Cámara de Neubauer

UNIVERSIDAD CENTRAL DEL ECUADOR
FACULTAD DE INGENIERÍA QUÍMICA

CARRERA DE INGENIERÍA QUÍMICA
LABORATORIO DE BIOTECNOLOGÍA INDUSTRIAL
TALLER IN SITU 4:
CÁMARA DE NEUBAUER
INTEGRANTES
STEEVEN CHÁVEZ
DAVID LÓPEZ
BRYAN JUIÑA
SEBASTIÁN PATIÑO
NICOLE PINTO
MARÍA JOSÉ REALPE
LIZBETH SUNTAXI
GUSTAVO VINTIMILLA
SAMANTA ZAMBRANO
PARALELO
1
DOCENTE
MADGALENA DÍAZ
FECHA DE ENTREGA:
2020-07-10
QUITO-ECUADOR
2020-2020
CENTRO DE BIOLOGÍA
PRÁCTICA 4: CÁMARA DE NEUBAUER
1. OBJETIVOS
1.1.Aplicación de un método de conteo directo y dilución seriada reflejada en los factores
de dilución con el fin de determinar la concentración inicial de una muestra microbiana.
1.2. Aprender a realizar un conteo de células en una Cámara de Neubauer.
1.3. Determinar el funcionamiento de una cámara de Neubauer y su precisión en el conteo
de células.
1.4. Identificar las células vivas y muertas a partir de su tinción.
1.5. Obtención del factor de dilución de la suspensión en la cámara de Neubauer.
1.6. Encontrar la concentración de células viables por mL de la muestra a analizar.
2. PROCEDIMIENTO
2.1. Ingresar al simulador o laboratorio virtual.
2.2. Se inicia contando las células muertas en el hemocitómetro las cuáles tendrán un color
azul debido a la tinción.
2.3. Después de haber contado las células muertas, se procede a contar las células vivas
que se encuentran dentro de los límites establecidos del cuadrante.
2.4. Se repite este proceso de conteo de células para cada uno de los 5 cuadrantes.
2.5. Sumamos las células vivas obtenidas de los 5 cuadrantes.
2.6. Sumamos el total de células obtenidas de los 5 cuadrantes, es decir, las células vivas y
muertas.
2.7. Finalmente, se procede a realizar los distintos cálculos de porcentaje de células viables,
células viables promedio, factor de dilución y concentración de células viables por mL.
CENTRO DE BIOLOGÍA
3. OBSERVACIONES
3.1. Infografía del procedimiento
Figura 3.1-1. Infografía del procedimiento en la Cámara de Neubauer
Fuente: CANVA.
https://www.canva.com/design/DAECvgjyFcU/mLZym8LUhF2MrbSNZ4Qosw/edit?category=t
ACFahzNhT4
CENTRO DE BIOLOGÍA
3.2. Cálculos del simulador
3.2.1. Cálculo modelo del porcentaje de células viables
Células viables: 95
Células muertas: 10
𝑐𝑒𝑙𝑢𝑙𝑎𝑠 𝑣𝑖𝑎𝑏𝑙𝑒𝑠
% 𝑐é𝑙𝑢𝑙𝑎𝑠 𝑣𝑖𝑎𝑏𝑙𝑒𝑠 = ∗ 100 (1)
𝑐𝑒𝑙𝑢𝑙𝑎𝑠 𝑡𝑜𝑡𝑎𝑙𝑒𝑠
95
% 𝑐é𝑙𝑢𝑙𝑎𝑠 𝑣𝑖𝑎𝑏𝑙𝑒𝑠 = ∗ 100 = 90,48%
105
3.2.2. Cálculo modelo del promedio del número de células por cuadrado
𝑐𝑒𝑙𝑢𝑙𝑎𝑠 𝑣𝑖𝑎𝑏𝑙𝑒𝑠
= 𝑁º 𝑐é𝑙𝑢𝑙𝑎𝑠 𝑝𝑜𝑟 𝑐𝑢𝑎𝑑𝑟𝑎𝑑𝑜 (2)
𝑐𝑢𝑎𝑑𝑟𝑎𝑑𝑜𝑠
95 𝑐𝑒𝑙𝑢𝑙𝑎𝑠 𝑣𝑖𝑎𝑏𝑙𝑒𝑠
𝑁º 𝑐é𝑙𝑢𝑙𝑎𝑠 𝑝𝑜𝑟 𝑐𝑢𝑎𝑑𝑟𝑎𝑑𝑜 = = 19
5 𝑐𝑢𝑎𝑑𝑟𝑎𝑑𝑜
3.2.3. Cálculo modelo del factor de dilución
𝑉𝑜𝑙𝑢𝑚𝑒𝑛 𝑓𝑖𝑛𝑎𝑙
𝑓 = 𝑉𝑜𝑙𝑢𝑚𝑒𝑛 𝑑𝑒 𝑐𝑒𝑙𝑢𝑙𝑎𝑠 (3)
200𝑚𝐿
𝑓= =2
100𝑚𝐿
3.2.4. Cálculo de la concentración de células viables
Concentración = Numero promedio de celulas por cuadrado ∗ Cf ∗ 10000 (4)
𝑐𝑒𝑙𝑢𝑙𝑎𝑠 𝑣𝑖𝑎𝑏𝑙𝑒𝑠 𝑐𝑒𝑙𝑢𝑙𝑎𝑠 𝑣𝑖𝑎𝑏𝑙𝑒𝑠

𝐶𝑜𝑛𝑐𝑒𝑛𝑡𝑟𝑎𝑐𝑖ó𝑛 = 19 ∗ 2 ∗ 10000 = 380000
𝑐𝑢𝑎𝑑𝑟𝑎𝑑𝑜 𝑚𝐿
Tabla 3.1. Resultados finales.

