Biopsia Liquida Como Marcador Pronostico Para El Cáncer De Cabeza Y Cuello

Biopsia liquida, que es definición,

biopsia líquida, término acuñado en el 2004, La biopsia líquida busca, cuantifica y caracteriza las
células tumorales, el ADN de sus núcleos (cDNA), o fragmentos de ese ADN (cfDNA) en la sangre
circulante de individuos con tumores.

Los tumores liberan moléculas y células a los fluidos corporales. El análisis de estos
componentes puede revelar gran parte de la información que dan las biopsias de tejido
denomina biopsia líquida y se basa en el análisis de pequeños fragmentos de material
tumoral, así como células cancerosas que se encuentran en los fluidos del cuerpo.
Diferentes biopsias líquidas analizan distintos materiales tumorales como ADN, ARN,
proteínas, vesículas minúsculas (exosomas) o células enteras. Las pruebas detectan
estas moléculas o células en sangre, orina, líquido cerebroespinal o saliva.

brinda la oportunidad de detectar, analizar y monitorear el cáncer en varios efluentes corporales,

como sangre u orina, en lugar de un fragmento de tejido canceroso.

Por lo tanto hay un fuerte necesidad de utilizar materiales más accesibles que impliquen
procedimientos no invasivos o mínimamente invasivos que permitan un monitoreo sistemático y
en tiempo real de las alteraciones moleculares del cáncer del paciente.

proceso

¿Cómo separar las células tumorales de las otras células de la sangre? ¿Cómo concentrarlas si son
tan pocas? ¿Cómo identificarlas con certeza? En la actualidad los métodos y técnicas usuales para
separarlas y concentrarlas se basan en:

1) Tamaño: las células tumorales son más grandes (> 8 µm) que los leucocitos (< 8 µm), y no pasan
por un filtro con poros de 8µm, quedan retenidas en éste.

2) Densidad: en una solución de Ficoll (o un medio similar), las partículas más pesadas, eritrocitos
y neutrófilos, van al fondo y las más livianas, células tumorales y mononucleares, y el plasma,
quedan arriba.

3) Separación inmuno-magnética: La más empleada, la única autorizada por la Federal Drug

Administration (FDA) de EE.UU., es CellSearch®, de Janssen Diagnostics. Emplea la marcación
inmunomagnética y la microscopía de fluorescencia digital.

4) Microfluídica: Técnica basada en el comportamiento de los fluidos en micro-escala, cuando

fluyen por canales de menos de 1 mm de diámetro. La sangre pasa por la superficie de un tubo y
un dispositivo o un filtro separan las células por tamaño, o pasa por un chip donde hay puestos
(microposts) cubiertos por los anticuerpos anti células epiteliales, las células tumorales se
adhieren y una cámara las registra

¿Cómo funcionan las biopsias líquidas?

Como hemos comentado anteriormente, hay fragmentos de ADN que son
liberados por las células tumorales al torrente sanguíneo, conocidos como ADN
tumoral circulante.

El primer paso sería extraer la sangre del paciente y con ella, el ADN libre
circulante (incluyendo el ADN tumoral circulante). Tras purificar el ADN libre
circulante, éste será sometido a un análisis genómico molecular.

Las principales técnicas para analizar el ADN circulante son:

 Secuenciación masiva: NGS (Next-Generation Sequencing) da un

análisis de gran rendimiento de un gran número de moléculas en una
única reacción. Puede detectar mutaciones específicas de tumor en todo
el genoma o un grupo de genes en muestras de tejido donde las
mutaciones están presentes en al menos 5% de las células analizadas.
Debido a que las mutaciones en el DNA tumoral circulante son difíciles
de detectar y puede ocurrir en menos del 1% de las moléculas de ADN
tumoral circulante, se han desarrollado nuevas técnicas que usan una
secuenciación más profunda para detectar alteraciones que presentan
frecuencias tan bajas como 0,05%.
 PCR digital: cuantifica alteraciones de las muestras de ADN tumoral
circulante separando una reacción de PCR en múltiples reacciones, cada
una con una única o un número muy pequeño de moléculas de ADN. En
este proceso la PCR amplifica los fragmentos de ADN tumoral circulante
y se emplean pruebas fluorescentes diferenciales ligadas a la secuencia
salvaje y a la mutante. Esta reacción se basa en la presencia o ausencia
de la señal mutante o salvaje. La proporción de diferentes señales
representa la prevalencia de los alelos mutantes y salvajes.

Objetivos

El objetivo más buscado de contar las células tumorales en la sangre periférica es predecir la
supervivencia, cuando menor el número mejor, cuando mayor peor.

