UNIVERSIDAD DE LAS FUERZAS ARMADAS –ESPE

DEPARTAMENTO DE CIENCIAS DE LA VIDA Y LA AGRICULTURA

INGENIERÍA EN BIOTECNOLOGÍA
NOMBRES: Stephanie Chávez
NRC: 2976
ASIGNATURA: Microbiología II
FECHA: 4 de enero de 2021
DOCENTE: ALMA ROSEL KOCH KAISER 

LABORATORIO N° 3
1. TÍTULO: Aislamiento e identificación de Streptococcus.
2. RESUMEN:
En la siguiente practica de laboratorio se realiza el aislamiento y la identificación de
Streptococcus las cuales son bacterias Gram positivas, anaerobias facultativas, inmóviles y
con forma esférica o de coco se agrupan formando cadenas de dos bacterias, su
diferenciación es más complicada a partir de las cepas clínicas ya sea por su determinación
antigénica mediante la clasificación serológica de Lancefield o por su capacidad hemolítica
o capacidad de formar halos de lisis en los medios de cultivo de agar sangre.
Estas bacterias son consideradas como patógenos oportunistas y son causantes de
enfermedades e infecciones, se procedió a tomar muestras de la faringe de un paciente con
un hisopo estéril, se sembró en medios de cultivo como el agar sangre donde se puede
identificar diferentes tipos de hemolisis (α y β), en medio Mac Conkey, en el agar chocolate
y TBS se observó la presencia de Streptococcus mediante una tinción Gram y después al
usar un antibiótico denominado optoquina bacitracina obteniendo hemolisis de tipo alfa y
se aplicó el CAMP Test para las que produjeron dicha hemolisis , se realizaron pruebas
bioquímicas como la catalasa , también se realizaron pruebas para Enterococcus como la
catalasa, la bilis esculina.
Palabras clave: anaerobias facultativas, antigénica, serológica.
3. INTRODUCCION
 ANTECEDENTES

La primera descripción reconocida de los Streptococcus fue realizada por Theodor

Billroth en 1874 el cual describió pequeños organismos aislados y organizados en duo o
también en cadenas de 4 a 20 o más, sin embargo, la primera caracterización de estos
Streptococcus Gram positivos fue dada por Louis Pasteur en 1879 el cual aisló la bacteria
del útero y muestras de sangre que sufrían fiebre puerperal la cual es una afectación
inflamatoria séptica como consecuencia de las modificaciones y heridas que en el aparato
genital se ocasionan por el embarazo y parto [ CITATION Car20 \l 3082 ].

El uso del medio de cultivo agar sangre para el estudio de Streptococcus fue propuesto
por Hugo Schottmuller en 1903, lo que se convirtió en un importante aporte para la
microbiología y para los métodos de diferenciación de este microorganismo, debido a que
en este medio se produce dos tipos de hemólisis además años más tarde en 1919 Brown
expuso tres clases de patrones hemolíticos que rodean una colonia en una placa de agar
sangre, estas fueron "Alfa", "Beta" y "Gamma"[ CITATION Jvo15 \l 3082 ].

 JUSTIFICACION

Los Streptococcus son responsables de una variedad de enfermedades y se atribuye

según su capacidad hemolítica se distinguen los siguientes tipos los alfa (α), que producen
una hemolisis incompleta y decoloración verdosa; los beta (β), que producen una lisis total
de los hematíes; y los gamma (γ) o no hemolíticos, en las personas son frecuentes las
infecciones por Streptococcus del grupo A, con una prevalencia aparentemente más alta en
climas templados, los del grupo B (Streptococcus agalactiae) causan una variedad de
infecciones ya sea a las vías urinarias, bacteriemia, gangrena, infección posparto,
neumonía, endocarditis, empiema, meningitis, etc. Y los del grupo D (Streptococcus bovis)
suelen causar: endocarditis, bacteriemia, infecciones del tracto urinario, osteomielitis y
enfermedad gastrointestinal [CITATION Ins18 \l 3082 ].

Muchos Streptococcus sintetizan factores de virulencia, entre ellos estreptolisinas,

DNAasas y hialuronidasas, que contribuyen a la destrucción de los tejidos y a la
diseminación de la infección, la resistencia de Streptococcus pneumoniae a los
antibióticos es un problema creciente y el desarrollo de cepas resistentes a penicilina se
da gradualmente esto se puede deber a mutaciones genéticas repetidas de la bacteria y por
presión selectiva por el uso indiscriminado de antibióticos [ CITATION Nan13 \l 3082 ].

