LABORATORIO Nº 2

MANEJO Y USO DEL MICROSCOPIO

Profa. Idalmi Martínez de Rincón

INTRODUCCIÓN
Los avances en la microscopía esta íntimamente ligada al desarrollo de la biología, llevando a la
creación de nuevas técnicas y métodos de investigación. El término microscopio fue acuñado por
Jean Faber (1624) y etimológicamente significa mikrós (pequeño) y skoopéo (observar), su
mayor impulsor fue Anton Van Leeuwenhoek ya que pulía lentes convexas y construía sus
microscopios.
Microscopio es un instrumento óptico que permite observar objetos no visibles a simple vista o
sea inferiores a 0.1 mm. Hay dos principios en los que se basa el uso del microscopio que son la
magnificación (capacidad de aumentar la imagen observada) y la resolución (capacidad de
producir una imagen nítida y bien definida).
Tipos de microscopios:
a. Simples: un solo sistema de lente con una distancia focal corta (aumento hasta 15x)
b. Compuestos: compuestos por dos o más lentes y se consiguen aumentos mayores. Hay un
ocular y objetivos montados en extremos opuestos de un tubo cerrado, donde el objetivo
crea una imagen real aumentada de la muestra observada y el ocular produce una imagen
virtual aumentada de la imagen real.

OBJETIVOS
1. Identificar las partes del microscopio y sus respectivas funciones.
2. Describir las reglas básicas para su cuidado.
3. Adquirir habilidad en el uso y manejo del microscopio.

MATERIALES
Microscopios Porta y cubre objeto
Papel de lente Agua estancada
Papel toalla Papel milimetrado
Periódico Hilos de colores contrastantes
Gotero Tijera

