Informe 5 Cámara de Neubauer

UNIVERSIDAD CENTRAL DEL ECUADOR
FACULTAD DE INGENIERÍA QUÍMICA

CARRERA DE INGENIERÍA QUÍMICA
LABORATORIO DE BIOTECNOLOGÍA INDSUTRIAL
CENTRO DE BIOLOGÍA
INFORME 5
Cámara de Neubauer
QUINTO SEMESTRE
PARALELO 1
Dra. Magdalena Díaz
Técnico de Laboratorio 2 del centro de biología: Andrés Granda
GRUPO 5
INTEGRANTES:
• MELANY BAUTISTA
• PAOLA CARRIÓN
• ALEJANDRO CASTRO
• DOMÉNICA LANDETA
• MATEO PILLAJO
• DAVID PUENTE
QUITO-ECUADOR
2020-2021
1. Tema: Cámara de Neubauer
2. Objetivos:
2.1. Determinar el procedimiento adecuado para realizar el conteo de células viables y su

respectiva concentración en unidades de célula/ml, utilizando la cámara de Neubauer.
2.2. Experimentar mediante un simulador virtual, el uso de la cámara de Neubauer o
hematocímetro para determinar su factor de dilución, así como, el reconocimiento de la
cantidad de células vivas y muertas.
2.3. Reconocer las diferencias entre la cámara Neubauer Improved y la cámara Thoma, así como
identificar el uso correcto del cuadro central para células pequeñas, y los cuadros exteriores
para células grandes.
3. Procedimiento:
3.1. Procedimiento del simulador virtual
3.1.1. Mediante el link proporcionado ingresar al simulador
https://www.ncbionetwork.org/iet/hemocytometer/
3.1.2. Revisar detenidamente la explicación suministrada por el simulador.
Figura 1. Objetivos suministrados por el simulador.
Nota: La figura muestra los objetivos del simulador. Tomada de BioNetwork´s Vitrual
Training lab. Grupo 5. 2021.
Figura 2. Dilución del cultivo celular
Nota: La figura muestra la dilución del cultivo celular para tener un número manejable de
células en un espacio definido, para poder contarlas. Tomado de BioNetwork´s Vitrual
Figura 3. Teñido y Carga de la muestra en un Neubauer.
Nota: La figura muestra la tinción de las células para mejorar su visualización. Tomado de
BioNetwork´s Vitrual Training lab. Grupo 5. 2021.
Figura 4. Neubauer.
Nota: La figura muestra 9 cuadros en un portaobjetos Neubauer. Tomada de BioNetwork´s

Vitrual Training lab. Grupo 5. 2021.
Figura 5. Conteo de células en determinas celdas.
Nota: La figura señala que se debe contar las células que se encuentran dentro de los
cuadros en azul. Tomada de BioNetwork´s Vitrual Training lab. Grupo 5. 2021.
Figura 6. Límites.
Nota: La figura muestra que se deben tomar dos líneas límites para contar, y que no se
cuentan las células que cruzan menos de la mitad de los límites establecidos. Tomada de
Figura 7. Color de las células.
Nota: La imagen muestra que las células muertas se tiñen de color azul y las células vivas
aparecen de color claro porque el tinte no penetra su pared celular. Tomada de
3.1.3. Contar las células viables y las células muertas en cada cuadro, mediante el método
explicado en clase (Se cuenta de izquierda a derecha, se baja y se prosigue con el conteo
de derecha a izquierda, se baja y se cuenta nuevamente de izquierda a derecha).
Figura 8. Conteo de células viables y muertas por cuadro.
Nota: La figura muestra el conteo de las células muertas y las células viables que se debe
realizar en cada cuadro especificado en la Figura 5. Tomada de BioNetwork´s Vitrual
3.1.4. Registrar las células muertas y las células viables de cada cuadro y sumarlas.
3.1.5. Realizar los cálculos.
Figura 9. Cálculo de células Viables.
Nota: La figura muestra el cálculo de células viables. Tomada de BioNetwork´s Vitrual

Figura 10. Cálculo promedio de células por cuadro.
Nota: La figura muestra el cálculo promedio de células por cuadro. Tomada de

Figura 11. Cálculo del factor de dilución.
Nota: La figura muestra el cálculo del factor de dilución. Tomada de BioNetwork´s Vitrual
Figura 12. Cálculo para concentración de células viables por mililitro.
Nota: La figura muestra el cálculo para concentración de células viables por mililitro.
Tomada de BioNetwork´s Vitrual Training lab. Grupo 5. 2021.
3.1.6. Registrar los resultados.
Figura 13. Tabla de resultados.
Nota: La figura muestra los resultados que se obtuvieron mediante los cálculos realizados.
3.2. Pocedimiento de Cuantificación de levaduras

3.2.1. Mediante el uso del navegador Chrome Ingresar al link mostrado a continuación:
http://insilico.ehu.eus/camara_recuento/
3.2.2. Registrar el código numérico propio ubicado en la parte superior
Figura 14. Código numérico para conteo de levaduras.
Nota: Cuantificación de levaduras en cámara de recuento Neubauer improved o Thoma.

