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Laboratorio de Biología

Prof. Seir Antonio Salazar Mercado

PRÁCTICA 2. MICROSCOPIO COMPUESTO, PARTES Y MANEJO

2.1. MARCO CONCEPTUAL

El conocimiento de las estructuras del ser vivo está basado casi totalmente en el estudio del
microscopio. El microscopio óptico es un instrumento que permite la observación de objetos y detalles
de estructuras tan pequeñas que no podrían ser observadas a simple vista. Con él, nuestro grado de
visibilidad se amplía en cientos o miles de veces, gracias a un conjunto de lentes, dispuestos
convenientemente. Las principales dificultades en la observación y estudio de estructuras biológicas son
su REDUCIDO TAMAÑO Y TRANSPARENCIA a la luz visible. Dado que el microscopio permite superar
estas dos dificultades, su uso y el conocimiento de los principios y técnicas en microscopía resultan
fundamentales para el desarrollo de la investigación en ciencias biológicas.

El microscopio compuesto, puede ser monocular o binocular, permite obtener aumentos de 100 a 1500
veces. Los objetos a observar deben ser muy pequeños o cortados en láminas tan delgadas que la luz
pueda atravesarlos. Estos se colocan en láminas de vidrio especiales denominadas porta – objetos y
cubre – objetos. Las imágenes que se obtienen son bidimensionales e invertidas.

2.2. OBJETIVOS

- Identificar las partes del microscopio y comprender sus características y la visión con él.
- Manejar el microscopio correctamente.
- Realizar observaciones con este instrumento.

2.3. IMPLEMENTOS

EQUIPOS Y REACTIVOS MATERIAL BIOLÓGICO


Implementos personales Tejido de súber (Corcho pequeño).
Microscopio compuesto. Microorganismos (Agua estancada).
Hilo de varios colores.
Trozos de papel periódico.
Trozo de papel milimetrado.

2.4. PROCEDIMIENTO

- Una vez asignado el microscopio por parte del asistente, el estudiante deberá proceder así:
- Para transportar el microscopio, agárrelo firmemente con las dos manos: con la derecha (si
eres diestro) lo sujetas por el brazo o soporte y con la palma de la mano izquierda lo sostienes
por la base. Llévelo en posición vertical.
- Colocar el microscopio sobre la mesa de trabajo y retirar la cubierta de la tela protectora y
limpiarlo con una lanilla, de arriba hacia abajo.
- Si su microscopio posee lámpara como fuente de luz, conecte al toma corriente respectivo y
verifique si prende el foco. En caso contrario avise al asistente.
- Identifique las diferentes partes del microscopio.

2.5. PARTES DEL MICROSCOPIO COMPUESTO

- Parte Mecánica (figura 1 y 2).


- La parte mecánica del microscopio comprende: el pie, el tubo, el revólver, la platina, el carro, el
tornillo macrométrico y el tornillo micrométrico. Estos elementos sostienen la parte óptica y de
iluminación, además permite los desplazamientos necesarios para el enfoque del objeto.
- Pie. Constituye la base sobre la que se apoya el microscopio y tiene por lo general forma de Y o
bien es rectangular.
- Tubo. Tiene forma cilíndrica y está ennegrecido internamente para evitar las molestias que
ocasionan los reflejos de la luz. En su extremidad superior se colocan los oculares.
- Cabezal. Contiene los lentes oculares.
- Revólver. Es una pieza giratoria provista de orificios en los cuales se enroscan los objetivos. Al
girar el revólver, los objetivos pasan por el eje del tubo y se colocan en posición de trabajo, la
cual se nota por el ruido de un piñón que lo fija.
- Columna llamada también asa o brazo, es una pieza colocada en la parte posterior del aparato.
Sostiene el tubo en su porción superior y por el extremo inferior se adapta al pie.
- Platina. Placa cuadrada o circular en la que se apoya la preparación a observar. Dispone de
unas pinzas que permiten sujetar la preparación. La platina se halla perforada en el centro para
dejar paso a los rayos luminosos procedentes de la fuente de luz.
- Carro. Es un dispositivo colocado sobre la platina que permite deslizar la preparación con
movimiento ortogonal de adelante hacia atrás y de derecha a izquierda.
- Tornillo macrométrico. Girando este tornillo, asciende o desciende el tubo del microscopio,
deslizándose en sentido vertical gracias a una cremallera. Estos movimientos largos permiten el
enfoque rápido de la preparación.
- Tornillo micrométrico. Mediante el movimiento casi imperceptible que produce al deslizar el
tubo o la platina, se logra el enfoque exacto y nítido de la preparación. Lleva acoplado un
tambor graduado en divisiones de 0,001 mm que se utiliza para precisar sus movimientos y
puede medir el espesor de los objetos.

