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EL CICLO CELULAR
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CICLO CELULAR

Serie ordenada de acontecimientos

macromoleculares que llevan a la duplicación del
material genético (y de las organelas) y la
posterior división celular, produciendo dos
células hijas genéticamente idénticas, con
cromosomas idénticos a los de la madre

ESPECIES EUCARIOTAS
UNICELULARES SUPERIORES

PROLIFERACIÓN
ESPECIALIZACIÓN
PROLIFERACIÓN
INTERACCIÓN
MOVIMIENTO

NUEVO ORGANISMO NUEVO ORGANISMO

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El ciclo celular y los acontecimientos

que ocurren durante la división celular

Interfase: fases G1, S y G2. Se produce la duplicación del material celular

(especialmente importante es la duplicación del ADN)
Dos Fases
Fase M (división del núcleo y del citoplasma). Al superar la transición
entre meta- y ana-fase, la célula se dividirá inexorablemente.

El ciclo celular y los acontecimientos

que ocurren durante la división celular

En qué etapa del ciclo se encuentra una célula?

Fibroblastos en cultivo
Las células redondeadas están en
mitosis
Levaduras
El tamaño del brote depende de la
etapa del ciclo en que se encuentre

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CÉLULAS EN FASE S

3H-Timidina +

autorradiografía

BrdU (bromo-desoxi-uridina) +
anticuerpos fluorescente anti
Br-dU

Determinación del contenido de ADN en un citómetro de

flujo

CARGA DE ADN:
Es el contenido de ADN del núcleo de una
célula.

Se mide en picogramos (1pg= 10–12 g).

El contenido de ADN del núcleo de una
gameta (haploide) representa “c”.

Por lo tanto, en las células somáticas

(diploides) en G1, la carga será el doble del de
una gameta, y se designa con el valor 2c.

Luego de la replicación del ADN, la carga de

ADN se duplica, en consecuencia, la carga de
ADN de una célula en G2 tiene un valor de 4c.
2c 4c

Carga de ADN: peso del ADN nuclear

Gameta
Haploide: 1 juego de cr. (En el humano, 23 cr.
simples)
Carga: 1c (c es una notación universal que
denota los pg de una gameta de la especie de
la cual estamos hablando, c puede valer 100
pg para una especie, 30 pg para otra, etc.).

Célula somática en G1
Diploide: 2 juegos de cr. simples (en el humano son 46 cr. constituidos por
una única cromátide. Cada juego tiene 23 cr. simples)
Carga: 2c. Si peso el ADN de esta célula, pesará el doble que lo que pesó
el ADN de la gameta.
En el ejemplo anterior: En la primer especie el valor será 200 pg y en la
segunda 60 pg).
Célula somática en G2
Diploide: 2 juegos de cr. duplicados (en el humano son 46 cr. constituidos
por dos cromátides hermanas unidas). Cada juego tiene 23 cr. duplicados.
Carga: 4c. Si peso el ADN de esta célula, pesará el doble que lo que pesó
el ADN de la célula en G1 y 4 veces lo que pesó el de la gameta.
En el ejemplo anterior: En la primer especie del ejemplo, el valor será 400
pg y en la segunda 120 pg).

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CLASIFICACION DE LAS CÉLULAS EN TÉRMINOS DE SU

PROPIEDADES PROLIFERATIVAS
Tipo I (Renovables)
Permanecen dentro del ciclo celular la mayor parte del tiempo de la vida del organismo,
Presentan el sistema de control del ciclo celular (SCCC) montado y regulado.
células madres pluripotenciales de diferentes tejidos: células epiteliales .
de epidermis o mucosa gastrointestinal, células madres hematopoyéticas .

Tipo II (Estables)
Permanecen fuera del ciclo celular en estado quiescente (Go) pero con la posibilidad de
retornar al mismo ante los estímulos mitogénicos adecuados.
Presentan el SCCC parcialmente desmantelado
linfocitos T y B, fibroblastos del tejido conectivo, hepatocitos, células pancreáticas, .
otras glándulas, músculo liso y células endoteliales de vasos sanguíneos .

Tipo III (Estáticas)

Permanecen fuera del ciclo celular, en un estado de diferenciación terminal (GTD) sin
posibilidad de retornarlo durante toda la vida del organismo.
Perdieron su capacidad proliferativa durante la ontogenia al desmantelar el SCCC.
Pueden responder a mayores demandas funcionales a través de la hipertrofia
neuronas, miocitos esqueléticos, cardíacos y adipocitos .