4. OBJETIVOS
 OBJETIVO GENERAL

Aislar e identificar Streptococcus a partir de muestras de faringe

 OBJTIVO ESPECIFICO
- Sembrar en medios selectivos y diferenciales a partir de muestras de faringe.
- Identificar las especies de Streptococcus mediante pruebas bioquímicas.
- Determinar la sensibilidad de la bacteria a la optoquina en α-hemolisis y a la
bacitracina en β- hemolisis.
5. HIPOTESIS
Los Streptococcus α y β hemolíticos se encuentran en muestras de faringe.
 6. MARCO TEORICO
Streptococcus pertenece a la familia Streptococcaceae estas bacterias en los humanos se
encuentran en la boca, piel, tracto genitourinario, intestinal y respiratorio y en el caso de
animales como: mamíferos bovinos, ovinos, caprinos, cánidos, felinos, equinos, roedores,
aves y peces, los Streptococcus pueden sobrevivir durante una o más semanas en polvo de
superficies y en alimentos, el Streptococcus agalactiae puede sobrevivir en leche a -20ºC y
en pescado a -70ºC [ CITATION Tim15 \l 3082 ].

La transmisión de los Streptococcus se puede producir por aerosoles, por contacto

dérmico o por mucosa, por contaminación de heridas, lesiones o mordeduras al manipular
pacientes, animales o materiales contaminados como por ejemplo durante el manejo y
preparación de peces infectados con Streptococcus iniae. También se puede producir la
transmisión por la ingestión de alimentos contaminados, principalmente lácteos y cárnicos,
la transmisión entre los animales y el hombre (zoonosis) suele ser poco frecuente o de poca
importancia, porque el agente patógeno en unos y otros pertenece a distintas especies o a
distinta cepa dentro de la misma especie y su identificación por métodos convencionales es
difícil, La clasificación serológica de Lancefield se basa en la identificación de los
antígenos presentes en la pared y la cápsula bacteriana [ CITATION Cen07 \l 3082 ].

 Streptococcus A o GAS: este tipo de bacteria produce infecciones autoinmunes,

fiebre reumática y glomerulonefritis aguda, un ejemplo es Streptococcus. pyogenes
que presenta hemólisis beta y causa faringitis. 

 Streptococcus B o GBS: también conocidos como Streptococcus agalactiae, son

cocos de 0.6 a 1.2 µm agrupados en cadenas cortas, se encuentran en el tracto
gastrointestinal y genitourinario de mujeres sanas. Algunas infecciones producidas
por este grupo son: osteomielitis, endocarditis, infecciones urinarias y dérmicas. 
 Streptococcus C: contiene a Streptococcus. zooepidemicus, Streptococcus. equi y
Streptococcus equimidis, producen beta hemólisis, causan infecciones
principalmente en animales, como faringitis, endocarditis, meningitis, neumonía y
celulitis. 
 Streptococcus F: contiene a Streptococcus anginosus responsable de causar
endocarditis, abscesos en el cerebro, boca y mandíbula.
 Streptococcus G: se caracterizan por producir hemólisis beta y ser causantes de
faringitis, endocarditis, bacteriemia y peritonitis [ CITATION Lar193 \l 3082 ].

Dentro de las pruebas bioquímicas para la identificación, luego de determinar que se

trata de un coco Gram positivo, por la prueba de la catalasa, después de determinar que se
trata de un coco Gram positivo catalasa negativo, debemos proceder a observar el efecto
que tiene la cepa sobre el agar sangre (hemólisis) y así podemos clasificar este grupo de
gérmenes [ CITATION Nan13 \l 3082 ]:

 ß hemolíticos: son aquellos que producen una hemólisis total de los glóbulos rojos,
observándose como un halo transparente alrededor de las colonias.
 α hemolíticos: son aquellos que producen hemólisis parcial, la cual se observa
como un halo con tonalidad verdosa alrededor de las colonias
 Gamma hemolíticos: son aquellos que no producen hemólisis sobre el agar sangre.

