UNIVERSIDAD DE CIENCIAS APLICADAS Y AMBIENTALES

LABORATORIO 2 y 3
MICROSCOPIA
BIOLOGIA CELULAR Y MOLECULAR
(Pilar Huérfano Riaño M sc)

1.OBJETIVO GENERAL:

Adquirir habilidades para manejar el microscopio compuesto.

2.MARCO TEORICO:

2.1 Generalidades:
El microscopio es un instrumento óptico que permite observar, medir y cuantificar objetos y
organismos muy pequeños.
La invención del microscopio en el siglo XVII posibilitó la serie de descubrimientos posteriores de
las mismas. En 1665 Robert Hooke utilizando un microscopio óptico simple, examinó un corte de
corteza, encontró que esta estaba compuesta por una masa de diminutas cámaras, que llamó
“células”.
El tipo de microscopio más utilizado es el microscopio óptico, que se sirve de la luz visible para
crear una imagen aumentada del objeto. El microscopio óptico más simple es la lente convexa
doble con una distancia focal corta. Estas lentes pueden aumentar un objeto hasta 15 veces. Por lo
general se utilizan microscopios compuestos, que disponen de varias lentes con las que se
consiguen aumentos mayores. Algunos microscopios ópticos pueden aumentar un objeto por
encima de las 2.000 veces.

El microscopio compuesto consiste en dos sistemas de lentes, el objetivo y el ocular, montados en

extremos opuestos de un tubo cerrado. El objetivo está compuesto de varias lentes que crean una
imagen real aumentada del objeto examinado. Las lentes de los microscopios están dispuestas de
forma que el objetivo se encuentre en el punto focal del ocular. Cuando se mira a través del ocular
se ve una imagen virtual aumentada de la imagen real. El aumento total del microscopio depende
de las longitudes focales de los dos sistemas de lentes.

El equipamiento adicional de un microscopio consta de un armazón con un soporte que sostiene el

material examinado y de un mecanismo que permite acercar y alejar el tubo para enfocar la
muestra. Los especímenes o muestras que se examinan con un microscopio son transparentes y se
observan con una luz que los atraviesa, y se suelen colocar sobre un rectángulo fino de vidrio. El
soporte tiene un orificio por el que pasa la luz. Bajo el soporte se encuentra un espejo que refleja
la luz para que atraviese el espécimen. El microscopio puede contar con una fuente de luz eléctrica
que dirige la luz a través de la muestra.

Los microscopios ópticos actuales tienen un poder resolutivo de 0,2 µm, unas mil veces la del ojo
humano(http://www.biologia.edu.ar/microscopia/microscopia1.htm#Microscopio óptico).

2.2 Estructura del microscopio óptico:

• Sistema óptico
OCULAR: Lente situada cerca del ojo del observador. Amplía la imagen
del objetivo.
 OBJETIVO: Lente situada cerca de la preparación. Amplía la imagen de
ésta.
CONDENSADOR: Lente que concentra los rayos luminosos sobre la
preparación.
DIAFRAGMA: Regula la cantidad de luz que entra en el condensador.
FOCO: Dirige los rayos luminosos hacia el condensador.
• Sistema mecánico
SOPORTE: Mantiene la parte óptica. Tiene dos partes: el pie o base y el
brazo.
PLATINA: Lugar donde se deposita la preparación.
CABEZAL: Contiene los sistemas de lentes oculares. Puede ser
monocular, binocular,
REVÓLVER: Contiene los sistemas de lentes objetivos. Permite, al girar,
cambiar los objetivos.
TORNILLOS DE ENFOQUE: Macrométrico que aproxima el enfoque y micrométrico que
consigue el enfoque correcto (figura 1).(www.joseacortes.com)