10

CARACTERÍSTICAS BÁSICAS DEL SISTEMA DE CONTROL

 Un reloj, o controlador de encendido, que active cada proceso
en el momento adecuado, proporcionando un tiempo fijo para
cada proceso.
 Un mecanismo que inicie los procesos en el orden correcto.
 Un mecanismo que asegure que cada proceso sólo se
desencadene una vez en cada ciclo.
 Interruptores binarios (encendido/apagado) que pongan en
marcha los acontecimientos de forma completa e irreversible.
 Robustez: mecanismos auxiliares que aseguren que el ciclo
pueda funcionar correctamente incluso cuando algunas partes
del sistema funcionen mal
 Adaptabilidad: el comportamiento del sistema debe adaptarse
a las necesidades de cada tipo celular o a las condiciones
ambientales.

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Puntos de control del ciclo

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Componentes del sistema de control del

ciclo celular
1.- Complejo Cdk/ciclina (ser/thr quinasa)

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Niveles proteicos de Cdk y ciclinas a lo

largo del ciclo

CdKs
Nivel de proteína

Cdk G1 Cdk G1/S Cdk S Cdk M

14

Principales ciclinas y Cdks en mamíferos

Existen 2 ciclinas B: B1 y B2,

Y 3 ciclinas D: D1, D2 y D3

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5
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Activación de las Cdk

1° unión de la ciclina
2° fosforilación por la quinasa activadora de Cdk (CAK)

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Principal regulador de actividad de Cdks: niveles de las ciclinas

Niveles accesorios de regulación:
Primario (modifica la actividad Cdk por fosforilación/desfosforilación)
a.- CAKs (Quinasas activadoras de Cdk)
b.- Otras quinasas y Fosfatasas
(Wee1) (Cdc25)
(Especialmente importante
en regulación de Cdk-M)

Secundario (se une a las Cdk modificándoles su acción)

CKIs (Proteínas inhibidoras de Cdk)
(Especialmente importantes
en la regulación de Cdk-G1/S y Cdk-S)

17

COMPLEJOS Cdk/CICLINA EN MAMÍFEROS.

Actúan en la mayoría de las células y tienen un limitado espectro de
sustratos:
• Complejo Cdk-G1: Cdk4, Cdk6 y ciclinas D1, D2 y D3: se forma en
“G1 media” de manera dependiente de mitógeno e inicia la
transición G1-S.
Actúan en todos los ciclos celulares y tienen un amplio espectro de
sustratos:
• Complejo Cdk-G1/S: Cdk2 y ciclina E: se forma en “G1 tardía”, es
fundamental para superar el punto de restricción (R).
• Complejo Cdk-S: Cdk2 y ciclina A: se forma en “fase S” e inicia y
mantiene la replicación del DNA.
• Complejo Cdk-M: Cdk1 y ciclina B ó A: se forman al “final de G2” y
estimulan los acontecimientos de las mitosis (antiguamente MPF)

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REGULACIÓN TRANSCRIPCIONAL
Mitógenos ciclina G1

Cdk-G1 ciclinas G1/S

Cdk-G1 y Cdk G1/S ciclinas S

Cdk S ciclinas M

PROTEÓLISIS CÍCLICA EN LOS PROTEOSOMAS

Complejos de ubiquitina ligasa:
• SFC (se activa en G1)
• APC/C o ciclosoma (se activa en G2)

19

Complejos Ubiquitina Ligasas

Complejo SCF ubiquitiniza proteínas CKI a finales de G1.
Permite la activación del complejo Cdk-S.
Además participa en la degradación de ciclinas G1/S

Su actividad es regulada por unión a la “proteína con caja F (F-box)”

que fosforila las proteínas CKI que serán degradas en proteosomas

20

Complejos SCF (por las proteínas que lo integran: SKP1 - CUL1 - F-box)
Regula los niveles de ciclinas G1/S y S
SCF

Complejos promotor de la anafase ó ciclosoma (APC/C)

Regulador de la transición Metafase-Anafase

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Complejos Ubiquitina Ligasas

Complejo promotor de la anafase ó ciclosoma (APC/C) provoca la
escisión de las Cohesinas que mantenían las cromátides unidas