Usos

Se ha descrito la presencia de ADN de naturaleza tumoral en el plasma sanguíneo de

pacientes con cáncer de mama, cuello uterino, colon, esófago, estómago, cabeza y
cuello, hígado, riñón, páncreas, piel, nasofaringe, ovario, próstata, pulmón, tiroides y
hematológicos

detección del cáncer en estadios tempranos. En varios estudios, las biopsias

líquidas han detectado ADN tumoral circulante en sangre varios meses antes de
que el cáncer se detectara mediante los métodos tradicionales.
para identificar las mutaciones del ADN en pacientes con cáncer. Se ha
encontrado que, para muchos pacientes, las mutaciones genéticas identificadas
con biopsia líquida fueron coincidentes con las identificadas mediante biopsia de
tejido.

Los análisis de ADN tumoral circulante ya han sido aprobados por la

FDA (Food and Drug Administration) para usarse en pacientes con cáncer de
pulmón cuando la cantidad de tejido tumoral para realizar una biopsia de tejido es
insuficiente. En 2016, se aprobó una biopsia líquida denominada
prueba cobas® EGFR Mutation Test. Esta prueba se emplea para la detección
de mutaciones en el gen EGFR en DNA tumoral circulante de pacientes con
cáncer de pulmón.

Debido a que no son invasivas y pueden repetirse fácilmente, las biopsias líquidas
basadas en DNA tumoral circulante pueden ser útiles, también, para monitorizar
las respuestas de los pacientes a la terapia durante el tratamiento y una vez
acabado éste. Esta monitorización puede permitir ajustes del tratamiento en
tiempo real. Es decir, el tratamiento puede ser detenido o ajustado si la biopsia
líquida indica que no está funcionando bien.

Ventajas

s ventajas potenciales de la técnica se señalan: evitar las biopsias convencionales, invasoras, a

veces imposibles, pequeñas, no representativas de la heterogeneidad del tumor, irrepetibles;
permite la genotipificación del tumor, sus cambios por el tratamiento y la elección del anti-
neoplásico más efectivo; el tamizado (screening) de metástasis no visibles (¿?), la mínima
enfermedad residual.

Normalmente, son fluidos accesibles y su extracción es menos invasiva que la biopsia

de tejido.
Sin embargo, las biopsias de tejido pueden ser invasivas, costosas y dolorosas. Por
otra parte, en ocasiones a algunos pacientes no se les puede realizar una biopsia de
tejido por la inaccesibilidad del tumor o debido a otros problemas de salud. Estos factores
hacen que sea difícil emplear biopsias de forma repetida en el mismo paciente: son
métodos poco prácticos para rastrear tumores a medida que la enfermedad se desarrolla
en el tiempo.

En comparación con la `` biopsia sólida '' tradicional, que no siempre se puede

realizar para determinar la dinámica del tumor, la biopsia líquida tiene ventajas
notables porque es una modalidad no invasiva que puede proporcionar
información de diagnóstico y pronóstico antes del tratamiento, durante el
tratamiento y durante la progresión. 

la biopsia líquida proporciona una alternativa no invasiva a la 'biopsia sólida'

tradicional, que no puede realizarse de manera consistente en ciertas
situaciones o en 'tiempo real'.

Además, la heterogeneidad intratumoral, especialmente la heterogeneidad espacial, podría

conducir a resultados poco confiables de detección de biomarcadores, especialmente cuando se
prueba una sola biopsia [2–4]. Además, la presencia de múltiples sitios tumorales complica la
caracterización del cáncer del paciente.

La disponibilidad de muestras de tumor durante el tratamiento a largo plazo de los pacientes

también podría ser complicada y, además, la prueba de las muestras de tumor de archivo puede
no ser óptima debido a la evolución del tumor. Además, como podría ser necesario poder realizar
una monitorización en serie de la progresión y evolución tumoral en pacientes, el

El uso de biopsias de tejido no es fácilmente factible. Por lo tanto hay un

fuerte necesidad de utilizar materiales más accesibles que impliquen procedimientos no invasivos
o mínimamente invasivos que permitan un monitoreo sistemático y en tiempo real de las
alteraciones moleculares del cáncer del paciente. La biopsia líquida representa el procedimiento
ideal para tales aplicaciones, que es muy importante.

respaldado por los impresionantes avances que presenciamos en estos últimos años

Desventajas

Pero tras las técnicas viene la interpretación de los resultados y poco se insiste sobre sus
limitaciones: la entrada en la circulación de las células tumorales no es regular ni continua; no se
detectan entre el 10 y el 50% de los individuos con metástasis; no todas las células tumorales son
grandes; se aglutinan entre sí o con las plaquetas y otros componentes de la sangre; aun las
viables son frágiles y se destruyen en los capilares; son heterogéneas y plásticas; se encuentran
células benignas circulantes; no todas las células tumorales tienen el antígeno epitelial en la
superficie, y el sistema inmune para algo funciona6, 7. Para más detalles consultar la nota crítica
titulada Circulating tumor cells: Who is the killer?8 . No todas las células tumorales son viables ni
todos los órganos aptos, las siembras no son eficientes

Principales limitaciones y retos

Si bien las biopsias líquidas son unas pruebas muy prometedoras, hay una serie
de factores que debemos superar antes de poder aprovechar todo su potencial.