CENTRO DE BIOLOGÍA
Porcentaje de Número Factor de Concentración
Integrante células viables promedio de dilución de células
(%) células por viables por
cuadrado mL
Samanta Zambrano 90,65 19,4 2 388000
Nicole Pinto 90,65 19,4 2 388000
María José Realpe 90,83 19,8 2 396000
Steeven Chávez 90,65 19,4 2 388000
Sebastián Patiño 90,74 19,6 2 392000
David López 90,74 19,6 2 392000
Bryan Juiña 90,83 19,8 2 396000
Lizbeth Suntaxi 90,38 18,8 2 376000
Gustavo Vintimilla 90,83 19,8 2 396000
4. CONCLUSIONES
4.1. De la realización del simulador, se puede concluir que para que la aproximación de
células en el recuento se acerque bastante al valor real que existe en la muestra inicial,
es importante el conocer el correcto uso de la cámara de conteo, puesto que, al ser un
recuento subjetivo, el error que se puede cometer puede llegar a ser bastante alto.
(Samanta Zambrano)
4.2. Se determina que uno de los métodos de conteo directo es mediante la aplicación de
un microscopio y fundamentalmente empleando cámaras de conteo ya sean de
Neubauer o de Thomas, en las cuales es posible establecer las zonas a contabilizar
considerando el respectivo volumen de la suspensión y las medidas de los cuadros
característicos de cada uno de ellos, para así definir la cantidad de microorganismos
presentes en una muestra y obtener su concentración inicial. (Nicole Pinto)
4.3. En base a la realización del conteo en el simulador se concluye que, en la cámara de
Neubauer se puede identificar células vivas y muertas, además de diferenciarlas unas
de las otras, esto debido a que, para este reconocimiento, se usan distintas tinciones que
CENTRO DE BIOLOGÍA
permiten que las células muertas adquieran un color distinto a las vivas, siendo así, más
fácil de identificarlas y agilizando el conteo de las células vivas de interés. (María José
Realpe)
4.4. Mediante el simulador de conteo de células, se conoció el funcionamiento de un
hemocitómetro o cámara de Neubauer, estas cámaras se utilizan dentro de la medicina
y biología, para realizar diferentes conteos de células, esporas, etc, que se encuentren
en un medio líquido ya sea cultivado o de otra índole. Es un método más preciso de
conteo ya que tienen la posibilidad de contar células vivas y muertas. (Steeven Chávez)
4.5. En la realización de la práctica se determinó que, mediante el recuento de células, se
puedo conocer la concentración aproximada de la muestra tomada para el análisis; dado
que el recuento de las células es directamente proporcional a la concentración
aproximada de la muestra. (Sebastián Patiño)
4.6. De la simulación se determinó que el factor de dilución es muy importante en el
conteo de las células de interés, para aquellas muestras que tienen una gran densidad
poblacional que dificultad su conteo de manera adecuada, siendo este simulador una
manera practica de como calcularlo. (David López)
4.7. En base a los resultados obtenidos en la simulación de la cámara de Neubauer, se

comprueba la eficacia que tiene el uso de esta técnica tanto a nivel micro, como a nivel
macro. (Bryan Juiña)
4.8. Se determinó que la cámara de Neubauer es un instrumento útil para la contabilización
de células en una muestra y que permite diferenciar entre células viables y no viables a
través de una tinción con colorantes, mediante una diferenciación en la coloración, así
como la forma de estas. (Lizbeth Suntaxi)
4.9. Es necesario conocer el tipo de célula a ser contado para determinar el cuadrante
adecuado en cada caso, así como la disolución propia para cada tipo ya que de esto
dependerá realizar un correcto conteo y así una aproximación del número de células en
una muestra. (Gustavo Vintimilla)
5. ANEXOS
CENTRO DE BIOLOGÍA
5.1. Simulación del conteo en la cámara de Neubauer (Ver Anexos 1-9)
6. CUESTIONARIO
6.1.De donde sale el término 10000, en la ecuación de concentración para la cámara
Neubauer, Explicar con ecuaciones.
𝑐𝑒𝑙 𝑛º 𝑑𝑒 𝑐é𝑙𝑢𝑙𝑎𝑠 × 10000
𝐶𝑜𝑛𝑐𝑒𝑛𝑡𝑟𝑎𝑐𝑖ó𝑛 ( )= ∗ 𝑓𝑎𝑐𝑡𝑜𝑟 𝑑𝑒 𝑑𝑖𝑙𝑢𝑐𝑖ó𝑛
𝑚𝑙 𝑛º 𝑑𝑒 𝑐𝑢𝑎𝑑𝑟𝑜𝑠 𝑐𝑜𝑛𝑡𝑎𝑏𝑖𝑙𝑖𝑧𝑎𝑑𝑜𝑠
Dimensiones de cada cuadro mayor:

