AO DE LA DIVERSIFICACIN PRODUCTIVA Y DEL

FORTALECIMIENTODE LA EDUCACIN

ESCUELA ACADMICO PROFESIONAL DE FARMACIA Y BIOQUMICA

QUMICA ORGNICA 2

PRCTICA N 3

IDENTIFICACIN DE CARBOHIDRATOS POR MTODOS

CROMATOGRFICOS

Alumno:

Chepe Cueva, Freddy Jesus M.

Docente:

Q.F. Daniel aez.

Seccin:

FB4M1

LIMA - PERU

2016
I. INTRODUCCION

La cromatografa es una tcnica de separacin extraordinariamente verstil que

presenta distintas variantes. En toda separacin cromatogrfica hay dos fases
(slida, lquida o gas) una mvil y otra estacionaria, que se mueven una con respecto
de la otra manteniendo un contacto ntimo. La muestra se introduce en la fase mvil
y los componentes dela muestra se distribuyen entre la fase estacionaria y la mvil.
Los componentes de la mezcla a separar invierten un tiempo diferente en recorrer
cada una de las fases, con lo que se produce la separacin. Si un componente est
la mayor parte del tiempo en la fase mvil el producto se mueve rpidamente,
mientras que si se encuentra la mayor parte en la fase estacionaria, el producto
queda retenido y su salida es mucho ms lenta

CROMATOGRAFA EN CAPA FINA

Las capas finas preparadas sobre vidrio se denominan cromatoplacas o Placas

simplemente. Se usan dos tipos de capas: capa compacta que se adhiere a la placa
de vidrio por medio de un agente aglomerante incorporado al adsorbente o por las
cualidades adherentes del propio material, y capa suelta. Estas ltimas slo se
emplean en la determinacin de la actividad de los adsorbentes y en uno o dos casos
especiales.
II. MARCO TEORICO

La cromatografa en capa fina presenta una serie de ventajas frente a otros mtodos
cromatogrficos (en columna, en papel, en fase gaseosa,...) ya que el utillaje que
precisa es ms simple. El tiempo que se necesita para conseguir las separaciones
es mucho menor y la separacin es generalmente mejor. Pueden usarse reveladores
corrosivos, que sobre papel destruiran el cromatograma. El mtodo es simple y los
resultados son fcilmente reproducibles, lo que hace que sea un mtodo adecuado
para fines analticos.

Al realizar la eleccin del adsorbente se debe tener en cuenta el tamao de las

partculas del adsorbente, cuanto ms finamente dividido est mayor ser su
adhesin al soporte, aunque tambin se le puede aadir un adherente (yeso).
Algunos de los adsorventes ms utilizados son: Celulosa, Almidn y Azucares.

La fase estacionaria puede ser un slido o un lquido que se queda fijo en la misma
posicin. La faso mvil puede ser un lquido o un gas que corre a travs de una
superficie y de la fase estacionaria. Las sustancias que estn en un sistema de
cromatografa interaccionan tanto con la fase estacionaria como con las fases
mviles. La naturaleza de estas interacciones depende de las propiedades delas
sustancias as como tambin de la composicin de la fase estacionaria.

La rapidez con que viaja una sustancia a travs del sistema de cromatografa
depende directamente de la interaccin relativa entre las sustancias y las fases mvil
y estacionaria. En el caso de una mezcla, si cada componente interacciona diferente
con la faso mvil y la fase estacionaria, cada uno de ellos se mover diferente.

El desarrollo de los cromatogramas en capa fina se realiza normalmente por el

mtodo ascendente, esto es, al permitir que un eluyente ascienda por una placa casi
en vertical, por la accin de la capilaridad. La cromatografa se realiza en una cubeta.
Para conseguir la mxima saturacin posible de la atmsfera de la cmara, las
paredes se tapizan con papel impregnado del eluyente.

Generalmente el eluyente se introduce en la cmara una hora antes del desarrollo,

para permitir la saturacin de la atmsfera. El tiempo de desarrollo, por lo general,
no llega a los 30 minutos.

