UNIVERSIDAD NACIONAL MAYOR DE SAN MARCOS

UNIVERSIDAD DEL PERÚ, DECANA DE AMÉRICA

Informe de laboratorio -
Métodos para la determinación
de láctico deshidrogenasa y
lactato en suero

Curso: Bioquímica

Profesor(a): Doris Virginia Huerta Canales

Aaron Joel Camargo Mendoza

27/06/2021
1. Introducción
El trabajo experimental realizado el día jueves 24 de junio (8-11 am), consistió en la
interpretación de manuales pertenecientes a dos compañías proveedoras de kits de
diagnóstico, estas son Valtek y Wiener. Previamente se tuvo que realizar una revisión de
conceptos sobre la lactasa deshidrogenasa, sus funciones, partes del cuerpo donde se
produce esta enzima y enfermedades que puede ocasionar en caso se encuentre en
cantidades excesivas. Al término de la sesión se dio paso a las preguntas dirigidas a la
docente por parte de los estudiantes y viceversa.

2. Objetivos
Los siguientes objetivos están planteados en el protocolo de la práctica con el fin de lograr
determinadas competencias, entre las que están:
● Interpretar el significado clínico de la prueba de laboratorio.
● Explicar el fundamento de los métodos propuestos.
● Aplicar los procedimientos para su realización
● Conocer los valores de referencia de la prueba.
● Calcular sus valores de actividad y concentración.

3. Trabajos dentro de la sesión

3.1. Conceptos previos
● Kit de diagnóstico: son métodos de prueba que permiten identificar la presencia de
una enfermedad causada por un desequilibrio, contiene reactivos que para un
propósito específico, estos reactivos tienen diferentes componentes que pueden
encontrarse en estado líquido o en polvo, además incluye una presentación que nos
indica el número de pruebas que se pueden realizar y la temperatura de almacenaje
para lograr resultados precisos.
● Lactato deshidrogenasa (LDH): es una enzima oxidorreductasa que cataliza la
reacción piruvato - lactato en presencia de NAD y NADH2, es abundante en los
tejidos pero en la sangre se encuentra en bajas cantidades. En caso de darse lo
contrario nos puede indicar enfermedades como infartos de miocardio, cáncer,
enfermedades del hígado, sangre o músculo.
● Lactato oxidasa (LOD): es una enzima que en presencia de oxígeno, cataliza la
oxidación del ácido láctico, que promueve la formación de piruvato y peróxido de
hidrógeno.
● Actividad enzimática: medida de la cantidad de enzima activa presente y del nivel de
actividad de la misma. En el caso de la LDH, se mide en relación a la fermentación
láctica y cumple con una curva michaeliana.
 ● NAD: significa Nicotinamida adenina dinucleótido,en caso de tener más hidrógenos
se encontrara en estado de reducción, en caso tenga menos hidrógenos se
encontrará oxidada.
● Isoenzimas: son enzimas que difieren en la secuencia de aminoácidos, pero que
catalizan la misma reacción química. En el caso de la lactato deshidrogenasa
encontramos cinco tipos de isoenzimas, las más importantes son las LDH1 Y LDH5.
Se diferencian unas de otras debido al tejidos en donde actúan.
● Fermentación láctica: proceso que interviene en reacciones metabólicas para la
obtención de energía. Se da en condiciones anaeróbicas y se tiene como producto
final al lactato a partir del piruvato.
● Cromógeno: Bacterias que generan colorantes.
● Ácido láctico: producido principalmente en los músculos, se forma cuando el cuerpo
descompone carbohidratos para utilizarlos como energía cuando los niveles de
oxígeno son bajos y se puede encontrar en condiciones no patológicas debido a la
realización de ejercicio intenso.
● Gluconeogénesis: ruta metabólica que permite la biosíntesis de glucosa, se da en el
hígado.
● Calibrador: Asegura mejores resultados y proporciona el factor correspondiente.
● Valores normales: son las cantidades adecuadas que debe presentar una persona
tomando en cuenta la edad. Por ejemplo en adultos las cantidades normales de LDH
son de 60 a 140 UI / L a 30 °C, y de 115 a 240 UI / L a 37°C.
● Espectrofotómetro: instrumento que mide la cantidad de luz absorbida, permite
conocer la actividad de una enzima.
● Azida sódica: es un inhibidor de la LDH.
● Líquido cefalorraquídeo (LCR): fluye dentro del cerebro y la médula espinal y
alrededor de estos para ayudar a amortiguarlos en caso de una lesión y para
proporcionar nutrientes. En condiciones patológicas, se da un aumento de los
niveles normales de LDH.

