FASE 3 – MÉTODOS INSTRUMENTALES

DAYRA ALEJANDRA CAICEDO DIAGO – CÓDIGO: 1.114.835.411

JUAN SEBASTIAN GONZALEZ DOMINGUEZ– CÓDIGO: 1113042268
JORGE HERNAN ROLDAN SANCHEZ – CÓDIGO: 1.114.822.079
JOHANNA HOLGUIN HINCAPIE – CÓDIGO: 1.113.660.942
NATALIA CEBALLOS ARANGO – CÓDIGO: 1.116.279.169

PRESENTADO A:

LADY DIANA CASTANEDA

GRUPO 301102_20

UNIVERSIDAD NACIONAL ABIERTA Y A DISTANCIA

ESCUELA DE CIENCIAS BÁSICAS TECNOLOGÍA E INGENIERIA
QUIMICA ANALITICA E INSTRUMENTAL
2020
 Problemática Seleccionada por el grupo Contaminación de la Leche por Plomo
colaborativo
Método instrumental Espectroscopia de absorción atómica

Grupo colaborativo : #301102_20

La leche es considerada como un alimento casi completo, y es el principal constituyente de

la dieta diaria, por ser una buena fuente de proteínas, lípidos, carbohidratos y de los
principales minerales. El objetivo de este estudio fue determinar la presencia de plomo y de
cadmio en leche cruda.
Identificación del problema:
Entre las fuentes de exposición que permiten que los metales pesados tóxicos entren en
contacto con los animales se tienen los alimentos (como chalas picadas contaminadas con
fertilizantes químicos fosfatados o nitrogenados), el agua de ríos contaminados con
desechos industriales (empleados para el regadío de las chalas), las aguas subterráneas que
consumen y el uso de materiales durante ordeño, almacenamiento y transporte de la leche
Los animales expuestos a las emisiones de plomo y cadmio son propensos a contaminarse
principalmente por las vías respiratoria y digestiva. Las vacas pueden acumular niveles de
plomo en los huesos durante su exposición, y liberarlo en ciertas condiciones
(principalmente en las etapas de gestación y de lactancia) hacia el torrente sanguíneo y,
posteriormente, hacia la leche, de manera muy similar a como se realiza con el calcio y c o
n otros cationes divalentes de importancia fisiológica, pudiendo, de esta forma, competir el
plomo y el cadmio con estos iones.

Plomo
Propiedades fisicoquímicas
El plomo (Pb) es un metal pesado de color grisáceo, brillante al corte reciente, que se oxida
rápidamente, adoptando un aspecto mate. Es muy dúctil, blando y maleable. Número
atómico, 82; peso atómico, 207,19; estado de oxidación en los compuestos inorgánicos, +2;
posee alta densidad, 11,34 g/cm3 a 20 °C; bajo punto de fusión, 327 °C; entra en ebullición
a 1751 °C. Al fundirse, emite vapores tóxicos.
Cadmio
Propiedades fisicoquímicas
El cadmio (Cd) es un metal pesado, blanco azulado, blando, dúctil, maleable, resistente a la
oxidación y altamente reactivo. Número atómico, 48; peso atómico, 112,40; su estado de
oxidación más común es el +2, y puede presentar el estado de oxidación +1, pero es muy
inestable; su densidad es de 8,64 g/cm3, su punto de fusión, 320,9 °C; y entra en ebullición
a 765 °C.