Grupo 5. 2021.
3.2.3. Seleccionar la cámara Thoma y ubicarse en el primer cuadrante izquierdo
Figura 15. Opción cámara de Neubauer Thoma.
Nota: La figura indica donde se debe seleccionar para la cuantificación de levaduras en

cámara de recuento Thoma. Tomada de Cuantificación de levaduras de recuento Neubauer
improved o Thoma. Grupo 5. 2021.
3.2.4. Captar lo observado mediante una fotografía y ubicarlo en la parte de observaciones
3.2.5. Mediante el uso de los métodos indicados en clase para el conteo de levaduras llevar a
cabo el conteo en el primero cuadrante de la diagonal
3.2.6. Registrar los valores en la tabla.: Tabla de datos en cámara Thoma
3.2.7. Repetir el procedimiento para los demás cuadrantes que conforman la diagonal
3.2.8. Una vez acabado el conteo repetir el procedimiento desde el punto 3.2.1. para la cámara
Neubauer improved.
Figura 16. Opción cámara de Neubauer improved
Nota: La figura indica donde se debe seleccionar para la cuantificación de levaduras en cámara de
recuento Neubauer improved. Tomada de Cuantificación de levaduras de recuento Neubauer
improved o Thoma. Grupo 5. 2021.
4. Observaciones
4.1. Observaciones del simulador virtual
Figura 17. Conteo de células viables y muertas primer cuadro.
Nota: La figura muestra el conteo de las células muertas y las células viables presentes en
el primer cuadro. Tomada de BioNetwork´s Vitrual Training lab. Grupo 5. 2021.
Figura 18. Conteo de células viables y muertas segundo cuadro.
el segundo cuadro. Tomada de BioNetwork´s Vitrual Training lab. Grupo 5. 2021.
Figura 19. Conteo de células viables y muertas tercer cuadro.
el tercer cuadro. Tomada de BioNetwork´s Vitrual Training lab. Grupo 5. 2021.
Figura 20. Conteo de células viables y muertas cuarto cuadro.
el cuarto cuadro. Tomada de BioNetwork´s Vitrual Training lab. Grupo 5. 2021.
Figura 21. Conteo de células viables y muertas quinto cuadro.
Nota: La figura muestra el conteo de las células muertas y las células viables quinto cuadro.
NOTA
Para contar las células muertas y viables se debe comenzar de izquierda a derecha una vez
tontadas en su totalidad en este espacio se baja con el rotor del mouse y se cuenta en esta
ocasión de derecha a izquierda, se repite estos procesos hasta terminar con todas las células
muertas y viables que se pueden observar en el simulador
4.2. Observaciones de la cuantificación de levaduras

4.2.1. Para cámara Thoma.
Figura 22. Vista completa de la Cámara de THOMA
Nota: La figura muestra las células presentes en la cámara de Thoma. Tomada de

Cuantificación de levaduras en cámara de recuento Neubauer improved o Thoma. Grupo
5. 2021.
Figura 23. Vista del cuadrante 1 de cámara de Thoma.

Nota: La figura muestra las células presentes en el primer cuadrante. Tomada de
5. 2021.
Figura 24. Vista del cuadrante 2 de cámara de Thoma
Nota: La figura muestra las células presentes en el segundo cuadrante. Tomada de

5. 2021.

Nota: La figura muestra las células presentes en el tercer cuadrante. Tomada de
5. 2021.
Nota: La figura muestra las células presentes en el cuarto cuadrante. Tomada de

5. 2021.
4.2.2. Para cámara Neubauer improved.
Figura 27. Vista completa de la Cámara de Neubauer improved.

Nota: La figura muestra las células presentes en la cámara de Neubauer improved. Tomada
de Cuantificación de levaduras en cámara de recuento Neubauer improved o Thoma. Grupo
5. 2021.
Figura 28. Vista del cuadrante 1 de cámara de Nebauer improved
Nota: La figura muestra las células presentes en el primer cuadrante. Tomada de

5. 2021.
Nota: La figura muestra las células presentes en el segundo cuadrante. Tomada de

5. 2021.
Nota: La figura muestra las células presentes en el tercer cuadrante. Tomada de

5. 2021.