Figura 1. Microscopio compuesto

2.3 Manejo y uso del microscopio óptico

1. Colocar el objetivo de menor aumento en posición de empleo y bajar la platina

completamente. Si el microscopio se recogió correctamente en el uso anterior, ya debería estar en
esas condiciones.
2. Colocar la preparación sobre la platina sujetándola con las pinzas metálicas.
3. Comenzar la observación con el objetivo de 4x (ya está en posición) o colocar el de 10
aumentos (10x) si la preparación es de bacterias.
4. Para realizar el enfoque:
a. Acercar al máximo la lente del objetivo a la preparación, empleando el tornillo
macrométrico. Esto debe hacerse mirando directamente y no a través del ocular, ya que se corre
el riesgo de incrustar el objetivo en la preparación pudiéndose dañar alguno de ellos o ambos.
b. Mirando, ahora sí, a través de los oculares, ir separando lentamente el objetivo de la
preparación con el macrométrico y, cuando se observe algo nítida la muestra, girar el
micrométrico hasta obtener un enfoque fino.
5. Pasar al siguiente objetivo. La imagen debería estar ya casi enfocada y suele ser suficiente
con mover un poco el micrométrico para lograr el enfoque fino. Si al cambiar de objetivo se perdió
por completo la imagen, es preferible volver a enfocar con el objetivo anterior y repetir la
operación desde el paso 3. El objetivo de 40x enfoca a muy poca distancia de la preparación y por
ello es fácil que ocurran dos tipos de percances: incrustarlo en la preparación si se descuidan las
precauciones anteriores y mancharlo con aceite de inmersión si se observa una preparación que
ya se enfocó con el objetivo de inmersión 100x.
6. Empleo del objetivo de inmersión:
. Bajar totalmente la platina.
a. Subir totalmente el condensador para ver claramente el círculo de luz que nos indica la
zona que se va a visualizar y donde habrá que echar el aceite.
b. Girar el revólver hacia el objetivo de inmersión dejándolo a medio camino entre éste y el
de x40.
c. Colocar una gota mínima de aceite de inmersión sobre el círculo de luz.
d. Terminar de girar suavemente el revólver hasta la posición del objetivo de inmersión.
e. Mirando directamente al objetivo, subir la platina lentamente hasta que la lente toca la
gota de aceite. En ese momento se nota como si la gota ascendiera y se adosara a la lente.
f. Enfocar cuidadosamente con el micrométrico. La distancia de trabajo entre el objetivo de
inmersión y la preparación es mínima, aun menor que con el de 40x por lo que el riesgo de
accidente es muy grande.
g. Una vez se haya puesto aceite de inmersión sobre la preparación, ya no se puede volver a
usar el objetivo 40x sobre esa zona, pues se mancharía de aceite. Por tanto, si desea enfocar otro
campo, hay que bajar la platina y repetir la operación desde el paso 3.
h. Una vez finalizada la observación de la preparación se baja la platina y se coloca el objetivo
de menor aumento girando el revólver. En este momento ya se puede retirar la preparación de la
platina. Nunca se debe retirar con el objetivo de inmersión en posición de observación.
i. Limpiar el objetivo de inmersión con cuidado empleando un papel especial para óptica.
Comprobar también que el objetivo 40x está perfectamente limpio.

3. MATERIALES Y EQUIPOS PARA LA PRACTICA:

*periódico,*una pequeña hebra de hilo *papel milimetrado cortado en cuadros de 1cm2 (4
cuadritos), *tijeras, *papel absorbente*laminas porta y cubre objetos, *una pizca de sal *hojas de
revistas ( que tengan gráficos a color), gotero, caja pertri,microscopio.

* materiales aportados por cada grupo.

4. PROCEDIMIENTO:

4.1. Reconocimiento de las estructuras del microscopio óptico.

-Con ayuda de la figura 1 presentada anteriormente, identifique y ubique cada parte en el
microscopio con el que se trabajará. Realice un sencillo esquema. Cuáles son las partes mecánicas,
cuales las ópticas?
4.2. Determinación del poder de aumento
El poder de aumento es la capacidad que posee el microscopio para dar una imagen aumentada
de un objeto. El microscopio compuesto consta de dos lentes que aumentan la imagen, los
oculares y los objetivos. El poder de aumento del microscopio se calcula multiplicando el
aumento del ocular por el aumento del objetivo utilizado. El ocular de los microscopios que se
utilizarán en el laboratorio es de 10X.
¿Cuál será el poder de aumento cuando se estén utilizando cada uno de los objetivos de 4X, 10X,
40X y 100X?

