzima)
d) Reactivo para la detección de NADH
e) Reactivo para la detención de reacción
7. Muestra de plasma o sangre del paciente
Procedimiento
1. Preparar la muestra: Extraer la muestra sanguinea o plasma del paciente
y centrigugarla para separar los componentes celulares

2. Preparar los reactivos: Preparar soluciones de buffer de reacción en

concentraciones adecuadas así como soluciones de lactato y NADH en
los volúmenes requeridos

3. Preparación de la mezcla de reacción: en un tubo de ensayo mezclar el

buffer de reacción el lactato y el NADH en proporciones definidas según el
protocolo de ensayo

4. Incubación: incubar la mezcla de reacción a una temperatura y durante

un tiempo específico para permitir que la reacción enzimática

5. Detención de la reacción: agregar el reactivo de detención de reacción

para interrumpir la actividad enzimática y detener la formación de
productos

6. medición de absorbancia o fluorescencia: transfiere a la mezcla de

reacción detenida una cubeta de cuarzo o micro placa adecuada para la
 lectura en el espectrofotómetro, mida la absorbancia o fluorescencia a la
longitud de onda específica para el NADH utilizando un espectrofotómetro

7. cálculo de la actividad enzimática: utilizar la curva estándar de

concentración conocida de NADH calcula la actividad enzimática de la
LDH en la muestra estimando la concentración de NADH generada por la
muestra
Este proceso manual es más laborioso y susceptible a errores que con una
metodología automatizada pero esto nos puede servir en ciertos casos donde la
automatización no está disponible o no es práctica, este proceso tomó más
tiempo que si lo hacemos de una manera automatizada, para poner un ejemplo
podemos estimar que cada prueba nos tomaría alrededor de 30 minutos para
poder realizarla y dar un resultado, entonces para alrededor de 500 muestras nos
tomaría aproximadamente 250 horas de manera manual para poder entregar
todos los resultados de dichas muestras, lo cual hace el proceso poco práctico;
tanto para los laboratorios como para los pacientes que requieren dicha prueba.

Analizadores bioquímicos automatizados

Para lograr analizar grandes cantidades de muestras, en los laboratorios se
tiende a recurrir al uso de analizadores bioquímicos automatizados, los cuales
son equipos muy complejos y costosos, pero sencillos de utilizar y capaces de
ahorrar mucho trabajo. Esencialmente, se puede decir que son robots, ya que
realizan de forma repetida una serie de pasos que se le encomiendan; en este
caso, las fases van desde el muestreo, la adición de reactivos, la mezcla, la
retención de la reacción, la prueba misma, hasta el cálculo de resultados, la
evaluación de confiabilidad, la impresión y la limpieza, todo ello con una gran
precisión y eficiencia.

Fundamento para la determinación en el equipo

Los analizadores automáticos de LDH (lactato deshidrogenasa) funcionan
mediante la detección de la conversión del sustrato específico de la LDH en un
producto medible, cuya concentración está directamente relacionada con la
actividad enzimática presente en la muestra.
Para el análisis de muestras, los analizadores automáticos funcionan con base
en los principios de la espectrofotometría, más específicamente, mediante la
absorbancia, que no es más que la diferencia entre la luz que llega a una solución
que contiene esa sustancia y la que sale después de atravesarla. Esta magnitud
es proporcional a la concentración de dicha sustancia en el medio (la denominada
Ley de Beer-Lambert). Cuando esa sustancia se transforma como consecuencia
de una reacción, la absorbancia de la muestra cambia y por tanto podremos
calcular cuánto ha variado su concentración. La mayoría de las técnicas
monitoriza el cambio de color de la coenzima NAD + cuando se transforma en
NADH (que absorbe luz a 340 nm); pero otras técnicas utilizarán diferentes
longitudes de ondas.
Para tener una lectura estable, frecuentemente la primera medida de absorbancia
se realiza antes de añadir el segundo reactivo (o la muestra, en caso de
reacciones monoreactivas) y la segunda medida de absorbancia cuando la
reacción ha terminado completamente.
La LDH cataliza la oxidación del lactato por NAD+, obteniéndose piruvato y
NADH. La concentración catalítica se determina a partir de la velocidad de
aparición del NADH, medido a 340 nm, como se muestra en la siguiente reacción:

Capacidad de muestreo
La capacidad de muestreo en realidad depende del modelo en cuestión, pero
existen dispositivos modernos que tienen la capacidad de procesar hasta 300
muestras de manera simultánea.
Interferencias en el estudio
Pueden existir interferencias o alteraciones en los resultados debido a la
hemólisis o la tardía separación del suero, ocasionando resultados elevados
debido a la elevada concentración de LDH en los eritrocitos. Por esto, se
recomienda obtener el suero de la manera habitual, libre de hemólisis.

