MÉTODOS

ESPECTROFOTOMÉTRICOS

1.Introducción y generalidades
2. Espectrofotometría molecular
4.Instrumentación y aplicaciones analíticas
Dr. Alfredo Cruz Monzón
 METODOS OPTICOS ESPECTROSCOPICOS
Se fundamentan en la interacción de la radiación
electromagnética con el analito de interés.

La interacción puede originar distintos fenómenos, donde la

absorción y la emisión son los más relevantes, generando los
llamados métodos espectroscópicos de absorción y/o emisión.

Todos estos métodos se denominan también espectroscópicos,

porque están basados en los espectros de absorción o emisión del
analito.
 EL ESPECTRO ELECTROMAGNETICO
Por la diversas líneas y frecuencias espectrales generadas por la
interaccion entre el analito y la energía radiante, es que se han
tratado de agrupar abarcando zonas más amplia: X, Vis-Uv, IR, etc

Características de la radiación electromagnética

Energía fotón = h ν = h c/λ
Unidades de la λ :
um = 10-6
nm = 10-9
A0 = 10-10

Cuando l incrementa, disminuye la energía y frecuencia del fotón

 TIPOS DE INTERACCION

Absorción: Energía absorbida por un átomo, ion o molécula.

Adquiere un estado superior de energía.

Emisión: Energía liberada por un átomo, ion o molécula.

Adquiere un estado inferior de energía.
 ABSORCIÓN DE RADIACIÓN ELECTROMAGNÉTICA

Proceso en donde una especie en un medio transparente,

capta selectivamente ciertas frecuencias de la radiación

M + h n == M *

La Absorción de luz genera una absorción de energía

precisa que provoca cambios precisos.
Estos cambios, son siempre discretos y pueden ser:

•Electrónicos : átomos y/o moléculas

•Vibracionales : sólo moléculas
•Rotacionales : sólo moléculas
 ESPECTROSCOPÍA DE ABSORCIÓN

Absorción Atómica Absorción Molecular

Espectro esta formado por líneas, Hay transacciones de tipo

debido al elevado Nº de posibles vibracional y rotacional entre
transiciones. subniveles electrónicos.
Incluyen subniveles electrónicos El resultado final se traduce en
dentro de cada nivel un espectro de bandas.
 TIPOS DE ESPECTROS

A A

l l
ESPECTRO DE LÍNEAS ESPECTRO CONTINUO
ESPECTROFOTOMETRÍA DE ABSORCION MOLECULAR
Transacciones
electrónicas Interacciones
de enlace

Variando la longitud de onda, se obtiene el Espectro de absorción del analito

en cada región.

Información cualitativa:
Por comparación del espectros de la muestra y el de un material de
referencia. Es mas relevante en IR.

Los espectros Vis-UV se pueden lograr usando un mismo equipo.

La espectroscopia IR (mayor información), requiere otro tipo de instrumento
 LEY DE LAMBERT - BEER
potencia del haz
antes de
atravesar el
blanco

absortividad
absorbancia concentración
total medida a P0 molar de las
la longitud de AT,l = log =ebc especies
onda l P absorbentes
camino
óptico

P potencia del
= Transmitancia (T)
P0 haz luego de A = -logT
atravesar la
muestra
 ABSORTIVIDAD MOLAR
Es un valor característico de cada sustancia .
Indica la cantidad relativa de luz que absorbe a una longitud de
onda determinada.

Depende de:

1. Características del disolvente

2. Especie absorbente
3. Longitud de onda de trabajo

Unidades: L /mol*cm = M-1 * cm-1

Determinar la absorbancia y transmitancia de una disolución de
que es 0,00240 M de una especie que tiene una absortividad molar
de 256 M-1*cm-1 en una cubeta cuyo paso óptico es de 1 cm.

A = ε b c = 256 * 1 * 0,00240
A = 0,6144

Asimismo:
log T = - A
log T = - 0,6144 de donde T = 0,2430
% T = 24,30

Significa que un 24,30 % de la luz incidente emerge de la

solución.
Una muestra de hexano absorbe en el UV por encima de los 200
nm. Si se diluyen 25,8 mg de benceno (PM = 78,11), en hexano
hasta completar 250 mL entonces se observa que presenta un pico
de absorción a 256 nm y una absorbancia de 0,266 en una cubeta
de 1 cm de paso óptico.
Determinar la absortividad molar del benceno a dicha longitud de
onda.