Nota: La figura muestra las células presentes en el cuarto cuadrante. Tomada de
5. 2021.
Nota: La figura muestra las células presentes en el quinto cuadrante. Tomada de

5. 2021.
5. Cálculos
5.1.Cálculos del simulador virtual
Tabla 1. Datos del Experimento
Cuadro N° Células viables Células muertas
1 20 2
2 21 2
3 20 2
4 19 2
5 19 2
Total 99 10
Nota: Universidad Central del Ecuador, Facultad de ingeniería Química, Laboratorio de

Biotecnología Industrial, Grupo 5- 2021
5.1.1. Cálculo para el porcentaje de células viables.
𝐶𝑎𝑛𝑡𝑖𝑑𝑎𝑑 𝑑𝑒 𝑐é𝑙𝑢𝑙𝑎𝑠 𝑣𝑖𝑎𝑏𝑙𝑒𝑠

× 100 = 𝑃𝑜𝑟𝑐𝑒𝑛𝑡𝑎𝑗𝑒 𝑑𝑒 𝑐é𝑙𝑢𝑙𝑎𝑠 𝑣𝑖𝑎𝑏𝑙𝑒𝑠
𝐶𝑎𝑛𝑡𝑖𝑑𝑎𝑑 𝑡𝑜𝑡𝑎𝑙 𝑑𝑒 𝑐é𝑙𝑢𝑙𝑎𝑠
99(𝑐é𝑙𝑢𝑙𝑎𝑠 𝑣𝑖𝑎𝑏𝑙𝑒𝑠)
× 100 = 98,83%[𝐶é𝑙𝑢𝑙𝑎𝑠 𝑣𝑖𝑎𝑏𝑙𝑒𝑠]
109 (𝑐é𝑙𝑢𝑙𝑎𝑠 𝑡𝑜𝑡𝑎𝑙𝑒𝑠)
5.1.2. Cálculo para el promedio de células viables por cuadro.
𝐶𝑎𝑛𝑡𝑖𝑑𝑎𝑑 𝑑𝑒 𝑐é𝑙𝑢𝑙𝑎𝑠 𝑣𝑖𝑎𝑏𝑙𝑒𝑠

= 𝑃𝑟𝑜𝑚𝑒𝑑𝑖𝑜 𝑑𝑒 𝑐é𝑙𝑢𝑙𝑎𝑠 𝑣𝑖𝑎𝑏𝑙𝑒𝑠
𝑁ú𝑚𝑒𝑟𝑜 𝑑𝑒 𝑐𝑢𝑎𝑑𝑟𝑜𝑠
99 [𝐶é𝑙𝑢𝑙𝑎𝑠]
= 19,8 [Células/Cuadro]
5 [𝐶𝑢𝑎𝑑𝑟𝑜]
5.1.3. Cálculo para el factor de dilución.
𝑉𝑜𝑙𝑢𝑚𝑒𝑛 𝑓𝑖𝑛𝑎𝑙
= 𝐹𝑎𝑐𝑡𝑜𝑟 𝑑𝑒 𝑑𝑖𝑙𝑢𝑐𝑖ó𝑛
𝑉𝑜𝑙𝑢𝑚𝑒𝑛 𝑑𝑒 𝑙𝑎𝑠 𝑐𝑒𝑙𝑢𝑙𝑎𝑠
200[𝑚𝐿]
=2
100[𝑚𝐿]
5.1.4. Cálculo para la concentración de células viables por mililitro.
𝑃𝑟𝑜𝑚𝑒𝑑𝑖𝑜 𝑑𝑒 𝑐é𝑙𝑢𝑙𝑎𝑠 𝑝𝑜𝑟 𝑐𝑢𝑎𝑑𝑟𝑜 × 𝐹𝑎𝑐𝑡𝑜𝑟 𝑑𝑒 𝑑𝑖𝑙𝑢𝑠𝑖ó𝑛 × 104

= 𝐶𝑜𝑛𝑐𝑒𝑛𝑡𝑟𝑎𝑐𝑖ó𝑛 𝑑𝑒 𝑐𝑒𝑙𝑢𝑙𝑎𝑠 𝑣𝑖𝑎𝑏𝑙𝑒𝑠 𝑝𝑜𝑟 𝑚𝑖𝑙𝑖𝑙𝑖𝑡𝑟𝑜.
𝐶é𝑙𝑢𝑙𝑎𝑠
19,8 × 2 × 104 = 396000 [ ]
𝑚𝐿
5.2. Cálculos cuantificación de levaduras

5.2.1. Cámara de Thoma
Tabla 2. Datos para conteo de levaduras en cámara Thoma
Células presentes
Cuadrante 1 14
Cuadrante 2 7
Cuadrante 3 4
Cuadrante 4 7