 Muchos tipos de cáncer carecen de biomarcadores bien

establecidos que permitan identificar y rastrear la enfermedad a través
del ADN tumoral circulante. Mientras que la tecnología para detectar este
tipo de ADN en los fluidos corporales ha mejorado mucho, no lo han
hecho los conocimientos necesarios para identificar adecuadamente
biomarcadores para muchos tipos de cáncer.
 El ADN tumoral circulante de la sangre puede no representar el ADN
del tumor total. Por tanto, puede no ser la mejor fuente de información
para guiar las decisiones clínicas. Los tumores son heterogéneos (las
mutaciones de ADN varían entre las células cancerígenas del mismo
tumor) y no se sabe si el ADN tumoral circulante es liberado por las
células de todo el tumor o únicamente de una parte.
 Todavía no se tienen los conocimientos necesarios para saber si las
mutaciones encontradas en el ADN tumoral circulante son mutaciones
que determinan un papel fundamental en el desarrollo del cáncer o bien,
son mutaciones que acompañan al desarrollo del cáncer sin ejercer un
control en su crecimiento.

El problema, sin embargo, es que en algunas ocasiones se han producido falsos

positivos: la detección de ADN canceroso cuando el cáncer no se desarrolla
posteriormente. Otro asunto que cabe considerar es que los tumores detectados
en fases tempranas puede que no crezcan mucho o crecer de forma tan lenta que
nunca lleguen a hacer daño al paciente. Es decir, el tratamiento de estos tumores
puede hacer más daño que bien. Por ello, el diagnóstico empleando únicamente
biopsia líquida no se ha validado aún.
A pesar de estas numerosas ventajas, persisten varias limitaciones, como la
falta de consenso sobre los métodos de detección, la dificultad en el análisis de
información de secuencia abrumadora y la prueba insuficiente basada en la
evidencia basada en la medicina.

Biomarcadores en suero

Se compone de diferentes matrices biológicas, como células tumorales circulantes (CTC), ácidos
nucleicos libres de células, exosomas o "plaquetas educadas" tumorales.

Inicialmente referida principalmente al análisis de células tumorales circulantes (CTC), la biopsia

líquida ahora se extiende al análisis de los muchos componentes liberados por el tumor en los
efluentes corporales (principalmente sangre), incluidos los ácidos nucleicos circulantes libres de
células (ADN, ARNm, no ARN codificante como micro ARN o ARN largo no codificante, "plaquetas
tumoreducidas" (TEP) o vesículas como exosomas.
Presentación de componentes de biopsia líquida

CTC células 1860 Thomas las células tumorales sólidas

tumorales Ashworth podrían penetrar en el torrente
circulantes sanguíneo a través de enfoques
pasivos y activos / pasivamente
por fuerzas externas, como el
crecimiento tumoral, las fuerzas
mecánicas durante la operación
quirúrgica o la fricción
cfDNA cellfreeDNA se puede liberar del tejido sano,
ADN libre de células inflamado o tumoral que sufre
apoptosis o necrosis.
pasiva o activa [ 22 ]. El
mecanismo pasivo sugiere que
las células tumorales muertas
liberan ADN o ARN en la
circulación, mientras que
ciertos experimentos in vitro e i
n vivo encontraron que las
líneas celulares tumorales
podrían liberar
espontáneamente fragmentos
de ADN en la circulación
[ 23 , 24 ]. 
exosomas muchos tipos de células pueden
circulantes generar 
partículas pequeñas (30-140
nm) unidas a la membrana que
se originan a partir de grandes
cuerpos multivesiculares (MVB)
y se liberan en el entorno
extracelular mediante la fusión
de MVB con la membrana
plasmática, y se han revelado
como un biomarcador
prometedor en múltiples
enfermedades 
Aunque el tamaño de los
exosomas es similar entre las
células normales y las malignas,
la concentración de proteínas
del exosoma es más alta en el
cáncer en estadio avanzado, y
los perfiles de proteínas, ARNm
 y miARN de los exosomas
también difieren de los de las
células de origen de los
exosomas

La biopsia en cy c

file:///C:/Users/Ta_ch/Downloads/Biopsia%20Liquida%20,%20Buenos%20Aires.pdf

imagen usos https://www.seap.es/documents/10157/1443467/05+-+Utilidad+cl

%C3%ADnica+de+la+biopsia+l%C3%ADquida+-+JL+Gonz%C3%A1lez+Larriba.pdf/71d9a521-4de4-
43fb-a185-5988610a4055?version=1.0

En conclusión, aunque aún queda mucho por avanzar en cuanto a las limitaciones
que presenta, la biopsia líquida es una herramienta que puede llegar a adquirir un
papel muy importante en el cáncer. Esto se debe a que el análisis de ADN tumoral
circulante habilita para la detección y caracterización no invasiva del cáncer, la
predicción de la respuesta al tratamiento, la monitorización de la recaída de la
enfermedad y la identificación de mecanismos de resistencia a medicamentos.