𝑙 (𝑙𝑎𝑟𝑔) = 1 𝑚𝑚
𝑎 (𝑎𝑛𝑐ℎ𝑜) = 1 𝑚𝑚
ℎ (𝑎𝑙𝑡𝑢𝑟𝑎) = 0,1𝑚𝑚
𝑉𝑐𝑢𝑎𝑑𝑟𝑜 = 𝑙 ∗ 𝑎 ∗ ℎ
𝑉𝑐𝑢𝑎𝑑𝑟𝑜 = 1 𝑚𝑚 ∗ 1 𝑚𝑚 ∗ 0,1 𝑚𝑚 = 0,1 𝑚𝑚3
(1𝑚)3 1000 𝑙 1 𝜇𝑙
𝑉𝑐𝑢𝑎𝑑𝑟𝑜 = 0,1 𝑚𝑚3 ∗ ∗ ∗ = 0,1 𝜇𝑙
(1000𝑚𝑚)3 (1𝑚)3 10−6 𝑙
Al tomar en cuenta tales dimensiones, la concentración quedaría en función de 0,1 𝜇𝑙,

𝑐𝑒𝑙
es decir (0,1 𝜇𝑙).
𝑐𝑒𝑙
De forma que es necesario una transformación para que quedé en función de ( 𝑚𝑙 ):
𝑐𝑒𝑙 1 𝜇𝑙 1𝑙 𝑐𝑒𝑙
∗ −6 ∗ = 10000
0,1 𝜇𝑙 10 𝑙 1000 𝑚𝑙 𝑚𝑙
A partir de ello, se observa que se debe multiplicar por 10000 para que la concentración
esté en 𝑐𝑒𝑙⁄𝑚𝑙 .
CENTRO DE BIOLOGÍA
6.2.Tras tomar una muestra de sangre problema y diluirla al 1/200, se ha procedido
a realizar un recuento manual de eritrocitos en cámara de Neubauer modificada.
Al final del recuento, en cada uno de los recuadros en los que se cuentan estas
células hemos obtenido los siguientes resultados:
E1 = 82 eritrocitos
E2 = 84 eritrocitos
E3 = 85 eritrocitos
E4 = 87 eritrocitos
E5 = 83 eritrocitos
Calcular el número de eritrocitos por milímetro cúbico (mm3) que hay en la

muestra de sangre problema estudiada.
ET=(82+84+85+87+83) eritrocitos
ET= 421 eritrocitos
(421 ∗ 5)𝑒𝑟𝑖𝑡𝑟𝑜𝑐𝑖𝑡𝑜𝑠
[𝐶] = ∗ 200
(5 ∗ 0,2)𝑚𝑚2 ∗ 0,1𝑚𝑚
𝑒𝑟𝑖𝑡𝑟𝑜𝑐𝑖𝑡𝑜𝑠
[𝐶] = 4210000
𝑚𝑚3
6.3.¿Cómo se debe mover la preparación para que el recuento resulte fiable?

a) De arriba a abajo.
b) De derecha a izquierda.
c) En zig-zag.
Se tiene que unir en zig-zag, con el fin de que exista una distribución uniforme de
las células y no exista ningún tipo de distorsión.
6.4.¿Qué células han de contarse en cada cuadradito?
a) Las que contenga en su interior y las que estén situadas sobre sus líneas
superior e izquierda.
CENTRO DE BIOLOGÍA
b) Sólo las que contenga en su interior.
c) Las que estén situadas sobre sus líneas superior e izquierda.
6.5.¿Qué recuento se corresponde con la siguiente imagen?:
a) 43
b) 37
c) 38
7. BIBLIOGRAFÍA:
8. EJERCICIOS PROBLEMA
A partir de una suspensión de levaduras se han realizado dos diluciones decimales hasta
llegar a la dilución 10-2. Diez microlitros de la dilución han sido transferidos a una
cámara de recuento Neubauer improved y otros diez a una cámara de recuento Thoma.
Hay que contabilizar las levaduras y hacer los cálculos para obtener la concentración
de levaduras en la suspensión inicial, e indicar cómo se obtendrían las siguientes
diluciones de microorganismos:
• Una suspensión de 2 ml a una concentración de 5 x 106 levaduras/ml.

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8.1. PROBLEMA NÚMERO 28489509 (Samanta Zambrano)
- SOLUCIÓN
Levaduras contadas en el cuadro grande la mitad: 134
Concentración de levaduras en la suspensión inicial:
𝑙𝑒𝑣𝑎𝑑𝑢𝑟𝑎𝑠
𝑁 ∗ 104 ∗ 𝑓𝑑 = 134 ∗ 104 ∗ 102 = 1,34 ∗ 108 𝑙𝑒𝑣𝑎𝑑𝑢𝑟𝑎𝑠/𝑚𝐿
𝑚𝐿
• Una suspensión de 2 mL a una concentración de 5 x 106 levaduras/ml.
Se necesitaría tomar 75 µL de la suspensión inicial.
1,34 ∗ 108 ∗ 0,075 𝑚𝐿 = 1,005 ∗ 107 𝑙𝑒𝑣𝑎𝑑𝑢𝑟𝑎𝑠
𝑚𝐿
1,005 ∗ 107 𝑙𝑒𝑣𝑎𝑑𝑢𝑟𝑎𝑠 𝑙𝑒𝑣𝑎𝑑𝑢𝑟𝑎𝑠