La mejor posicin de desarrollo para un componente es el punto medio entre el

origen y el frente del eluyente, ya que permite separar las impurezas que se
desplazan con mayor y menor velocidad. El frente del eluyente nunca debe llegar a
tocar el borde de la placa.

CONCEPTO DE R.F.

Rf es el registro y se define como: distancia que recorre la muestra desde el punto

de aplicacin / distancia que recorre el disolvente hasta el frente del eluyente.5, 6

El valor de Rf depende de las condiciones en las cuales se corre la muestra (tipo de

adsorbente, eluyente, as como las condiciones de la placa, temperatura, vapor de
saturacin, etc.). Tiene una reproducibilidad de 20%, por lo que es mejor correr
duplicados de la misma placa.

III. MATERIALES Y REACTIVOS

3.1 OBJETIVOS
Aplicar la cromatografa en la identificacin de carbohidratos.
Realizar los clculos del RF con las muestras de glucosa y almidn.

3.2 MATERIALES Y REACTIVOS

Materiales:

Matraz de 250mL
Pipetas de 5mL y 10mL
Centrfuga
Esptula
Backer 250mL
Pro pipeta
Bagueta
Balanza analtica
Cuba cromatografica pequea
Asperjador con bombilla

Reactivos:
Acido Sulfrico al 5%
Carbonato de Calcio
Cromatofolio 20 x20 cm
Butanol
Acido actico
Piridina
Acetato de Etilo
 Sacarosa Q.P
Almidn Q.P
Antrona
Lugol
Etanol
Revelador de difenilamina
Revelador acido 3.5-dinitrosalisilico

IV. PROCEDIMIENTO

Hidrlisis:

Se peso 1 g de almidn. Se puso en el tubo de ensayo .

A ambos se aado 10 mL de cido sulfrico al 5 % y se coloc a bao maria

por 20 minutos.

Se neutralizo con de carbonato de calcio, una vez q este neutralizada se

llevo a centrifugar y filtrara identificar los azucares por cromatografa en
capa fina.
 Luego de neutralizar separar en 2 tubos en el mismo volumen para
centrifugar.

Cromatografa

Se Prepar las placas cromatografas despus de centrifugar las muestras,

en el cual se sembr las placas patrn de glucosa ms glucosa muestra y en
otra placa la glucosa patrn y al almidn.

Lo ponemos en la cuba con las siguientes proporciones n-butanol-agua-cido

actico (1,2:0,2:0,8). Luego dejar secar las placas y llevarlos al revelador.
 La placa con las muestra de glucosa se revelo con antrona y la placa con la
nuestra de glucosa patrn y el almidn se revelo con difenilamina. Para que
se note ms lo llevamos a calentar para observar el recorrido.

V. RESULTADOS

REVELADOR DE DIFENILAMINA

3.8
Muestra problema del almidn: RfA = = = 0.76
5

2
Muestra de glucosa: RfB = = 5 = 0.4

REACCION

INTERPRETACION

La prctica de laboratorio tuvo como fin identificar un monosacrido en este caso la

glucosa producto de un polisacrido que es el almidn, para poder obtener la glucosa
se someti al almidn a una reaccin de hidrolisis, utilizando cido sulfrico ms calor ,
los cuales producirn la ruptura de enlaces que forman las glucosas en el compuesto, y
para identificar que la reaccin se ha llevado a cabo se aadi lugol a la muestra, el cual
la colorea si hay presencia de almidn en ella, pero si el almidn en la muestra ha sufrido
una reaccin de hidrolisis ahora le nuevo compuesto ser la glucosa el cual no reacciona
con el lugol. Luego al azcar obtenido se le realiz el anlisis cromatogrfico y luego fue
revelado con antrona y difenilamina.