Dimensiones del equipo

Al igual que la capacidad de muestreo, las dimensiones del equipo varían según
el modelo y el fabricante, además de las funciones que incorpore el equipo. Las
medidas de éstas máquinas pueden llegar a ser relativamente compactas, como
es el caso del modelo H100: 560 x 410 x 360 mm y pesando alrededor de 30 kg;
caso contrario sucede con el modelo ROR A-380, el cual mide 920 x 650 x 1120
mm y pesa alrededor de 170 kg.

Costo promedio
En cuanto al costo, al igual que las dimensiones y la capacidad de muestreo,
depende de numerosos factores, factores principalmente relacionados con las
funciones más importantes como la capacidad de muestreo. El modelo H100 es
capaz de tratar 120 pruebas por hora, costando unos 207’872.00 MXN; por otro
lado, el modelo ROR A-380 es capaz de tratar hasta con 300 muestras por hora,
pero cuesta 491’562.00 MXN, es decir más del doble que el modelo H100.

Ventajas y Desventajas
-Procedimiento no automatico
El análisis no automático de la lactato deshidrogenasa (LDH) presenta varias
ventajas sobre los métodos automáticos:
• Menor consumo de reactivos: En algunos casos, los métodos no
automáticos pueden requerir menos reactivos, lo que puede resultar en
ahorros adicionales en costos operativos a largo plazo.

• Control de calidad: Algunos laboratorios prefieren realizar análisis no

automáticos porque les permite un mayor control de calidad. Los técnicos
pueden monitorear de cerca cada paso del proceso y realizar ajustes
según sea necesario para garantizar resultados precisos y consistentes.

• Flexibilidad: Los métodos no automáticos pueden adaptarse fácilmente a

diferentes condiciones de laboratorio y equipos disponibles. Esto permite
una mayor flexibilidad en la realización del análisis según las necesidades
específicas del laboratorio.

• Mantenimiento más sencillo: Los métodos no automáticos suelen

requerir menos mantenimiento y calibración de equipos en comparación
con los sistemas automáticos complejos. Esto puede ahorrar tiempo y
recursos a largo plazo.

Aunque el análisis no automático de la lactato deshidrogenasa (LDH)

tiene sus ventajas, también presenta algunas desventajas:
 • Mayor susceptibilidad a errores humanos: Los métodos no automáticos
dependen en gran medida de la habilidad y precisión del personal de
laboratorio. Esto puede aumentar el riesgo de errores humanos durante la
preparación de muestras, la manipulación de reactivos y la interpretación
de resultados.

• Mayor variabilidad: La falta de estandarización en los procedimientos

manuales puede conducir a una mayor variabilidad en los resultados entre
diferentes operadores y sesiones de análisis. Esto puede afectar la
precisión y la reproducibilidad de los resultados.

• Menor capacidad de procesamiento: Los métodos no automáticos

generalmente requieren más tiempo y mano de obra para procesar
muestras en comparación con los sistemas automáticos. Esto puede
limitar la capacidad del laboratorio para manejar grandes volúmenes de
muestras o cumplir con plazos ajustados.

-Procedimiento automatico en el analizador

Ventajas:

1. Posibilidad de programación: Los sistemas automáticos suelen permitir

la programación de diferentes tipos de análisis y la personalización de
protocolos según las necesidades específicas del laboratorio o del estudio,
lo que aumenta su versatilidad.
2. Mayor capacidad de procesamiento: Al automatizar el análisis, es
posible procesar un mayor volumen de muestras en un período de tiempo
determinado, lo que puede ser especialmente beneficioso en laboratorios
con una alta demanda de pruebas.
3. Mejora en la trazabilidad: Los sistemas automáticos suelen estar
equipados con funciones de registro y seguimiento que proporcionan una
trazabilidad completa de las muestras y los resultados, lo que facilita la
auditoría y el cumplimiento de regulaciones.
 4. Reducción de la fatiga laboral: Al liberar al personal de tareas repetitivas
y tediosas, la automatización puede contribuir a reducir la fatiga laboral y
mejorar el bienestar general del personal del laboratorio.
5. Posibilidad de análisis continuo: Algunos sistemas automáticos pueden
operar de forma continua, lo que permite realizar análisis de manera
ininterrumpida durante períodos prolongados, incluso fuera del horario
laboral regular.

Desventajas:

1. Inversión en capacitación: La implementación de sistemas automáticos

puede requerir una inversión considerable en la capacitación del personal
para garantizar su uso adecuado y maximizar los beneficios del equipo.
2. Necesidad de validación y calibración constantes: Los sistemas
automáticos deben ser validados y calibrados regularmente para
garantizar la precisión y fiabilidad de los resultados, lo que puede implicar
una carga adicional de trabajo para el personal del laboratorio.
3. Posible pérdida de flexibilidad: En algunos casos, la automatización
puede limitar la capacidad del laboratorio para adaptarse rápidamente a
cambios en los protocolos de análisis o en los requisitos del estudio, lo que
puede ser problemático en entornos dinámicos.
4. Riesgo de fallos técnicos: Los sistemas automáticos están sujetos a
fallos técnicos, como errores de software o hardware, que pueden
interrumpir la operación del laboratorio y requerir tiempo y recursos para
su resolución.
5. Impacto en la interacción interpersonal: La automatización puede
reducir la interacción interpersonal entre el personal del laboratorio y los
pacientes o colegas, lo que podría afectar la calidad de la atención al
paciente y la colaboración entre profesionales.
Dispositivos electronicos

No se utilizan dispositivos específicos para medir la LDH en sí, sino que se realizan
pruebas de laboratorio utilizando métodos bioquímicos para medir los niveles de LDH en
la sangre, el suero u otros fluidos corporales. Estos análisis pueden realizarse utilizando
equipos de laboratorio estándar como espectrofotómetros y analizadores químicos
automáticos.