= 5,025 ∗ 106
2 𝑚𝐿 𝑚𝐿
Se necesitaría tomar 11, 2 mL de la suspensión inicial.
1,34 ∗ 108 ∗ 11,2 𝑚𝐿 = 1,5008 ∗ 109 𝑙𝑒𝑣𝑎𝑑𝑢𝑟𝑎𝑠
𝑚𝐿
1,5008 ∗ 108 𝑙𝑒𝑣𝑎𝑑𝑢𝑟𝑎𝑠 𝑙𝑒𝑣𝑎𝑑𝑢𝑟𝑎𝑠

= 5,0027 ∗ 108
3 𝑚𝐿 𝑚𝐿
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8.2. PROBLEMA NÚMERO 31662867 (Nicole Pinto)

- SOLUCIÓN
Recuentos
-Número de levaduras contadas en la cámara de Neubauer=147
- Numero de levaduras contadas en la cámara de Thoma =147
Cálculo de la concentración de la muestra.
147𝑙𝑒𝑣𝑎𝑑𝑢𝑟𝑎𝑠 1𝑚𝑚3 𝑙𝑒𝑣𝑎𝑑𝑢𝑟𝑎𝑠

3
∗ = 1470000
(1 ∗ 1) ∗ 0,1𝑚𝑚 0,001 𝑚𝐿 𝑚𝐿
-Cálculo de la concentración de levaduras inicial
𝑙𝑒𝑣𝑎𝑑𝑢𝑟𝑎𝑠 𝑙𝑒𝑣𝑎𝑑𝑢𝑟𝑎𝑠
𝐶𝑜𝑛𝑐𝑒𝑛𝑡𝑟𝑎𝑐𝑖𝑜𝑛 𝑖𝑛𝑖𝑎𝑙 = 1470000 ∗ 100 = 147000000
𝑚𝐿 𝑚𝐿

𝑙𝑒𝑣𝑎𝑑𝑢𝑟𝑎𝑠 5 ∗ 106
147000000 𝑥= ∗ 2𝑚𝐿
𝑚𝑙 𝑚𝐿
𝑥 = 6,027 𝑢𝐿

𝑙𝑒𝑣𝑎𝑑𝑢𝑟𝑎𝑠 5 ∗ 108
147000000 𝑥= ∗ 2𝑚𝐿
𝑚𝑙 𝑚𝐿
𝑥 = 6,8 𝑢𝐿
CENTRO DE BIOLOGÍA
8.3. PROBLEMA NÚMERO 15381455 (María José Realpe)
- SOLUCIÓN
Concentración inicial:
Nº de levaduras en el centro= 107
𝑉 = 1𝑚𝑚 ∗ 1𝑚𝑚 ∗ 0,1 𝑚𝑚 = 0,1 𝑚𝑚3 = 1 ∗ 10−4 𝑚𝐿3
𝑁º 𝑙𝑒𝑣𝑎𝑑𝑢𝑟𝑎𝑠 ∗ 𝑓 107 𝑙𝑒𝑣𝑎𝑑𝑢𝑟𝑎𝑠 ∗ 102 𝑙𝑒𝑣𝑎𝑑𝑢𝑟𝑎𝑠

𝐶𝑖𝑛𝑖𝑐𝑖𝑎𝑙 = = −4 3
= 1,07 ∗ 108
𝑉 1 ∗ 10 𝑚𝐿 𝑚𝐿
𝑙𝑒𝑣𝑎𝑑𝑢𝑟𝑎𝑠 2 𝑚𝐿
5 ∗ 106 ∗ = 0,0935 𝑚𝐿
𝑚𝐿 𝑙𝑒𝑣𝑎𝑑𝑢𝑟𝑎𝑠
1,07 ∗ 108 𝑚𝐿
Se debe tomar 0,0935 mL de la solución inicial para la dilución.
𝑙𝑒𝑣𝑎𝑑𝑢𝑟𝑎𝑠 3 𝑚𝐿
5 ∗ 108 ∗ = 14,02 𝑚𝐿
𝑚𝐿 8 𝑙𝑒𝑣𝑎𝑑𝑢𝑟𝑎𝑠
1,07 ∗ 10 𝑚𝐿
Se debe tomar 14,02 mL de la solución inicial para la dilución.
8.4. PROBLEMA NÚMERO 31662867 (Steeven Chávez)

- SOLUCIÓN
Concentración: N*104 cel/ml
𝑐𝑜𝑛𝑐𝑒𝑛𝑡𝑟𝑎𝑐𝑖𝑜𝑛 = 109 ∗ 104
𝑐𝑜𝑛𝑐𝑒𝑛𝑡𝑟𝑎𝑐𝑖𝑜𝑛 = 1.09 ∗ 106
𝑚𝑙
Nº células contadas: 109
𝑙𝑒𝑣𝑎𝑑𝑢𝑟𝑎𝑠 100
𝑠𝑢𝑠𝑝𝑒𝑛𝑐𝑖𝑜𝑛 𝑐𝑒𝑙𝑢𝑙𝑎𝑟 𝑖𝑛𝑖𝑐𝑖𝑎𝑙 = 109 ∗ 104 ∗
𝑚𝑙 1
CENTRO DE BIOLOGÍA
𝑙𝑒𝑣𝑎𝑑𝑢𝑟𝑎𝑠 100
𝑠𝑢𝑠𝑝𝑒𝑛𝑐𝑖𝑜𝑛 𝑐𝑒𝑙𝑢𝑙𝑎𝑟 𝑖𝑛𝑖𝑐𝑖𝑎𝑙 = 109 ∗ 104 ∗
𝑚𝑙 1
𝑠𝑢𝑠𝑝𝑒𝑛𝑐𝑖𝑜𝑛 𝑐𝑒𝑙𝑢𝑙𝑎𝑟 𝑖𝑛𝑖𝑐𝑖𝑎𝑙 = 1.09 ∗ 108
𝑚𝑙
Base de cálculo =100
𝑙𝑒𝑣𝑎𝑑𝑢𝑟𝑎𝑠 108 ∗ 100 1