https://genotipia.com/biopsia-liquida-deteccion-cancer/

https://www.karger.com/Article/FullText/458736#f01

Liquid Biopsy: General Concepts Geoffroy Pouleta, b Joséphine Massiasa Valerie Talya

file:///C:/Users/Ta_ch/Desktop/poulet2019.pdf

Resumen
La biopsia líquida brinda la oportunidad de detectar, analizar y monitorear el cáncer en varios
efluentes corporales, como sangre u orina, en lugar de un fragmento de tejido canceroso. Se
compone de diferentes matrices biológicas, como células tumorales circulantes (CTC), ácidos
nucleicos libres de células, exosomas o "plaquetas educadas" tumorales. Además de representar
un procedimiento no invasivo o mínimamente invasivo, debería representar una mejor visión de la
heterogeneidad tumoral y permite para el monitoreo en tiempo real de la evolución del cáncer.
Los recientes avances tecnológicos y moleculares, facilitados en gran medida por el uso de
microfluídica en muchos casos, han permitido grandes progresos tanto en nuestra capacidad para
purificar y analizar componentes de biopsia líquida. En particular, los grandes desarrollos de la PCR
digital basada en gotas y las diversas optimizaciones de las tecnologías de secuenciación de
próxima generación son fundamentales para las diversas validaciones de ADN libre de CTC como
un fuerte biomarcador de cáncer. Sin embargo, la adopción completa de la biopsia líquida en las
clínicas requerirá realizar esfuerzos recientes en la estandarización de los procedimientos.

tanto en los aspectos preanalíticos como analíticos.

El análisis de las alteraciones genéticas del cáncer es hoy en día fundamental para el manejo del
paciente y la decisión del tratamiento.

La evaluación del perfil mutacional del cáncer generalmente se realiza utilizando un fragmento del
tumor primario o metástasis. Sin embargo, existen varias limitaciones asociadas con dicho análisis
[1]. La obtención de biopsias de tejido requiere una intervención quirúrgica, lo que limita en gran
medida la posibilidad de tomar muestras de biopsias. Dependiendo de la localización del tumor,

La accesibilidad del tejido tumoral también podría ser un problema.

Además, la heterogeneidad intratumoral, especialmente la heterogeneidad espacial, podría

conducir a resultados poco confiables de detección de biomarcadores, especialmente cuando se
prueba una sola biopsia [2–4]. Además, la presencia de múltiples sitios tumorales complica la
caracterización del cáncer del paciente.

La disponibilidad de muestras de tumor durante el tratamiento a largo plazo de los pacientes

también podría ser complicada y, además, la prueba de las muestras de tumor de archivo puede
no ser óptima debido a la evolución del tumor. Además, como podría ser necesario poder realizar
una monitorización en serie de la progresión y evolución tumoral en pacientes, el

El uso de biopsias de tejido no es fácilmente factible. Por lo tanto hay un

fuerte necesidad de utilizar materiales más accesibles que impliquen procedimientos no invasivos
o mínimamente invasivos que permitan un monitoreo sistemático y en tiempo real de las
alteraciones moleculares del cáncer del paciente. La biopsia líquida representa el procedimiento
ideal para tales aplicaciones, que es muy importante.

respaldado por los impresionantes avances que presenciamos en estos últimos años (Tabla 1).

Inicialmente referida principalmente al análisis de células tumorales circulantes (CTC), la biopsia

líquida ahora se extiende al análisis de los muchos componentes liberados por el tumor en los
efluentes corporales (principalmente sangre), incluidos los ácidos nucleicos circulantes libres de
células (ADN, ARNm, no ARN codificante como micro ARN o ARN largo no codificante, "plaquetas
tumoreducidas" (TEP) o vesículas como exosomas.

Después de una breve presentación de estos diferentes elementos, esta revisión presentará
aplicaciones clínicas seleccionadas de biopsia líquida (Tabla 2), enfocándose principalmente en
CTC y ADN tumoral circulante (ADNc). Finalmente, las revisiones presentarán varias limitaciones
para la generalización de su uso en clínicas.

Tabla 1. Comparación de ventajas y limitaciones de la biopsia de tejido convencional y la biopsia