APC/C ubiquitiniza a la proteína

Segurina y de esta manera
desregula a la Separasa que
escinde de esta manera las
cohesinas que mantenían unidas a
las cromátides hermanas en
metafase

22

Complejos Ubiquitina Ligasas

APC/C ubiquitiniza a las ciclinas de la fase S y M, las Cdk se inactivan
y las proteínas fosforiladas son atacadas por fosfatasas y así finaliza
la fase M

Se activa a mediados de la fase M por unión a proteínas

reguladoras: Cdc20 ó Cdh1. Se inactiva a mediados de G1

23

Interruptores binarios del SCCC

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FASE G1
G1 TEMPRANA
 No hay actividad de Cdk (las ciclinas fueron degradadas por la
activación de APC/C)
 CKIs activas (p27)
Se organizan los complejos de pre-replicación en los orígenes de
replicación
 La célula crece

25

El tamaño de un órgano o un organismo depende principalmente

de su masa celular total, o sea del número y tamaño de sus
células y está determinado por tres procesos:

CRECIMIENTO, PROLIFERACIÓN Y MUERTE CELULAR

Los cuales son regulados independientemente por programas

intracelulares y moléculas señalizadoras extracelulares

26

FACTORES QUE ESTIMULAN EL CRECIMIENTO

DE UN ORGANO O DE UN ORGANISMO

Mitógenos
estimulan la división celular: ↑ actividad Cdk-G1/S y eliminan controles intracelulares
negativos que bloquean la progresión del ciclo celular.

Factores de crecimiento
estimulan el crecimiento celular induciendo la síntesis de proteínas y de otras
macromoléculas e inhibiendo su degradación.

Factores de supervivencia
estimulan la supervivencia celular inhibiendo la apoptosis.

27

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Los mitógenos y la entrada al ciclo celular

Los mitógenos quitan frenos del ciclo celular activos
como la proteína Rb (retinoblastoma) por fosforilaciones

Activan la cascada MAPK que resulta en el aumento de

proteínas reguladoras de la expresión génica como Myc

Myc promueve la expresión de genes de Rta tardía

que activan Cdk-G1, la cual fosforila Rb y permite
que E2F medie la activación de Cdk-G1/S y Cdk-S,
conduciendo a la replicación

Los genes que codifican proteínas

como la Rb se denominan genes
supresores de tumores.
Cdk-G1 es el principal regulador de su
acción.

28

El daño en el ADN
detiene el CC por
activación de otro
factor supresor de
tumores: p53
El daño del ADN activa
kinasas (ATM y ATR) que
fosforilan p53, el cual
activa la expresión de
una CKI (p21) que evita
el pasaje por el punto de
restricción del CC.
p53 es otro de los llamados factores
supresores de tumores (como la proteína Rb),
p53 puede promover la detención del CC o la
entrada a apoptosis.

29

Excesiva estimulación por mitógenos activa p53

activación de los sistemas

de reparación del ADN

30

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Los genes críticos del cáncer

Las células cancerosas rompen las reglas básicas del comportamiento celular (en su
formación y mantenimiento). Alteran los mecanismos de señalización celular, del ciclo
y crecimiento celular, la muerte celular y la citoarquitectura.

Las células cancerosas se caracterizan por:

• Reproducirse eludiendo las restricciones del ciclo celular
• Invadir y colonizar territorios reservados a otras células

Se identificaron genes que se encuentran alterados en muchos cánceres y se los

denominó: genes críticos del cáncer

a. Genes supresores de tumores (anti-oncogenes): una mutación que disminuya el

producto de expresión de estos genes dispara la aparición del cáncer (Rb, p53).

b. Proto-oncogenes: genes normales que al sufrir una alteración que lleva al

aumento del producto de su expresión, desencadena el cáncer. (El gen mutado
pasa a denominarse oncogen. Genes Ras).

