BIOLOGIA CELULAR

LABORATORIO # 3
MANEJO DEL MICROSCOPIO
1. INTRODUCCIÓN

El microscopio
El microscopio es un instrumento óptico que aumenta la imagen de los objetos. En los últimos tres
siglos ha permitido ampliar el campo de las investigaciones biológicas y se ha convertido en el
instrumento básico para abrir nuevas fronteras en la biología. La lupa puede considerarse como el
microscopio más simple y fue usada inicialmente por algunos investigadores para adquirir los
primeros conocimientos del mundo microscópico. Posteriormente se perfeccionó y en la actualidad
existen varios tipos de microscopios, algunos de ellos altamente especializados para una gran
variedad de usos. Entre los diferentes tipos podemos citar: microscopio simple, compuesto, de luz
ultravioleta, de luz polarizada y electrónica.

Anton Van Leeuwenhoek, Hans y Zacharias Jansen fueron tres holandeses que contribuyeron
significativamente al desarrollo de la microscopía a principios del siglo XVII. Leeuwenhoek fue uno
de los primeros en dejar constancia de sus observaciones, describiendo bacterias, protozoarios,
glóbulos rojos y espermatozoides.

El microscopio, al aumentar la imagen de los objetos, nos permite analizar la estructura interna de
células, tejidos y organismos, hacer mediciones y estimar el tamaño de una población de
microorganismos. En las prácticas de este curso se utilizará el microscopio compuesto en el cual se
combinan dos lentes, el ocular y el objetivo, para aumentar la imagen.

2. OBJETIVOS
• Conocer las diferentes partes del microscopio compuesto y sus respectivas funciones.
• Hacer el montaje de placas temporales.
• Determinar el tamaño del campo visual del microscopio.
• Adquirir destreza para calcular las medidas de estructuras celulares, células y organismos.
• Reconocer la importancia del microscopio en el desarrollo de las ciencias biológicas.

3. MATERIALES

DE LABORATORIO ESTUDIANTES
Microscopios compuestos Papel delgado con letras impresas
Aceite de inmersión Papel milimétrico
Pipeta pasteur Cebolla
Alcohol Guantes
Lugol Bisturí
Portaobjetos Encendedor o briquet
Cubreobjetos Pinzas
Goteros
Agua destilada

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4. PROCEDIMIENTO MANEJO DEL MICROSCOPIO

4.1. Cuidados del microscopio

Antes de observar cualquier preparación debe tener presente que el microscopio es un instrumento
delicado. Debido a esto debe utilizarse tomando en cuenta algunas instrucciones básicas:

• Cuando se transporte el microscopio tómelo siempre con las dos manos. Nunca tenga objetos
adicionales en sus manos. Si desea cambiar la posición del instrumento levántelo y NO lo arrastre por
el mesón.
• Coloque el microscopio en una posición cómoda sobre una superficie plana. Tómelo siempre del
brazo o columna. Al colocar el microscopio sobre la mesa, sitúelo a unos 10 o 15 cm del borde.
• Es conveniente chequear la limpieza de los diferentes lentes antes de comenzar la observación. Si
se requiere limpiar los lentes utilice sólo el papel y solución destinada para tal fin. No utilice ningún
otro tipo de papel.
• Nunca use el lente de inmersión si no se le ha solicitado hacerlo. Recuerde que se requiere el
uso de aceite, y si no lo hace puede dañar el lente.
• Cuando termine de trabajar deje el microscopio en el lente objetivo de 4X.

4.2. Partes del microscopio compuesto y sus funciones

A continuación, se describen las partes del microscopio y sus funciones. Trate de reconocer cada
componente en su microscopio.