Antecedentes de plomo y cadmio en la leche

Debido a las diversas fuentes de contaminación ambiental, la leche es susceptible a
contaminarse con los metales pesados. Estos pueden llegar al animal por consumo de aguas
contaminadas y forrajes contaminados con fertilizantes fosfatados o nitrogenados.
Asimismo, el uso de materiales poco apropiados en los utensilios durante ordeño,
manipulación, almacenamiento y transporte de la leche (tarros soldados con plomo) pueden
influir en la presencia de estos metales.
Fundamento del método espectrofotometría de absorción atómica
La espectrofotometría de absorción atómica es una técnica que se basa en la absorción
específica de radiación por átomos no excitados. Es un método de elección para identificar
y cuantificar trazas de metales en muestras líquidas.
La espectrofotometría de absorción atómica con horno de grafito es una técnica con elevada
sensibilidad, que tiene la capacidad de detectar concentraciones muy pequeñas de 1 ppm o
ppb. Además, se utiliza para muestras de pequeño volumen (microlitros). El equipo consta
de una fuente (una lámpara de cátodo hueco específico para cada metal) que emite
radiación a longitudes de onda específicas. Este tipo de lámparas contiene un ánodo de
wolframio y un cátodo cilíndrico cerrado herméticamente en tubo de vidrio lleno con gas
neón/argón a presión de 1 a 5 torr. Además, consta de un atomizador, donde se llevan a
cabo fundamentalmente dos procesos: la atomización de la muestra y la absorción de
radiación proveniente de la lámpara por los átomos libres.

Preparación de la muestra La muestra se ha de introducir en la fuente de excitación disuelta,

por lo general en agua. muchos materiales no son solubles en los disolventes habituales. El
material requiere un tratamiento previo, por lo general se puede descomponer el material
sometiéndolo a altas temperaturas, pero se puede perderse el analito por volatilización o en
forma de aerosoles en el humo. Algunos reactivos para la descomposición pueden ser
interferentes químicos y espectrales
Por lo tanto, algunos de los métodos más habituales para la descomposición y disolución de
las muestras son:
• Tratamiento con ácidos minerales en caliente
• Oxidación con reactivos líquidos como ácido sulfúrico
• Combustión en una bomba de oxigeno o en otro recipiente para evitar pérdidas del analito
• Digestión a elevada temperatura
• Fusión a elevada temperatura con reactivos como oxido bórico o carbonato sódico.
Una de las ventajas de la atomización electrotermica es que algunos materiales pueden
atomizarse directamente evitando de esta manera la etapa de la disolución
Disolventes orgánicos
Se puede obtener mayores pucos de absorción a partir de disoluciones que contengan
alcoholes de bajo peso molecular, esteres o cetonas. Esto se puede atribuir a:
• Mejoran la eficacia de la nebulización
• La mayor velocidad de evaporación del disolvente
La mejor aplicación de estos disolventes es la utilización de disolventes inmiscibles, como
la metil isobutil cetona, para extraer quelatos de iones metálicos.

Curvas de calibrado.
En teoría la absorción atómica debería cumplir la ley de Beer, pero se encuentran con
frecuencia desviaciones de la linealidad. Se debería preparar periódicamente una curva de
calibrado que cubra el intervalo de concentraciones correspondientes a la muestra
Adición estándar
Este método se utiliza ampliamente con el objeto de contrarrestar parcialmente o completo
las interferencias químicas y espectrales introducidas por la matriz de la muestra.

Desde el tratamiento de la muestra hasta la atomización comprende las tres siguientes

etapas:

Secado. Una vez que la muestra ha sido inyectada en el tubo de grafito, se calienta a una
temperatura algo inferior al punto de ebullición del solvente (usualmente entre 80 a 180
°C). El objetivo de esta etapa es la evaporación del solvente y de los componentes volátiles
de la matriz.
Calcinado o carbonización. El próximo paso del programa es el calcinado por incremento
de la temperatura, para remover la mayor cantidad de materia orgánica de la muestra como
sea posible, sin pérdida del analito. La temperatura de calcinación usada varía típicamente
en el rango de 350 a 1600 °C. Durante este proceso se destruye la estructura química de la
muestra. Durante el calcinado, el material sólido es descompuesto, mientras que los
materiales refractarios, como los óxidos, permanecen inalterados.
Atomización. En esta etapa, el horno es calentado rápidamente a altas temperaturas (1800-
2800 °C), para vaporizar los residuos del paso de calcinado (vapor atómico). En este
proceso se convierten los iones (cationes) en átomos libres. Los átomos libres no excitados
de un elemento son capaces de absorber radiación o energía a partir de fuente externa
(lámpara de cátodo), siempre que la radiación absorbida corresponda exactamente a la
energía necesaria para que tenga lugar la transición del átomo del elemento problema desde
el estado fundamental a otro estado excitado de mayor energía. La diferencia de energías
entre el estado final y el inicial da la frecuencia de las líneas de absorción.
La longitud de onda a la cual la luz es absorbida es específica para cada elemento; la
cantidad de radiación absorbida es proporcional a la cantidad de átomos del elemento
presente.
Asimismo, se cuenta con un monocromador para controlar la intensidad que llega al
detector y separar radiación de fondo; un tubo fotomultiplicador, para convertir los fotones
que no fueron absorbidos a cierta longitud de onda en señales eléctricas, para ser
amplificadas y procesadas. Finalmente, se transmite a la computadora para su lectura.

