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Resumen:
Con el trmino de bacilos Gram negativos no fermentadores (BNNF), se designa
a un heterogneo grupo de microorganismos bacterianos que comparten algunas
caractersticas muy generales. Estn ampliamente distribuidos en la naturaleza, se
los encuentra en el suelo, agua y plantas. Si bien este grupo incluye muchos gneros
presentamos en este acpite los que con mayor frecuencia se aislan en infecciones
asociadas a servicios de salud y que pueden ser identificados por los laboratorios
de tercer nivel.
Palabras claves: bacilos Gram Negativos No Fermentadores
Correspondencia
Elizabeth Torrico
eliza_torr64@hotmail.com
INTRODUCCIN
Son bacilos o cocobacilos Gram negativos, aerobios estrictos, que no fermentan
los hidratos de carbono, y lo utilizan por va oxidativa, sin formacin de gas.
Generalmente son oxidasa positiva, pueden ser inmviles o mviles, presentar
319
Taxonoma
Desde el punto de vista taxonmico la clasificacin de estos microorganismos es
muy compleja pertenecen al:
Dominio:
Bacteria (Eubacteria)
Philium:
Proteobacteria
Flavobacteria
Clase: Proteobacteria
Proteobacteria
Proteobacteria
Proteobacteria
Proteobacteria
Proteobacteria
Clase: Flavobacteria
320
Flavobacteria
Sphingobacteria
Gneros:
Pseudomonas
Acinetobacter
Stenotrophomonas
Burkholderia
Achromobacter
Alcaligenes
Flavobacterium
Chryseobacterium
Brevudimonas
Sphingomonas
Elizabethkingia
Shewanella
Acidovorans
Alrededor del 15% de los bacilos Gram negativos aislados de muestras clnicas
corresponde a bacilos no fermentadores y de este porcentaje, Pseudomonas
aeruginosa, Pseudomonas stutzeri, el complejo Acinetobacter baumanniicalcoaceticus, Acinetobacter lwoffii,
Stenotrophomonas maltophilia y
Burkholderia cepacia son las de mayor incidencia.El aislamiento de los otros
gneros son menos frecuentes por lo cual presentaremos slo a los gneros de
mayor aislamiento.
OBTENCIN DE LA MUESTRA
Estos microorganismos pueden ser aislados de:
Orina
Sangre
L.C.R (Lquido cefaloraquideo)
Secreciones de heridas, quemaduras, abscesos
Liquido pleural
321
Lavado bronquial
Catteres intravenosos y urinarios
Soluciones desinfectantes: jabones, agua destilada
Instrumental de uso mdico
Ambientes y equipos hospitalarios
Suelo, plantas, etc.
DIAGNSTICO BACTERIOLOGICO
La identificacin de bacilos Gram negativos no fermentadores (BNNF) representa
un desafo para los laboratorios, considerando que la mayora de las pruebas
bioqumicas corrientemente usadas para el diagnstico bacteriolgico resultan,
con frecuencia, poco tiles para estos grmenes.
En las ltimas dcadas se han descrito varios procedimientos para
identificar estos microorganismos mediante mtodos convencionales, con nuevas
pruebas bioqumicas, por ensayos de bacteriologa analtica, mediante procesos
que involucran al genoma bacteriano o con el empleo de sistemas diagnsticos
comerciales como: Oxi-FERM, API 20E, API 20 NE, NF-System, MINITEX,
Micro ID y R/B Enteria, entre otros.
Entre los mtodos convencionales revisados, se destacan el de Hugh
y Gilardi y el aportado por Silva, quienes seleccionaron un grupo de pruebas
bioqumicas claves que permiten la identificacin y clasificacin de estos
microorganismos.
AISLAMIENTO PRIMARIO
El aislamiento primario depende del tipo de muestra, pero los BNNF se
desarrollan bien en agar nutritivo, agar sangre y agar Mac Conkey (con algunas
excepciones)
Una vez obtenida la muestra se siembra en los medios anteriormente
mencionados, se incuba en estufa durante 18-24 horas a 35C, si no
se observa desarrollo, dejarlas por 18 horas adicionales a 30C o a
temperatura ambiente.
Hacer tincin de Gram de las colonias aisladas en medios primarios,
realizar prueba de catalasa y de oxidasa a partir de agar nutritivo o agar
322
sangre.