• Base: Parte inferior del microscopio que hace contacto con la mesa. Es el punto de apoyo del
microscopio.
• Columna o Brazo: Estructura rígida situada en la parte posterior del microscopio, sostiene el tubo
binocular y la platina, y sirve para transportarlo.
• Tubo: Pieza vertical que sostiene el revólver y el lente ocular.
• Revólver: Sistema giratorio localizado en la parte inferior del tubo, al cual se incorporan los lentes
objetivos.
• Tornillo macrométrico: Se encuentra en la parte inferior del microscopio. Sirve para alejar o
acercar el tubo y la platina. Se obtiene la imagen de la muestra (enfoque o ajuste grueso).
• Tornillo micrométrico: Generalmente se encuentra incorporado al tornillo macrométrico. Sirve
para dar claridad a la imagen. Se logra el ajuste fino.
• Platina: Lámina con un orificio central en donde se coloca la muestra que se desea observar.
• Carro: Sistema de pinzas colocado encima de la platina. Sirve para desplazar la muestra hacia
adelante y hacia atrás, y de derecha a izquierda.
• Oculares: Lentes convergentes situados en la parte superior del tubo. Aumentan la imagen que
proviene del objetivo. Su aumento es de 10X.
• Objetivos: Lentes convergentes incorporados en la parte inferior del revólver. Aumenta la imagen
del objeto observado. Se tienen 4 lentes de 4X, 10X, 40X y 100X, aunque éstos pueden variar de
acuerdo con el microscopio. El lente de 100X se le denomina lente de inmersión y para su uso es
indispensable el uso de aceite en el portaobjetos.
• Condensador: Sistema de lentes convergentes encargados de concentrar los rayos de luz en el
centro del orificio de la platina. Sirve para enfocar la luz hacia el objeto que se va a examinar.
• Diafragma o Iris: Está situado debajo de la platina, inmediatamente debajo del condensador.
Sirve para regular la entrada de luz al condensador y se acciona mediante una palanca.

ESQUEMATICE UN MICROSCOPIO COMPUESTO INDICANDO SUS PARTES.

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4.3. Manejo y uso del microscopio óptico

1. Colocar el objetivo de menor aumento en posición de empleo y bajar la platina completamente. Si
el microscopio se recogió correctamente en el uso anterior, ya debería estar en esas condiciones.
2. Comenzar la observación con el objetivo de 4x (ya está en posición) o colocar el de 10 aumentos
(10x) si la preparación es de bacterias.
3. Para realizar el enfoque:
a. Acercar al máximo la lente del objetivo a la preparación, empleando el tornillo macrométrico.
Esto debe hacerse mirando directamente y no a través del ocular, ya que se corre el riesgo de
incrustar el objetivo en la preparación pudiéndose dañar alguno de ellos o ambos.
b. Mirando, ahora sí, a través de los oculares, ir separando lentamente el objetivo de la
preparación con el macrométrico y, cuando se observe algo nítida la muestra, girar el micrométrico
hasta obtener un enfoque fino.
Pasar al siguiente objetivo. La imagen debería estar ya casi enfocada y suele ser suficiente con
mover un poco el micrométrico para lograr el enfoque fino. Si al cambiar de objetivo se perdió
por completo la imagen, es preferible volver a enfocar con el objetivo anterior y repetir la
operación desde el paso 3. El objetivo de 40X enfoca a muy poca distancia de la preparación y por
ello es fácil que ocurran dos tipos de percances: incrustarlo en la preparación si se descuidan las
precauciones anteriores y mancharlo con aceite de inmersión si se observa una preparación que ya
se enfocó con el objetivo de inmersión.
Al terminar su observación, gire lentamente el revólver y coloque el objetivo de 4X y retire el
portaobjetos. Cuando termine de usar el microscopio coloque el control de la luz en 0 y apague el
microscopio. Desconéctelo, enrolle el cordón y cúbralo con el cobertor plástico. Guarde el
microscopio en el locker correspondiente si aplica.

