UNIDAD 1: Breve historia de los Venenos.

Toxicología y su vinculación con las

ciencias básicas y aplicadas. Ramas de la Toxicología. Noción de Tóxico. Intoxicación:
tipos y características. Dosis y toma . Dosis letal cincuenta o DL50. Experimentación
animal. Factores que influyen en su determinación: propios de la especie o factores
exógenos.

Objetivo: Conocimiento de los antecedentes históricos y del argot propio de la

asignatura. Nociones básicas en la que se sustenta la Ciencia toxicológica y las
fuentes de información disponibles.

Breve historia de los Venenos

El hombre desde su comienzo en la tierra ha tenido que adaptarse a su entorno, entre

los cuales los tóxicos de diferentes orígenes estaban en su entorno .
En la prehistoria , con grupos pequeños, dedicándose a la caza y recolección de
diferentes plantas para su sustento . En la actividad de la caza , en general podemos
decir que no había grandes inconvenientes porque muy pocas carnes eran nocivas
para la salud, en cambio la actividad de recolección contaba con mayor peligro por la
elevada toxicidad de plantas y hongos y, por lo tanto, las debían conocer. En principio
podríamos imaginar que se podían emplear dos métodos para discernir del peligro
de una planta;

a- que un animal herbívoro ingiera un vegetal y observar sus efectos , y ante

ausencia de síntomas , podría probárselo , esto con ciertas restricciones.
b- El método de prueba y error, es decir probando plantas de origen no
conocido y esperar sus efectos.

Estos métodos muy primitivos, eran transferidos de generación en generación .

Estos conocimientos permitieron emplear algunas plantas para cazar animales ,

colocados en lanzas o flechas , debiendo ensayar diferentes métodos y vías de
incorporación para poder luego ser empleados como comestibles.

El Curare, (Chondodrendon tomentosum, Menispermaceae, Strychnos jobertiana) es

una sustancia pastosa de color parda extraída de diversas especies del género
Strychnos toxifera que abundan en la cuenca del amazonas. Esta sustancia era
utilizada por pueblos indígenas de América del Sur, África, Asia y Oceanía con el que
empozoñan untando sus flechas para inmovilizar a sus presas (
http://es.wikipedia.org/wiki/Curare)
 Planta de donde se extrae el curare -por Koehler 1887
(http://es.wikipedia.org/wiki/Curare)

La palabra tóxico proviene del griego Toxicon, que significa lo que se pone en la punta
de las flechas y facilita la caza.Con esta aplicación se consigue reducir los esfuerzos
que conlleva la actividad de la caza .
Otra aplicación histórica de los tóxicos es su uso político, destinado a matar personas
por disputas personales , políticas , de creencias ,etc. Por ejemplo Sócrates muere por
Cicuta. De la obra, Phédon (Fedón), Edición Garnier Brothers, París, 1965, podemos
leer de la muerte de Sócrates: “ Le recomendaron que siguiera caminando hasta que
su piernas llegaron a ser pesadas y entonces se acostó sobre la espalda como el
hombre le había recomendado. El que le había dado el veneno examinó su pies y su
piernas, entonces, pellizcando su pie fuertemente le preguntó si sentía algo. Sócrates
contestó que no. Luego lo pellizcó en un punto bajo de las piernas y el frío fue
subiendo hasta que el cuerpo se congeló y llegó a ser tieso. Al revisarlo otra vez, dijo
que cuando el frío ganara el corazón, Socrates se iría. Cuando la región del bajo
vientre comenzó a enfriarse, Sócrates dijo: “Critón, debemos un gallo a Asclepio; no te
olvides de pagarlo”. “Sí será hecho”, dice Critón, “pero ve si tienes algo más para
decirnos”. A esta pregunta no contestó a más; pero algunos instantes después quedó
inmóvil. El hombre lo descubrió: tenía los ojos inmóviles. Mientras que lo veía, Critón le
cerró la boca y los ojos. ”.