líquida

Biopsia de tejido convencional Biopsia liquida

Estándar de oro
Accesible al análisis histológico y la
estadificación.
Podría no estar disponible
Procedimiento invasivo
Fuente de molestias para los pacientes
(posibilidad de complicaciones clínicas)
Los tejidos conservados con FFPE podrían
presentar una calidad muy variable (ADN
crossling) dependiendo de los procedimientos
de recolección, almacenamiento y
conservación
Potencial alto rendimiento de ADN pero riesgo
de degradación del ADN / reticulación
(FFPE)
La cantidad de ADN es muy variable según los
métodos de muestreo
Análisis localizado
No permita la caracterización de la
heterogeneidad intra o inter tumor
(metástasis) característica de la mayoría de los
tumores, especialmente en estadios
avanzados o
múltiples sitios tumorales
No aplicable a la monitorización en serie.
Análisis de puntos de tiempo fijo. No hay
posibilidad de seguimiento dinámico de las
modificaciones moleculares del cáncer
Interés clínico bajo investigación.
Posibilidad de análisis histológico limitado a
CTC
Fácil de obtener
Tiempo de respuesta más rápido en
comparación con la biopsia de tejido.
Bajo nivel de productos derivados de tumores
en efluentes corporales
Riesgo de resultados falsos negativos.
Mínimamente invasiva
ADN fresco no modificado por conservantes
Los procedimientos estrictos de recolección,
manipulación y almacenamiento deben ser
respetado para evitar la degradación del ADN
La cantidad y la calidad del ADN dependen en
gran medida de la preanalítica y
proceso analítico
Permitir, en principio (si se puede extraer y
analizar suficiente ADN),
para resaltar tanto la heterogeneidad intra e
intertumoral como la múltiple
sitios tumorales
Aplicable a la fuente de ADN de monitoreo en
serie que se puede tomar en cualquier
momento durante la terapia o el seguimiento
del paciente Seguimiento dinámico de la
evolución del tumor (especialmente
relacionado con la corta vida media del ADNc
 de ctDNA)

Presentación de componentes de biopsia líquida

Los CTC son células cancerosas que se desprenden de un tumor primario y / o lesiones
metastásicas y viajan a través del torrente sanguíneo a otras partes del cuerpo con una vida media
de 1 a 2.4 h [5]. Se pueden aislar de la sangre de pacientes con cáncer como células individuales o
grupos de células. Su abundancia es baja (<10 células / ml de sangre) incluso en entornos
metastásicos y varía entre los tipos de tumor [5, 6]. Se ha desarrollado una amplia gama de
tecnologías basadas en la presencia o ausencia de marcadores específicos (como la molécula de
adhesión de células epiteliales para la selección positiva o marcadores CD45 para la selección
negativa) o en propiedades biofísicas (tamaño, deformabilidad, etc.). aislamiento.

 Es importante destacar que el número y el fenotipo de "CTC" aislados utilizando estos métodos
varían en gran medida y se necesitan más estudios para comprender la verdadera importancia
clínica de estas células [8]. Los análisis citológicos y moleculares (como los análisis genómicos y
transcriptómicos) también se pueden realizar en CTC que potencialmente abren grandes
aplicaciones tanto en clínicas como en la comprensión de los procesos fundamentales del
desarrollo del cáncer [9, 10]. Además, la posibilidad de capturar CTC viables también ha abierto
nuevas oportunidades, como la creación de modelos de xenoinjertos derivados de CTC mediante
la expansión de CTC de pacientes en ratones inmunocomprometidos [11], el establecimiento de
líneas celulares de CTC de varios tipos de cáncer (con varios eficiencia) [12], o el cultivo de CTC
independientes o como tejidos 3D [13]. Estos enfoques de cultivo innovadores han llevado a la
posibilidad de realizar estudios funcionales en estas células, incluidas las pruebas de terapia [6,
10].

Los TEP se han descrito recientemente como otro componente pertinente de la biopsia líquida.
Los TEP están implicados como actores centrales en las respuestas sistémicas y locales al
crecimiento tumoral. Las células tumorales están alterando el perfil de ARN de estas plaquetas
[14]. Además, los TEP pueden tener la capacidad de ingerir directamente (empalmado) ARNm
circulante liberado por las células tumorales y también pueden sufrir eventos de empalme
específicos de la cola en respuesta a las señales liberadas por las células cancerosas y el
microambiente tumoral, como las células inmunes y del estroma. Las plaquetas también pueden
secuestrar proteínas solubilizadas asociadas a tumores . Estas interacciones entre las plaquetas y
las células tumorales podrían presentar un potencial interesante para el diagnóstico de cáncer y
para controlar la evolución del tumor.

Se detecta una mayor concentración de ctDNA en los cánceres avanzados en comparación con los
localizados [33] y también se ha observado una correlación entre la cantidad de ctDNA y la carga
tumoral [34, 35]. Un desafío importante para la detección de alteraciones genéticas o epigenéticas
específicas del cáncer en el ADNc está relacionado con nuestra capacidad para alcanzar niveles
aceptables de sensibilidad y especificidad. De hecho, las bajas concentraciones de ctDNA en
sangre y la dilución dentro de ccfDNA han dificultado durante mucho tiempo su detección. Los
desarrollos recientes en la secuenciación de próxima generación (NGS) y la PCR digital basada en
gotas (ddPCR) han permitido la detección altamente sensible y cuantitativa de mutaciones raras y
más recientemente de secuencias metiladas.