Las pruebas usadas son las siguientes:

 Sensibilidad a la bacitracina: Separar el Streptococcus pyogenes de los demás

Streptococcus beta hemolíticos, esta bacteria es sensible a bajas concentraciones de
Bacitracina (discos conteniendo 0,04U). También existe un 5% de cepas de
Streptococcus agalactiae que son sensibles a la bacitracina, se realiza sembrando un
gran inóculo, tomado con asa bacteriológica de un cultivo puro, se estría sobre una
placa de agar sangre en varias direcciones, luego se coloca el disco de Bacitracina y
se incuba 18- 24 horas a 37º, la aparición de cualquier diámetro de halo de
inhibición de crecimiento alrededor del disco se considera prueba positiva
[ CITATION Ver02 \l 3082 ]
 Sensibilidad a la optoquina: Diferenciar Streptococcus pneumoniae de otros
Streptococcus α-hemolíticos y se basa en la sensibilidad de Streptococcus
pneumoniae a una concentración menor o igual a 5µg/ml de hidroxicuprina
(optoquina), se debe estriar un cuadrante de una placa de agar sangre en varias
direcciones con una suspensión Mc Farland 0,5 y colocar luego un disco de
optoquina en el centro del área estriada finalmente incubar 18-24 horas a 37ºC, si
los halos de inhibición mayores de 15mm son característicos de Streptococcus
pneumoniae [ CITATION Ver02 \l 3082 ]
 Prueba de Camp: Separar Streptococcus agalactiae de los demás Streptococcus ß-
hemolíticos y se basa en que los Streptococcus del grupo B producen un factor
llamado CAMP (factor de monofosfato de adenina cíclica) que aumenta la zona de
hemólisis producida por un Staphylococcus productor de ßlisina, la prueba positiva
se evidencia por la presencia de una zona de potenciación del hemólisis en forma de
puntas de flecha en el lugar donde se contactan las dos estrías [ CITATION Lar193 \l
3082 ].
 Bilis esculina: Separar los Streptococcus del grupo D de los demás grupos, se basa
en la capacidad de los Streptococcus del grupo D de crecer en un medio de cultivo
que contiene un 40% de bilis y de hidrolizar la esculina a esculetina, la cual se
combina con el citrato ferroso que posee el medio, dando un complejo de color
negro[ CITATION Ver02 \l 3082 ].
 Prueba de tolerancia a la sal: Separar los enterococcus, capaces de crecer en
caldo salado, de los demás estreptococos del grupo D y se basa en la capacidad de
 los enterococcus de crecer en una concentración de 6,5% de NaCl, se trata de un
medio de cultivo líquido que contiene además de NaCl, glucosa y un indicador de
pH: púrpura de bromocresol [ CITATION Ver02 \l 3082 ].

7. MATERIALES Y METODOS
Al tener ya muestras tomadas de la faringe a horas de la mañana se prosiguió a
sembrar en diferentes medios de cultivo como en el agar MacConkey, agar sangre y
agar chocolate, TBS realizando estriados en diferentes sentidos después incubar a 37 ℃
durante 24 h los medios de cultivo , después se pasó a determinar si existe hemolisis y
si crecieron las colonias bacterianas igual en los medios de TBS, después se realizó una
tinción Gram para poder identificar las bacterias a estudiar, la muestra se la extendió
sobre un portaobjetos y se la dejo secar, se fijó con alcohol y se aplicó el tinte violeta de
genciana sobre el portaobjetos se lavó y se aplicó un fijador que es el lugol, después se
lavó de nuevo con alcohol y acetona y finalmente se aplicó la tinción de safranina o
fucsina, se visualizó el tipo de bacterias
Se realizó la prueba de la catalasa para verificar que es negativa, posteriormente se
realiza el cultivo del medio para la prueba de antibióticos con la optoquina y bacitracina
sembrando en 3 direcciones diferentes y ubicando los discos sobre el estriado, por otro
lado, se realizó el test de camp con ayuda de Staphylococcus aureus haciendo una línea
larga en el medio de cultivo y después se realizan las líneas más pequeñas en dirección
contraria, pero con Streptococcus.
Las colonias que presentaban hemolisis se utilizan para inocular los tubos de TSB,
etiquetar los tubos con hemolisis alpha y beta, incubar a 37℃ durante 24 horas, en otra
etapa se realiza tinción gram de los aislados y se examina con aceite de inmersión , para
las inoculaciones de tipo beta etiquetar una placa de agar sangre y un tubo de hipurato
de sodio caldo , en el medio de cultivo sembrar el aislado o desconocido en forma de
estrías y después una línea de Staphylococcus aureus descendida perpendicularmente ,
manteniendo una distancia de separación de 1 cm, con la ayuda de una pinza o
dispensador colocar el disco de bacitracina y un disco de SXT presionar ligeramente
los discos , después se inoculo un tubo de caldo hipurato para cada aislado, incubo las
placas de agar sangre a 37℃ durante 24 horas y los tubos a 35℃ .
8. RESULTADOS
 Obtención de Streptococcus en diferentes medios de cultivo a partir de
muestras de faringe