- PARTE ÓPTICA (figura 1 y 2).


- El sistema óptico es el encargado de reproducir y aumentar las imágenes mediante el conjunto
de lentes que lo componen. Está formado por los oculares y los objetivos.

- Los oculares. Los oculares están constituidos generalmente por dos lentes, dispuestas sobre un
tubo corto. Los oculares generalmente más utilizados son los de: 8X, 1OX, 12.5X, 15X. La X se
utiliza para expresar en forma abreviada los aumentos.
- Los objetivos. Los objetivos producen aumento de las imágenes de los objetos y organismos y,
por tanto, se hallan cerca de la preparación que se examina. Los objetivos utilizados
corrientemente son de dos tipos: objetivos secos y objetivos de inmersión.
- Los aumentos de los objetivos secos más frecuentemente utilizados son: 6X, 1OX, 20X, 45X y
60X.
- El objetivo de inmersión está compuesto por un complicado sistema de lentes. Para observar a
través de este objetivo es necesario colocar una gota de aceite de cedro entre el objetivo y la
preparación, de manera que la lente frontal entre en contacto con el aceite de cedro.
Generalmente, estos objetivos son de 1OOX y se distingue por uno o dos círculos o anillos de
color negro que rodea su extremo inferior.
Figura. dispersión de la luz procedente de la muestra en un objetivo sin y con aceite. Fuente:
Daniel Moreno.

- SISTEMA DE ILUMINACIÓN (figura 1 y 2).

- Este sistema tiene como finalidad dirigir la luz natural o artificial de tal manera que ilumine la
preparación u objeto que se va a observar en el microscopio. Comprende los siguientes
elementos.

- Condensador. El condensador está formado por un sistema de lentes, cuya finalidad es


concentrar los rayos luminosos sobre el plano de la preparación. El condensador se halla
debajo de la platina. El condensador puede deslizarse sobre un sistema de cremallera mediante
un tornillo que determina su movimiento ascendente o descendente.
- Diafragma. Generalmente, el condensador está provisto de un diafragma-iris, que regula su
abertura y controla la calidad de luz que debe pasar a través del condensador.
- Lámpara: Proporciona la luz que llega hasta el objeto a estudiar y el sistema óptico del
microscopio.

CARACTERÍSTICAS DE LA VISIÓN CON MICROSCOPIO

Grado de aumento: Es la magnificación total que sufre la imagen del objeto debido al efecto de los
lentes oculares y objetivos. Se obtiene multiplicando el número de veces que aumenta la lente ocular
por el número de veces que aumenta el lente objetivo. Si el objetivo aumenta la imagen de un objeto 40
veces, ésta al pasar por la lente ocular será nuevamente aumentada. Si el ocular aumenta 10 veces, la
magnificación total en este caso será:

10x * 40x = 400x

Este resultado permite saber cuántas veces se aumenta la imagen de un objeto.

Poder de resolución: Es la posibilidad de distinguir separados dos puntos muy cercanos entre sí. Cuanto
mayor sea el poder de resolución, menor será la distancia entre dos puntos a la cual distinguirse como
tales. La distancia límite en la cual dos puntos pueden ser todavía distinguibles se denomina Límite de
Resolución.