Los exosomas son un tipo de vesículas extracelulares (EV) de origen endocítico que varían en
tamaño entre 30 y 100 nm [18]. Se describe que juegan un papel importante en los intercambios
de información molecular entre las células. Son detectables en la sangre de pacientes con varios
tipos de cánceres y se ha demostrado que se correlacionan bien con la progresión tumoral, la
supresión de la respuesta inmune, la angiogénesis y la metástasis [19]. Se han descrito varios
procedimientos para su aislamiento, como la centrifugación en gradiente de densidad, la
ultracentrifugación o la selección mediante marcadores específicos de membrana exosómica
(proteínas de tetraspanina CD63, CD9 y CD81) [20]. Sin embargo, en cuanto a los CTC, existe un
gran debate no cerrado sobre el análisis preanalítico y analítico de estas vesículas [21, 22].
Además, el término de exosoma parece usarse a menudo para pequeñas vesículas extracelulares,
incluidas las derivadas de membrana plasmática [18]. Se ha descrito que los exosomas transportan
varias moléculas, incluidas proteínas y ácidos nucleicos. La identificación de alteraciones
moleculares (incluidas mutaciones, variantes de empalme o fusiones de genes), así como el perfil
de expresión génica, se han realizado mediante el análisis del contenido de exosomas de ARN. Los
exosomas se han considerado como mediadores del intercambio genético entre poblaciones
heterogéneas de células cancerosas, y varios estudios muestran que los microARN derivados de
exosomas (miARN) promueven metástasis, aumentan la migración de células endoteliales [23, 24]
y también pueden desempeñar un papel importante en el fármaco. resistencia.

El ADN libre de células circulantes (ccfDNA) se ha propuesto como un biomarcador de cáncer, pero
solo el análisis de la fracción directamente derivada del tumor (ctDNA) presenta la sensibilidad y
especificidad necesarias. De hecho, las modificaciones de los niveles de ccfDNA se han asociado
con varios procesos patológicos y no patológicos (como se explica más adelante en esta revisión).
El ADNc está altamente fragmentado en los efluentes corporales. Tiene una vida media corta en la
sangre (alrededor de 114 min) [27], lo que permite un control dinámico (en tiempo real) de la
evolución del cáncer. Dependiendo de los tipos de cáncer, la detección de ADNc se ha descrito en
varios otros fluidos corporales, incluida la orina [27], el líquido cefalorraquídeo [28], la saliva [29] o
el líquido pleural [30] con una cantidad vinculada en gran medida a la localización del tumor
primario. y metástasis [6]. Por ejemplo, una mayor concentración de ctDNA también se asoció con
la presencia de metástasis hepáticas en pacientes con cáncer avanzado de pulmón [31] y
colorrectal.

Los miARN son ARN endógenos pequeños no codificantes (21-25 bps). Pueden funcionar como
oncogenes o supresores de tumores bajo ciertas condiciones y pueden regular diferentes vías
celulares. Son las moléculas de ARN más abundantes que circulan en la sangre y pueden
transportarse en exosomas o TEP como se describió anteriormente, cuerpos apoptóticos o
complejos de proteína-miRNA. Los miARN presentan una alta estabilidad en muestras biológicas
(probablemente debido a la protección dentro de exosomas y / o complejos de proteínas). Se ha
descrito que desempeñan un papel crucial en el crecimiento tumoral y la resistencia al tratamiento
[37]. En el caso de tumores sólidos, se ha observado correlación entre el tumor y el perfil de
miARN sanguíneos. La cantidad y composición de los miARN exosómicos difieren entre pacientes
con cáncer y sujetos sanos y pueden usarse como nuevos biomarcadores de cáncer [38]. Los
miARN también se han propuesto como posibles marcadores de diagnóstico, pronóstico y
predicción para varios tipos de cáncer [39, 40]. El manejo preanalítico de las muestras y la elección
de los métodos analíticos para el análisis de miRNA se han descrito como influyentes en los
resultados potenciales [41]. Como se mencionó anteriormente, cuando se habla de biopsia líquida,
los investigadores generalmente se refieren a CTC y / o ADNc y la mayor parte de la literatura está
dedicada a estos biomarcadores no invasivos [42]. Ahora nos centraremos en estos dos
marcadores para la ejemplificación de las aplicaciones clínicas de la biopsia líquida.

