Efecto de la concentración del sustrato sobre la

velocidad de reacción.
Rosario Hernández Jessica Micaela º, Cruz Ocampo Ana Karen º, Avendaño Pérez Carmen Lizbeth, Rubén
Pérez Morales Rubén º.

Instituto tecnológico de Zacatepec. Ingeniería Bioquímica. Asignatura Cinética, Química y Biología.

Catedrática Dr. Wendy Hernández Díaz. Calzada tecnológica No. 27, C.P.62780, Zacatepec Hidalgo.

Resumen.

Las enzimas son catalizadores biológicos, en la mayoría de los casos de

naturaleza proteica. Una enzima, se une a un determinado sustrato para
dar un complejo enzima-sustrato, el cual se descompone para dar la
enzima libre y un producto. La mayoría de las reacciones biológicas
transcurren lentamente si no son catalizadas. Las enzimas catalizan
reacciones mediante la estabilización del estado de transición,
disminuyendo así la energía de activación, en consecuencia la velocidad
de la reacción aumenta y aunque el equilibrio de esas reacciones no
cambia, es alcanzado rápidamente.

Palabras claves. Catalizada, enzima, estabilidad, velocidad de

reacción, sustrato.

Introducción. enzima y los constituyentes

necesarios para que la reacción
La cinética enzimática es la rama
proceda.
de la enzimología que trata de
los factores que afectan a la Enzima invertasa.
velocidad de las reacciones
Es una enzima que cataliza
catalizadas por enzimas.
la hidrólisis de los terminales no
La actividad catalítica de una reductores β-d-fructofuranosílicos
enzima se determina midiendo la de los fructofuranósidos,
velocidad inicial de reacción, que rompiendo el enlace β-d-
es la pendiente de la curva de
progreso (curva del producto
formado frente al tiempo), en el
tiempo cero. La velocidad de una
reacción catalizada por una fructofuranosil.
enzima es como la cantidad de
sustrato consumido o la cantidad
de producto generado en la Se ha señalado, con el nombre
unidad de tiempo en una mezcla de Fig.1 Enzima Invertasa.
de reacción que contenga la
sacarosa. Esta enzima hidroliza añadido. Mientras que en las
la fructosa y la glucosa mediante reacciones catalizadas por
la siguiente reacción reversible: enzimas, generalmente se
obtiene una dependencia
Sacarosa ↔ Fructosa +
hiperbólica de la velocidad
Glucosa
respecto a la concentración de
Aplicación. sustrato, distinguiéndose 3
partes distintas en la curva. En la
La invertasa es una enzima muy
primera parte, a bajas
utilizada como sustituyente de la
concentraciones de sustrato, la
levadura en la repostería y la
velocidad es proporcional a la
alimentación animal. El uso más
concentración de sustrato, de tal
común de la invertasa en
manera que si se duplica la
alimentos azucarados se basa en
concentración de sustrato, se
la transformación lenta y parcial
duplica la velocidad (reacción de
de la sacarosa en azúcar
primer orden). La segunda parte
invertido (glucosa + fructosa).
de la curva, a concentraciones
Velocidad de reacción. intermedias de sustrato, la
velocidad se incrementa menos
La velocidad de reacción se que en la primera parte con el
define como el cambio en la incremento de la concentración,
concentración de uno de los iniciando alrededor de la ½ de la
reactivos o productos, en un Vmax. La última parte de la
intervalo de tiempo en el cual curva, a altas concentraciones de
tiene lugar el cambio. Lo sustrato, la velocidad es
anterior, permite saber independiente de la
la velocidad promedio de la concentración de sustrato
reacción. Por lo tanto, la (reacción de orden cero), así la
velocidad de reacción es función velocidad alcanzada es cercana a
de los reactivos, de la la máxima.
temperatura a la que se efectúa
la reacción, de la superficie DNS
expuesta entre los reactivos, de
El método DNS determina la
la concentración de los reactivos,
presencia de grupos carbónicos
y en algunas ocasiones, de los
libres (C=O) de los azucares
catalizadores.
reductores. El procedimiento se
basa en una reacción redox, que
ocurre en la utilización de ácido
En las reacciones no catalizadas 3,5 dinitrosalicílico para provocar
por enzimas la formación de la oxidación de los azucares y al
producto depende linealmente mismo tiempo su
de la concentración de sustrato propia reducción
endotermica. Un mol de azúcar
reacciona con un mol de ácido  Enzima invertasa
3,5 dinitrosalicílico, dando lugar  DNS
a una reacción estequiométrica
Preparación de DNS
que permite conocer la cantidad
Se pesan 10 g de ácido 3,5
de azucares reductores dinitrosalicílico, 300 g de tartrato
presentes en la muestra. de Na-K y 16 g de NaOH. Se
En el presente trabajo se emplea disuelve el NaOH en 400 ml de
el uso de la enzima invertasa, agua y se añade en agitación el
que hidroliza la sacarosa por tartrato de Na-K lentamente. Se
escisión en sus constituyentes completa con agua hasta 800 ml
y se comienza a añadir
glucosa y fructosa, y se evalúa
lentamente el ácido 3,5
su actividad y sus parámetros
dinitrosalicílico. Se deja en
cinéticos partiendo de la
agitación toda la noche, se
absorbancia que presenta tras un
enrasa a 100 ml y se filtra.
determinado tiempo utilizando el
método de Eadie-Hoffstee. PROCEDIMIENTO:
Los pasos para la obtención de la
Material, Reactivos y curva estándar constaron.
Procedimiento. Prepararon una solución buffer.
Se preparó la solución de
MATERIALES:
glucosa a las concentraciones de
 Micro pipeta 25 g/L.
 1 caja de puntas azules
 1 matraz aforado de 250mL Dentro de cada tubo de ensayo
 2 vasos de precipitado de 250mL se colocaron las cantidades que
 2 vasos de precipitado 100mL se muestran en la tabla 1, de
 1 agitador de vidrio solución buffer y glucosa en un
 2 pipetas de 10mL volumen máx. de 3 mL.
 1 perilla de 3 vías
 1 piseta Tabla 1. Tubos con solución
 1 probeta de 250mL de glucosa.
 1 probeta de 250mL
 13 tubos de ensayo 15x150 con No. tubo Sol. De Cantidad
taparrosca glucosa de agua.
(mL) (mL)
 1 espátula de acero
1 0 3
 1 vidrio de reloj
2 0.5 2.5
 1 barra de agitación magnética
3 1 2
 1 extractor de barras magnéticas
4 1.5 1.5
 1 termómetro
5 2 1
 1 baño maría
6 2.5 0.5
 1 balanza analítica 7 3 0
REACTIVOS:
 Sacarosa
 Glucosa
 Buffer
 Posteriormente se adiciono 3mL Posteriormente se tomó la
de DNS y se procedió a darle una absorbancia de nuevas muestra
agitación correcta. diluidas en diferente porcentaje
Los tubos se colocaron en una que se mostrara en los
gradilla y se introdujeron dentro resultados.
del baño maría por 5min a una
Temperatura de 55ºC.