5 ∗ 106 = ∗
𝑚𝑙 2 𝑥
𝑥 = 10−3
Base de cálculo =100
𝑙𝑒𝑣𝑎𝑑𝑢𝑟𝑎𝑠 1012 ∗ 100 1

5 ∗ 108 = ∗
𝑚𝑙 2 𝑥
𝑥 = 10−5
8.5. PROBLEMA NÚMERO 83293182 (Sebastián Patiño)
- SOLUCIÓN
Concentración de levaduras en la dilución inicial.
𝑁 ∗ 104 ∗ 𝑓𝑑 = 86 ∗ 104 ∗ 102 = 8,6 ∗ 107 𝑙𝑒𝑣𝑎𝑑𝑢𝑟𝑎𝑠/𝑚𝐿
𝑚𝐿
8,6 ∗ 107 ∗ 0,116 𝑚𝐿 = 9,98 ∗ 106 𝑙𝑒𝑣𝑎𝑑𝑢𝑟𝑎𝑠
𝑚𝐿
9,98 ∗ 106 𝑙𝑒𝑣𝑎𝑑𝑢𝑟𝑎𝑠 𝑙𝑒𝑣𝑎𝑑𝑢𝑟𝑎𝑠 𝑙𝑒𝑣𝑎𝑑𝑢𝑟𝑎𝑠

= 4,99 ∗ 106 ≈ 5,00 ∗ 106
2 𝑚𝐿 𝑚𝐿 𝑚𝐿
CENTRO DE BIOLOGÍA
8,6 ∗ 107 ∗ 17,44 𝑚𝐿 = 14,998 ∗ 108 𝑙𝑒𝑣𝑎𝑑𝑢𝑟𝑎𝑠
𝑚𝐿
14,998 ∗ 108 𝑙𝑒𝑣𝑎𝑑𝑢𝑟𝑎𝑠 𝑙𝑒𝑣𝑎𝑑𝑢𝑟𝑎𝑠 𝑙𝑒𝑣𝑎𝑑𝑢𝑟𝑎𝑠

= 4,99 ∗ 108 ≈ 5,00 ∗ 108
3 𝑚𝐿 𝑚𝐿 𝑚𝐿
8.6. PROBLEMA NÚMERO 90135074 (David López)
- SOLUCIÓN
Suspensión celular inicial

𝑵 ∗ 𝟏𝟎𝟒 ∗ 𝒇𝒅
𝐶 = 112 𝑙𝑒𝑣𝑎𝑑𝑢𝑟𝑎𝑠 ∗ 104 ∗ 100
𝐶 = 112 ∗ 106
𝑚𝐿
• Una suspensión de 2 mL a una concentración de 5*10^6 levaduras /mL
𝑙𝑒𝑣𝑎𝑑𝑢𝑟𝑎𝑠 1𝑚𝐿
𝑉 = 5 ∗ 106 ∗ 2𝑚𝐿 ∗
𝑚𝐿 112 ∗ 10^6𝑙𝑒𝑣𝑎𝑑𝑢𝑟𝑎𝑠
𝑉 = 0,089𝑚𝐿
• Una suspensión de 3 mL a una concentración de 5*10^8 levaduras /mL
𝑉 = 5 ∗ 108 ∗ 3𝑚𝐿 ∗
𝑚𝐿 112 ∗ 10^6𝑙𝑒𝑣𝑎𝑑𝑢𝑟𝑎𝑠
𝑉 = 13,39 𝑚𝐿
8.7. EJERCICIO NÚMERO 90867032 (Bryan Juiña)
- SOLUCIÓN
𝐶𝑜𝑛𝑐𝑒𝑛𝑡𝑟𝑎𝑐𝑖ó𝑛: 𝑁 ∗ 104 𝑐𝑒𝑙/𝑚𝑙
𝑁° 𝑐é𝑙𝑢𝑙𝑎𝑠 𝑐𝑜𝑛𝑡𝑎𝑑𝑎𝑠: 135 𝑐𝑒𝑙

CENTRO DE BIOLOGÍA
CÁLCULO:
104 𝑐𝑒𝑙𝑠 100 𝑐𝑒𝑙

𝐶 = 135 ∗ ∗ = 1,35 ∗ 108
𝑚𝑙 1 𝑚𝑙
100 ∗ 108 𝑥
5 ∗ 106 = ∗ 𝑥 = 10−3
2 1
1012 ∗ 100 𝑥
5 ∗ 108 = ∗ 𝑥 = 10−5
3 1
Figura 8.7-1.
Cámara de Neubauer Improved
Fuente: Bryan Juiña. http://insilico.ehu.eus/camara_recuento/
PARTE 2:
𝐶𝑜𝑛𝑐𝑒𝑛𝑡𝑟𝑎𝑐𝑖ó𝑛: 𝑁 ∗ 104 𝑐𝑒𝑙/𝑚𝑙
𝑁° 𝑐é𝑙𝑢𝑙𝑎𝑠 𝑐𝑜𝑛𝑡𝑎𝑑𝑎𝑠: 135 𝑐𝑒𝑙

