UNIVERSIDAD POLITÉCNICA

DE LA REGIÓN LAGUNA.

PRÁCTICA 1: PREPARACIÓN DE SOLUCIÓN BUFFER Y

MATERIAL PARA ESTERILIZAR.

Nombre del programa: Ingeniería en Tecnología

Ambiental.

Nombre de la materia: Microbiología.

Nombre de la profesora: Verónica de la Rosa.

Nombre del alumno:

2110013 Ximena Moreno Martínez.
2110009 Itzel Alejandra Ramírez Valdez.
2110008 Lizbeth Monserrath Castro Ávila.

Grado y sección: 13°, A.

OBJETIVO.
Conocer los principios de las técnicas de esterilización de materiales de vidrio y
medios de cultivo de uso común en microbiología.
INTRODUCCIÓN.
La esterilización se define como la destrucción completa de toda forma de vida
microbiana incluyendo las esporas bacterianas, y los priones siendo estas últimas
las formas de vida con más alta resistencia a los métodos de esterilización.
Este procedimiento es de gran utilidad dentro del campo farmacéutico, ya que
existen muchos procesos que requieren la utilización de materiales estériles. Entre
éstos podemos destacar:
• La esterilización de equipos quirúrgicos y otros materiales de uso médico con el
propósito de reducir el riesgo de infecciones en pacientes.
• El acondicionamiento del material (pipetas, tubos, placas de Petri, pinzas, etc.) que
va a ser utilizado en los laboratorios de microbiología.
• La preparación de medios de cultivo que serán empleados con diferentes
propósitos (cultivo de microorganismos, control de ambiente, equipos o personal,
análisis microbiológico de medicamentos, cosméticos, alimentos, etc.)
• La descontaminación de material utilizado.

Existen diversos métodos de esterilización. La selección del método a aplicar en

cada caso está determinada por el tipo de producto a esterilizar.
(Sofía Gutiérrez, 2008)
PROCEDIMIENTO.
1. Desinfectar las áreas donde se trabajará.
2. Preparación de solución Buffer de fosfatos.
2.1 Solución stock A: (fosfato de potasio monobásico cristal).
Pesar 0.870g de fosfato de potasio monobásico cristal, añadir al reactivo a 100ml
de agua destilada utilizando un vaso de precipitado hasta su completa disolución.
2.2 Solución stock B: (fosfato de sodio dibásico anhidro).
Pesar 0.593g de fosfato de sodio dibásico anhidro, añadir al reactivo a 100ml de
agua destilada utilizando un vaso de precipitado hasta su completa disolución.
2.3 Solución C: Solución Buffer de fosfatos.
2.3.1 En un matraz Erlenmeyer de 250ml adicionar 5.4ml de la solución
stock A + 14.56 ml de la solución stock B y aforar a 200ml.
 2.3.2 El rango de pH de dicha solución debe estar entre 6.8 y 7.2, en
caso de obtener como resultado un pH ajustar con 0.5ml de HCl
0.1N por cada 100ml de solución de fosfatos, para resultados con
pH ajustar con NaOH 0.1 N gota a gota hasta alcanzar el rango de
pH óptimo.
2.3.3 Añadir 9ml de solución de fosfatos a cada tubo, colocar a cada
tubo, colocar un tapón de algodón.
3. Preparación del material de vidrio.
a) Lavar perfectamente las cajas de Petri y las pipetas con escobillón y
detergente.
b) Escurrir el exceso de agua y enjuagar el material con agua destilada con
una piceta, por las paredes interiores. Dejar escurrir el material sobre una
toalla o papel de envoltura. No se debe secar el material por ningún otro
medio.
c) Una vez seco el material, se procederá a envolver las cajas de Petri y
pipetas con papel estraza. Para los tubos y matraces se elaborarán
tapones de algodón y gasa, procurando que ajusten con holgura, sobre
los que finalmente se les colocará un capuchón de papel y un trozo de
cinta testigo.
4. Esterilización de materiales.
a) Revisar que el nivel de agua coincida con la marca en el tubo indicador.
En caso necesario añadir agua destilada.
b) Conectar la autoclave y poner la perilla de control de calentamiento alto.
Acomodar los medios y materiales en la canasta de la autoclave y
colocarla dentro.
c) Cerrar la puerta, apretar las manijas de dos en dos en posición
encontrada y esperar a que salga el vapor de agua por el orificio de
purgado hasta alcanzar las 2 lb/plg2. Después cerrar este oficio con la
válvula de seguridad.
d) Dejar que el equipo se caliente hasta alcanzar los 15 lb/plg2 de presión
revisando continuamente la escala del manómetro. Una vez alcanzada
esta presión, el equipo debe mantenerse por 15 minutos deberá bajarse
el nivel de calentamiento moviendo la perilla de control al nivel medio o
bajo.
e) Apagar la autoclave y dejar que baje la presión al valor de ‘’0’’. Abrir la
válvula de purga, con la ayuda de guantes de asbesto abrir
cuidadosamente la puerta, de adelante hacia atrás para evitar
quemaduras por la salida del vapor.
RESULTADOS.
CONCLUSIONES.
La esterilización en los materiales de laboratorio de microbiología es tan importante,
ya que se manejan muchos microorganismos que pueden llegar a ser patógenos, o
sea, malignos y si no se esterilizaran los materiales, a la hora de hacer prácticas
con esos materiales ya utilizados se estarían propagando esos microorganismos,
es por eso que cuando ya se utilizaron las materiales, se tienen que volver a
esterilizar para volverlos a ocupar.
Los diferentes tipos de esterilización que existen son para diferentes tipos de
materiales que se utilicen en los laboratorios, por ejemplo nosotros usamos la
esterilización de seco húmedo que es el auto clave, que es el más indicado ya que
hace excelentemente su trabajo eliminando casi el 100% de microorganismos
presentes en los materiales.
Conocer esa información y también saber utilizarla convenientemente a nuestro
objetivo es lo indicado para realizar las prácticas en el laboratorio.

BIBLIOGRAFÍAS.
-Black, J. 1999. Microbiology Principles and Exploration. Fourth edition. John Wiley
& Son, Inc.
-Clavell, L.; Pedrique de Aulacio, M. 1992. Microbiología. Manual de Métodos
Generales (2da edición). Facultad de Farmacia. Universidad Central de Venezuela.
-Murray, P. 1999. Manual of Clinical Microbiology. 7th edition. American Society for
Microbiology. Washington, DC.
-Standards of Sterilization. 2001. Monitoring the Sterilization Process. Online
Education. URL: http://education.sterra .com/c3/c3_monitoring.htm.
-Sofía Gutiérrez; The Pharmacopeia of the United States of America. Sterilization
and Sterility Assurance of Compendial Articles. Cap 1211. 32 Edition. Rockville:
USP; 2008.