A partir de una sola colonia realizar siembra en medios diferenciales (TSI,
BHI caldo , UREA, CITRATO). Incubar durante 18-24 horas a 35C; si
no se observa viraje del indicador en el TSI (K/K), estaramos frente a
un microorganismo no fermentador por lo cual sembrar en batera de
azucares O/F de Hugs y Leifson O/F glucosa, lactosa, maltosa, xilosa,
manitol, sacarosa.
Interpretar las pruebas y utilizar flujograma de orientacin para
identificacin de BNNF.
Hacer pruebas adicionales reduccin de nitratos, cecimiento a 42C, bilis
esculina, prueba de colistin . ADH, ODC. LDC., etc para la identificar
especie en algunos gneros.
Para el diagnstico de los dos gneros de BNNF de mayor aislamiento en
nuestro medio, es necesario tener presente lo siguiente:
Si se observa al microscopio cocobacilos Gram negativos, oxidasa negativa
y son inmviles, debe sospecharse del gnero Acinetobacter.
Si se observa bacilos Gram negativos, oxidasa positiva, mviles, el
cultivo presenta pigmentacin amarillo verdosa, brillo nacarado y olor
caracterstico a uvas o mote se debe pensar en Pseudomonas aeruginosa.
GENERO Pseudomonas
INTRODUCCION
Caractersticas generales del grupo de Pseudomonas
Este gnero est constituido por bacilos Gram-negativos, rectos o ligeramente
curvos, no formadores de esporas, no encapsulados, siempre mviles con
flagelacin polar monotrica o lofotrica, oxidadan glucosa, son oxidasa positivas.
Se encuentran ampliamente distribuidas en la naturaleza, se pueden aislar
normalmente del suelo, aguas contaminadas, as como de plantas y animales,
comportndose como patgenos oportunistas.
En el hombre pueden causar infeccin de quemaduras, colonizar tracto
respiratorio, producir neumonas, se asla de pacientes con fibrosis qustica, puede
323
Taxonoma
Por estudios recientes realizado por Gilardi, se ha clasificado a este gnero en
base a la homologa del rRNA/DNA en varios grupos con 76 especies. Los
grupos ms frecuentemente aislados son:
324
Todas las especies de este grupo producen pigmentos solubles en agua que
fluorescen bajo luz ultravioleta (400nm)
Pseudomonas aeruginosa (ms frecuente)
Pseudomonas fluorescens
Pseudomonas putida
Pseudomonas luteola
Pseudomonas oryzihabtans
Sphingomonas paucimbilis
Balneatrix alpica
Massilia timonae
CDC grupos 0 -1, 0 -2
Pseudomonas aeruginosa
Representa un problema importante de salud en centros hospitalarios,
especialmente cuando se trata de pacientes con cncer o quemados. Una vez que
se establece la infeccin, el microorganismo produce una serie de compuestos
txicos que causan no slo dao tisular extenso, sino adicionalmente interfieren
con el funcionamiento del sistema inmune. Entre las protenas que intervienen
en la infeccin de Pseudomonas aeruginosa encontramos toxinas, como las
exotoxinas A y S, as como enzimas hidrolticas que degradan las membranas
y el tejido conjuntivo de diversos rganos. Esta situacin se ve agravada por
la dificultad para tratar las infecciones por P. aeruginosa, ya que esta bacteria
presenta una alta resistencia natural a distintos antibiticos y a desinfectantes.
325
Cultivo
Las muestras se cultivan en agar sangre, Mac Conkey o cualquier otro medio
diferencial, no fermenta la lactosa siendo fcil su diferenciacin de las bacterias
que si la fermentan. Pseudomonas aeruginosa produce un olor dulzn semejante
a jugo de uvas o de maz, algunas cepas producen hemlisis, forma colonias
redondas, lisas con frecuencia produce un pigmento azulado no fluorescente:
piocianina que difunde en el agar, tambin produce pioverdina pigmento que
confiere un color verdoso al agar, algunas producen pigmento rojo oscuro
piorrubina o negro piomelanina; las otras especies de pseudomonas no producen
piocianina
Ps. aeruginosa en
Agar nutritivo
326
Ps. aeruginosa en
Agar Mac Conkey
Ps. aeruginosa en
Agar Sangre
CARACTERISTICAS BIOQUIMICAS
TABLA 1 Caractersticas bioqumicas Genero Pseudomonas
Ps.