Cálculos
El contenido de Pb en la muestra se obtiene mediante la siguiente ecuación:
Contenido de Pb (µg/kg) = (Lec. x 0,050) /P
Lec. = Lectura del equipo en µg/L de Pb
P = Peso de la muestra en g

CÁLCULO DE LA INCERTIDUMBRE Definición del Mensurando El primer paso para calcular la

incertidumbre es la completa definición del mensurando a determinar, en éste caso la concentración
en %Peso del Pb. Para ello, el espectrofotómetro realiza una curva de calibración, que ajusta por
mínimos cuadrados, y calcula la concentración de la solución leída mediante la
Ecuación
A O −B
C O=
m
Donde CO= Concentración del metal en la solución [mg L-1], A= Absorbancia del metal en
absorción atómica, B= Ordenada al origen de la curva de calibración, m= Pendiente de la curva de
calibración.

Fuentes de luz

La fuente de luz elegida tiene una anchura espectral más estrecha que la de las transiciones
atómicas.
utiliza un tubo catódico de cobre, y así para cualquier otro metal que se analice.
La espectrometría de absorción atómica también puede ser llevada a cabo mediante láser,
principalmente un láser de diodo, ya que sus propiedades son apropiadas para la
espectrometría de absorción láser. La técnica se denomina espectrometría de absorción
atómica por láser de diodo (DLAAS o DLAS), o bien, espectrometría de absorción por
modulación de longitud de onda.

MÉTODOS DE CORRECCIÓN DE FONDO

El estrecho ancho de banda de las lámparas catódicas huecas hace que sea raro el
solapamiento espectral. Es decir, es poco probable que una línea de absorción de un
elemento se solape con otra. La emisión molecular es mucho más amplia, por lo que es más
probable que algunas bandas de absorción molecular se superpongan con una línea atómica.
Esto puede resultar en una absorción artificialmente alta y un cálculo exagerado de la
concentración en la solución. Se utilizan tres métodos para corregir esto:

* Corrección de Zeeman. Se usa un campo magnético para dividir la línea atómica en dos
bandas laterales. Estas bandas laterales están lo suficientemente cerca de la longitud de
onda original como para solaparse con las bandas moleculares, pero están lo
suficientemente lejos como para no coincidir con las bandas atómicas. Se puede comparar
la absorción en presencia y ausencia de un campo magnético, siendo la diferencia la
absorción atómica de interés.
Instrumentos para la espectroscopia de absorción atómica
En esencia el equipo de absorción atómica consta de tres partes: una fuente de radiación, un
medio para la obtención de átomos libres y un sistema para medir el grado de absorción de
la radiación.
Fuentes de radiación
La fuente de radiación característica debe poseer tres propiedades fundamentales:
monocromaticidad, la línea de resonancia se debe poder seleccionar con toda precisión
exactamente a la longitud de onda del elemento a determinar. Intensidad, deber ser lo
suficientemente intensa a la longitud de onda de interés. Estabilidad, suficiente como para
poder realizar las medidas sin fluctuaciones considerables.
Actualmente hay varias fuentes de radiación utilizables, las de emisión continua, que
abarcan el espectro desde el ultravioleta lejano hasta el visible y las fuentes de emisión
discontinua, que emiten únicamente a longitudes de onda muy concretas.
Las fuentes de emisión continua son muy buenas, pero necesitan un monocromador de un
elevado poder de resolución cuyo precio es muy alto. Por esta razón son más utilizadas las
fuentes de emisión discontinua, entre las que se pueden distinguir las lámparas de cátodo
hueco y las lámparas de descarga sin electrodos. Tanto unas como otras requieren un
período de calentamiento antes de comenzar las mediciones. Sin embargo, se debe destacar
que las lámparas de descarga sin electrodos tienen un elevado precio y requieren un elevado
tiempo de calentamiento, pero presentan la ventaja de alta intensidad de emisión frente a las
lámparas de cátodo hueco
Incremento de la sensibilidad
En ocasiones, las concentraciones que deseamos detectar son demasiado bajas, por lo que
se debe recurrir a técnicas especiales que requieren complementar el equipo con ciertos
accesorios, los cuales mejoran notablemente la sensibilidad del equipo. Ejemplo de esto
puede ser: cámara de grafito. El aporte energético más utilizado es la llama, pero en
ocasiones se necesita mayor sensibilidad.
Una forma de controlar las etapas necesarias para llevar los átomos que constituyen una
muestra hasta el estado fundamental es suministrar la energía programada por medios
electrotérmicos. Es decir, se sustituye la llama por la cámara de grafito, con ello aumenta la
proporción de átomos en estado fundamental y, por tanto, la sensibilidad aumenta. Con la
cámara de grafito, se aumenta la sensibilidad unas 1000 veces la de la llama, pudiéndose
llegar a detectar niveles de ng/L.
 Estudiante N° 1 Dayra Alejandra Caicedo
1ª. Para la determinación del contenido de fosforo en carne por el método de espectroscopia
UV-Vis, se obtuvieron los siguientes datos de absorbancia para las soluciones estándar:

A partir de los datos de la tabla:

-Grafique los datos experimentales de absorbancia en función de la concentración.

Absorbancia
0.7

0.6

0.5

0.4

0.3

0.2

0.1

0
0 2 4 6 8 10 12
-Utilice el método de mínimos cuadrados para realizar un ajuste lineal que le permita
determinar la ecuación correspondiente.

x y x*y x^2 y^2

1 0,116 0,116 1 0,013456
3 0,221 0,663 9 0,048841
5 0,347 1,735 25 0,120409
7 0,456 3,192 49 0,207936
9 0,535 4,815 81 0,286225
11 0,588 6,468 121 0,345744
Sumatoria 36 2,263 16,989 286 1,0205006

n∗∑ ( x∗y )−∑ x∗∑ y ∑ y∗∑ x 2−∑ x∗∑ ( x∗y )

y= (
n∗∑ x 2−∣ ∑ x ∣2
x+ ) (
n∗∑ x 2−∣ ∑ x ∣2 )
6∗(15,989)−(36∗2,263)
y=
( 6∗(286)−(362 ) ) =0,0290

(2,263∗286)−(36∗16,989)
b=
( 6∗(286)−(362 ) )
=0,0117
 y=0,0290 x +0,0117
1b. A partir de la curva de calibración del numeral anterior se requiere calcular la
concentración en una muestra para lo cual se tomó 2 g de harina y luego de tratarla
adecuadamente se llevó a un volumen de 100 mL. La lectura de absorbancia de esta
solución fue de 0,240. Determine la concentración de fósforo en la muestra de harina.

A partir de la curva de calibración se tiene que:

A=0,0290 c+ 0,0117
Entonces
A−0,0117
=C
0,0290
A−0,0117
C=
0,0290
Remplazamos la absorbancia en la formula y obtenemos la concentración:
0,240−0,0117
C=
0,0290
=7,872 ppm

1c. Indique cuales son las limitaciones de la absorción atómica y a la emisión atómica.