Empleo del objetivo de inmersión:

a. Bajar totalmente la platina.
b. Subir totalmente el condensador para ver claramente el círculo de luz que nos indica la zona que
se va a visualizar y donde habrá que echar el aceite.
c. Girar el revólver hacia el objetivo de inmersión dejándolo a medio camino entre éste y el de 40X.
d. Colocar una gota mínima de aceite de inmersión sobre el círculo de luz.
e. Terminar de girar suavemente el revólver hasta la posición del objetivo de inmersión.
f. Mirando directamente al objetivo, subir la platina lentamente hasta que la lente toca la gota de
aceite. En ese momento se nota como si la gota ascendiera y se adosara a la lente.
g. Enfocar cuidadosamente con el micrométrico. La distancia de trabajo entre el objetivo de inmersión
y la preparación es mínima, aun menor que con el de 40X por lo que el riesgo de accidente es muy
grande.
h. Una vez se haya puesto aceite de inmersión sobre la preparación, ya no se puede volver a usar el
objetivo 40X sobre esa zona, pues se mancharía de aceite. Por tanto, si desea enfocar otro campo, hay
que bajar la platina y repetir la operación desde el paso 3.
i. Una vez finalizada la observación de la preparación se baja la platina y se coloca el objetivo de
menor aumento girando el revólver. En este momento ya se puede retirar la preparación de la platina.
Nunca se debe retirar con el objetivo de inmersión en posición de observación.
j. Limpiar el objetivo de inmersión con cuidado empleando un papel especial para óptica.
k. Comprobar también que el objetivo 40X está perfectamente limpio.

Al finalizar las observaciones el microscopio y las preparaciones deben quedar limpios.

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4.4. Mantenimiento y precauciones

1. Al finalizar el trabajo, hay que dejar puesto el objetivo de menor aumento en posición de
observación, asegurarse de que la parte mecánica de la platina no sobresale del borde de la misma
y dejarlo cubierto con su funda.
2. Nunca hay que tocar las lentes con las manos. Si se ensucian, limpiarlas muy suavemente con un
papel de filtro o, mejor, con un papel de óptica (papel de arroz).
3. No dejar el portaobjetos puesto sobre la platina si no se está utilizando el microscopio.
4. No forzar nunca los tornillos giratorios del microscopio (macrométrico, micrométrico, platina,
revólver y condensador).
5. El cambio de objetivo se hace girando el revólver y dirigiendo siempre la mirada a la preparación
para prevenir el roce de la lente con la muestra. No cambiar nunca de objetivo agarrándolo por el
tubo del mismo ni hacerlo mientras se está observando a través del ocular.
6. Mantener seca y limpia la platina del microscopio. Si se derrama sobre ella algún líquido, secarlo
con un paño.
7. Es conveniente limpiar y revisar siempre los microscopios al finalizar la sesión práctica y, al
acabar el curso, encargar a un técnico un ajuste y revisión general de los mismos.

4.5. Preparación de una placa temporal (en el laboratorio)

• Tome un portaobjetos y un cubreobjetos. Asegúrese de que estén limpios.
• Coloque el portaobjetos sobre la mesa y deje caer una gota de agua en el centro de la placa.
• Recorte una o dos letras del papel impreso y colóquelo sobre la gota.
• Coloque el cubreobjetos sobre el portaobjetos formando un ángulo de 45 grados entre el
portaobjetos y el cubreobjetos. Déjelo caer lentamente para evitar la formación de burbujas en la
placa.
• Observe la placa temporal comenzando por el objetivo 4X hasta el 40X (No utilice el objetivo de
100X), dibuje lo observado.

4.6. Montaje de células de cebolla (en el laboratorio)

• Ubique todos los materiales que necesitará para el montaje.
• En una lámina portaobjetos poner una gota de agua destilada.
• Tome la cebolla y córtela por la mitad.
• Extraiga la epidermis (lamina muy delgada que se encuentra entre las capas de la cebolla) y ponga
una porción de la epidermis en el agua. Haga este paso con pinzas. Esto se hace con el fin de
hidratarla.
• Para fijar la muestra calentamos o flameamos rápidamente con el encendedor.
• Agregar una gota de lugol. Poner un cubreobjetos y limpiar exceso solución.
• Observar en el microscopio empezando por el objetivo de 4X hasta el 40X.
• Dibuje y describa lo observado.