aeruginosa
Ps.
fluorescens
Ps.
putida
Ps.
stutzeri
+
+
Ox
K
K
A
A
+
+
+
+
+
+
+
+
+/-
-
-
1 polar
+
+
Ox
K
K
A
A
-
+
+
-
+
+
-
+
-
-
-
>1 polar
+
+
Ox
K
K
A
K
-
+
+
-
+
+
-
-
-
-
-
> 1 polar
+
+
Ox
K
A
A
A
+
+
+
+
+
+
1 polar
Catalasa
Oxidasa
O/F Glucosa
OF/ Lactosa
O/F Maltosa
O/F Xilosa
O/F Manitol
Piocianina
Pioverdina
Movilidad
Nitrato
ADH
Fluorescencia
Denitrificacin
Gelatina
NaCl 6,5%
Almidn
Colonias rugosas
N flagelos
Desarrollo a 42C
+
-
Prueba de Fermentacin de azucares (O/F)
Pseudomonas aeruginosa
327
Pseudomonas stutzeri
K= Alcalino
A= Acido
GENERO Stenotrophomonas
INTRODUCCION
Anteriormente perteneca al gnero Pseudomonas, posteriormente al gnero
Xanthomonas. Actualmente esta dentro del genero Stenotrophomonas.
Este gnero se encuentra ampliamente distribuido en la naturaleza, se
asla de humanos, alimentos y muchas fuentes ambientales; es un patgeno
oportunista en pacientes inmunocomprometidos y aquellos con tratamiento
antibiotecoterapico prolongado, es considerado como un patgeno nosocomial
emergente por su incremento desde los aos 70 a 90. Se aisla de muchos sitios
anatmicos como ser: secreciones respiratorias, orina, heridas de la piel, sangre, etc.
Taxonoma
Se describen dos especies:
Stenotrophomonas africana
Stenotrophomonas malthophilia
Stenotrophomonas maltophilia es un bacilo Gram negativo, no formador
de esporas, no encapsulado, oxidasa negativo, lisina decarboxilasa positivo,
mvil por flagelacin polar lofotrca, Indol negativo, no reduce nitratos, DNAsa
positivo, oxida glucosa y maltosa.
328
Las colonias en agar sangre son de color caf-grisceo o color lavanda (por
produccin de pigmentos solubles) adems de olor amoniacal.
En agar Mac Conkey las colonias son transparentes lactosa negativa.
Es genticamente resistente a muchos antibiticos, desarrolla mutaciones
rpidamente contra varios antibiticos.
CARACTERISTICAS BIOQUIMICAS
TABLA 2 Caractersticas bioqumicas Stenotrophomonas maltophilia
Pruebas Bioqumicas
Oxidasa
O/F glucosa
O/F maltosa
O/F lactosa
O/F xilosa
O/F manitol
Movilidad
N flagelos
Denitrificacin
Gelatina
DNAsa
Fluorescencia
Lactosa
Ureasa
Indol
Produccin de SH2
Orinitina decarboxilasa
Lisina decarboxilasa
Arginina dehidrolasa
Stenotrophomonas maltophilia
A (retardada)
A
K
V
K
+
> 2 polar
V+
+
+
-
329
Stenotropomonas maltophilia
GENERO Acinetobacter
INTRODUCCIN
Los miembros del gnero Acinetobacter han sufrido grandes cambios taxonmicos
a lo largo de la historia, lo cual ha impedido un estudio adecuado, es as que
hasta el ao 1986 slo se reconoca la especie Acinetobacter calcoaceticus
con las variedades anitratus y lwoffi. Posteriormente, los avances logrados en
los estudios genticos han permitido establecer la existencia de al menos 30
genoespecies de Acinetobacter, de los cuales solo 18 son nombradas el resto an
no tienen nombre.