Posteriormente se leyó la absorbancia en Resultados.

el espectrofotómetro para leer cada una
Con 7 tubos de ensaye de
de las muestras.
15X150 a diferentes diluciones
Después se realizaron dos con una concentración de 25
soluciones de sacarosa a 25 y g
se encontraron valores
200g/L que posteriormente se L
adicionó a los tubos y el volumen diferentes de absorbancias
se completó como se muestra en correspondientes a cada tubo.
la sig. Tabla.
Tabla 2 cantidad de sacarosa Las primeras absorbancias no
en cada tubo. son las totales, puesto que, se
diluyeron en agua destilada 1:5
No. De Sol. De Agua para obtener una mejor lectura
tubo sacarosa. (mL) en el espectrofotómetro. Para la
(mL)
obtención de absorbancia total
1 0 3
2 0.5 2.5 se multiplico por 5.
3 1 2 La concentración del sustrato Cs
4 1.5 1.5
5 2 1
g
de 25 se repartió de
6 2.5 0.5 L
7 3 0 acuerdo a las diluciones (se usó
regla de tres para obtenerlas).
Después se colocaron los tubos
dentro de una gradilla y se La absorbancia total y la
calentaron en el baño maría a concentración de sustrato (Cs),
55ºC. se seleccionaron estos valores y
Se adicionaron 3mL de solución se graficaron sin usar ningún
de enzima. Y se midió el tiempo 5 método. Únicamente una gráfica
min desde la primera adición al lineal, donde se aprecia el valor
tubo 1. Concluidos los 5 min se de la R2 y la ecuación de la
agregó de inmediato el DNS para recta.
detener la reacción de la enzima.

Después de esto se llevaron a

baño maría a una temperatura de
90ºC durante 5 min.
 Tabla 3. Valores para la
determinación de la curva
estándar.

30

25

20 f(x) = 10.12x - 1.47

R² = 0.96
15

10

0
0 0.5 1 1.5 2 2.5

Grafica 1. Curva estándar