Prácticas de Bioquímica Mgr.

Soledad Bornás Acosta

PRÁCTICA 4

PK Y AMORTIGUADORES

1. INTRODUCCION
Los compuestos químicos de los fluidos corporales presentan grupos ionizables, los cuales
tienen la capacidad de ionizarse en mayor y menor grado, dependiendo de la cantidad de
hidrógenos que presente el medio. Los compuestos que experimentan ionización son por
ejemplo los aminoácidos, ácidos orgánicos, porfirinas, purinas, pirimidinas, proteínas,
ácidos nucleicos, carbonatos, fosfatos y otros.
Disociación e ionización del ácido acético:

𝐂𝐇𝟑𝐂𝐎𝐎𝐇 ↔ 𝐂𝐇𝟑𝐂𝐎𝐎− + 𝐇+

Cuando la reacción química señalada alcanza el equilibrio, este se expresará como la

constante de equilibrio (constante de disociación):

[𝐂𝐇𝟑𝐂𝐎𝐎−] + [𝐇+]
𝐤=
[𝐂𝐇𝟑𝐂𝐎𝐎𝐇]

Donde la constante de equilibrio será igual al producto de las concentraciones moleculares

de los resultantes, dividido por la concentración molecular del reaccionante (s) en el
momento del equilibrio.
El ácido acético es un ácido débil; por lo que, se ioniza muy pobremente en el momento del
equilibrio, la mayoría de sus moléculas estarán sin ionizar y la constante será muy
pequeño:
𝐤 = 𝟏, 𝟖 𝐱 𝟏𝟎−𝟓

Una manera más práctica de expresar esta constante es como su logaritmo negativo y es
lo que precisamente se denomina pK:
𝐩𝐤 = −𝐥𝐨𝐠 𝐤

Por lo tanto, el pK para el ácido acético será:

𝐩𝐤 = −𝐥𝐨𝐠 𝟏, 𝟖 𝐱 𝟏𝟎−𝟓
𝐩𝐤 = 𝟒, 𝟕𝟒

Los amortiguadores o tampones, son soluciones que se oponen a variaciones bruscas en

el pH y por lo general están constituidos de ácidos débiles con sus bases conjugadas.
Cuando hay exceso de OH-, interviene el componente ácido del tampón; en tanto que al
existir exceso de H+, interviene el componente base conjugada del mismo. En una u otro
caso, se habrán enmascarado los iones OH - y H+; por lo tanto, el pH del medio no se
modificará.
Existen dos factores a considerar en la efectividad de un tampón, la concentración de los
componentes del mismo y la relación existente entre ambos. No olvidemos, por otra parte,
que la mayor acción amortiguadora está en las proximidades del valor de su pK.

1
Prácticas de Bioquímica Mgr. Soledad Bornás Acosta

2. OBJETIVOS
 Encontrar la curva espectral de un colorante.
 Determinar la longitud de onda analítica o de mayor absorbancia.
 Poner en evidencia de ley de Lambert – Beer, haciendo uso de concentraciones
progresivas de un colorante.
 Determinar la curva de calibración y factor de calibración mediante concentraciones
progresivas del colorante.
 Determinar la concentración de una sustancia desconocida mediante el uso de la
curva de calibración o factor de calibración.

3. MATERIAL Y METODOS
3.1. MATERIALES
3.1.1. Materiales de vidrio
 Tubos de ensayo
 Pipetas
 Cubetas para espectrofotómetro

3.1.2. Reactivos
 H20 destilada
 Anaranjado de metilo 1%

3.1.3. Equipos y otros

 Espectrofotómetro
 Calculadora

3.2. METODOS
El método que se aplicará en la práctica es la observación y exploración.

4. PROCEDIMIENTO
4.1. Espectros de absorción y longitud de máxima absorción
 Tomamos un tubo de ensayo en el agregamos 2mL de Anaranjado de metilo, luego
lo diluimos adicionando 1mL agua destilada.
 Seguidamente calibramos el espectrofotómetro a 0, utilizando agua destilada
como blanco.
 Por último seleccionamos la longitud de onda de mayor absorbancia.
4.2. Curva de calibración
Anaranjado
0 mL 5 mL
1 mL 2 mL 3 mL 4 mL

Calibración
del equipo

5 mL 0 mL
4 mL 3 mL 2 mL 1 mL

Agua
destilada
Prácticas de Bioquímica Mgr. Soledad Bornás Acosta

4.3. Factor de calibración

Determinar la concentración de anaranjado de metilo en mg/mL y mg/100mL
para cada tubo.

Tubo 1 Tubo 2

No hay Anaranjado de
anaranjado metilo 1mL
de metilo

En el tubo 2: En el tubo 3: En el tubo 4:

10 mg−1000 mL 10 mg−1000 mL 10 mg−1000 mL

x−1 mL x−1 mL x−1 mL
x=0,01 mg x=0,01 mg x=0,01 mg

0,01 mg−5 mL 0,01 mg−5 mL 0,01 mg−5 mL

x−1 mL x−2 mL x−3 mL
x=0,002 mg/mL x=0,004 mg/mL x=0,006 mg/mL

Si0,002 mg−1 mL Si 0,004 mg−1mL Si 0,006 mg−1 mL

x−100 mL x−100 mL x−100 mL
x=0,2 mg/100 mL x=0,4 mg/100 mL x=0,6 mg/100 mL

En el tubo 5: En el tubo 6:

10 mg−1000 mL 10 mg−1000 mL
x−1 mL x−1 mL
x=0,01 mg x=0,01 mg

0,01 mg−5 mL 0,01 mg−5 mL

x−4 mL x−5 mL
x=0,008 mg/ mL x=0,01 mg/mL

Si0,008 mg−1 mL Si0,01 mg−1 mL

x−100 mL x−100 mL
x=0,8 mg/100 mL x=1 mg/100 mL
Prácticas de Bioquímica Mgr. Soledad Bornás Acosta

1 2 3 4 5 6
Anaranjado de metilo (10mg/L) 0 mL 1 mL 2 mL 3 mL 4 mL 5 mL
Agua destilada 5 mL 4 mL 3 mL 2 mL 1 mL 0 mL

4.4. Concentración de una solución desconocida

Agua destilada Anaranjado de

para calibrar el metilo
equipo desconocido
[ ]s
F=
As
F=Factor de calibración
[ ]s=Concentración estándar
A s= Absorbancia del estándar

[ ]D =Fx A D
[ ]D =Concentración desconocido
F=Factor de calibración
A D= Absorbancia del desconocido

Solución Medir Absorbancia (A) = 460 nm

desconocida
5 mL
Factor del tubo 2,3,4,5,6
F x=
5

F 2+ F 3+ F 4+ F 5+ F 6
Fx=
5

Absorbanciadel desconocido ( A D ) =0,410

Prácticas de Bioquímica Mgr. Soledad Bornás Acosta

[ ]s
F=
As

Tubo 2 Tubo 3 Tubo 4 Tubo 5 Tubo 6

0,002 0 ,004 0 , 006 0 ,008 0 ,01
F 2= F 3= F 4= F 5= F 6=
0,210 0 , 409 0 , 611 0 ,808 1, 009
F 2=0,0095 F 3=0,009 7 F 4=0,009 8 F 5=0,009 9 F 6=0,009 9

F 2+ F 3+ F 4+ F 5+ F 6
Fx=
5

0,0095+ 0,0097+0,0098+0,0099+0,0099
Fx= =0,00976
5

[ ]D =Fx A D

[ ]D =Fx x 0,410
[ ]D =0,00976 x 0,410=0,0040016

[ ]s
F=
As

Tubo 2 Tubo 3 Tubo 4 Tubo 5 Tubo 6

0,2 0,4 0,6 0,8 1
F 2= F 3= F 4= F 5= F 6=
0,210 0,409 0,611 0,808 1,009
F 2=0,95 F 3=0,98 F 4=0,98 F 5=0,99 F 6=0,99

F 2+ F 3+ F 4+ F 5+ F 6
Fx=
5

0,95+ 0,98+0,98+0,99+0,99
Fx= =0,978
5

[ ]D =Fx A D

[ ]D =Fx x 0,410
[ ]D =0 , 978 x 0,410=0,4098
Prácticas de Bioquímica Mgr. Soledad Bornás Acosta

5. RESULTADOS
Esquematizar el procedimiento de los experimentos.

Experimento 1: Este proceso lo hacemos 5 veces en distintos cubetas,

 Seleccionar la longitud de onda de mayor absorbancia:

Mediante el uso de una tabla indicar la longitud de máxima absorción para
el anaranjado de metilo.

Longitud de onda 380nm 420nm 460nm 500nm 540nm 580nm

Absorbancia 0,109 0,325 0,592 0,371 0,099 0,002

 Espectros de absorción y longitud de máxima absorción del Anaranjado de Metilo.

Prácticas de Bioquímica Mgr. Soledad Bornás Acosta

 Encontrar el factor de calibración para el anaranjado de metilo.

Para la curva de calibración del anaranjado de metilo, elaborar una tabla

indicando la absorbancia y la concentración de cada sistema de tubos según el
caso.

Anaranjado de metilo (10mg/L) 1 2 3 4 5 6

Absorbancia 0 0,210 0,409 0,611 0,808 1,009
Concentración (mg/mL) 0 0,002 0,004 0,006 0,008 0,01
Concentración (mg/100mL) 0 0,2 0,4 0,6 0,8 1

 Curva de calibración del anaranjado de metilo en mg/mL

 Hallar la concentración de la solución desconocida, usando la curva de

calibración y/o factor de calibración, mediante el uso de una tabla.

Anaranjado de metilo desconocido Curva de calibración Factor de calibración

Concentración (mg/mL) 0,0040016 0,00976
Concentración (mg/100mL) 0,4098 0,978
Prácticas de Bioquímica Mgr. Soledad Bornás Acosta

 Ubicar la concentración de la solución desconocida en el gráfico de la curva

de calibración.

6. CONCLUSIONES

7. CUESTIONARIO
7.1. Calcular la constante de equilibrio y el pk para la disociación de un ácido débil
(monocarboxílico), sabiendo que su concentración inicial es 0,4M y que en el equilibrio un
0,2% de sus moléculas están disociadas.
7.2. Determinar el pH de una solución acuosa que es 0,4M en ácido acético y 0,4M en
acetato de sodio. Teniendo en cuenta que la constante de equilibrio del ácido acético es
1,8x10-5.
7.3. Calcular la variación de pH cuando añadimos 1mL de HCl a un litro de una solución
amortiguadora con una concentración de amoniaco 0,75M y cloruro de amonio al 0,75M.

8. BIBLIOGRAFIA