ESPECTROSCOPIA DE EMISION
Aplicaciones principales: Análisis cualitativo y cuantitativo de muchos elementos.
Fenómeno atómico: Emisión de luz por estados electrónicos excitados de los átomos
Ventajas en el análisis cualitativo: General para todos los elementos metálicos; análisis
simultáneo de los elementos metálicos.
Ventajas en el análisis cuantitativo: General para todos los elementos metálicos. En
muchos casos alta sensibilidad.
Muestra promedio deseable: 0.25 – 2 g
Limitaciones del método: Sensibilidad limitada para los halógenos y otros no metales
Limitaciones para la muestra: La mayoría de muestras orgánicas líquidas y sólidas
requieren de digestión antes del análisis
 ESPECTROSCOPIA DE ABSORCIÓN
Aplicaciones principales: Análisis cuantitativo de precisión para un metal dado.
Fenómeno atómico: Absorción de la línea atómica característica
Ventajas en el análisis cualitativo: No es aplicable
Ventajas en el análisis cuantitativo: Análisis rápido y fiable de un elemento dado. En
algunos casos alta sensibilidad
Muestra promedio deseable: 100 mg
Limitaciones del método: Los metales se analizan individualmente no simultáneamente.
Por lo general no es aplicable a no metales.
Limitaciones para la muestra: La mayoría de muestras orgánicas líquidas y sólidas
requieren de digestión antes del análisis.

1d. Mencione lo criterios necesarios en la selección de una fase estacionaria en

cromatografía HPLC.
En HPLC se emplean dos tipos de relleno para las columnas:
- Relleno pelicular: se utilizan bolitas de vidrio o polímero no porosas esféricas de diámetro
entre 30-40 µm. Sobre su superficie se deposita una capa delgada de partículas muy
pequeñas (2-5 µm) gel de sílice, alúmina o un cambiador iónico que actúan como fase
estacionaria. Si la fase estacionaria es líquida se coloca una fina película de líquido sobre
las esferas no porosas.
- Partículas porosas: se trata de micropartículas porosas con tamaños entre 3-10 µm de
sílice, alúmina o cambiadores iónicos, que actúan como fases estacionarias. También
pueden recubrirse con películas orgánicas líquidas retenidas por adsorción.

Estudiante N° 2 Jorge hernan roldan

2a Para la determinación del contenido de hierro en un alimento por el método de

espectroscopia UV-Vis, se obtuvieron los siguientes datos de absorbancia para las
soluciones estándar:
 Estándar Concentración (molar) Absorbancia

1 0 0

2 2 0,03

3 4 0,06

4 6 0,08

5 8 0,1

6 10 0,13

A partir de los datos de la tabla:

Grafique los datos experimentales de absorbancia en función de la concentración.

Utilice el método de mínimos cuadrados para realizar un ajuste lineal que le permita
determinar la ecuación correspondiente.

X Y X∗Y X2
0 0 0 0
2 0.03 0.06 4
4 0.06 0.24 16
6 0.08 0.58 36
8 0.1 0.48 64
10 0.13 0.8 100
∑ 30 0.4 2.88 220
 ∑ x +∑ y
∑ xy− n
m= ¿ ¿
∑ x 2−¿ ¿ ¿ ¿
(30)(0,4)
2,88−
6
m=
220−¿ ¿ ¿
m=0,012 X

X=
∑X y=
∑y
n n
30 0,4
x= =5 y= ¿ 0,066
6 6

Fórmula para calcular la intercepción en y.

B= y – mx
B=0,066−(0,012∗5)
B=0,066−0,06
B=0,006
La pendiente de la recta es 0,012X y la intercepción en y es 0,006

Por lo tanto, la ecuación es y= 0,012x + 0,006

2b A partir de la curva de calibración del numeral anterior se requiere calcular la

concentración en una muestra que luego de tratarla adecuadamente se llevó a un
volumen de 250 mL. La lectura de absorbancia de esta solución fue de 0,04.
Determine la concentración de hierro en la muestra.