31

Los factores de crecimiento aumentan la síntesis

proteica y el crecimiento celular

32

G1 MEDIO Y TARDIO
TRANSICIÓN G1-S:

Cuando la célula supera el Punto de Restricción (R) se vuelve

independiente de mitógenos

Cdk-G1 y Cdk-G1/S que activan Cdk-S

El complejo SFC degrada CKIs fosforiladas

33

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Complejos Ubiquitina Ligasas

Complejo SCF ubiquitiniza proteínas CKI a finales de G1,
permitiendo la activación del complejo Cdk-S. Además participa
en la degradación de ciclinas G1/S

Su actividad es regulada por unión a la “proteína con caja F” que

fosforila las proteínas CKI que serán degradas en proteosomas

34

Cdk-S
- Activa la transcripción de genes que codifican:
Enzimas responsables de la biosíntesis de dNTPs
Maquinaria de la replicación del ADN
Proteínas propias del SCCC (Ciclinas M entre otras)

- Activa orígenes de replicación

- Bloquea la doble replicación
- Inicia la duplicación del centrosoma en mamíferos

35

Control de la re-replicación del ADN

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Orígenes de replicación

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Control de la iniciación de la
replicación y de la re-replicación

ORC: Complejo de reconocimiento

de origen

Cdk-S y otras kinasas fosforilan

subunidades de helicasa y
proteínas accesorias permitiendo
su activación, el reclutamiento de
la ADN pol y la inactivación de ORC
que impide la formación de nuevos
complejos pre replicativos.

38

OTROS CONTROLES
Senescencia celular replicativa (cambios en la estructura de los
telómeros)

Control de anclaje en G1 (quinasas de adhesión focal FAK)

Dependencia de la densidad celular (disponibilidad de

mitógenos, factores de crecimiento y/o factores de
supervivencia)

39

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FASE G2
- La célula posee dos copias exactas de todo el genoma
(los cromosomas están formados por dos cromátidas
hermanas unidas por cohesinas)
- Culminó la duplicación del centrosoma (dos
centrosomas maduros con dos centríolos cada uno en un
único centro organizador de los microtúbulos)
- Se acumula ciclina M
- Hacia el final de G2, la célula contiene abundantes
reservas de complejos Cdk-M preparados para actuar. Sin
embargo, la actividad Cdk-M está inhibida debido a la
presencia de dos grupos fosfato que bloquean el sitio
activo de la quinasa.

40

TRANSICIÓN G2 - M

41

FASE M
EVENTOS MITÓTICOS TEMPRANOS
El complejo Cdk-M activo desencadena (directa o
indirectamente) los siguientes procesos y programa su
propia inactivación:
- Activación y separación de los centrosomas.
- Formación del huso mitótico a expensas de los microtúbulos
citoplasmáticos
- Condensación de los cromosomas
- Desorganización y disgregación de la envoltura nuclear, aparato
de Golgi y RE
- Interacción cromosomas – huso mitótico

42

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TRANSICION METAFASE-ANAFASE

43

SALIDA DE FASE M

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Resumen CCC
SCF

Ciclina G1

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Interruptores binarios del SCCC

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49

Muerte celular.
¿Apoptosis ó necrosis?
Esa es la cuestión!

50

El desarrollo y la homeostasis de los organismos depende del

equilibrio entre la supervivencia celular y la muerte celular.
Simplemente, no hay vida sin muerte
1842 Karl Vogt: en la metamorfosis de anfibios, la reabsorción
de la notocorda y su reemplazo por vértebras implica la muerte
celular fisiológica

Wood et al Development 127:5245-52 (2000)

1964 Lockshin y Williams incorporan el concepto de "muerte

celular programada" al estudiar la metamorfosis de los insectos.
Physiol. 10, 643–649 (1964).

51

17
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1973 Schweichel y Merker proponen tres morfologías de muerte

celular:
tipo I se asoció con heterofagia (Hoy: Apoptosis)
tipo II se asoció con la autodigestión (Hoy: Autofagia)
tipo III no implicaba digestión (Hoy: Necrosis)
Teratology 7, 253–266 (1973).

1986 Ellis & Horvitz en su trabajo pionero en Caenorhabditis elegans

(C. elegans) revelan el programa genético de apoptosis.
Cell 44, 817–829 (1986).

52

Apoptosis y necrosis
Por mucho tiempo se consideró que la apoptosis era la forma
estándar de muerte celular durante el desarrollo, la homeostasis, la
infección y la patogénesis, mientras que la necrosis se consideraba
mayoritariamente como una muerte celular "accidental" que sólo
se producía en respuesta a insultos físico-químicos.

Hoy ha cambiado esta visión por la descripción de la existencia de

múltiples vías de necrosis regulada.

53

2001 Leist & Jäättelä proponen 4

patrones de muerte celular según su
morfología nuclear:
Apoptosis cromatina condensada en
figuras compactas, globulares o con forma
de medialuna.
MCP Apoptosis-símil cromatina
condensada más laxamente.
MCP Necrosis-símil cromatina agrupada y
grumosa.
Necrosis edema celular con ruptura de la
membrana
Nat Rev Mol Cell Biol 2:589-98 (2001).