3.2. Interpretación de los métodos

Valtek laboratorio
-Significancia: Su finalidad radica en determinar la presencia de daño tisular en diferentes
órganos como el corazón, hígado o músculo, teniendo como indicador el aumento brusco
de la cantidad y actividad de la enzima lactato deshidrogenasa en el torrente sanguíneo.
Esto es debido a la obstrucción (coágulos) generados por el daño en los tejidos.
-Fundamentos: Utiliza el método de Wacker y Amador, y las modificaciones posteriores de
Gay, Mc. Comb y Bowers, está basado en la capacidad de la lactato deshidrogenasa para
reducir el NAD a NADH + H.
A partir del uso del espectrofotómetro con la capacidad de medir absorbancias a 340 nm, se
realizan las lecturas del NADH a la longitud de onda de 340 nm para observar el aumento
tanto de las absorbancias como de la cantidad del NADH reducido. Conforme aumenten las
absorbancias y la cantidad de NADH reducido, se puede obtener la concentración de la
enzima LDH, y por ende, su actividad enzimática.

A partir de la acción enzimática de la LDH, se reduce el L-lactato con el NAD (ganancia de

hidrógenos), obteniéndose piruvato y NADH + H (reducido).

-Reactivos: La temperatura indicada para su conservación es de 2 a 8 grados centígrados

hasta la fecha de caducidad indicada en el kit. Se debe tomar en cuenta que posteriormente
se tendrá que realizar una preparación que consiste en mezclar los reactivos con la
cantidad de agua destilada indicada, se obtiene como producto un reactivo reconstituido,
Para la preservación de este reactivo reconstituido se lo debe tener entre 2 a 8 grados
centígrados durante 5 días, y se puede conservar a temperatura ambiente durante 3 días.
Los componentes de este reactivo reconstituido son: Tris Buffer pH 8.9, L-lactato, NAD, KCL
y estabilizantes no reactivos.

-Muestras: Suero libre de hemólisis, dado que esta eleva falsamente los niveles de LDH, lo
que afectaría en la exactitud de los resultados. La LDH es estable entre 2 a 8 grados
centígrados durante 7 días.

-Equipo requerido: Se hace uso del espectrofotómetro que sirva para medir cuánta luz
absorbe una sustancia química. Este instrumento debe tener la capacidad de leer
absorbancias a 340 nanómetros dado que esta cantidad es la longitud de onda máxima
donde la enzima lactato deshidrogenasa logra su mayor actividad enzimática. También se
hace uso de pipetas, timer o cronómetro y baño termorregulado.

-Tecnica: Llevar el reactivo a temperatura ya sea a 30°C o 37°C, calibrar el

espectrofotómetro contra blanco de agua destilada. Se realizan lecturas con el
espectrofotómetro al NADH reducido durante 3 minutos con un intervalo de 60 segundos.
-Cálculos: Una vez realizado el procedimiento espectrofotométrico a 340 nm, se obtienen
las siguientes lecturas; al momento inicial 0.00; al primer minuto, 0.02; al segundo minuto,
0.04; al tercer minuto, 0.06. Por esta razón es que la variación de absorbancias por minuto
es de 0.02, esto posteriormente se multiplica con el factor dado por el método Valtek, este
es 3376, esto en base a la Ley de Lambed y Beer. En este caso los cálculos se realizan a
30°C de temperatura.