CENTRO DE BIOLOGÍA
CÁLCULO:
104 𝑐𝑒𝑙 100 𝑐𝑒𝑙

135 ∗ ∗ = 1,35 ∗ 108
𝑚𝑙 1 𝑚𝑙
Figura 8.7-2.
Cámara de Recuento: Thoma
Fuente: Bryan Juiña. http://insilico.ehu.eus/camara_recuento/

8.8. EJERCICIO NÚMERO 43426096 (Lizbeth Suntaxi)
- SOLUCIÓN
Conteo cuadro central: 109 células

𝑁 = 109 𝑐é𝑙𝑢𝑙𝑎𝑠
Concentración de la muestra
𝐶 = 𝑁 ∗ 10000 = 109 ∗ 10000

𝐶 = 1090000 𝑙𝑒𝑣𝑎𝑑𝑢𝑟𝑎𝑠⁄𝑚𝑙
Concentración con el factor de dilución
𝑓 = 102
CENTRO DE BIOLOGÍA
𝑠𝑢𝑠𝑝𝑒𝑛𝑠𝑖ó𝑛 𝑖𝑛𝑖𝑐𝑖𝑎𝑙
= 𝑠𝑢𝑠𝑝𝑒𝑛𝑠𝑖ó𝑛 𝑐𝑒𝑙𝑢𝑙𝑎𝑟 𝑑𝑖𝑙𝑢𝑖𝑑𝑎 ∗ 𝑓𝑎𝑐𝑡𝑜𝑟 𝑑𝑒 𝑐𝑜𝑛𝑐𝑒𝑛𝑡𝑟𝑎𝑐𝑖ó𝑛
− 𝑑𝑖𝑙𝑢𝑐𝑖ó𝑛
𝑠𝑢𝑠𝑝𝑒𝑛𝑠𝑖ó𝑛 𝑖𝑛𝑖𝑐𝑖𝑎𝑙 = 𝑁 ∗ 10000 ∗ 𝑓

𝑠𝑢𝑠𝑝𝑒𝑛𝑠𝑖ó𝑛 𝑖𝑛𝑖𝑐𝑖𝑎𝑙 = 109 ∗ 10000 ∗ 102
𝑠𝑢𝑠𝑝𝑒𝑛𝑠𝑖ó𝑛 𝑖𝑛𝑖𝑐𝑖𝑎𝑙 = 1,09 × 108 𝑙𝑒𝑣𝑎𝑑𝑢𝑟𝑎𝑠⁄𝑚𝑙
• Suspensión de 2 ml a una concentración de 5 x 106 levaduras/ml.

5 × 106 𝑙𝑒𝑣𝑎𝑑𝑢𝑟𝑎𝑠⁄𝑚𝑙 ∗ 2𝑚𝑙 = 107 𝑙𝑒𝑣𝑎𝑑𝑢𝑟𝑎𝑠
𝑚𝑙
107 𝑙𝑒𝑣𝑎𝑑𝑢𝑟𝑎𝑠 ∗ = 0,092 𝑚𝑙
1,09 × 108 𝑙𝑒𝑣𝑎𝑑𝑢𝑟𝑎𝑠
Se debe tomar 0,092 𝑚𝑙 (92 𝜇𝑙) de la suspensión inicial para la dilución.
1,09 × 108 ∗ 0,092 𝑚𝑙 = 10028000 𝑙𝑒𝑣𝑎𝑑𝑢𝑟𝑎𝑠
𝑚𝑙
10028000 𝑙𝑒𝑣𝑎𝑑𝑢𝑟𝑎𝑠
≈ 5 × 106 𝑙𝑒𝑣𝑎𝑑𝑢𝑟𝑎𝑠⁄𝑚𝑙
(0,092 + 1,908)𝑚𝑙
• Suspensión de 3 ml a una concentración de 5 x 108 levaduras/ml.
5 × 108 𝑙𝑒𝑣𝑎𝑑𝑢𝑟𝑎𝑠⁄𝑚𝑙 ∗ 3𝑚𝑙 = 15 × 109 𝑙𝑒𝑣𝑎𝑑𝑢𝑟𝑎𝑠
𝑚𝑙
15 × 109 𝑙𝑒𝑣𝑎𝑑𝑢𝑟𝑎𝑠 ∗ = 13,76 𝑚𝑙
1,09 × 108 𝑙𝑒𝑣𝑎𝑑𝑢𝑟𝑎𝑠
Se debe tomar 13,76 𝑚𝑙 (13760 𝜇𝑙) de la suspensión inicial para la dilución. Sin
embargo, en este caso no se estaría realizando una dilución a partir de la suspensión
CENTRO DE BIOLOGÍA
inicial ya que éste tiene menor concentración a la que se necesita, por lo que se debería
reducir el volumen de la muestra tomada a 3ml.
8.9. EJERCICIO NÚMERO 48027148 (Gustavo Vintimilla)
- SOLUCIÓN
Número de células contadas(N): 110
• Concentración inicial
[𝐶]𝑖𝑛𝑖𝑐𝑖𝑎𝑙 = 𝑁 ∗ 104 ∗ 102