MCP: Muerte celular programada: puede

bloquearse por inhibición de una enzima o vía
de señalización

54

18
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Necrosis regulada
Muerte celular genéticamente controlada que puede resultar en la
rotura de la membrana y la consecuente pérdida de material
citosólico al intersticio. Se caracteriza por presentar un citoplasma
granulado y las organelas hinchadas (oncosis).

55

Apoptosis vs. necrosis

Apoptosis. MCP dependiente de caspasas. Las células presentan cambios morfológicos
en el núcleo (cromatina condensada y compacta en formas globulares y de medialuna),
exposición de fosfatidilserina, contracción citoplasmática, zeiosis (formación de
burbujas) y la formación de cuerpos apoptóticos.

La necrosis (muerte accidental/lisis celular) se evita

sólo mediante la eliminación del estímulo de muerte
(detergentes, oxidantes, ionóforos o insulto
patológico).
Células con edema (hinchazón de organelas) sin
burbujas. La morfología del tejido necrótico es
debido a eventos que ocurren después de la lisis de
la membrana plasmática.

56

Necrosis

Muerte celular en respuesta a una lesión aguda. Las células se hinchan

y se lisan, liberando todo su contenido al intersticio y provocando una
respuesta inflamatoria

57

19
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Cambios morfológicos de las células apoptóticas

Las células se encogen y se condensan, el citoesqueleto colapsa, la
envoltura nuclear se desorganiza, la cromatina se condensa y se
fragmenta.
La superficie celular emite protrusiones y la célula desprende
fragmentos rodeados de membrana llamados cuerpos apoptóticos.
Finalmente las células y cuerpos apoptóticos son fagocitados por
células vecinas.

58

Necrosis Apoptosis
Mueren grupos de células Mueren células individuales
La célula se dilata y la MB se rompe. La célula se contrae y la MB no se rompe.
Destrucción de las organelas y del Fragmentación celular (cuerpos apoptóti-
citoesqueleto. cos) sin ruptura de organelas.
La cromatina flocula. La cromatina se asocia a la MB nuclear.
El ADN se digiere al azar (patrón de La digestión del ADN genera mono y oligo-
manchas en electroforesis) nucleosomas (patrón en escalera)
La fragmentación del ADN es tardía (último La fragmentación del ADN es uno de los
proceso de muerte) primeros eventos de la muerte
La liberación del contenido citoplasmático Los cuerpos apoptóticos son rápidamente
desencadena la respuesta inflamatoria fagocitados por células adyacentes o
significativa. macrófagos
Proceso no controlado, sin gasto de Proceso controlado con gasto de energía
energía, se pierde el equilibrio iónico dependiente de ATP (no sucede a 4°C)
(ocurre aún a 4°C)

Apoptosis and Necrosis in the Liver: A Tale of Two Deaths? Harmeet Malhi,1 Gregory J. Gores,1,2 and John J. Lemasters3

59

Apoptosis
(del griego “caer como las hojas de un árbol”)
La muerte celular NO es un proceso aleatorio, se produce a través de
una secuencia ordenada de procesos moleculares por los que se
destruye a sí misma desde su interior en forma sistemática, siendo
posteriormente ingerida por otras células

- Embriogénesis y desarrollo fetal

- Mantenimiento de las poblaciones
celulares de los tejidos como mecanismo
homeostático
- Reacciones inmunitarias como
mecanismo de defensa
- Respuesta a lesiones por enfermedad o
agentes lesivos subletales
- Envejecimiento

60

20
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Fosfatidilserina
Es un fosfolípido que se encuentra
normalmente en la cara citosólica de
la bicapa lipídica, cuando se presenta
en la monocapa externa actúa como
un marcador que es reconocido por
células fagocitarias.

Patología Estructural y Funcional. Robbins. Sexta Edición

61

Páncreas exocrino de ratón

Células apoptóticas que se encogen con el citoplasma

condensado, presentan núcleos picnóticos y
fragmentados. No se observa inflamación

Elmore S. Toxicol Patol 2007 35:495-516.