PREPARACIÓN DE MUESTRAS

- Las muestras pueden ser frescas y permanentes:


- Muestras frescas: Se clasifican en húmedas o líquidas (sangre, semen, orina) y en sólidas o
secas (cortes de tejido, lana). Estas muestras se pueden desechar de una vez que se han
observado o guardar para convertirlas en muestras permanentes.
- Muestras permanentes: Llamadas también micropreparados o Post mortem, se elaboran
mediante ciertas técnicas como: fijación, coloración, aclaramiento, deshidratación. Estas
muestras se pueden guardar por años y utilizarlas muchas veces.
- Montaje de muestras: El material que se va a observar se coloca en el centro del portaobjeto y
se agrega una gota de agua, reactivo, colorante, etc., según el caso, es decir, de acuerdo con la
práctica que se realiza y según el tipo de muestra.
- Con los dedos índice y pulgar sujete el cubreobjeto por los bordes, y formando un ángulo de
45º en relación con el portaobjetos, bájelo lentamente hasta que cubra la muestra. Así se evita
la formación de burbujas.
- A continuación, use el papel absorbente alrededor del cubreobjetos para eliminar el exceso de
agua o colorante.

MANEJO DEL MICROSCOPIO

- Limpiar las lentes frotándolas sin presionarlas, utilizando papel de lentes por una sola vez.
- Comprobar si el lente objetivo de menor aumento está a continuación del tubo; si no es así,
debe colocarse en dicha posición haciendo girar el revólver hasta alcanzar un “tope” que lo
indique.
- Abrir completamente el diafragma y observar a través del ocular, (mover el espejo
orientándolo) de modo que la luz reflejada se observe en un círculo uniformemente iluminado.
- Ubicar y sujetar el portaobjetos en una platina, procurando que la preparación se halle en el
centro de la abertura circular.
- Mover el tornillo macrométrico para acercar la lente objetiva de menor aumento hacia la
preparación, hasta llegar a un tope.
- Observar por la lente ocular y mover nuevamente el tornillo macrométrico en el sentido
inverso hasta que aparezca la imagen.
- Una vez enfocada la imagen girar el tornillo hasta que sea nítida. Nunca se debe usar el tornillo
micrométrico para grandes desplazamientos, para ello está el tornillo macrométrico.
- Cuando los tornillos macro y micrométrico se encuentran incorporados en un solo dispositivo,
el ajuste fino se hace solo después de haber realizado el avance rápido de acercamiento a la
preparación.
- Antes de pasar al siguiente aumento verificar que la imagen a observar se encuentre en el
centro del campo, hacer girar el revólver cambiando la lente objetivo hasta llegar al “tope” y
accionar solamente el tornillo micrométrico hasta obtener la nueva imagen.
- Para observar una muestra con el objetivo de inmersión, se coloca una gota de aceite de cedro
encima de la lámina de la preparación antes de girar el revólver. Esto permite que la imagen se
vea con nitidez para realizar la observación, ya que este tipo de lentes requiere que el índice de
refracción sea similar al del vidrio.

VISUALIZACIÓN DEL GROSOR Y TEXTURA

- Realice preparaciones frescas utilizando hebras finas de lana de colores vivos o hilos.
- También cabellos: rubio, negro, crespo, liso…
- Siga el mismo procedimiento en los enfoques y observación.
- Observe con 10x y 40x.
- Describa la observación hecha.
VISUALIZACIÓN DE IMÁGENES

- Recorte una letra minúscula de una revista, por ejemplo “e”, asegúrese que no sea “s”, o.
También puede recortar una palabra muy pequeña minúscula.
- Realice un micropreparado húmedo con dicha letra o palabra, siguiendo técnica mencionada en
la preparación de muestras.
- Coloque el microscopio en la platina y enfoque la muestra.
- Describa su observación.
- Utilizando la misma preparación, desplace el portaobjeto de izquierda a derecha y en sentido
contrario, mientras observa a través del ocular.
- Desplace ahora el micropreparado hacia arriba y hacia abajo, siempre observando a través del
ocular.
- Escriba en qué sentido se desplaza la imagen.
- Haga un esquema de la observación realizada.

VISUALIZACIÓN DE ESTRUCTURA CELULAR

- Con una cuchilla de afeitar, haga un corte transversal (lo más delgado posible) de un trozo de
corcho.
- Monte una muestra húmeda.
- Observe con objetos de menor y mayor aumento.
- Haga un esquema de la observación.

