PARTE EXPERIMENTAL

FUNDAMENTO

Los aminoácidos reaccionan con la ninhidrina dando un color azul violáceo. En esta
reacción la ninhidrina es reducida y el aminoácido es desaminado y descarboxilado.

MATERIAL

 Tubos de ensayo
 Pipetas
 Gradillas
 Baño maría

Solución de aminoácidos 0.1 M (glicina, metionina, cisteína, histidina, arginina,

tirosina, triptófano y cistina) Caseína 1% Ovoalbúmina 0.1% (o Clara de Huevo 5%)
Ninhidrina 0.1% en etanol de 95%

METODO DE TRABAJO

Prepare el siguiente sistema de tubos:

Mezclar mediante agitación suave y llevar a baño de agua hirviente por 10 minutos.
Retire y enfríe.

DATOS EXPERIMENTALES
Anote sus observaciones. Indique si la reacción es positiva o negativa según
corresponda.

  Reacción
Caseína  POSITIVO
Ovoalbúmina  POSITIVO
Agua destilada  NEGATIVO

RESULTADOS:

Figura N°. Reacción positiva con anihidrina

 La reacción con la anhidrita para la caseína y ovoalbúmina son positivas
dándose una coloración violeta azulado como se muestra en la siguiente figura,
(esto después de un baño maría)

DISCUSION:

La ninhidrina (hidrato de tricetohidrindeno) reacciona con aminoácidos que tengan el

grupo amino libre, dando lugar a la formación de amoniaco y anhídrido carbónico, con
reducción del reactivo (ninhidrina) a hidrindantina (Figura 1).

La hidrindantina reacciona a su vez con el amoniaco y otra molécula de ninhidrina para

dar un compuesto de adición doble que presenta una coloración azul-púrpura, con la
excepción de la prolina que da una coloración amarillenta (recordar que en la prolina el
grupo amino está sustituido). El derivado coloreado presenta máximo de absorción en
torno a 570 nm. La reacción se lleva a cabo en caliente y a valores de pH comprendidos
entre 4 y 8.

La técnica es muy sensible, por lo que es ideal para detectar concentraciones bajas de
aminoácidos, utilizándose para revelar su presencia en cromatogramas y fracciones
procedentes de otras técnicas de separación. La presencia de aldehídos resultantes de la
degradación de la ninhidrina por reacción con los aminoácidos modifica, bajo ciertas
condiciones, el color formado, lo que sirve para identificar el tipo de aminoácido.
[ CITATION Jor \l 3082 ]

Figura N1. REACCIÓN CON LA NIHIDRINA

CONCLUSIONES:

 Del experimento podemos concluir, que la caseína y la albumina

EXPERIMENTO N° 2. REACCION XANTOPROTEICA

FUNDAMENTO

Es una prueba positiva para aminoácidos aromáticos (tirosina, fenilalanina y triptófano).

Se basa en la nitración del núcleo de benceno (anillo aromático) dando derivados
amarillos, cuando se calientan con ácido nítrico concentrado; estos derivados se tornan
anaranjados por adición de NaOH (se forman sales).

MATERIAL:

 Tubos de ensayo
 Pipetas
 Gradillas
 Baño maría

REACTIVOS:

 Solución de aminoácidos 0.1 M (glicina, tirosina y triptófano)

 Ovoalbúmina 0.1% (o Clara de Huevo 5%)
 Caseína 1%
 Ácido nítrico concentrado
 NaOH 1 N

METODO DE TRABAJO:

Prepare el siguiente sistema de tubos:

Agite suavemente y lleve a baño maría por 10 minutos. Retire y enfríe. Adicione 1.0 ml
de NaOH.

DATOS EXPERIMENTALES: Anote sus observaciones.

Indique si la reacción es positiva o negativa según corresponda.

  Reacción
Caseína  POSITIVO
Ovoalbúmina  POSITIVO
Agua destilada  NEGATIVO

RESULTADOS:

 Las reacciones positivas se dieron en la caseína y la ovoalbúmina, ya que ambas

presentaron una coloración amarillo rojizo, como se observa en las siguientes
imágenes, caso que no ocurre con el agua destilada porque no se detecta
aminoácidos.

OVOALBUMINA

CASEINA

REACCION POSITIVA: ALBUMINA

DISCUSION:

Los resultados básicamente se dan por que se detecta la presencia del grupo bencénico,
tanto en aminoácidos, como en proteínas y péptidos. El ácido nítrico actúa sobre el
anillo bencénico de los aminoácidos que lo poseen, formando nitrocompuestos
fenólicos.

Los aminoácidos que detecta son principalmente tirosina y triptófano. [ CITATION

Gil19 \l 3082 ]

La prueba da resultado positivo en aquellas proteínas con aminoácidos portadores de

grupos aromáticos, si una vez realizada la prueba se neutraliza con un álcali, se torna
color amarillo oscuro. Esta reacción se debe a la formación de un compuesto aromático
nitrado de color amarillo, cuando las proteínas son tratadas con ácido nítrico
concentrado. Generalmente, se forma primero un precipitado blanco que cambia a
amarillo al calentarlo. El color se empieza a tornarse anaranjado cuando la solución se
vuelve básica. La prueba da resultado positivo en aquellas proteínas con aminoácidos
portadores de grupos bencénicos, tirosina, fenilalanina y triptófano .[ CITATION Quí18 \l 3082 ]

Grafico N°. Reacción de la fenilalanina con el ácido nítrico

CONCLUSIONES:
 Del experimento podemos concluir que tanto en la caseína como la ovoalbúmina
se encuentran aminoácidos con anillos bencénicos, dando positivo a la prueba
xantoproteica.
 La coloración que se da por la nitración es amarillenta y al colocarle una
solución básica se torna anaranjada, tengamos en cuenta que la intensidad del
color puede ser de acuerdo a la concentración de aminoácidos sin embargo la
prueba xantoproteica solo es considerada de identificación es decir cualitativa y
si se quiere profundizar la concentración se puede realizar la prueba de biuret.