𝐶𝑒𝑙𝑢𝑙𝑎𝑠𝑐1 + 𝐶𝑒𝑙𝑢𝑙𝑎𝑠𝑐2 + 𝐶𝑒𝑙𝑢𝑙𝑎𝑠𝑐3 + 𝐶𝑒𝑙𝑢𝑙𝑎𝑠𝑐4 + 𝐶𝑒𝑙𝑢𝑙𝑎𝑠𝑐5

𝑛𝑢𝑚𝑒𝑟𝑜 𝑡𝑜𝑡𝑎𝑙 𝑑𝑒 𝑐𝑒𝑙𝑢𝑙𝑎𝑠
=
𝑛𝑢𝑚𝑒𝑟𝑜 𝑑𝑒 𝑐𝑢𝑎𝑑𝑟𝑎𝑛𝑡𝑒𝑠
37
14 + 7 + 4 + 7 = = 9.25
4
9.25 [𝑙𝑒𝑣𝑎𝑑𝑢𝑟𝑎𝑠] 400[𝑐𝑢𝑎𝑑𝑟𝑜𝑠 ] 1000[𝑚𝑚3 ] 6

[𝑙𝑒𝑣𝑎𝑑𝑢𝑟𝑎 ]
∗ ∗ = 1.48 ∗ 10
25[𝑐𝑢𝑎𝑑𝑟𝑜𝑠 ] 0.1[𝑚𝑚3 ] 1[𝑚𝑙] [𝑚𝑖𝑙𝑖𝑙𝑖𝑡𝑟𝑜 ]
5.2.2. Cámara de Neubauer improved
Tabla 3. Datos para conteo de levaduras en cámara Neubauer improved

Células presentes
Cuadrante 1 5
Cuadrante 2 8
Cuadrante 3 3
Cuadrante 4 2
Cuadrante 5 7

𝐶𝑒𝑙𝑢𝑙𝑎𝑠𝑐1 + 𝐶𝑒𝑙𝑢𝑙𝑎𝑠𝑐2 + 𝐶𝑒𝑙𝑢𝑙𝑎𝑠𝑐3 + 𝐶𝑒𝑙𝑢𝑙𝑎𝑠𝑐4 + 𝐶𝑒𝑙𝑢𝑙𝑎𝑠𝑐5

𝑛𝑢𝑚𝑒𝑟𝑜 𝑡𝑜𝑡𝑎𝑙 𝑑𝑒 𝑐𝑒𝑙𝑢𝑙𝑎𝑠
=
𝑛𝑢𝑚𝑒𝑟𝑜 𝑑𝑒 𝑐𝑢𝑎𝑑𝑟𝑎𝑛𝑡𝑒𝑠
25
5+8+3+2+7= =5
5
5 [𝑙𝑒𝑣𝑎𝑑𝑢𝑟𝑎𝑠 ] 400[𝑐𝑢𝑎𝑑𝑟𝑠 ] [𝑚𝑚3 ] 6
∗ ∗ 1000 = 1.25 ∗ 10
16[𝑐𝑢𝑎𝑑𝑟𝑜𝑠 ] 0.1[𝑚𝑚3 ] 1[𝑚𝑙] [𝑚𝑖𝑙𝑖𝑙𝑖𝑡𝑟𝑜 ]
5.2.3. Concentración Promedio de levaduras por mililitro
1480000 + 1250000 𝐿𝑒𝑣𝑎𝑑𝑢𝑟𝑎𝑠

𝐶𝑝𝑟𝑜𝑚𝑒𝑑𝑖𝑜 = [ ]
2 𝑚𝐿
𝐿𝑒𝑣𝑎𝑑𝑢𝑟𝑎𝑠
𝐶𝑝𝑟𝑜𝑚𝑒𝑑𝑖𝑜 = 1365000[ ]
𝑚𝐿
5.2.4. Una suspensión de 2 mL a una concentración de 5 × 106 [Levaduras/mL]

5.2.4.1.Volumen de la alícuota para dilución.
𝐿𝑒𝑣𝑎𝑑𝑢𝑟𝑎𝑠 1 𝑚𝐿
𝑉 = 5 × 106 [ ] ∗ 2 [𝑚𝐿] ∗
𝑚𝐿 1365000 𝐿𝑒𝑣𝑎𝑑𝑢𝑟𝑎𝑠
𝑉1 = 7,326 [𝑚𝐿]
5.2.4.2.Concentración aproximada.
𝐿𝑒𝑣𝑎𝑑𝑢𝑟𝑎𝑠 7,326 𝑚𝐿 𝐿𝑒𝑣𝑎𝑑𝑢𝑟𝑎𝑠