CAMPO VISUAL Y MEDICIONES MICROSCÓPICAS

El CAMPO VISUAL del microscopio es el área circular iluminada que se observa a través del ocular.

Para hacer mediciones con el microscopio se usa el micrómetro, escala graduada que se inserta en el
ocular y permite determinar la longitud y anchura de determinada estructura que aparece en el campo
visual. Si no se tiene micrómetro, se puede determinar el diámetro del campo visual de la siguiente
forma:

- Con el papel milimetrado, haga un montaje húmedo.


- Enfoque el papel con el objetivo de menor aumento 10x.
- Calcule el número de divisiones observadas que hay desde el extremo izquierdo hasta el
derecho y desde arriba hacia abajo.
- Se observa un cuadro en el que el diámetro corresponde a la hipotenusa de un triángulo
rectángulo.
- Se aplica e Teorema de Pitágoras para determinar la longitud de la hipotenusa que corresponde
al diámetro del campo visual.

d= diámetro, a= lado del triángulo, b= lado del triángulo.

- Escriba el diámetro expresado en micras.


- Aplicar la siguiente fórmula:

En donde:
ø C.Vx = diámetro del campo visual del objetivo x.
ø C.V.m = diámetro del campo visual del objetivo de menor aumento.
No. Obm = número de objetivo de menor aumento.
No. Obj x = número de objetivo x.

- Proceda a determinar el campo visual con las lentes del microscopio utilizado.

FINALIZACIÓN DE LA PRÁCTICA

- Terminada la observación, girar el revólver para colocar el objetivo de menor aumento en la


primera posición de trabajo.
- Retirar la preparación y dejar limpio el microscopio, secando la platina con cuidado.
- Si usó el objetivo de inmersión, debe limpiarse inmediatamente después de su uso con la ayuda
del papel de lente. Quitar el grueso del aceite con una hoja, luego limpiar con una segunda
impregnada en xylol y finalmente una tercera, secar el lente. No usar cantidades excesivas de
solvente, pues pueden disolver el cemento de los componentes de las lentes.
- El asistente de laboratorio dará las instrucciones pertinentes para recoger y guardar el
microscopio.

MANTENIMIENTO Y PRECAUCIONES

- Al finalizar el trabajo, girar el revólver para colocar el objetivo de menor aumento en posición
de observación, asegurarse de que la parte mecánica de la platina no sobresale del borde de la
misma y dejarlo cubierto con su funda.
- Cuando no se está utilizando el microscopio, hay que mantenerlo cubierto con su funda para
evitar que se ensucien y dañen las lentes. Si no se va a usar de forma prolongada, se debe
guardar en su caja dentro de un armario para protegerlo del polvo.
- Nunca hay que tocar las lentes con las manos. Si se ensucian, limpiarlas suavemente con el
papel de óptica.
- No dejar el portaobjetos puesto sobra la platina si no se está utilizando el microscopio.
- No forzar los tornillos giratorios del microscopio (macrométrico, micrométrico, platina, revólver
y condensador).
- El cambio de objetivo se hace girando el revólver y dirigiendo siempre la mirada a la
preparación para prevenir el roce de la lente con la muestra. No cambiar nunca el objetivo
agarrándolo por el tubo del mismo ni hacerlo mientras se está observando a través del ocular.
- Mantener seca y limpia la platina del microscopio. Si se derrama sobre ella algún líquido,
secarlo con un paño. Si se mancha de aceite, limpiarla con un paño humedecido en xilol.
- Es conveniente limpiar y revisar siempre los microscopios al finalizar la sesión práctica y, al
acabar el curso, encargar a un técnico un ajuste y revisión general de los mismos.

2.5. ANÁLISIS DE LAS EXPERIENCIAS REALIZADAS

2.6. CONCLUSIONES

2.7. BIBLIOGRAFÍA CONSULTADA


Figura 1. Partes del microscopio Compuesto

Figura 2. Partes del microscopio Compuesto