4.7. Descripción de lo observado

Debe seguir una estructura, que puede variar según el observador, pero que debe ser sistemática y
ordenada. Se sugiere que considere en sus observaciones el siguiente esquema:
a) Objetivo: referido al porque se realiza la observación (Ej. observación de núcleo)
b) Material: es el órgano o tejido del que se obtuvo la preparación (Ej. riñón de rata)
c) Método: se refiere a la técnica histológica usada para elaborar la preparación (a fresco o
permanente) y a la tinción utilizada. (Ej. Preparación a fresco de células de cebolla).
d) Aumento: la amplificación del objeto observado y depende del ocular y del objetivo.
Aumento = aumento del objetivo x aumento del ocular

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e) Observaciones: considere describir la forma celular; relación con otros elementos presentes,
tamaño celular; forma, número y posición del núcleo y algunas características del citoplasma.

4.8. Determinación del poder de aumento

El poder de aumento es la capacidad que posee el microscopio para dar una imagen aumentada de un
objeto. El microscopio compuesto consta de dos lentes que aumentan la imagen, los oculares y los
objetivos. El poder de aumento del microscopio se calcula multiplicando el aumento del ocular por
el aumento del objetivo utilizado. El ocular de los microscopios que se utilizarán en el laboratorio es
de 10X.

¿Cuál será el poder de aumento cuando se estén utilizando cada uno de los objetivos de 4X, 10X, 40X
y 100X?

4.9. Determinación del diámetro del campo visual del microscopio (en el laboratorio)
La información del tamaño del diámetro del campo visual se utiliza para estimar el tamaño de las
estructuras o de los organismos que se estén observando en el microscopio. Es importante tener las
medidas correspondientes para cada uno de los objetivos.

Prepare una placa temporal con un pedacito de papel milimetrado. Enfoque con el objetivo de 4X y
enfoque una línea. Determine a cuántos milímetros y fracciones de milímetro corresponde el diámetro
del campo visual. Anote este dato.

Coloque la muestra en el objetivo de 10X y haga el mismo ejercicio. ¿A cuántos milímetros o

fracciones corresponde el diámetro?

¿Es la relación entre el diámetro y el poder de aumento directa o inversa?

¿Cómo podría calcularse el diámetro de los lentes de 10X, 40X y 100X conociendo el valor del
diámetro hallado utilizando el objetivo de 4X?

Anote los datos del diámetro del campo visual para cada uno de los objetivos.

4.10. Unidades más utilizadas en mediciones microscópicas

La mayoría de los organismos y estructuras que se estudian con el microscopio son muy pequeños.
Las medidas más comúnmente usadas en microscopía son el Angstrom (Å), la Milimicra (mµ), la
Micra (µ) y el Milímetro (mm).

Las relaciones entre ellas son las siguientes:

• 1 mm = 1000 µ
• 1 µ = 1000 mµ
• 1 mµ = 10 Å

Teniendo en cuenta estos datos resuelva los siguientes ejercicios:

a. ¿A cuántas mµ equivale 1 mm?
b. ¿A cuántas mµ equivale 1 Å?
c. El diámetro del campo visual de un microscopio es de 1500 µ cuando se observa con un ocular de
10X y un objetivo de 10X. ¿Cuál será el diámetro del campo visual si se observa con un objetivo de
40 X y el mismo ocular?

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d. Un estudiante observó una célula al microscopio utilizando un objetivo de 10X y un ocular de 10X
y se dio cuenta de que su tamaño aproximado era de una cuarta parte del diámetro de ese campo
visual. Si tal diámetro mide 1600 µ: ¿Cuánto mide la célula? ¿Se observará completamente esa célula
si se utiliza un objetivo de 40X y el mismo ocular de 10X?

e. Realice las siguientes conversiones:

• 0.025 mm en µ y en Å
• 5 x 10 mµ en mm y en Å
• 1300 Å en mµ, en µ y en mm