A=0,012C +0,006
0,04=0,012 C MP +0,006

0,04−0,006
C MP =
0,012
C MP =2,83 ppm
 2c Indique cuales son los principios básicos de absorción atómica y de un ejemplo.

Los principios teóricos de la absorción atómica fueron establecidos en 1840 por

Kirchhoff y Bunsen en sus estudios del fenómeno de auto absorción en el espectro de
los metales alcalinos y alcalinos térreos.

La base de la espectroscopia de absorción atómica (EAA) la entregó Kirchhoff al

formular su ley general: « cualquier materia que pueda emitir luz a una cierta longitud
de onda también absorberá luz a esa longitud de onda». El significado práctico de esto
fue recién desarrollado en 1955 por el australiano Walsh, apareciendo los primeros
instrumentos comerciales a principios de 1960.

Ejemplo: La técnica de espectroscopia de absorción atómica de flama (FAAS) requiere

una muestra líquida que se aspira, aeroliza, y se mezcla con gases combustibles, como
acetileno y aire o acetileno y óxido nitroso. La mezcla es encendida dentro de una
flama que tiene un rango de temperatura que van desde 2100 a 2800 ºC. Durante la
combustión, los átomos de los elementos de interés en la muestra son reducidos a
átomos libre, átomos en estado basal no excitado, los cuales absorben luz a longitudes
de onda características.

2d ¿Cuál es la clasificación de los métodos cromatográficos según la disposición de

la fase estacionaria?
La cromatografía puede ser definida como cualquier método de separación que
depende de una absorción continua, partición o proceso de intercambio iónico; agrupa
un conjunto importante y diverso de métodos, que permite separar componentes
estrechamente relacionados en mezclas complejas, lo que en muchas ocasiones resulta
imposible por otros medios.
Los métodos cromatográficos son hoy en día tan diversos que pocos de ellos muestran
alguna similaridad con la técnica original.
Las técnicas cromatografías pueden clasificarse de acuerdo a la disposición de la fase
estacionaria como sigue:
- Cromatografía Plana: La fase estacionaria se sitúa sobre una placa plana o sobre un
papel. Las principales técnicas son: Cromatografía en papel y Cromatografía en capa
fina
- Cromatografía en Columna: La fase estacionaria se sitúa dentro de una columna.
Según en tipo de fluido empleado como fase móvil

Estudiante N° 3 Johanna Holguin

3ª. La provitamina A se determina como β-caroteno. Para lo cual se hace una
extracción previa, se purifica por cromatografía de columna y el extracto se diluye a
un volumen conocido y se mide a 450 nm. Para determinar el contenido de esta
sustancia en un alimento se preparó la siguiente curva de calibración:
A partir de los datos de la tabla:

-Grafique los datos experimentales de absorbancia en función de la concentración.

0.7

0.6

0.5
Absorvancia

0.4

0.3

0.2

0.1

0
0 1 2 3 4 5 6 7
Concentracion

-Utilice el método de mínimos cuadrados para realizar un ajuste lineal que le permita
determinar la ecuación correspondiente.

X Y X*Y X2
0 0 0 0
0,3 0,13 0,039 0,09
0,5 0,23 0,115 0,25
0,7 0,36 0,252 0,49
0,9 0,48 0,432 0,81
 1 0,62 0,62 1
3,4 1,82 1,458 2,64

∑ x +∑ y
∑ xy− n
m= ¿ ¿
∑ x 2−¿ ¿ ¿ ¿
( 3,4)(1,82)
1,458−
6
m=
2,64−¿ ¿ ¿
¿ 0,598 X

X=
∑X y=
∑y
n n
3,4 1,82
¿ = 0,566 ¿ 0,303
6 6

Fórmula para calcular la intercepción en y.