𝐶1 = 1365000 [ ]∗ [ ] = 4999995 [ ]
𝑚𝐿 2 𝑚𝐿 𝑚𝐿
5.2.5. Una suspensión de 3 mL a una concentración de 5 × 108 [Levaduras/mL]

5.2.5.1.Volumen de la alícuota para la dilución.
𝐿𝑒𝑣𝑎𝑑𝑢𝑟𝑎𝑠 1 𝑚𝐿
𝑉 = 5 × 108 [ ] ∗ 3 [𝑚𝐿] ∗
𝑚𝐿 1365000 𝐿𝑒𝑣𝑎𝑑𝑢𝑟𝑎𝑠
𝑉2 = 1098,901 [𝑚𝐿]
5.2.5.2.Concentración aproximada.
𝐿𝑒𝑣𝑎𝑑𝑢𝑟𝑎𝑠 1098,901 𝑚𝐿 𝐿𝑒𝑣𝑎𝑑𝑢𝑟𝑎𝑠

𝐶2 = 1365000 [ ]∗ [ ] = 499999955 [ ]
𝑚𝐿 3 𝑚𝐿 𝑚𝐿
6. Resultados
6.1.Resultados del simulador virtual
Tabla 4. Resultados simuladores.
Resultados
Porcentaje de células viables 90,83 % [Células viables]
Promedio de células viables por cuadro 19,8 [Células/Cuadro]
Factor de dilución 2
Concentración de células viables por
396000 [Células/mL]
mililitro

6.2. Resultados cuantificación de levaduras
Tabla 5. Resultados experimento cuantificación de levaduras.
Resultado
Cámara de Thoma 1.48 ∗ 106
[𝑚𝑖𝑙𝑖𝑙𝑖𝑡𝑟𝑜 ]
Cámara de Nebauer 1.25 ∗ 106
[𝑚𝑖𝑙𝑖𝑙𝑖𝑡𝑟𝑜 ]
Volumen de la alícuota para una concentración de
𝑉1 = 7,326 [𝑚𝐿]
5 × 106 [Levaduras/mL]
Volumen de la alícuota para una concentración de
𝑉2 = 1098,901 [𝑚𝐿]
5 × 108 [Levaduras/mL]