Reemplazando los valores, tenemos:

Actividad LDH (UI/L) = 0.02 * 3376 = 67.52 UI/L

Dentro del rango de valores (30°C) :

60 a 140 UI/L

Wiener laboratorio
-Significancia: Su finalidad radica en determinar la cantidad de lactato, esta se puede
aumentar a partir del ácido láctico por medio de ejercicio intenso. También se puede
presenciar un incremento del lactato de forma patológica, esta se da en el líquido
cefalorraquídeo (LCR), esto puede indicar una disminución del oxígeno hacia el cerebro.

-Fundamentos: La enzima LOD oxida al lactato, generando peróxido de hidrógeno, este

luego es utilizado por la peroxidasa para generar un cromógeno. Se basa en la relación
cromática y la concentración de lactato, esto mediante las lecturas de absorbancias.
En la reacción podemos observar, la actividad enzimática de la lactato oxidasa que
transforma el L-lactato + O2 en piruvato + peróxido de hidrógeno. Mientras que en la
segunda reacción vemos la actividad de la peroxidasa, que transforma el peróxido de
hidrógeno en cromógeno más dos moléculas de agua.

-Reactivos: tenemos dos tipos de reactivos, los provistos y no provistos. Entre los reactivos
provistos tenemos al A y el B, ambos con sus respectivos componentes y medidas
indicadas. En los no provistos tenemos al calibrador A plus y la solución fisiológica. Su
conservación se debe dar en un refrigerador con una temperatura de 2 a 10° C, hasta la
fecha de vencimiento.

-Muestras: Como muestras se tiene el plasma y la LCR, para ello se deben tomar en cuenta
los cuatro parámetros indicados; la recolección de, los aditivos, las sustancias interferentes
conocidas y la estabilidad e instrucciones de almacenamiento.

-Equipo requerido: se necesita de micropipetas, analizador automático y un calibrador o

muestra que nos brinda el factor correspondiente.

-Cálculos: buscamos la concentración del lactato tanto en plasma como en LCR.

Tomamos en cuenta:
Lactato (mg/dL) = Abs MP x Factor
Factor = (St) / Abs St
(Estándar) = 10 mg/dL (valor dado)

● En plasma:
Abs MP = 0,250
Abs Blanco = 0,010
Abs Estándar = 0,211

0,250 – 0,010 = 0,240

0,211 – 0,010 = 0,201

● En LCR:
Abs MP = 0,730
Abs Blanco = 0,010
Abs Estándar = 0,211
0,730 - 0,010 = 0,720
0,211 – 0,010 = 0,201

4. Conclusiones y discusión de los resultados Valtek y Wiener

Respecto a las dos metodologías utilizadas, la principal diferencias entre estas se encuentra
en los fundamentos de ambas, en el caso de Valtek, se observa aumento de absorbancias
del NADH reducido conforme transcurre el tiempo establecido, por lo que se puede calcular
la actividad enzimática de la enzima LDH y su concentración. En el caso de Wiener,
podemos ver que la reacción es distinta y la enzima que actúa es la LOD con la POD, y se
da la catálisis de L-lactato a piruvato, posteriormente se obtiene el cromógeno y esto
permite calcular la concentración de lactato tanto en plasma como en LCR. Otra diferencia
es la longitud de onda a las que se realiza las absorbancias, estas son de 340 nm en Valtek
y de 540 nm en Wiener.

Es importante conocer estas metodologías porque nos permite diagnosticar la presencia de

daños en los tejidos del paciente, además de comprender los procesos tanto patológicos
como no patológicos que pueden causar un incremento de la LDH y el lactato.

Referencias:
1. Nuñez M.A. 2021. Guía de Prácticas del Curso de Bioquímica - Nutrición. Perú.
2. lactate_sp.pdf [Internet]. [citado 27 de junio de 2021]. Disponible en:
https://www.wiener-lab.com.ar/VademecumDocumentos/Vademecum%20espanol/lac
tate_sp.pdf
3. VTK-ldh-ls.pdf [Internet]. [citado 27 de junio de 2021]. Disponible en:
https://andinamedica.com.pe/wp-content/uploads/2016/08/VTK-ldh-ls.pdf