Aplicaciones clínicas de biopsia líquida

La abundancia de CTC se ha descrito como un fuerte marcador de pronóstico para pacientes con
varios tipos de cáncer y, cuando se mide después del inicio del tratamiento, como un marcador
predictivo de respuesta a la terapia. El número de CTC detectados se ha asociado con los
resultados del tratamiento y la supervivencia general [6]. Incluso si se ha desarrollado una amplia
gama de métodos para su detección, solo el sistema CellSearch (Veridex ahora Sillicon Biosystems)
está aprobado por la FDA [8]. El análisis de CTC podría integrarse fácilmente en las prácticas de
citología [9]. En cuanto al ADNc, la mayoría de las evidencias demuestran su uso potencial en
entornos metastásicos, pero trabajos recientes sugieren su pertinencia para las enfermedades en
etapas más tempranas. Es muy probable que la gran aparición de métodos para su aislamiento y
caracterización conduzca a una mejor comprensión de su utilidad clínica. Como se mencionó
anteriormente, la posibilidad de realizar la enumeración de CTC para el seguimiento de pacientes
con cáncer se ha descrito durante mucho tiempo. Sin embargo, ahora se propone la
caracterización fenotípica de estos CTC para el análisis del perfil de expresión génica, por ejemplo,
para investigar la heterogeneidad del tumor o para identificar alteraciones específicas del gen
diana, así como para evaluar la presencia de marcadores asociados al tratamiento (como la
muerte celular programada). ligando uno (PD-L1) para inmunoterapias) [43]. Sin embargo, como
se mencionó anteriormente, debido a los numerosos métodos desarrollados para su aislamiento,
pero también por su baja representación en entornos no metastásicos, su uso sigue siendo
controvertido y varias iniciativas ahora están tratando de evaluar su utilidad clínica [44]. Grandes
estudios clínicos ahora tienen como objetivo comprender la ganancia potencial para la
supervivencia del paciente de la inclusión de CTC para la decisión del tratamiento.

Los últimos años han sido testigos de un tremendo aumento en las publicaciones que demuestran
el impacto potencial de ctDNA para el tratamiento de pacientes con cáncer. El análisis altamente
sensible y cuantitativo de ccfDNA se ha descrito en gran medida como una forma de evaluar la
carga tumoral en varios tipos de cánceres [6, 33, 45]. La cantidad de ccfDNA total se ha descrito
como más alta en pacientes con cáncer en comparación con individuos sanos, pero también como
un aumento en la función del estadio tumoral. También se ha descrito como pertinente para
evaluar el riesgo de recaída después de la cirugía. Sin embargo, estos análisis cuantitativos de
ccfDNA solo son limitados, ya que los niveles elevados también se han asociado con el embarazo,
procesos patológicos no cancerosos (diabetes, inflamación, infección, etc.) o daño de los tejidos
(ejercicio intenso o lesión) [1 6]. Sin embargo, la asociación entre el análisis de ccfDNA y la
identificación de alteraciones genéticas o epigenéticas específicas del tumor (lo que permite
centrarse en su fracción tumoral, ctDNA) aumenta en gran medida su pertinencia clínica. Para
aplicaciones clínicas que implican la detección de ADNc, generalmente se prefiere el plasma al
suero. De hecho, incluso si la cantidad total de ccfDNA es mayor en suero que en plasma, la
fracción de ADN tumoral es menor y más variable [46]. Los procedimientos altamente sensibles
como ddPCR y NGS optimizado parecían verdaderamente cuantitativos y muy precisos, lo que
permitió un control preciso de los niveles de ctDNA [47] y allanó el camino para la detección
precoz de recurrencia del cáncer, la identificación de subclones resistentes, así como la pronta y
rentable evaluación de la eficacia del tratamiento [45]. Ahora está bien aceptado que la fracción
de ADNc detectado está relacionada con la carga tumoral [6, 33, 45]. Se han informado altas
correlaciones entre el genotipo tumoral y las mutaciones presentes en el ADNc que conducen a
fuertes implicaciones para la medicina de precisión [32]. Esto se ve reforzado por el hecho de que
se ha descrito que la biopsia líquida permite un tiempo de respuesta medio más corto de las
pruebas [32, 48]. Un ejemplo pertinente del uso potencial de ctDNA se basa en la reciente
autorización para realizar la determinación del estado mutacional de EGFR para determinar la
sensibilidad del tumor a EGFR-TKI en NSCLC avanzado cuando la prueba de tejido tumoral no es
factible [49]. Otra aplicación atractiva de la biopsia líquida se basa en el monitoreo de la evolución
clonal durante el tratamiento [50]. La detección temprana de mutaciones o amplificaciones de
resistencia al tratamiento bien conocidas en plasma de pacientes con cáncer colorrectal
metastásico demostró ser altamente eficiente [51], pero también se pudieron identificar nuevos
mecanismos de resistencia mediante análisis de secuenciación [52, 53]. Sin embargo, dado que no
se puede detectar el ADNc para todos los pacientes con cáncer, incluso en un entorno
metastásico, es importante garantizar la presencia de ADNc al realizar dicho análisis. La presencia
de mutaciones específicas del tumor o marcadores de metilación aparece recientemente como
pertinente para tales aplicaciones [32]. Varios estudios describieron que la cantidad de ctDNA se
correlacionó mejor con la respuesta a los tratamientos que los marcadores séricos utilizados
convencionalmente [31, 54, 55] o incluso la enumeración de CTC para el cáncer de mama [56], así
como las imágenes convencionales [51, 56]. Nuevamente, ahora se requieren grandes estudios
clínicos para garantizar el beneficio de los pacientes con cáncer del análisis de ADNc.