[𝐶]𝑖𝑛𝑖𝑐𝑖𝑎𝑙 = 1.1 ∗ 108
𝑚𝐿
• Una suspensión de 2mL a una concentración de 5 x 106 levaduras/ml.
5 ∗ 106 ∗ 2𝑚𝐿 ∗
𝑚𝐿 1.1 ∗ 108 𝑙𝑒𝑣𝑎𝑑𝑢𝑟𝑎𝑠
Se necesitarán tomar:
𝑉 = 0.090 𝑚𝐿 = 90 𝑚𝑖𝑐𝑟𝑜𝑙𝑖𝑡𝑟𝑜𝑠
5 ∗ 108 ∗ 3𝑚𝐿 ∗
𝑚𝐿 1.1 ∗ 108 𝑙𝑒𝑣𝑎𝑑𝑢𝑟𝑎𝑠
Se necesitarán tomar:
𝑉 = 13.63 𝑚𝐿
ANEXO 1
Figura 5.1-1. Simulación en la cámara de conteo de Neubauer
Fuente: NC Community Colleges BioNETWORK. Samanta Zambrano.
Fecha Universidad Central del Ecuador

Facultad de Ingeniería Química
Dibuja: Samanta Zambrano 10/07/2020 Laboratorio de Biotecnología
Revisa: Isabel Carrillo 24/07/2020 Industrial
Escala: Lámina:
TEMA:
CÁMARA DE NEUBAUER 1
1:1
ANEXO 2
Fuente: NC Community Colleges BioNETWORK. Nicole Pinto.

Dibuja: Nicole Pinto 10/07/2020 Laboratorio de Biotecnología
Escala: Lámina:
TEMA:
1:1
ANEXO 3
Fuente: NC Community Colleges BioNETWORK. María José Realpe.

Dibuja: María José Realpe 10/07/2020 Laboratorio de Biotecnología
Escala: Lámina:
TEMA:
1:1
ANEXO 4
Fuente: NC Community Colleges BioNETWORK. Steeven Chávez.

Dibuja: Steeven Chávez 10/07/2020 Laboratorio de Biotecnología
Escala: Lámina:
TEMA:
1:1
ANEXO 5
Fuente: NC Community Colleges BioNETWORK. Sebastián Patiño.

Dibuja: Sebastián Patiño 10/07/2020 Laboratorio de Biotecnología
Escala: Lámina:
TEMA:
1:1
ANEXO 6
Fuente: NC Community Colleges BioNETWORK. David López.

Dibuja: David López 10/07/2020 Laboratorio de Biotecnología
Escala: Lámina:
TEMA:
1:1
ANEXO 7
Fuente: NC Community Colleges BioNETWORK. Bryan Juiña.

Dibuja: Bryan Juiña 10/07/2020 Laboratorio de Biotecnología
Escala: Lámina:
TEMA:
1:1
ANEXO 8
Fuente: NC Community Colleges BioNETWORK. Lizbeth Suntaxi.

Dibuja: Lizbeth Suntaxi 10/07/2020 Laboratorio de Biotecnología
Escala: Lámina:
TEMA:
1:1
ANEXO 9
Fuente: NC Community Colleges BioNETWORK. Gustavo Vintimilla.

Dibuja: Gustavo Vintimilla 10/07/2020 Laboratorio de Biotecnología
Escala: Lámina:
TEMA:
1:1

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UNIVERSIDAD CENTRAL DEL ECUADOR

FACULTAD DE INGENIERÍA QUÍMICA

PRÁCTICA 4: CÁMARA DE NEUBAUER

3.2.3. Cálculo modelo del factor de dilución

3.2.4. Cálculo de la concentración de células viables

Concentración = Numero promedio de celulas por cuadrado ∗ Cf ∗ 10000 (4)

𝑐𝑒𝑙𝑢𝑙𝑎𝑠 𝑣𝑖𝑎𝑏𝑙𝑒𝑠 𝑐𝑒𝑙𝑢𝑙𝑎𝑠 𝑣𝑖𝑎𝑏𝑙𝑒𝑠

Tabla 3.1. Resultados finales.

4.7. En base a los resultados obtenidos en la simulación de la cámara de Neubauer, se

Dimensiones de cada cuadro mayor:

Al tomar en cuenta tales dimensiones, la concentración quedaría en función de 0,1 𝜇𝑙,

Calcular el número de eritrocitos por milímetro cúbico (mm3) que hay en la

6.3.¿Cómo se debe mover la preparación para que el recuento resulte fiable?

• Una suspensión de 2 ml a una concentración de 5 x 106 levaduras/ml.

Levaduras contadas en el cuadro grande la mitad: 134

Concentración de levaduras en la suspensión inicial:

• Una suspensión de 2 mL a una concentración de 5 x 106 levaduras/ml.

Se necesitaría tomar 75 µL de la suspensión inicial.

1,005 ∗ 107 𝑙𝑒𝑣𝑎𝑑𝑢𝑟𝑎𝑠 𝑙𝑒𝑣𝑎𝑑𝑢𝑟𝑎𝑠

• Una suspensión de 3 mL a una concentración de 5 x 106 levaduras/ml.