7. Discusiones:
El método cualitativo y cuantitativo empleados en la práctica fueron adecuados, debido a que
se pudo identificar las diferencias entre las cámaras Neubauer y Thoma, mediante el uso de
simuladores los cuales permitieron conocer el proceso de conteo en cada cámara, para este
proceso se preparó el cultivo celular para obtener un número manejable de células en un
espacio definido, antes del conteo se realizó una tinción para distinguir las células vivas y
muertas. Se procedió el conteo de cada cuadro comenzando desde la izquierda hasta la derecha
siguiendo una forma de “S”, evitando contar las células que se encuentren fuera de los límites
de la cámara. Para la segunda parte de la práctica se realizó un conteo de levaduras de un
cultivo utilizando ambas cámaras y aplicando el mismo procedimiento de conteo. Este método
se validó por medio de los datos obtenidos para la cámara de Neubauer (Tabla 5.1.1) y (Tabla
5.2.2.1) y para la cámara de Thoma (Tabla 5.2.1.1), además de los resultados obtenidos de
porcentaje, concentración, promedio de células vivas y factor de dilución (Tabla 6.1.1) y (Tabla
6.2.1).Durante la práctica se presentaron errores de tipo aleatorio en el conteo del cultivo de
levaduras, debido a que estos microorganismos se encuentran repartidos de forma aleatoria y
algunos de estos se sobreponen en el límite de la cámara obligando al observador a discernir
sobre el número de células contables en cada cuadrante. Se recomienda utilizar estas cámaras
para soluciones de una concentración mayor o igual a 106 células por cada mL, además del
uso de un microscopio de contraste de fases al momento de la tinción.
8. Conclusiones:
8.1. Se determinó que el procedimiento adecuado para el recuento celular es en forma de zig –
zag, empezando desde la esquina superior izquierda y finalizando en la esquina inferior
derecha del recuadro, además, para facilitar el conteo se selecciona dos líneas en forma de L
del recuadro. También hay que tomar en cuenta que, para obtener en las unidades de correctas
de concentración, es necesario multiplicar por un factor de 10mil debido a que se debe
considerar el volumen del recuadro, dando como resultado 396mil cell/ml, expuesto en la
tabla de resultados.
8.2. Mediante el uso del simulador virtual se determinó que la cámara de Neubauer o
Hematocímetro, permite reconocer ciertas características de un conjunto de células en medio
líquido, como son el porcentaje de células viables en levaduras, obteniendo un 90,83%, un
promedio de 19.8 celular por cuadro y el factor de dilución obtenido de 2. Esto nos indica
que posee un alto potencial para su utilización en la industria biotecnológica, generalmente,
se requiere que los procesos que involucren levadura tengan viabilidad mayor al 90%.
8.3. En base a los resultado obtenidos en TABLA, se diferenció que las concentraciones
obtenidas en la cámara Thoma son mayores a la cámara de Improved , con concentraciones
de 1.48e6 y 1.25e6, respectivamente, esto se debe a que la capacidad de conteo en la cámara
de Thoma es mejor debido a que tiene mayor cantidad de recuadros (25) en comparación a la
cámara improved (16), lo cual ofrece un mayor espacio para el conteo.
9. Cuestionario:
9.1.De donde sale el término 10000, en la ecuación de concentración para la cámara Neubauer,
Explicar con ecuaciones.
Datos:
Largo=1mm
Ancho=1mm
Altura=0.1mm
Cálculo del volumen de un cuadrado: largo*ancho*altura
1𝑐𝑚3 1𝑚𝑙 1
𝑉 = 1𝑚𝑚 ∗ 1𝑚𝑚 ∗ 0.1𝑚𝑚 = 0.1𝑚𝑚3 ∗ 3
∗ 3
= 𝑚𝑙
(10𝑚𝑚) 1𝑐𝑚 10000
Ecuación de la concentración:
𝑛° 𝑑𝑒 𝑐é𝑙𝑢𝑙𝑎𝑠
𝑐𝑒𝑙𝑙 𝑛° 𝑑𝑒 𝑐𝑢𝑎𝑑𝑟𝑎𝑑𝑜𝑠 𝑐𝑜𝑛𝑡𝑎𝑏𝑖𝑙𝑖𝑧𝑎𝑑𝑜𝑠
𝐶( )=
𝑚𝑙 1
10000 𝑚𝑙
𝑛° 𝑑𝑒 𝑐é𝑙𝑢𝑙𝑎𝑠 ∗ 10000
=
𝑛° 𝑑𝑒 𝑐𝑢𝑎𝑑𝑟𝑎𝑑𝑜𝑠 𝑐𝑜𝑛𝑡𝑎𝑏𝑖𝑙𝑖𝑧𝑎𝑑𝑜𝑠
9.2.Tras tomar una muestra de sangre problema y diluirla al 1/200, se ha procedido a realizar un
recuento manual de eritrocitos en cámara de Neubauer modificada. Al final del recuento, en
cada uno de los recuadros en los que se cuentan estas células hemos obtenido los siguientes
resultados:
E1 = 82 eritrocitos
E2 = 84 eritrocitos
E3 = 85 eritrocitos
E4 = 87 eritrocitos
E5 = 83 eritrocitos
82 + 84 + 85 + 87 + 83
= 84,2 𝑒𝑟𝑖𝑡𝑟𝑜𝑐𝑖𝑡𝑜𝑠
5
84,2 𝑒𝑟𝑖𝑡𝑟𝑜𝑐𝑖𝑡𝑜𝑠 400 𝑐𝑢𝑎𝑑𝑟𝑜𝑠 1000 𝑚𝑚3 𝑚𝑖𝑙𝑙𝑜𝑛𝑒𝑠 𝑑𝑒 𝑒𝑟𝑖𝑡𝑟𝑜𝑐𝑖𝑡𝑜𝑠
× 3
× = 21,05
16 𝑐𝑢𝑎𝑑𝑟𝑜𝑠 0,1 𝑚𝑚 1 𝑚𝐿 𝑚𝐿
Calcular el número de eritrocitos por milímetro cúbico (mm3) que hay en la muestra de
sangre problema estudiada.
9.3.¿Cómo se debe mover la preparación para que el recuento resulte fiable?
a) De arriba a abajo.
b) De derecha a izquierda.
c) En zig-zag.
9.4.¿Qué células han de contarse en cada cuadradito?
a) Las que contenga en su interior y las que estén situadas sobre sus líneas superior
e izquierda.
b) Sólo las que contenga en su interior.
c) Las que estén situadas sobre sus líneas superior e izquierda.
9.5.¿Qué recuento se corresponde con la siguiente imagen?:
a) 43
b) 37
c) 38
9.6.Realizar 5 preguntas adicionales.
9.6.1. ¿Cómo se distinguen las células vivas de las muertas al momento de realizar el
conteo?
Se realiza una tinción en la cual las células muertas se vuelven azules.
9.6.2. ¿Cuál son las dimensiones de la cuadrícula de la sección media de la cámara de
Neubauer?
Tiene unas dimensiones de 3 mm x 3 mm
9.6.3. ¿Cuántos cuadraditos tienen los cuadrantes del cuadro central de la cámara de
Thoma?
Tiene 25 cuadraditos
9.6.4. ¿Cuál es la concentración mínima de células por cada mL para este método?
El cultivo debe tener una concentración mínima de 10 6 células por cada mL
9.6.5. ¿Qué profundidad existe entre el cubrehematocímetro y la cámara de Neubauer?
La profundidad es de 0,1 mm
10. Bibliografía:
10.1. BioNetworks Virtual Training. (2020). Population Biology. Retrieved 16 February 2021,
from: https://www.ncbionetwork.org/iet/hemocytometer/.
10.2. Universidad del País Vasco (22 de septiembre de 2012). Cuantificación de levaduras en
cámara de recuento Neubauer improved o Thoma. http://insilico.ehu.eus/camara_recuento/
11. Anexos
11.1. Resultados del conteo de células viables y muertas en la cámara de Neubauer
11.2. Resultados del conteo de levaduras
Anexo 1
11.1. Resultados del conteo de células viables y muertas en la cámara de Neubauer
Figura 33. Conteo de células viables y muertas en la cámara de Neubauer resultados
Nota: La figura muestra las células presentes en la cámara de Neubauer. Tomada de BioNetwork´s
Vitrual Training lab. Grupo 5. 2021.
Nombre Fecha
Técnico de Universidad Central del Ecuador
Revisa: laboratorio 19/02/2021 Facultad de Ingeniería Química
Andrés Granda Biotecnología Industrial
Dibuja Grupo 5 19/02/2021
Tema: Cámara de Neubauer
Anexo 2
Figura 34. Conteo de levaduras en la cámara de Thoma
Nota: La figura muestra las células presentes en la cámara de Thoma. Tomada de Cuantificación
de levaduras en cámara de recuento Neubauer improved o Thoma. Grupo 5. 2021.
Nombre Fecha
Anexo 2
Figura 35. Conteo de levaduras en la cámara de Neubauer
Nota: La figura muestra las células presentes en la cámara de Neubauer. Tomada de Cuantificación
de levaduras en cámara de recuento Neubauer improved o Thoma. Grupo 5. 2021.
Nombre Fecha