Ahora se describe bien que el análisis cuantitativo del nivel de ADNc del paciente con cánceres
localizados después de la cirugía u otros tratamientos curativos es un fuerte marcador de
recurrencia potencial de la enfermedad para varias localizaciones de cáncer [55, 57-59]. La
determinación del riesgo de recurrencia para pacientes con cáncer en etapa temprana abre la
posibilidad de ajustar el tratamiento del paciente para pacientes positivos y también de reducir el
tratamiento para pacientes negativos. Sin embargo, se deben realizar más estudios clínicos
grandes para confirmar dichos resultados. Sin embargo, ser capaz de identificar la recurrencia del
cáncer en pacientes con cáncer temprano después del tratamiento curativo es una aplicación muy
atractiva de biopsia líquida.

Finalmente, el diagnóstico temprano del cáncer también es una aplicación atractiva del análisis de
biopsia líquida. Varios trabajos sugirieron la capacidad de los marcadores de ADNc para realizar la
detección temprana del cáncer [1, 60]. De hecho, la mayoría de los cánceres se diagnostican en
una etapa tardía cuando las posibilidades de un resultado positivo de los pacientes con cáncer
disminuyeron drásticamente al aumentar la etapa del cáncer. Trabajos recientes combinaron la
detección altamente sensible de mutaciones y marcadores de proteínas en la biopsia líquida para
permitir la detección de pacientes con cáncer en etapa temprana [61, 62]. Los autores de estos
trabajos también describieron la posibilidad de determinar el posible órgano de origen de los
cánceres no metastásicos (análisis de sangre CancerSEEK) en varios tipos de cáncer [61]. Tanto
para la detección de cánceres tempranos como para la determinación de un mayor riesgo de
recurrencia del cáncer y la eficacia terapéutica mediante biopsias líquidas, ahora es importante
evaluar el impacto en los resultados de los pacientes [6].

Conclusiones / Perspectivas

El gran potencial de la biopsia líquida para la investigación en oncología y clínicas está

comenzando a ser explorado de manera eficiente. En particular, recientemente ha surgido una
literatura impresionante que destaca las posibles aplicaciones clínicas de las biopsias líquidas. Esto
seguramente se verá reforzado en los próximos años, ya que una gran cantidad de estudios
clínicos realizados en la actualidad involucran recolecciones de sangre en serie. Además, es muy
probable que las mejoras continuas en tecnologías precisas y altamente sensibles que hemos
presenciado en estos últimos años pronto abran aún más aplicaciones para los diversos
componentes liberados por los tumores en los efluentes corporales. Finalmente, incluso si nos
centramos en esta revisión en el uso de la sangre, ya se han utilizado varios otros efluentes como
biopsia líquida.

Para lograr un uso clínico eficiente, aún se debe realizar y generalizar un trabajo importante en la
estandarización de los procedimientos preanalíticos y analíticos para todos los componentes de
biopsias líquidas. Ya se han realizado una gran cantidad de trabajos en este camino y hay que
mencionar las redes pertinentes, como Cancer-ID en Europa (https://www.cancer-id.eu/the-
project/overview/). Las necesidades de estandarización en los procedimientos preanalíticos
incluyen la elección de los tubos de extracción de sangre, el tiempo y los procedimientos que se
utilizarán entre la extracción de sangre y el procesamiento del plasma, así como los
procedimientos para la extracción / aislamiento de componentes de biopsia líquida. Los
procedimientos estándar también deben validarse para su caracterización y cuantificación.
Además, la estandarización también debe centrarse en la maximización del rendimiento de los
marcadores de biopsia líquidos.

Como se mencionó anteriormente, la biopsia líquida podría ofrecer una mejor caracterización de
la heterogeneidad del cáncer (tumores y sitios metastásicos) y su evolución. Sin embargo, los
grandes estudios de validación clínica también son obligatorios para evaluar y demostrar la
eficiencia de los diversos marcadores encontrados en la biopsia líquida (incluidos exosomas, ADNc
o CTC) en entornos clínicos, pero también para experimentar beneficios en el resultado del
paciente [6]. Además, aún debe estudiarse la complementariedad de los diversos componentes de
la biopsia líquida, potencialmente originarios de diferentes poblaciones de células cancerosas.
https://healthcarentsickcare.com/liquid-biopsy-test

pphttps://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S1535610817300028

https://european-biotechnology.com/up-to-date/latest-news/news/liquid-biopsy-identifies-
residual-breast-cancer.html

https://www.cancer.ca/en/research-horizons/1/8/f/liquid-biopsy-for-early-cancer-detection/

http://www.discoverymedicine.com/Matthew-E-Spector/2018/05/the-potential-for-liquid-
biopsies-in-head-and-neck-cancer/

https://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S0165614719300173

http://www.aiaohns.in/article.asp?issn=2589-
3505;year=2019;volume=3;issue=1;spage=1;epage=7;aulast=Singhal

https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC6032225/

file:///C:/Users/Ta_ch/OneDrive/Documentos/vicky/servicio%20social/Biopsia%20liquida/Un
%20análisis%20de%20sangre%20permite%20detectar%20mutaciones%20genéticas,.pdf