Los miembros de este gnero estn ampliamente dispersos en la naturaleza
habitan en el agua y el suelo, tambin forman parte de la flora normal de la
piel humana (especialmente manos), orofaringe e intestino, en una pequea
proporcin de sujetos adultos; estos sitios suelen ser el reservorio de la bacteria
en hospitales y causar brotes en los que el germen se comporta como oportunista,
razn por la cual su aislamiento no debe ser menospreciada ya que es capaz de
causar infecciones de importancia clnica a nivel de tracto respiratorio inferior
(neumonas), producir infecciones del tracto urinario, infeccin de heridas en los
servicios de traumatologa, ciruga, causa bacteriemias, meningitis y septicemia.
La puerta de entrada del organismo son en general tubos endotraqueales, sondas,
catteres y otros cuerpos extraos.
Como se dijo anteriormente, es frecuente que las infecciones producidas
por estos microorganismos, aparezcan en forma de brotes, las unidades ms
330
Taxonoma:
331
- Acinetobacter junii
-6
- Acientobacter johnsonii
- Acinetobacter lwoffii
-9
- 10
- 11
- Acinetobacter radioresistens
- 13BJ/14TV
- 14BJ
- 15BJ
- 16
- 17
- 15TU
- Acinetobacter venetianus
- Acinetobacter ursingii
- Acinetobacter shindlen
- Acinetobacter bouwetii
- Acinetobacter towneri
- Acinetobacter tandoii
- Acinetobacter grimontii
- Acinetobacter tjernbergiae
- Acinetobacter generi
- Acinetobacter parvus
332
Acinetobacter en
Agar Mac Conkey
Acinetobacter en
Agar Sangre
CARACTERSTICAS BIOQUMICAS
TABLA 3. Caractersticas bioqumicas Genero Acinetobacter
Complejo
Acinetobacter
Acinetobacter
Prueba
A. baumannii
lwoffi
haemolyticus
calcoaceticus
Catalasa
Oxidasa
O/F glucosa
Ox
NR
Ox (v)
O/F lactosa
O/F maltosa
O/F manitol
O/F xilosa
Movilidad
Fluorescencia
Desnitrificacin
Hemlisis
Gelatina
333
Acinetobacter lwoffi
K= Alcalino
A= Acido
GENERO Burkholderia
INTRODUCCION
En 1992 fue definido como un nuevo gnero, separandose del gnero
Pseudomonas por estar estrechamente relacionado genticamente.
Este gnero se encuentra ampliamente distribuido en la naturaleza: agua,
suelo, plantas, frutas, verduras, la excepcin es Burkholderia cepacia que no se
cultiva a partir de muestras ambientales.
Causa infecciones nosocomiales, sobre todo en pacientes
inmunocomprometidos con infecciones urinarias, sondados, con endocarditis,
infecciones de heridas, infecciones respiratorias, especialmente en pacientes con
fibrosis qustica, con catteres intravenosos, con septicemia, etc.
Esta compuesto por bacilos Gram negativos, rectos o ligeramente curvos,
no formadores de esporas, no capsulados, aerobios, catalasa positiva, mviles
por uno o mas flagelos polares, excepto B. mallei, son oxidasa variables, por lo
general positivos, O/F glucosa oxidativo
334
TAXONOMA
Este gnero est compuesto por las siguientes especies:
Burkholderia pseudomallei
Burkholderia mallei
Burkholderia gladioli
Burkholderia picketti
335
CARACTERISTICAS BIOQUIMICAS
B. cepacia genov.I
B. pseudomallei
B. mallei
Catalasa
Oxidasa
+ (debil y lenta)
O/F glucosa
Ox
Ox
Ox
O/F maltosa
O/F lactosa
V (k)
O/F manitol
O/F xilosa
V(k)
Movilidad
N flagelos
>1 polar
>1 polar
Reduccin de NO3
Lisina decarboxilasa
Arginina dihidrolasa
Ornitina decarboxilasa
Desarrollo a 42C
Amarillo
Crema/tostado
Urea
Colonias rugosas
Polimixina B
Pigmento
336
V-
Burkholderia pseudomallei
K: Alcalino
A: Acido
337
Medio selectivo
TSI
LIA
MIO
UREA
CITRATO
K/K
K/A
A/A
Fermentador
Enterobacterias
No Fermentador
Oxidasa (-)
MOTILIDAD (-)
Acinetobacter spp
338
MOTALIDAD (+)
Stenotrophomonas spp
Oxidasa (+)
Pseudomonas spp
Burkolderia spp
Alcalgenes spp
Acromobacter spp
KIA
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