Informe 5 Cámara de Neubauer

Cargado por

Información del documento

Derechos de autor

Formatos disponibles

Compartir este documento

Compartir o incrustar documentos

Opciones para compartir

¿Le pareció útil este documento?

¿Este contenido es inapropiado?

Copyright:

Formatos disponibles

Informe 5 Cámara de Neubauer

Cargado por

Copyright:

Formatos disponibles

UNIVERSIDAD CENTRAL DEL ECUADOR

FACULTAD DE INGENIERÍA QUÍMICA

2.1. Determinar el procedimiento adecuado para realizar el conteo de células viables y su

Figura 1. Objetivos suministrados por el simulador.

Figura 3. Teñido y Carga de la muestra en un Neubauer.

Nota: La figura muestra 9 cuadros en un portaobjetos Neubauer. Tomada de BioNetwork´s

Figura 5. Conteo de células en determinas celdas.

Figura 7. Color de las células.

Figura 8. Conteo de células viables y muertas por cuadro.

Nota: La figura muestra el cálculo de células viables. Tomada de BioNetwork´s Vitrual

Figura 10. Cálculo promedio de células por cuadro.

Nota: La figura muestra el cálculo promedio de células por cuadro. Tomada de

Figura 12. Cálculo para concentración de células viables por mililitro.

Figura 13. Tabla de resultados.

3.2. Pocedimiento de Cuantificación de levaduras

Nota: Cuantificación de levaduras en cámara de recuento Neubauer improved o Thoma.

3.2.3. Seleccionar la cámara Thoma y ubicarse en el primer cuadrante izquierdo

Figura 15. Opción cámara de Neubauer Thoma.

Nota: La figura indica donde se debe seleccionar para la cuantificación de levaduras en

Figura 16. Opción cámara de Neubauer improved

Figura 18. Conteo de células viables y muertas segundo cuadro.

Figura 20. Conteo de células viables y muertas cuarto cuadro.

4.2. Observaciones de la cuantificación de levaduras

Nota: La figura muestra las células presentes en la cámara de Thoma. Tomada de

Figura 23. Vista del cuadrante 1 de cámara de Thoma.