Del mismo modo pasa con la Sacarosa: realizamos una reaccin de hidrlisis, tenemos
que descomponer la sacarosa, en primer lugar pesamos la sacarosa y aadimos cido
sulfrico al 5% y lo llevamos a bao mara por 20 minutos lo cual hace que la mezcla
se solubilice ms rpido, luego se llev a enfriar y neutralizamos con carbonato de calcio
(este reactivo libera oxigeno) y finalmente centrifugamos para obtener por separacin la
glucosa de la cual esa muestra obtenida se le realiz el anlisis cromatogrfico y luego
fue revelado con antrona y difenilamina.
VI. CONCLUSIONES
Es una tcnica de separacin simple debido a que durante el proceso slo se
debe preparar el papel cromatogrfico, aplicar la muestra y finalmente el
revelado.
No es recomendable ubicar las muestras muy cerca una de otra, ya que se puede
mezclar las muestras y nos dificultara su identificacin, es por eso que debe
tener un espacio mnimo de separacin.
La cromatografa se da cuando en el proceso existe una interaccin entre la fase
mvil, la fase estacionaria, y la estructura del compuesto (proceso de separacin
de la muestra), y con la disponibilidad de estndares (sustancias puras) para
realizar la respectiva comparacin con nuestra muestra.

VII. CUESTIONARIO
1. Indique otros reveladores para identificar azcares por cromatografa en
capa Fina.
Luz UV: si la sustancia absorbe luz ultravioleta, se puede usar una fase
estacionaria impregnada con un indicador fluorescente (F254 F366), el nmero
que aparece como subndice nos indica la longitud de onda de excitacin del
indicador utilizado.
La introduccin de la placa en vapores de yodo.
El roco con una solucin de agua/H2SO4 1:1 (dentro de un compartimiento
especialmente protegido y bajo una campana de extraccin de gases).

2. Qu otros mtodos cromatogrficos de aplican para identificar

carbohidratos. De ejemplos (Adjunte cromatogramas, grficos o figuras)
Cromatografa lquida. La fase mvil es un disolvente o mezcla de
disolventes y la fase
estacionaria un slido
que interacta con las
sustancias que se
desea separar
(cromatografa lquido-
slido), o bien un lquido
inmiscible con la fase
mvil, depositado en la
 superficie de un slido (cromatografa lquido-liquido).

Cromatografa de gases. En este caso la fase mvil es un gas inerte (helio

o nitrgeno) y la fase estacionaria es un slido (cromatografa gas-slido) o
un lquido sostenido por un slido inerte (cromatografa gas-lquido).

Cromatografa en papel. La cromatografa en papel es un proceso muy

utilizado en los laboratorios para realizar anlisis cualitativos ya que pese a
no ser una tcnica potente no requiere de ningn tipo de equipamiento. La
fase estacionaria est constituida simplemente por una tira de papel de filtro.

Cromatografa de permeacin en gel. La cromatografa de permeacin en

gel, tambin conocida como cromatografa de exclusin es una variante de
la CLAE que consiste en una columna cromatogrfica empacada de tal
manera que las partculas de dicho empacamiento tienen diferentes tamaos
de poros o de redes de poros con el fin de que las molculas de soluto sean
retenidas o excluidas basndose en su forma y tamao y no en el peso
molecular.
VIII. BIBLIOGRAFIA

http://es.scribd.com/doc/23351629/Separacion-de-Carbohidratos-Por-
Cromatografia-en-Capa-Fina#scribd. Tema: separacin de
carbohidratos

http://depa.fquim.unam.mx/amyd/archivero/M.Cromatogrficos_6700.p
df

Harold Hart. Leslie E. Craine. Qumica orgnica. Dcimo segunda, ed.

Madrid. 2000.

Bloomfield, Molly M. Qumica de los Organismos vivos. 1, ed. Mxico

D.F. Limusa. 1992

http://www.textoscientificos.com/quimica/cromatografia/capa-fina

http://biblioteca.uns.edu.pe/saladocentes/archivoz/curzoz/cromatograf
%EDa.pdf