FACULTAD DE CIENCIAS QUÍMICAS

PROCESO PLAN CURRICULAR

GUÍA DE LABORATORIO BIOQUÍMICA

CONTENIDO DE LA GUÍA PRÁCTICA

1. N° DE LA PRÁCTICA: 01
2. UNIDAD CURRICULAR DE LA SIGNATURA: UNIDAD I
3. TÍTULO: DETERMINACIÓN DE AZUCARES POR CROMATOGRAFÍA DE
PAPEL

4. OBJETIVOS:
 Determinar de manera cualitativa la presencia de azucares por cromatografía de papel.

5. FUNDAMENTO Y MÉTODO DE LA PRÁCTICA:

La cromatografía en papel es una técnica de separación e identificación de sustancias
químicas mediante un disolvente que se mueve sobre hojas o tiras de papel de filtro u papeles
especialmente diseñados. Un rasgo característico de la cromatografía es la presencia de dos
fases; dispuestas de tal manera que mientras una permanece estacionaria dentro del sistema
(fase estacionaria), la otra se desplaza a lo largo de él (fase móvil)[ CITATION Uni07 \l 2058 ].
5.1. Cromatografía de Azúcares
En el caso de los azúcares, una técnica muy difundida es la que se utiliza papel filtro como
fase estacionaria y la mezcla de butanol piridina y agua como fase móvil. Los azúcares son
retenidos por la fase acuosa adherida al papel y arrastrados por la fase orgánica móvil. Se
trata fundamentalmente de una cromatografía liquido-liquido de partición. Cada azúcar
avanza, desde el origen, en una longitud proporcional al desplazamiento de la fase orgánica;
esta longitud se lo puede determinar mediante el parámetro Rf (relación de referentes)
distancia recorrida por el azúcar
Rf =
distancia recorrida por el disolvente
Para identificar un azúcar desconocido, se realiza la cromatografía junto a patrones
conocidos, y se comparan los valores de Rf utilizando diferentes mezclas líquidas. El azúcar
problema corresponde al patrón cuyos valores de Rf sean idénticos en todos los casos.

Azúcar Valor de Rf
Lactosa 0.22
Manosa 0.28
Galactosa 0.36
Glucosa 0.41
Fructuosa 0.46
Xilosa 0.52
[ CITATION Mac94 \l 2058 ]

6. PARTE EXPERIMENTAL:
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6.1. Equipos, Materiales y reactivos

Reactivos Materiales y Equipos
- Tinta - Matraz Erlenmeyer o Vaso de
- Alcohol precipitación.
- Agua - Papel Filtro
- Azúcar - Clip
- Zumo de Naranja - Varilla de Vidrio
- Zumo de Limón - Regla
- Lápiz
- Tijera
- Horno/Plancha

6.2. Procedimiento:
- Corta una tira de papel de manera que llegue hasta el fondo del recipiente.
- Coloca un punto de tinta(estándar) y gotas de solución de azúcar, extracto de jugos a 1.5 cm
del extremo de la tira de papel.
- Adiciona agua/alcohol 1:1 al erlenmeyer en cantidad tal que no vaya a rebasar el nivel del
punto de tinta en el papel.
- Introduce cuidadosamente el papel dentro del erlenmeyer procurando que no quede rozando
las paredes y sin que el punto de tinta quede sumergido como se indicó en el apartado
anterior.
- Observa y deja que el solvente ascienda arrastrando la muestra.
- Finalmente, seca al ambiente y una vez seco calienta en una plancha (horno: T superen los
150°C).

7. RESULTADOS:
- Determinar los Rf de cada azúcar y comparar con los datos bibliográficos.
8. DISCUCIÓN DE RESULTADOS:
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9. CONCLUSIONES:
- En base al objetivo.

10. CUESTIONARIO:
- Investigar la reacción de Maillard.
- ¿Cuál es la diferencia entre reacción de Maillard y caramelización?
Reacción de Maillard Caramelización
Glucosilación o glicación no enzimática Es la oxidación del azúcar
de proteínas. Es una pirólisis, en contraposición a una
Son necesarios un azúcar reductor reacción con aminoácidos.
(cetosa o aldosa) y un grupo amino
libre, proveniente de un aminoácido o
una proteína.

- Investigar los principales reactivos reveladores de azúcares en cromatografía de papel

y su principal característica química.

-Generalmente se utiliza como reactivo revelador yodo, el cual forma complejos

coloreados con los componentes orgánicos (con tonos amarillo-marrón), pero las
manchas desaparecen con el tiempo con lo que es conveniente señalar las manchas
aparecidas.

-Otro reactivo revelador bastante utilizado es el ácido sulfúrico, que reacciona con los
componentes orgánicos produciendo manchas negras.

-2,4 - dinitrofenilhidracina (para aldehidos y cetonas).

-Verde de bromocresol (para ácidos carboxílicos).

-Paradimetil aminobenzaldehido (para aminas).

-Ninhidrina (para aminoácidos).

11. BIBLIOGRAFÍA:

Macarulla, J., & Goñi, F. (1994). Bioquímica humana. Barcelona: Editorial Reverté.

Universidad Autónoma de México . (2007). Técnicas cromatográficas. México: Universidad

Autónoma de México .
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Campbell; Farrell. 2010.“Bioquímica”. 6a Ed. Cengage Learning Editores S. A.