4.3 Enfoque
-Lea atentamente el procedimiento descrito en el marco teórico sobre como ubicar un preparado
y cómo enfocar una imagen.
-Recorte una letra asimétrica ( a, d , p, e). Colóquela en el centro de una lamina porta objetos muy
limpia y seca. Deposite sobre ésta una gota de agua. Coloque una lámina cubreobjetos sobre la
gota de tal manera que no queden burbujas en el preparado.
-Coloque la lámina en la platina y ajuste. Desplace la lamina de tal manera que la preparación a
observar quede en el centro de la platina.
- Observe con el objetivo de menor aumento , debe lograse una imagen nítida. Mientras observa,
desplace la platina hacia adelante, hacia donde se mueve la imagen? Luego hacia atrás, hacia la
izquierda y la derecha. En cada caso hacia donde se desplaza la imagen?
- Ahora observe con el objetivo 10 x, recuerde que para lograr un imagen definida en este caso
solamente debe manipular el tornillo micrométrico, grafique la observación. Observe en el
objetivo de 40 x . Grafique.(Bernal, 2000)
-Realice el mismo procedimiento descrito anteriormente pero en el montaje utilice un pequeño
trozo de hilo y luego con un trozo de hilo. Dibuje y explique

4.4. Micrometría
La unidad de longitud más frecuentemente utilizada en microscopía es la micra “µ“ que equivale a
1/1000 mm, es decir 1mm=1000 µ .
El tamaño de los objetos microscópicos puede determinarse utilizando un micrómetro o
conociendo el diámetro de campo correspondiente a cada objetivo del microscopio (Madigan y
cols, 2003).

-Determine el diámetro del campo con el objetivo de menor aumento, para esto coloque un
cuadro de papel milimetrado en una lamina y enfoque. Mueva la placa de tal forma que una de las
líneas del papel se convierta en el diámetro de campo visual. Cuente el numero de cuadriculas y
las fracciones que atraviesan el campo.
Cuál es el diámetro en mm? Cuál es el diámetro en micras?
- Coloque la muestra en el objetivo de 10X y haga el mismo ejercicio.
Es la relación entre el diámetro y el poder de aumento directa o inversa?
- Con el dato del diámetro obtenido en 4X es posible determinar el diámetro del campo visual
correspondiente al objetivo de mayor aumento. Basta dividir este diámetro encontrado en la
razón entre las magnitudes de los objetivos de mayor y menor aumento. Ejemplo: se va a
comparar los campos visuales de un objetivo de 45X y 15 X., la razón mencionada será 45/15 = 3.
Si el campo correspondiente al objetivo de menor aumento tiene un diámetro de 1500 µ, el
diámetro del campo correspondiente al objetivo de mayor aumento ( en este ejemplo 45x ) es de
1500/3=500 µ. Calcule ahora el diámetro del campo visual para cada uno de los objetivos del
microscopio que está manipulando.
- Retire el papel milimetrado y coloque una letra , calcule la altura en mm y en µ.Dibuje.
-Coloque en un portaobjetos algunos cristales de NaCl, observe en todos los aumentos y calcule el
largo y ancho de uno de ellos. Dibuje.
(http://www.unioviedo.es/bos/Asignaturas/TecnicasImagen/historia.htm)

4.4 Poder de resolución.

A simple vista solo podemos ver las diferentes densidades del grabado que tienen por ejemplo las
impresiones en las revistas,mientras que con el microscopio es posible distinguir puntos, es decir
resolvemos los puntos.
El poder de resolución consiste en la capacidad de un lente para mostrar dos objetos muy
cercanos como discretos y separados (Castro y cols, 2002).
Ubique un trozo de grabado de una revista en una lámina portaobjetos.Dibuje.
Cuantos puntos puede contar con el objetivo de mayor aumento

5. RESULTADOS Y DISCUSION
Presente debidamente organizados los datos obtenidos en cada aspecto de la práctica y los
gráficos correspondientes y responda los cuestionamientos planteados en el procedimiento
Realice un paralelo entre observar en el objetivo de 10 X y el de 40 X. Tenga en cuenta tamaño,
detalle, iluminación, campo visual.
Que diferencia hay entre oculares y objetivos?
Qué utilidad tiene la micrometría en microscopia?
Que importancia tiene para su profesión el uso del microscopio?

6. CONCLUSIONES

7. BIBLIOGRAFIA

Bernal, D. Manual de guía de laboratorio de biología celular y molecular. 2000. UDCA. Bogotá

Castro, F., Vélez, M., Gonzáles, I.y Rondón, F. Manual y talleres en Biología general.
2002.Universidad del Valle. Cali.

Madigan, M., Martinko, J., Parker, J. (2003). Brock, Biología de los microorganismos, Pearson
Prentice Hall.New York

http://www.biologia.edu.ar/microscopia/microscopia1.htm#Microscopio óptico [01-06-2018]

http://www.unioviedo.es/bos/Asignaturas/TecnicasImagen/historia.htm [01-06-2108]