- Envenenamiento de Sócrates -
En la historia podemos ver que los grandes envenenadoras son mujeres, como el
caso de Locusta, esclava romana cuyo nombre significa "langosta", († en 68 d. J.C.).
Fue una envenenadora de confianza al servicio de Agripina contra Claudio, y de Nerón
contra Británico. El nuevo emperador Galba la condenó a muerte.

En Roma apareció una primera ley antiveneno: Ley Comelia Maestration porque se
dieron cuenta que había un exceso de viudas ricas, las que empleaban venenos para
deshacerse de sus maridos.

La Edad Media , la época oscura de la ciencia, en la que se contaban con probadores

oficiales en los castillos medievales.
En Italia, con el Renacimiento , recupera otra vez el empleo de venenos, con ejemplos
como :

Los Borgia, con el uso de compuestos del arsénico , empleados con fines homicidas

Caterina de Medici: era italiana y va hacia Francia y, con ella, se llevó todos los
conocimientos de venenos, empleándolos en perfumes.

En la corte de le Roi-Soleil (Luis XIV), Rey de Francia desde 1643 a 1715, existieron
tres famosas envenenadoras: la marquesa de Brinvilliers, La Voisin y la marquesa de
Montespan. La segunda, Catherine Deshayes, más conocida con el nombre de La
Voisin, fue acusada de numerosos envenenamientos. Catherine llegó a regentar un
lucrativo negocio de venta de venenos, que compraban mujeres deseosas de
enviudar. También se vio implicada en un atentado frustrado contra la vida de Luis
XIV, al proporcionar a sus autores un preparado elaborado con Arsénico y acetato de
plomo que luego se denominaría polvos de sucesión. Este último compuesto -el
acetato de plomo- era conocido como azúcar de Saturno.

Madame Lafarge: Después de una corta enfermedad, el señor Lafarge murió el día 14
de Enero del 1840. Su joven esposa, Marie Lafarge (nacida Marie Capelle), fue
acusada de asesinato por envenenamiento y encerrada en la prisión. Una semana
después, los expertos locales fueron requeridos para realizar una autopsia y un test
químico. Encontraron rastros de arsénico, con su característico olor a ajo, un
precipitado sulfuroso amarillo, pero no pudieron dar respuestas concluyentes al
tribunal. Durante el siglo XIX, el arsénico fue el veneno más empleado por los
criminales, se podía obtener fácilmente a partir de los venenos para las ratas y era
difícil de detectar porque sus síntomas se confunden con los de la cólera.
Casi al mismo tiempo, Mateo Orfila- toxicólogo de origen español- estaba realizando
una serie de conferencias en la Academia de Medicina de París, el ensayo de Marsh.
El nuevo instrumento fue introducido en 1836 y Orfila y otros toxicólogos lo
consideraron un método revolucionario para descubrir arsénico en experimentos
legales. En septiembre de 1840, con la aplicación del ensayo de Marsh en la muerte
del señor Lafarge, obtuvieron un par de gotas de arsénico y la señora Lafarge fue
condenada a cadena perpetua.

Otras curiosidades que entran en el terreno de esta breve descripción de la historia

de la Toxicología, en cuanto a la semántica, GIFT en alemán significa veneno y, en
inglés regalo, mientras en sueco significa, cuando es nombre veneno y cuando es
adjetivo matrimonio y, por lo tanto, matrimonio envenenado.

Los primeros científicos toxicólogos son:

Dioscórides: cuyo nombre completo era Pedanio Dioscórides Anazarbeo (Anazarbus,

Cilicia, en Asia Menor, c. 40 -c. 90) fue un médico, farmacólogo y botánico de la
antigua Grecia, cuya obra De Materia Medica alcanzó una amplia difusión y se
convirtió en el principal manual de farmacopea durante toda la Edad Media y el
Renacimiento.