Agar Mac Conkey Agar sangre Agar Chocolate

En este tipo de medio de Se evidencia el desarrollo Se evidencia el desarrollo

cultivo no existe de hemolisis y formación de hemolisis pero en
crecimiento de de colonias pequeñas y menor proporción,
Streptococcus, resultados translucidas. colonias poco visibles.
negativos

Tabla 1: crecimiento de Streptococcus en diferentes medios de cultivo

 Prueba de tinción Gram de las colonias con hemolisis alfa y beta

obtenidas del agar sangre.

Figura 1: Tinción Gram, cadena larga de cocos

  Prueba de catalasa para verificar el género:

Figura 2: reaccion catalasa negativa

Con las colonias obtenidas del agar sangre se logra evidenciar que no existe la producción
de burbujas por lo tanto es catalasa negativa lo que indica que se trata de Streptococcus

 Prueba de optoquina

Prueba de optoquina Prueba de bacitracina

En la muestra se evidencia con el disco de En la muestra se evidencia con el

optoquina la formación de un halo de hemolisis
de tipo alfa de 21 mm de tamaño, indicando que
se trata de un Streptococcus pneumonae.
Test de camp
disco de bacitracina la formación de
un halo de hemolisis de tipo alfa de
tamaño menor a 14 mm, indicando
que se trata de un Streptococcus
pneumonae.
Bilis esculina

Bacterias con hemolisis alfa, no se evidencio la Esta prueba es exclusiva para

 formacion de las puntas en el medio de cultivo determinar la presencia de un
dando el test de camp negativo ocasionada por enterococcus , en la muestra se
Staphylococcus aureus. evidencia que no existe cambio de
coloracion a un tono negro y obscuro
lo que resulta una prueba negativa y
que se trata de un Streptococcus.
Prueba de sales 6,5 % de NaCl
Se puede verificar que el tubo
izquierdo que posee la muestra no
presencio desarrollo ni crecimiento
por lo tanto dio negativo para el aCl
al 6,5%;

9. DISCUSION
Las bacterias fueron obtenidas de la faringe con ayuda de un hisopo las cuales fueron
sembradas en diferentes medios e cultivo para su desarrollo y crecimiento, al ser inoculadas
en el agar Mac Conkey no se evidencio crecimiento después de la incubación debido a que
las bacterias definidas en este caso como Streptoccocus son bacilos Gram positivas además
el cristal violeta y las sales biliares del medio inhiben el crecimiento de este tipo de
microorganismo [ CITATION Min03 \l 3082 ]. Por otro lado, en el medio de cultivo agar sangre
existe el crecimiento de colonias bacterianas se identificó un halo transparente alrededor de
las colonias donde los glóbulos rojos han sido completamente rotos o haber sufrido
hemolisis, este medio nutritivo permite el crecimiento de bacterias patógenas que tienen
alfa’ hemolisina degradando la mioglobina del cultivo, y al ser bacteria anaerobia
facultativa de crecimiento en ausencia de oxígeno se confirma que es un Streptococcus
pneumonae[ CITATION Gon00 \l 3082 ]. En el tercer medio que es agar de chocolate se
evidencia el crecimiento de colonias, desarrollo de hemolisis, pero en menor proporción
son poco visibles, el medio contiene nutrientes nitrogenados en forma de caseína y
peptonas que neutralizan los ácidos grasos permitiendo el crecimiento de ciertas bacterias
como la Haemophilus spp [ CITATION Ana19 \l 3082 ].