B= y – mx
¿ 0,303−(0,598∗0,566)
¿ 0,303−0,338
¿−0,035

La pendiente de la recta es 0,598X y la intercepción en y es -0,035

Por lo tanto, la ecuación es y= 0,598x - 0,035

3b. A partir de la curva de calibración del numeral anterior se requiere calcular la

concentración de provitamina A en una muestra para lo cual se tomó 10 mL y se llevó
a un volumen de 100 mL. La lectura de absorbancia de esta solución fue de 0,21.
Determine la concentración de provitamina A en la muestra.
A=0,598 C−(−0,035)
0,21=0,598C MP−(−0,035)

C MP =0,21+0,035 ¿ ¿
0,598
C MP =0,409

3c. ¿Cuáles son las propiedades que debe tener una molécula para que sea posible
cuantificarla por espectroscopia UV-Vis?
Capacidad de absorción de energia.
Cantidad de anlito a cuantificar.

La espectrofotometría UV-visible es una técnica analítica que permite determinar la

concentración de un compuesto en solución. Se basa en que las moléculas absorben las
radiaciones electromagnéticas y a su vez que la cantidad de luz absorbida depende de forma
lineal de la concentración. Para hacer este tipo de medidas se emplea un espectrofotómetro,
en el que se puede seleccionar la longitud de onda de la luz que pasa por una solución y
medir la cantidad de luz absorbida por la misma.
3d. ¿Qué papel juega el coeficiente de partición del compuesto en la separación por
cromatografía?
El coeficiente de reparto (K) de una sustancia, también llamado coeficiente de partición
(P), es el cociente o razón entre las concentraciones de esa sustancia en las dos fases de
la mezcla formada por dos disolventes inmiscibles en equilibrio. Por tanto, ese coeficiente
mide la solubilidad diferencial de una sustancia en esos dos disolventes.
Donde [sustancia1] es la concentración de la sustancia en el primer disolvente y,
análogamente [sustancia2] es la concentración de la misma sustancia en el otro disolvente.

Estudiante: 5 – Natalia Ceballos

Para determinar la concentración de calcio en una muestra de leche se construyó la
siguiente curva de calibración:
 Estándar Concentración Porcentaje de
(ug/cm3) Tramitancia (%)

1 2,1 86,0

2 4,4 72,0

3 6,8 62,0

4 9,1 54,0

5 11,6 48,0

-Grafique los datos experimentales de absorbancia en función de la concentración teniendo

en cuenta que:
A=2-Log %T

Aborbancia vs concentración
0.35

0.3 f(x) = 0.03 x + 0.02

R² = 0.99
0.25
absorbancia

0.2
Aborbancia (y)
0.15 Linear (Aborbancia (y))
0.1

0.05

0
0 2 4 6 8 10 12 14
concentración

-Utilice el método de mínimos cuadrados para realizar un ajuste lineal que le permita
determinar la ecuación correspondiente.

Concent Porcent
Estánda ración aje de Aborba
r (ug/cm3 Tramita ncia (y)
(x*y) x2 y2
) (x) ncia (%)
 1 2,1 86 0,0655 0,13755 4,41 0,00429
2 4,4 72 0,14267 0,62774 19,36 0,02035
3 6,8 62 0,20761 1,41174 46,24 0,0431
4 9,1 54 0,26761 2,43522 82,81 0,07161
5 11,6 48 0,31876 3,6976 134,56 0,10161
Suma 34 1,00214 8,310 287,38 0,24097

( 5∗8.310 )−(34∗1.0021)
m= =0,0266
( 5∗287.38 )− (34 )2

(1.0021∗287.38 )−(34∗8.310)
b=
(5∗287.38 ) −¿ ¿

Ecuación lineal

y=0.0266 x +0.0194

A partir de la curva anterior, determine la concentración de calcio en una muestra de leche

con una Tramitancia de 58 %

A=2−log ( %T )=2−log ( 58 )
A=0.236
0.0236=0.0266 x+ 0.0194
0.236−0.0194
=8.14 ug /cm3
0.0266

¿Cuáles son los pasos a seguir para cuantificar un analito por medio de espectroscopia
UV-Vis?
Primero debe conocer la longitud de onda a la que se produce una absorción máxima
(lambda max). Luego se debe preparar soluciones de concentraciones conocidas y trazar
sus valores de absorbancia vs. concentración para seguir la ecuación en línea recta y = mx
donde y es la absorbancia yx las concentraciones correspondientes. Se debe tener en cuenta
que si las concentraciones obedecen la ley de Lambert-Beer, la trama será una línea recta.
De la parcela se obtiene la pendiente m. Luego simplemente reemplace la absorbancia (y)
de la conc. en la ecuación donde se conoce la m.