62

Miocardio de una rata adulta con células apoptóticas

Macrófagos, algunos con

cuerpos apoptóticos
engullidos
Células apoptóticas con
citoplasma condensado,
cromatina condensada e
hipercromática y fragmentada

Espacio
intersticial

Elmore S. Toxicol Patol 2007 35:495-516.

63

21
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Linfocitos apoptóticos en timo de rata

Citoplasma Borde celular
condensado irregular

Cuerpo apoptótico
Cromatina sin material nuclear
condensada
y periférica
Núcleo
fragmentado

Micrografía electrónica de transmisión (TEM) del tejido timo apoptótico.

Elmore S. Toxicol Patol 2007 35:495-516.

64

Cuerpo apoptótico brotando de un linfocito de rata

Cuerpo
apoptótico
emergiendo
Vacuolas

Micrografía electrónica de transmisión (TEM) del tejido timo normal

Elmore S. Toxicol Patol 2007 35:495-516.

65

Macrófago engullendo cuerpos apoptóticos

Cuerpos apoptóticos Macrófago

Micrografía electrónica de transmisión (TEM) del tejido timo apoptótico.

Elmore S. Toxicol Patol 2007 35:495-516.

66

22
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APOPTOSIS
DEATHS

67

68

CASPASAS

Son sintetizadas como cimógenos inactivos (procaspasas)

constituidos por un prodominio, una subunidad pequeña (de unos 10
KD) y otra grande (de unos 20 KD).
Al activarse por proteólisis forman un heterotetrámero.

69

23
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Activación por clivaje proteolítico.

70

Pérdida ó ganancia
de función de la
proteína diana

Las caspasas pueden actuar de dos

formas principalmente:

• Inactivando sustratos por clivaje

proteolítico (Cadenas polipeptídicas
simples o estructuras complejas).

• Activando sustratos (Eliminando

secciones inhibitorias o reguladoras)

71

Mecanismo general de activación

72

24
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Dianas de las caspasas efectoras

Caspasa inactiva (Pro-caspasa)

NH2 COOH
Clivaje por otra caspasa
Subunidad grande Subunidad pequeña

Agregación de subunidades
Caspasa ejecutora activa

Secuestradora de Otras Otras

endonucleasa Actina proteasas caspasas

Fragmentación Pérdida de Fragmentación celular

del ADN forma celular Desmembramiento de organelas

73

Fragmentación del ADN por endonucleasas

CAD: endonucleasa
iCAD: inhibidor de CAD

74

Mecanismo general de activación

La apoptosis puede ser desencadenada por
varios estímulos

Extracelulares Intracelulares

• Activación de receptores en la superficie de la célula.

• Daños en el ADN causados por defectos en sus
mecanismos de reparación.
• Tratamiento con drogas citotóxicas o radiación.
• Ausencia de señales de supervivencia.
Apoptosis: A Review of Programmed Cell Death Susan Elmore NIEHS, Laboratory of Experimental Pathology, Research Triangle Park, North
Carolina 27709, USA

75

25
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Dos vías de activación de la apoptosis

The biochemistry of apoptosis. NATURE VOL 407 12 OCTOBER 2000

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La Vía Extrínseca

Ligando externo

Receptor de
muerte

Adaptadores

DISC

Caspasa iniciadora

Caspasas efectoras

Muerte

77

Vía extrínseca. Receptores de muerte.

La transducción de la señal apoptótica depende de la presencia de un
dominio de muerte citoplasmático (DD [Death Domain])

Se asocia con moléculas adaptadoras que poseen un

dominio efector de muerte (DED)

Se forma DISC
(Death Inducing Signaling Complex).

Se activa la caspasa 8 (iniciadora) y luego las

efectoras (3, 6, 7): APOPTOSIS

Apoptosis and Necrosis in the Liver: A Tale of Two Deaths? Harmeet Malhi,1 Gregory J. Gores,1,2 and John J. Lemasters3

78

26
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Vía extrínseca.

79

Vía intrínseca
• Estímulos no mediados por receptores de membrana, atacan
blancos directamente dentro de la célula y son ejecutados por las
mitocondrias.
Un defecto del ciclo
Daños del ADN
celular
Otros tipos graves de
estrés celular (radiación) Hipoxia

La pérdida de factores de Desprendimiento de la

supervivencia celular matriz extracelular

• Estímulos pueden ser:

Negativos: Ausencias (factores Positivos: Presencia de
de crecimiento, hormonas o factores (radiación, toxinas,
factores tróficos) hipertermia…)
Apoptosis: A Review of Programmed Cell Death. Toxicol Pathol. 2007 ; 35(4): 495–516.