Se necesitaría tomar 11, 2 mL de la suspensión inicial.

1,5008 ∗ 108 𝑙𝑒𝑣𝑎𝑑𝑢𝑟𝑎𝑠 𝑙𝑒𝑣𝑎𝑑𝑢𝑟𝑎𝑠

8.2. PROBLEMA NÚMERO 31662867 (Nicole Pinto)

-Número de levaduras contadas en la cámara de Neubauer=147

- Numero de levaduras contadas en la cámara de Thoma =147

Cálculo de la concentración de la muestra.

147𝑙𝑒𝑣𝑎𝑑𝑢𝑟𝑎𝑠 1𝑚𝑚3 𝑙𝑒𝑣𝑎𝑑𝑢𝑟𝑎𝑠

-Cálculo de la concentración de levaduras inicial

• Una suspensión de 2 ml a una concentración de 5 x 106 levaduras/ml.

• Una suspensión de 3 ml a una concentración de 5 x 108 levaduras/ml.

𝑉 = 1𝑚𝑚 ∗ 1𝑚𝑚 ∗ 0,1 𝑚𝑚 = 0,1 𝑚𝑚3 = 1 ∗ 10−4 𝑚𝐿3

𝑁º 𝑙𝑒𝑣𝑎𝑑𝑢𝑟𝑎𝑠 ∗ 𝑓 107 𝑙𝑒𝑣𝑎𝑑𝑢𝑟𝑎𝑠 ∗ 102 𝑙𝑒𝑣𝑎𝑑𝑢𝑟𝑎𝑠

• Una suspensión de 2 ml a una concentración de 5 x 106 levaduras/ml.

Se debe tomar 0,0935 mL de la solución inicial para la dilución.

• Una suspensión de 3 ml a una concentración de 5 x 108 levaduras/ml.

Se debe tomar 14,02 mL de la solución inicial para la dilución.

8.4. PROBLEMA NÚMERO 31662867 (Steeven Chávez)

• Una suspensión de 2 ml a una concentración de 5 x 106 levaduras/ml.

Base de cálculo =100

𝑙𝑒𝑣𝑎𝑑𝑢𝑟𝑎𝑠 108 ∗ 100 1

• Una suspensión de 3 ml a una concentración de 5 x 108 levaduras/ml.

Base de cálculo =100

𝑙𝑒𝑣𝑎𝑑𝑢𝑟𝑎𝑠 1012 ∗ 100 1

9,98 ∗ 106 𝑙𝑒𝑣𝑎𝑑𝑢𝑟𝑎𝑠 𝑙𝑒𝑣𝑎𝑑𝑢𝑟𝑎𝑠 𝑙𝑒𝑣𝑎𝑑𝑢𝑟𝑎𝑠

14,998 ∗ 108 𝑙𝑒𝑣𝑎𝑑𝑢𝑟𝑎𝑠 𝑙𝑒𝑣𝑎𝑑𝑢𝑟𝑎𝑠 𝑙𝑒𝑣𝑎𝑑𝑢𝑟𝑎𝑠

Suspensión celular inicial

𝑁° 𝑐é𝑙𝑢𝑙𝑎𝑠 𝑐𝑜𝑛𝑡𝑎𝑑𝑎𝑠: 135 𝑐𝑒𝑙

104 𝑐𝑒𝑙𝑠 100 𝑐𝑒𝑙

• Una suspensión de 2 ml a una concentración de 5 x 106 levaduras/ml.

• Una suspensión de 3 ml a una concentración de 5 x 108 levaduras/ml.

Fuente: Bryan Juiña. http://insilico.ehu.eus/camara_recuento/

𝐶𝑜𝑛𝑐𝑒𝑛𝑡𝑟𝑎𝑐𝑖ó𝑛: 𝑁 ∗ 104 𝑐𝑒𝑙/𝑚𝑙

𝑁° 𝑐é𝑙𝑢𝑙𝑎𝑠 𝑐𝑜𝑛𝑡𝑎𝑑𝑎𝑠: 135 𝑐𝑒𝑙

104 𝑐𝑒𝑙 100 𝑐𝑒𝑙

Fuente: Bryan Juiña. http://insilico.ehu.eus/camara_recuento/

Conteo cuadro central: 109 células

𝐶 = 𝑁 ∗ 10000 = 109 ∗ 10000

𝑠𝑢𝑠𝑝𝑒𝑛𝑠𝑖ó𝑛 𝑖𝑛𝑖𝑐𝑖𝑎𝑙 = 𝑁 ∗ 10000 ∗ 𝑓

• Suspensión de 2 ml a una concentración de 5 x 106 levaduras/ml.

Se debe tomar 0,092 𝑚𝑙 (92 𝜇𝑙) de la suspensión inicial para la dilución.

• Suspensión de 3 ml a una concentración de 5 x 108 levaduras/ml.

5 × 108 𝑙𝑒𝑣𝑎𝑑𝑢𝑟𝑎𝑠⁄𝑚𝑙 ∗ 3𝑚𝑙 = 15 × 109 𝑙𝑒𝑣𝑎𝑑𝑢𝑟𝑎𝑠

[𝐶]𝑖𝑛𝑖𝑐𝑖𝑎𝑙 = 𝑁 ∗ 104 ∗ 102

• Una suspensión de 2mL a una concentración de 5 x 106 levaduras/ml.