[C6H6] = 1,32*10-3 M

ε = A/bc = 0,266 /(1* 1,32*10-3)

ε = 201,52 M-1 * cm-1
 LIMITACIONES DE LA LEY DE BEER

REALES
 Variación de la absortividad debida al disolvente

 Concentración

APARENTES
 Instrumentales: radiación policromática

Químicas: cambios químicos de las especies absorbentes

por interacción con el disolvente
 DESVIACIONES DE LA LEY DE BEER
La mayoría de analitos cumplen con la ley en un determinado intervalo
de concentraciones.
Fuera de él: Desviaciones positivas o negativas.

respuesta debida
a la autoabsorción
o a la luz escasa que
atraviesa la cubeta
absorbancia

concentración
respuesta del blanco,
interferencias o escasa
sensibilidad

Es preciso asegurar que se está trabajando

en el intervalo lineal!!
 SELECCIÓN DE LA LONGITUD DE ONDA DE TRABAJO

banda A
A A banda C
banda A
banda C banda B banda B

l concentración

Medir absorbancias en el entorno más próximo a l max. n

Pues se minimizan errores, y se logra mayor sensibilidades.

Lecturas lejos del l max produce pequeñas variaciones que se

traducen en grandes errores.
COMPONENTES BÁSICOS DE LOS INSTRUMENTOS PARA
MEDIDAS DE ABSORCIÓN MOLECULAR EN EL UV-VISIBLE

1. Fuente de energía radiante

2. Selector de longitud de onda
3. Cubetas (muestra)
4. Detector
5. Dispositivo de lectura
 FUENTE DE ENERGÍA RADIANTE

1. Continua
2. Estable
3. Intensa
lámpara de
lámpara de Tungsteno
Deuterio
intensidad lumínica

300 500 700 900 1100

longitud de onda (nm)
 Fuentes de Energía
En absorción molecular la muestra debe ser irradiada con energía luminosa,
procedente de una fuente. Dependiendo de la zona de trabajo, las propiedades
de la fuente son distintas. Las fuentes deben ser uniformes en intensidad.

Las fuentes de IR se
producen al paso de corriente
a través de materiales
incandescentes:
ZrO2-óxidos de itrio (400-20,000nm)
Cr-Ni (750-20,000 nm), SiC..etc

lámpara de deuterio
(UV)
fuente de tungsteno (W)

Se usa en VIS e IR próximo

produce luz en intervalos de 350-2200 nm
160- 380 nm
 CUBETAS O CELDAS
CARAS NORMALES A LA DIRECCIÓN DEL HAZ

IR

VIS-UV

ABSORCIÓN MÍNIMA A LA LONGITUD DE ONDA DE TRABAJO

1. Vidrio ordinario o sílice (VIS).
2. Sílice fundida o cuarzo (UV).
3. NaCl, NaI, etc (IR).
 ESPECTROFOTOMETROS
Pueden ser :
1 Monohaz o haz simple
 2 Espectrofotómetro de doble haz

• Se puede desdoblar el haz a intervalos regulares con la ayuda de un

choper
• La mitad de la luz atraviesa la muestra y la otra un “blanco”
• La absorbancia medida tiene en cuenta la ratio de absorción
muestra/blanco y permite corregir las desviaciones en el detector y en
la fuente de salida
•La velocidad de cambio del chopper es una limitación a la l que puede
seleccionar el instrumento.
 APLICACIONES ANALÍTICAS
La espectrofotometría de absorción molecular se puede aplicar tanto
al análisis cualititativo como cuantitativo.

Análisis cualitativo:
Por comparación con estándares a fin de identificar las bandas de
absorción coincidentes. Es frecuente en UV e IR para identificar compuestos
orgánicos y mas rara vez se utiliza el Vis.

Análisis cuantitativo:
En el intervalo lineal de la ley de Beer. Se establece la curva de
calibrado usando estándares y la absorbancia de la muestra de concentración
desconocida se remite a la curva ( a veces basta con un solo estándar).

Procedimiento:
• En Espect. Visible el analito se incorpora a una especie compleja que
presenta bandas de absorción intensas.
• La selección correcta de la l contribuye a incrementar la selectividad de
la medida, pues sólo absorbe el analito.
•Siempre que sea posible se debe medir la absorbancia a lmax

Es una técnica rutinaria y especialmente sensible en fluorescencia.

 APLICACIONES ANALÍTICAS

Amplio Campo de Aplicaciones

(análisis orgánico e inorgánico)
Alta Sensibilidad

Buena Selectividad

Buena Precisión

Facilidad Operativa

Aplicación a Especies no Absorbentes

(Formación de Complejos)