Espectrofotómetros
El Espectrofotómetro es un equipo de análisis de laboratorio que permite conocer las
propiedades de la luz sobre la superficie de una muestra en específico. Su uso principal
se enfoca en el análisis espectroscópico, lo que permite conocer e identificar los
diferentes compuestos de la muestra que se está analizando.

El análisis que realiza el Espectrofotómetro funciona mediante la detección de absorción

y emisión de la radiación electromagnética de la muestra en determinadas longitudes de
onda. Este método es uno muy importante en el campo del análisis, sobre todo en
laboratorios de química analítica, en los cuales se estudian los procesos de absorción,
emisión y luminiscencia.
Analizadores químicos automáticos
Un analizador automatizado es un robot de un laboratorio clínico diseñado para medir
diferentes sustancias químicas y otras características en un número de muestras
biológicas, con una asistencia humana mínima.
Estas mediciones de sangre y otros líquidos pueden usarse para el diagnóstico de la
enfermedad.

Se han inventado muchos métodos para la introducción de muestras dentro del

analizador. Esto implica poner tubos de ensayo con muestras dentro de ‘racks’, de
manera que se pueden mover por un especie de pista o camino, o metiendo los tubos
en unos carruseles circulares que hace rotar a las muestras. Algunos analizadores
requieren muestras para ser transferidas a unas copas de muestra. Sin embargo, el
esfuerzo en promocionar la salud y la seguridad dentro del laboratorio, ha hecho que
muchos fabricantes desarrollen analizadores con capacidad para tratar tubos cerrados,
previniendo el contacto directo de los trabajadores con las muestras.

Las muestras se pueden procesar una por una, por lotes (agrupaciones de muestras), o
de manera constante.

La automatización del laboratorio no elimina la necesidad de una persona experta (los

resultados aún deben ser evaluados por un facultativo o alguna profesión equivalente
reconocida), pero sí que reduce la posibilidad de error, de accidente o los problemas de
dotación de personal.
Sugerencias de mejora de métodos automatizados
Los dispositivos automáticos han ido revolucionando la medicina y nos han
proporcionado una mejor eficacia al tomar muestras, detectar enfermedades y
procesar datos. A pesar del gran funcionamiento de estos dispositivos, existe
espacio para las áreas de mejora, conociendo sus desventajas se puede buscar
cómo optimizarse, logrando un mejor desarrollo y facilitación de los procesos.

Una gran área de oportunidad es implementar inteligencia artificial para optimizar

la obtención de resultados, esta mejora facilitaría ya que se pueden presentar
errores al presentar los resultados con acceso a la IA (Inteligencia Artificial). Puede
tener un aprendizaje automático mediante algoritmos ocasionando que analice los
patrones en los datos y ajustar los parámetros consiguiendo una minimización de
errores notable logrando una mayor confiabilidad en los resultados.
Continuando con la IA, otra manera en la que beneficia un laboratorio es en la
mejora del tiempo del laboratorio. Al implementar un dispositivo automático es
necesario tener el conocimiento de este mismo, por lo que es necesario entrenarlo,
pero puede ser una desventaja la inversión requerida para implementar una
capacitación con la ayuda de la IA. Puede interpretar los mismos resultados y
generar informes para que los profesionales tengan mayor tiempo y tengan un mayor
trato directo con pacientes.

Por otro lado, una mejora en un laboratorio seria la integración de sistemas de

gestión para mejorar el flujo del laboratorio vinculando todo a una nube para mejorar
la obtención de datos si conectividad con los registros médicos electrónicos
vinculando los analizadores bioquímicos con los electrónicos para facilitar el
acceso a los resultados. Implementar sistemas de alerta para que el personal este
informado sobre posibles errores o anomalías que puedan presentarse, además de
que estas alertas se envíen con una aplicación accediendo a las notificaciones lo
antes posible desde su dispositivo móvil, logrando que todos los profesionales de la
salud estén informados en el menor tiempo posible.

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O., De la reacción fueron seleccionadas para obtener una relación

adecuada entre la medición de la actividad y la concentración catalítica

del patrón isoenzimático, las C., De las isoenzimas, a. F. de M. las D. P.

P. el C., de la actividad enzimática. Como resultado de la optimización,

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