Figura 24. Vista del cuadrante 2 de cámara de Thoma

Nota: La figura muestra las células presentes en el segundo cuadrante. Tomada de

Figura 25. Vista del cuadrante 3 de cámara de Thoma

Figura 26. Vista del cuadrante 4 de cámara de Thoma

Nota: La figura muestra las células presentes en el cuarto cuadrante. Tomada de

4.2.2. Para cámara Neubauer improved.

Figura 27. Vista completa de la Cámara de Neubauer improved.

Figura 28. Vista del cuadrante 1 de cámara de Nebauer improved

Nota: La figura muestra las células presentes en el primer cuadrante. Tomada de

Nota: La figura muestra las células presentes en el segundo cuadrante. Tomada de

Figura 30. Vista del cuadrante 3 de cámara de Nebauer improved

Nota: La figura muestra las células presentes en el tercer cuadrante. Tomada de

Figura 31. Vista del cuadrante 4 de cámara de Nebauer improved

Figura 32. Vista del cuadrante 5 de cámara de Nebauer improved

Nota: La figura muestra las células presentes en el quinto cuadrante. Tomada de

Nota: Universidad Central del Ecuador, Facultad de ingeniería Química, Laboratorio de

5.1.1. Cálculo para el porcentaje de células viables.

𝐶𝑎𝑛𝑡𝑖𝑑𝑎𝑑 𝑑𝑒 𝑐é𝑙𝑢𝑙𝑎𝑠 𝑣𝑖𝑎𝑏𝑙𝑒𝑠

5.1.2. Cálculo para el promedio de células viables por cuadro.

𝐶𝑎𝑛𝑡𝑖𝑑𝑎𝑑 𝑑𝑒 𝑐é𝑙𝑢𝑙𝑎𝑠 𝑣𝑖𝑎𝑏𝑙𝑒𝑠

5.1.3. Cálculo para el factor de dilución.

5.1.4. Cálculo para la concentración de células viables por mililitro.

𝑃𝑟𝑜𝑚𝑒𝑑𝑖𝑜 𝑑𝑒 𝑐é𝑙𝑢𝑙𝑎𝑠 𝑝𝑜𝑟 𝑐𝑢𝑎𝑑𝑟𝑜 × 𝐹𝑎𝑐𝑡𝑜𝑟 𝑑𝑒 𝑑𝑖𝑙𝑢𝑠𝑖ó𝑛 × 104

5.2. Cálculos cuantificación de levaduras

Tabla 2. Datos para conteo de levaduras en cámara Thoma

Nota: Universidad Central del Ecuador, Facultad de ingeniería Química, Laboratorio de

𝐶𝑒𝑙𝑢𝑙𝑎𝑠𝑐1 + 𝐶𝑒𝑙𝑢𝑙𝑎𝑠𝑐2 + 𝐶𝑒𝑙𝑢𝑙𝑎𝑠𝑐3 + 𝐶𝑒𝑙𝑢𝑙𝑎𝑠𝑐4 + 𝐶𝑒𝑙𝑢𝑙𝑎𝑠𝑐5

9.25 [𝑙𝑒𝑣𝑎𝑑𝑢𝑟𝑎𝑠] 400[𝑐𝑢𝑎𝑑𝑟𝑜𝑠 ] 1000[𝑚𝑚3 ] 6

5.2.2. Cámara de Neubauer improved

Tabla 3. Datos para conteo de levaduras en cámara Neubauer improved

Nota: Universidad Central del Ecuador, Facultad de ingeniería Química, Laboratorio de

𝐶𝑒𝑙𝑢𝑙𝑎𝑠𝑐1 + 𝐶𝑒𝑙𝑢𝑙𝑎𝑠𝑐2 + 𝐶𝑒𝑙𝑢𝑙𝑎𝑠𝑐3 + 𝐶𝑒𝑙𝑢𝑙𝑎𝑠𝑐4 + 𝐶𝑒𝑙𝑢𝑙𝑎𝑠𝑐5

5.2.3. Concentración Promedio de levaduras por mililitro

1480000 + 1250000 𝐿𝑒𝑣𝑎𝑑𝑢𝑟𝑎𝑠

5.2.4. Una suspensión de 2 mL a una concentración de 5 × 106 [Levaduras/mL]

𝐿𝑒𝑣𝑎𝑑𝑢𝑟𝑎𝑠 7,326 𝑚𝐿 𝐿𝑒𝑣𝑎𝑑𝑢𝑟𝑎𝑠

5.2.5. Una suspensión de 3 mL a una concentración de 5 × 108 [Levaduras/mL]

𝐿𝑒𝑣𝑎𝑑𝑢𝑟𝑎𝑠 1098,901 𝑚𝐿 𝐿𝑒𝑣𝑎𝑑𝑢𝑟𝑎𝑠

Nota: Universidad Central del Ecuador, Facultad de ingeniería Química, Laboratorio de