PROCEDIMIENTO
I. Identifique con ayuda del profesor las partes que componen al microscopio. Indique las partes
en la figura anexa
Sistemas que constituyen el microscopio
A. Mecánico:
* Pie: apoyo de las otras piezas del microscopio
*Brazo: relaciona el tubo con la base o pie y sostiene la platina y el condensador, además
nos sirve para sostener el microscopio al transportarlo.
*Tubo: está en la parte superior del microscopio, sostiene el o los oculares y mantiene
constante la distancia entre el ocular y el objetivo.
*Tornillo macrométrico: acerca o aleja de forma rápida el objetivo de la muestra
permitiendo un enfoque más o menos claro del material biológico a estudiar.
 *Tornillo micrométrico: acerca o aleja el portaobjeto de manera lenta permitiendo
desplazamientos muy finos y enfocar nítidamente el material objeto de estudio.
*Revólver o disco giratorio: se encuentra debajo del tubo y en él se insertan los objetivos,
permite el cambio de un objetivo a otro.
*Platina: placa con un orificio central que permite el paso de la luz. Sirve para sostener las
placas con el material biológico a observar.
*Carro mecánico: dispositivo en la platina que permite sujetar y movilización del material
a estudiar. Posee dos tornillos que permiten los movimientos horizontales del portaobjeto
(adelante, atrás, izquierda, derecha).
B. Óptico
*Ocular: se encuentra más cerca del ojo, colocado en la parte superior del tubo, aumenta la
imagen dada por el objetivo. Hay de diferentes aumentos (3.5x, 5x, 10x, 12.5x, 15x, 20x, 25x).
*Objetivos: lentes más cerca del objeto a estudiar y se acoplan al revólver y se pueden
rotar. Hay generalmente cuatro: bajo poder (3.5x, 4x, 5x, 6x, 8x, 10x), alto poder (40x, 45x,
50x) e imersión (90x, 95x, 100x).
C. Iluminación
*Diafragma: ubicado entre la fuente de luz y el condensador y regula la intensidad de luz
que atraviesa la muestra. Hay una palanca que agranda o achica el orificio central para regular
la cantidad de luz que pasa.
*Condensador: elemento que posee dos lentes convergentes que recogen los rayos
luminosos y lo envía al objetivo. Hay un tornillo que permite graduar la altura del condensador,
es importante tenerlo en cuenta al trabajar con los objetivos de mayor aumento.
*Fuente de luz
II. Recomendaciones para el uso del microscopio
1. Al trasladar el microscopio de un lugar a otro utilice ambas manos: con la derecha sujételo
firmemente por el brazo y coloque la izquierda debajo de la base. Manténgalo siempre en
posición vertical.
2. Coloque el microscopio con suavidad sobre la mesa, no lo arrastre y no lo coloque al borde
de la mesa.
3. Si su Microscopio presenta algún defecto, consulte con su profesor. No trate de arreglarlo
Usted.
4. Antes de usar el microscopio revíselo y determine si está limpio y en buen estado.
Cualquier daño debe ser informado al profesor.
5. Limpie los lentes suavemente con papel de lente antes y después de usarlo. Por favor no
utilice papel toalla, pañuelo, bata o los dedos.
6. Mientras no utilice el microscopio manténgalo apagado.
7. Sea cuidadoso con las preparaciones líquidas para que los objetivos no se humedezcan.
1. Al finalizar sus actividades de laboratorio, tenga en cuenta lo siguiente:
8.1 Antes de apagar la fuente de luz, llevar el dispositivo que regula la intensidad luminosa
hasta O (cero).
8.2 Dejar el microscopio con el objetivo de menor aumento en la posición de enfoque y la
platina en su máxima posición superior.
8.3 Desenchufar el microscopio y colocarle la funda protectora.
III. Preparación del material biológico
Al prepara el material biológico se debe tener en cuenta que a través del microscopio
solamente se pueden observar objetos que dejan pasar rayos de luz, por esta razón el preparado
 debe ser lo más delgado y transparente posible para ver lo detalles, pues un preparado grueso
solo nos permite observar una mancha negra.
Los porta y cubreobjetos deben limpiarse antes de usarlos (colocarlos en alcohol y antes de
usarlos se limpian para quitarles la grasa o se pueden lavar). Las preparaciones microscópicas
pueden ser acuosas o en seco. Las preparaciones acuosas son muy simples y fáciles de preparar,
usadas para examinar cualquier objeto fluido, como agua de estanque o sangre. Se deposita una
gotita del líquido que se desea observar en el centro del porta-objeto, luego se coloca el
cubreobjeto sobre el porta, forme con las dos láminas un ángulo de 45 grados y luego deje caer
suavemente el cubre-objeto sobre el preparado, evitando la formación de burbujas. El líquido
no debe
rebosar los bordes del cubre-objeto, en caso de que suceda seque cuidadosamente el líquido
sobrante usando papel absorbente o papel toalla.
IV. Uso del microscopio
A. Coloque la preparación que hizo en la sección anterior en la platina y enfoque:
a.1. Encienda la fuente de luz y regule la cantidad de luz.
a.2. Gire el revólver hasta que el objetivo de bajo poder (10x) este alineado con el ocular,
cuando esto ocurre escuchará un “clic” el objetivo estará en la posición correcta en el revólver.
a.3. Observe lateralmente los objetivos y utilizando el tornillo macrométrico suba la platina
hasta casi tocar el objetivo (o bajar los objetivos, según el modelo de microscopio que usted
tenga).
En que sentido movió el tornillo macrométrico para acercar la muestra?
_____________________________________________________________________________
a.4. Observe ahora por el ocular y verifique que el campo óptico esté uniformemente
iluminado, si no es así, baje lentamente el condensador hasta obtener una iluminación uniforme.
a.5. Ahora coloque la preparación con material biológico sobre la platina y que quede bien
sujeto en el carro mecánico o con las pinzas. Este debe quedar centrado debajo del objetivo de
menor aumento.
a.6. Mire a través del ocular y gire el tornillo macrométrico hasta ver aparecer la imagen,
termine de enfocar (enfoque exacto de la imagen) de acuerdo a usted, con el tornillo
micrométrico. Controle la intensidad lumínica.
a.7. Mueva el carro en diferentes direcciones para seleccionar el mejor campo posible. La
imagen de la muestra se mueve en la misma dirección?
_________________________________
Al mover a la derecha en qué sentido observa que se mueve la muestra?