80

Vía intrínseca ó mitocondrial

• Estos mecanismos producen cambios en la
membrana mitocondrial (poros) y se liberan al
citosol proteínas pro apoptóticas.

The biochemistry of apoptosis. NATURE VOL 407 12 OCTOBER 2000

81

27
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Vía intrínseca ó mitocondrial

82

La Vía intrínseca

El citocromo c se une a la proteína adaptadora Apaf-1 que, a través de su

dominio de reclutamiento de caspasas [CARD], oligomeriza formando el
apoptosoma al que se unen varias caspasas 9 y se activan

83

Las proteínas Bcl2

• Su nombre deriva de un gen aislado involucrado en el Linfoma de
Células B.
• Controlan la permeabilidad de la membrana mitocondrial
• Pueden ser anti- ó pro- apoptóticas

Antiapoptóticas Bcl2 y Bcl X

impiden la liberación de citocromo c
Proteínas
Bcl2 Efectoras (Bax y Bak)
permiten la liberación de citocromo c
Proapoptóticas
“Sólo BH3” (Bad, Bim, Bid,
Puma y Noxa)
The biochemistry of apoptosis. NATURE VOL 407 12 OCTOBER 2000
Inhiben a las antiapoptóticas

84

28
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Las proteínas Bcl2

Todas presenten dominios de homología Bcl2 (BH)
• El Dominio BH4 sólo está presente en las antiapoptóticas
• El dominio BH3 está presente en todas

impiden la liberación de citocromo c

permiten la liberación de citocromo c

Inhiben a las antiapoptóticas

85

Las proteínas proapoptóticas Bcl2 forman un poro

para permitir la salida de Citocromo C

86

Proteínas sólo BH3 vs. Proteínas antiapoptóticas

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29
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Ante el daño en ADN, la proteína supresora de

tumores p53 se acumula y activa la expresión de
genes de proteínas “sólo BH3” (Puma y Noxa)

The biochemistry of apoptosis. NATURE VOL 407 12 OCTOBER 2000

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La proteína “sólo BH3” Bid vincula las vías

extrínseca e intrínseca

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Las proteínas inhibidoras de apoptosis (IAP) y las

anti-IAP regulan la vía intrínseca
IAPs Anti-IAPs
c-IAP1, c-IAP2, XIAP, Survivina Smac/DIABLO y Omi

-Se unen a las caspasas -Son liberadas desde el espacio

y las inhiben intermembrana mitocondrial
cuando se activa la vía intrínseca
- Se unen a las caspasas y las
“marcan” para su ubiquitinación - Se unen a las IAP y las
y posterior degradación bloquean

Smac: second mithocondrial-derived activator of caspase

DIABLO: direct IAP-associated binding protein with Low PI
The biochemistry of apoptosis. NATURE VOL 407 12 OCTOBER 2000

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Las IAP y las anti-IAP regulan la actividad de las caspasas

c-IAP1, c-IAP2, XIAP, Survivina

Smac/DIABLO (anti IAPs)

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La vía Intrínseca

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31
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Factores de muerte y de supervivencia

Durante el desarrollo del sistema nervioso, se genera un exceso de

neuronas que mueren por falta de señales de supervivencia liberadas
por la célula diana

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La respuesta celular depende de la combinación de señales

extracelulares que reciba
A

B SOBREVIVE

B CRECE Y SE DIVIDE

C E
D
A

B SE DIFERENCIA

C G
F

MUERE Célula
apoptótica

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Inhibición de apoptosis por factores de supervivencia

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APOPTOSIS EN CÉLULAS β. Métodos de detección y cuantificación

DAPI: mide fragmentación TUNEL (TdT-mediated

del ADN dUTPnick end labeling):
añade restos de dUTP
marcados en los extremos
3´OH libre de los fragmentos
de ADN

DHE: (dihidro ethidio) Mide ion

superóxido (ROS) liberación de Eth
(ethidio) fluorescente

RT-PCR, WB e IHQ de V Alexa Fluor y yoduro de propidio detecta la

marcadores de las vías expresión de fosfatidilserina (AF) y la
apoptóticas: Citocromo c, Bcl2, permeabilidad de las membranas (IP)
Bad, Caspasas, etc.

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101

Muchas
Gracias

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