Para todas las muestras tomadas de la faringe se realizó primer la prueba de la catalasa
para separar entre los géneros Staphylococcus y Streptococcus con Enterococcus, al no
existir desprendimiento de burbujas no existe la descomposición del H2O2 por lo tanto este
tipo de bacterias no es capaz efectuar esta reacción siendo así una prueba catalasa negativa [
CITATION Ver02 \l 3082 ].
 Para la identificación de los géneros de Streptococcus se realizó la prueba de la
optoquina en donde se evidencio la formación de un halo de hemolisis de tipo alfa de 21
mm confirmando según [ CITATION Alb14 \l 3082 ] que se trata de un Streptococcus
pneumonae debido a que es una bacteria sensible al antibiótico por lo tanto igual se
confirme que no son sensibles a la bacitracina en Estreptococcus definiéndolos como
bacterias no sensibles a este antibiótico.
En la prueba de sales NaCl 6,5 % verifico este tipo de bacterias no crecen en esas
condiciones por lo tanto fue un resultado negativo para el género Streptococcus pneumonae
y viridans y afirmando nuevamente que te trata de un Streptococcus pneumonae según
[ CITATION Fau10 \l 3082 ], esta prueba no ser positiva nos lleva a los resultados que también
la bilis esculina es una prueba negativa no existio la hidrolisis de la esculina a esculetina la
cual se combina con el citrato ferroso que posee el medio y da el cambio de coloracion,
manteniendose en un color amarillento y translucido , no existe tolerancia a las sales y
carecen de desarrollo de colonias de bilis esculina.
los Streptococcus del grupo B producen una proteína extracelular difusible llamada “factor
CAMP” que actúa sinérgicamente con la ß-lisina de Staphylococcus aureus, potenciando la
lisis de los eritrocitos, al no tratarse de una bacteria del grupo B y se alfa hemoliticos no se
evidencio la flecha en el medio de cultivo, resultando negativo el análisis y confirmando
que se trata de un Staphylococcus pneumonae.
10. CONCLUSIONES
 Las muestras extraídas de la faringe se las cultivo en agar Mac Conkey, agar
sangre y chocolate en donde el crecimiento de colonias bacterianas con
hemolisis alfa se dio en el medio nutritivo agar sangre determinando la
presencia de Streptococcus.
 Se realizó la prueba de tinción Gram de las colonias obtenidas en el medio
de cultivo agar sangre, donde se presenció los cocos Gram positivos teñidos
por violeta de genciana.
 Las diferentes pruebas bioquímicas como la optoquina en donde se
evidencia un halo de 21mm lo cual nos indica una hemolisis de tipo alfa se
confirma la presencia del genero Streptococcus pneumonae y al no ser
sensibles a la bacitracina se presentan análisis negativos a este antibiótico.

Bibliografía
(CDC), C. f. (2007). Guideline for Isolation Isolation Precautions: Preventing Transmission
of Infectious Agents in Healthcare Settings . Center for disease control and
prevention.
Galiana, C. (24 de mayo de 2020). Streptococcus pyogenes resistente a la eritromicina.
Obtenido de https://blog.uchceu.es/odontologia/streptococcus-pyogenes-resistente-
 a-la-eritromicina/#:~:text=La%20primera%20descripci%C3%B3n%20reconocida
%20del,4%20a%2020%20o%20m%C3%A1s%C2%BB.
Nancy Torres, R. V. (Diciembre de 2013). Resistencia antibiótica de streptococcus
pneumoniae en portadores nasofaríngeos sanos de siete regiones del Perú.
Obtenido de http://www.scielo.org.pe/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S1726-
46342013000400006
Rader, M. (28 de diciembre de 2018). Streptococcus spp. Obtenido de
https://www.insst.es/documents/94886/353165/Streptococcus+spp+-+A
%C3%B1o+2019.pdf/0d0f069d-e46c-4596-a5ab-79a4221bcb30
Sejia, V. (2002). COCOS GRAM POSITIVOS: Aspectos prácticos. Barcelona: Higiene.edu.
Obtenido de http://www.higiene.edu.uy/cefa/Libro2002/Cap%2019.pdf
Siegrist, J. (2015). Streptococci- Overview of Detection, Identification, Differentiation and
Cultivation Techniques. Obtenido de https://www.sigmaaldrich.com/technical-
documents/articles/analytix/streptococci-overview.html
Timothy C. Barnett, J. N.-H. (2015). Streptococcal toxins: role in pathogenesis and
disease. Microbiology. Obtenido de
https://www.insst.es/documents/94886/353165/Streptococcus+spp+-+A
%C3%B1o+2019.pdf/0d0f069d-e46c-4596-a5ab-79a4221bcb30