___________________________ Al mover hacia la izquierda hacia donde se mueve?
___________________________ Ahora mueva hacia arriba y hacia abajo. Anote sus
observaciones _________________________________________________________________
a.8. Para enfocar con el objetivo de mayor aumento debe seguir las indicaciones anteriores.
Una vez obtenido el enfoque correcto con el objetivo de menor aumento (10x), mueva el
revolver y coloque en posición de trabajo el objetivo de mayor aumento (40x). Si su
microscopio está bien calibrado debe aparecer enfocada la imagen del objeto y ajuste a su
visión con el tornillo micrométrico moviendo lentamente.
Cuando el microscopio es monocular debe acostumbrarse a mantener abiertos ambos ojos
esto le evita cansancio.
a.9. Una vez realizada la observación vuelva a colocar el revólver en posición del objetivo
de menor aumento. Esto evitará daños en la placa o en el objetivo de mayor aumento. No
permita que líquidos, especialmente ácidos o alcoholes, se pongan en contacto con su
microscopio.
B. Determinación del tamaño de los objetos microscópicos
1. Corte una tira de papel milimetrado sobre la platina y observe con el objetivo de menor
aumento: debe quedar una línea verde en el borde izquierdo del campo óptico, cuente cuantas
líneas verticales observa y anote_____________mm. Transforme a micras ___________. Este
sería el diámetro del campo microscópico con el objetivo de menor poder.
Para determinar el diámetro del campo microscópico del objetivo de mayor aumento use:
D.O.M.= d.om. donde:
R
D.O.M.= diámetro del campo microscópico con el objetivo de mayor aumento.
d.om.= diámetro del campo microscópico con el objetivo de menor aumento.
R (razón)= valor del objetivo de mayor aumento
valor del objetivo de menor aumento
D.O.M= _________________________
Mencione otras medidas utilizadas en microscopía ____________________________________
_____________________________________________________________________________
¿Con cuál objetivo disminuye el diámetro del campo óptico?
____________________________
¿Con cuál objetivo se observa mayor área y con cuál mayor detalle?
_______________________
____________________________________________________________________________
C. Características de la imagen
1. Corte una “e”. Coloque una gota de agua en un portaobjeto, sobre en posición de lectura
añada la letra recortada, ponga el cubreobjeto . Lleve al microscopio y observe con el objetivo
de menor aumento, mueva el carro mecánico en todas las direcciones. Dibuje lo observado.
Observa la letra en la misma posición que la colocó? _________ Hay diferencia?
_______________ Explique
_____________________________________________________________________
La imagen observada es real o virtual?
______________________________________________
_____________________________________________________________________________
D. Poder de resolución
Capacidad de los lentes de mantener separados dos puntos que a simple vista parece uno solo o
sea la distancia mínima que debe haber entre dos puntos para poder
diferenciarlos, y no verlos como una sola figura.
Utilizando la preparación con la letra “e”, enfoque con bajo poder y luego con alto poder
observe, dibuje ( lo que observa en ambos poderes de aumento) y conteste:
¿Qué diferencia hay entre la cantidad de puntos y la distancia entre ellos? _________________
_____________________________________________________________________________
_____________________________________________________________________________
¿Cuál objetivo posee mayor poder de resolución? _______________ Explique
______________
_____________________________________________________________________________
E. Poder de aumento
Es la capacidad de los lentes para aumentar el tamaño de los objetos observados.
 Localice el número de los lentes (objetivos y ocular) y anote. El aumento de la imagen de un
objeto observado a través de un microscopio, se calcula multiplicando el número de aumento
del objetivo con el cual se está trabajando por el número de aumento del
ocular que se está utilizando.
Realice las operaciones matemáticas y calcule el poder de aumento de cada uno de los objetivos
de su microscopio y anote.
F. Profundidad de campo
Es el área vertical que estará enfocada cuando el objeto se mantiene en una posición fija o sea
es el espesor del preparado que se observa con nitidez, es decir, profundidad
de planos que están en foco en un momento dado
Coloque una gota de agua en un portaobjeto y en ella cruzadas dos hebras de hilo de colores
contrastantes y coloque el cubreobjeto. Anote el orden en que colocó los hilos. Enfoque el área
donde se cruzan los hilos. Dibuje sus resultados.
¿Con qué objetivo debe enfocar las hebras de hilo? ____________________________
Anote el orden de los hilos de abajo hacia arriba ______________________________
Se puede enfocar con nitidez ambas hebras de hilo ____________________________
¿Cuántas dimensiones observa en la imagen formada?_______ ¿Cuáles son? _______
_____________________________________________________________________
Enfoque ahora con el objetivo de mayor poder. Anote y dibuje lo observado.
¿Qué objetivo da la mayor profundidad de campo? __________. ¿Qué objetivo ofrece el mejor
detalle sin interferir la profundidad de campo? ______________
La profundidad de campo guarda relación inversa con el aumento: es tanto menor
cuanto mayor es el aumento de la lente. Con inmersión en aceite, la profundidad de
campo es muy escasa (menor que 1 µm).

CUESTIONARIO
1. ¿Qué otros tipos de microscopios se utilizan en la investigación biológica?
2. ¿Qué son objetivos de inmersión?
3. Para qué se utiliza el aceite de inmersión (cedro) cuando usamos el objetivo de inmersión?
4. Señale 4 ventajas y desventajas del microscopio óptico y el microscopio electrónico.
5. Mencione las características de una imagen real y una virtual.
6. ¿Qué nombre recibe la parte del ojo que funciona como una lente? Explique.

BIBLIOGRAFÍA
Arenas, J.A. 2005. Contribuciones de la Física en la historia de la microscopía. Revista Digital
Universitaria 10 de julio 2005: 6 (7), ISSN: 1067-6079

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De Robertis, E.D.P. & E.M.F. De Robertis. 1981. Biología celular y molecular. Buenos Aires,
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Lanfranconi, M. s/f. Historia de la microscopía. En
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