¿Cuáles son las propiedades de la fase móvil que se deben considerar en

cromatografía HPLC para la separación de compuestos?
El propósito de la fase móvil es mover la muestra a través de la columna y separar los
componentes de la muestra ralentizándolos. Estos componentes están separados por
tamaño, forma, carga, polaridad, estado hidrofóbico y capacidad de unión y se capturan en
la columna. La separación ocurre cuando la muestra se "ralentiza" en comparación con la
fase móvil y los componentes individuales que comienzan a separarse de la fase móvil se
detectan y cuantifican.
Hay una variedad indefinida de fases móviles, pero la mayoría se pueden clasificar en dos
tipos diferentes:

1. Fase normal, en la cual la columna es más polar que la fase móvil

2. Fase inversa, en la cual la columna es menos polar que la fase móvil

Teniendo en cuenta los componentes químicos objetivo que se analizan y las

características de la muestra, se puede utilizar una fase móvil o una combinación de
fases para generar la resolución y los resultados óptimos.
Después del tipo, la segunda parte definitoria de la fase móvil son los componentes que
se mezclan para crearla: su formulación. Independientemente del tipo de fase móvil
utilizada (normal o inversa), la calidad y consistencia de la formulación de la fase móvil
es crucial para la precisión analítica y la precisión.
Típicamente, la fase móvil consiste en un solvente base (fase normal) o agua (fase
inversa) y una o más sales, ácidos y tampones. Ciertas características de la fase móvil,
incluido el pH, las concentraciones, la pureza, etc., pueden alterar la efectividad de la
fase móvil y aumentar o disminuir la resolución. La adición de estos componentes es,
por lo tanto, altamente útil. Por ejemplo, los tampones pueden ayudar a mantener el pH
constante, regulando así las características hidrofóbicas del analito, mientras que los
ácidos pueden reforzar la efectividad de la columna y los detectores en la HPLC,
permitiendo una mayor resolución y diferentes tiempos de retención.
El pH juega un papel crucial en la determinación de la retención y la selectividad, así
como en el control de la precisión y precisión de un método. No existe un "mejor" pH
universal para la fase móvil, ya que las características de la muestra y los analitos
deseados juegan un factor en la determinación del pH ideal para una ejecución. Lo que
es universal es la necesidad de tener un pH constante y preciso que se mantenga en el
valor requerido para la vida útil de la fase móvil. Esto puede ser minutos u horas (el
tiempo para ejecutar un conjunto de muestras a través del HPLC), hasta 6 meses o más
en ciertos sistemas cerrados. En los casos en que la muestra podría afectar el pH durante
una ejecución típica, el tampón debe incluirse en la composición de la fase móvil.
Deben considerarse otras condiciones con respecto a cómo podrían afectar el pH (p. Ej.,
Intercambio iónico con productos químicos en el aire ambiente del laboratorio) y deben
usarse controles para minimizar estos efectos. Si el pH sube o baja, lo más probable es
que los resultados varíen.
Al agregar ácidos, tampones, sales, solventes y / o agua para hacer la fase móvil, es
importante tener en cuenta los niveles de pureza para garantizar que ningún compuesto
adicional contamine la fase móvil y altere los resultados analíticos deseados. De hecho,
las impurezas y partículas en los componentes pueden afectar incluso más que los
resultados. Estos contaminantes también pueden acortar la vida útil del equipo al
obstruir la columna, bloquear los filtros y dejar artefactos en las líneas. Esto aumentará
los costos de mantenimiento, interrumpirá el rendimiento de la muestra y disminuirá la
eficiencia.

REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS
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