Avicena: Abū ‘Alī al-Husayn ibn ‘Abd Allāh ibn Sīnā (980 - 1037), llamado en Occidente
Avicena, fue un médico, filósofo y científico persa. Escribió alrededor de 450 libros de
diversas materias, fundamentalmente de filosofía y medicina. Sus libros más famosos
fueron El libro de la curación y El canon de medicina (conocido como Canon de
Avicena). Es considerado como uno de los más grandes médicos de todos los
tiempos.

Paracelso: Theophrastus Philippus Aureolus Bombastus von Hohenheim, conocido

como Paracelso (Atenas, Grecia, 11 de noviembre o 17 de diciembre de 1493 –
Zurich, 24 de septiembre de 1541), fue un alquimista, médico y astrólogo griego.
El nombre Paracelso (Paracelsus, en latín), que escogió para sí mismo y por el que es
generalmente conocido, significa «superior a Celso», médico romano del siglo I.

Bernardino Ramazzini: médico y pionero de la salud ocupacional y de la medicina del

trabajo , nació en Capri - Italia (1633–1714), estudio en la Universidad de Parma y
practico la medicina cerca de Roma y radico en la ciudad de Modena, fue profesor de
medicina (1682–1700). Luego se traslado a la ciudad de Padua en 1700. Su mayor
trabajo fue la obra titulada De morbis artificum diatriba (en al año 1700, "Enfermedades
de los trabajadores"), fue el primero que describió sistemáticamente las enfermedades
ocupacionales bajo la observación en el medio ambiente laboral este medico italiano
también dedicó a estudiar los riesgos y enfermedades existentes en más de 100
profesiones diferentes

Mateo José Buenaventura Orfila ; quien desarrolla técnicas que permiten detectar
mínimas dosis de tóxico en los tejidos. Tiene mucho contacto con la aristocracia y esto
le da dinero que le permite experimentar. Crea una escuela en Francia. A partir de él
comienzan a bajar los casos de intoxicaciones hasta que hoy, en humana casi han
desaparecido, no así en los animales.

Toxicología y su vinculación con las ciencias básicas y aplicadas

Debemos como primera parte del estudio de la Toxicología, definirla la misma, para
lo cual empleamos la siguiente , entre otras tantas que pueden encontrarse en los
diferentes libros de texto , como : la ciencia que estudia las sustancias químicas y los
agentes físicos , en cuanto que son capaces de producir alteraciones patológicas en
los seres vivos, con sobrevida (con o sin secuelas ) o muerte , a la par que estudia los
mecanismos de producción de dichas alteraciones y los medios para contrarrestarlas
(antídotos y antagonistas ) , así como los procedimientos para detectar, identificar y
cuantificar tales agentes y evaluar su grado de toxicidad y su dispersión en el medio
ambiente .

La toxicología como ciencia , se nutre de las mas variadas disciplinas , como por
ejemplo : química, física , anatomía , fisiología , entre otras , y de ahí su carácter
interdisciplinario, y que en los últimos años ha dado un salto de conocimientos muy
importante dado esa característica de no pertenecer a una sola disciplina sino ser
compartidas por numerosas ,por lo cual los equipos de trabajo de toxicología son
interdisciplinarios y surge la necesidad que las diferentes actividades profesionales
tengan conocimientos de toxicología.

Pero además, el desarrollo científico tecnológico actual hace insuficientes a los

equipos monodisciplinarios ( los integrados exclusivamente por médicos, o por
farmacéuticos, o por químicos, o por biólogos o por ingenieros, etc.), sino que exige la
actuación de grupos en que colaboren integradamente, profesionales debidamente
capacitados poseedores de las más distintas titulaciones.
Esta característica es una de las razones del rápido desarrollo de la Toxicología en los
últimos años, gracias a las contribuciones de profesores, investigadores y
profesionales de muy diferente formación inicial .

Ramas de la Toxicología

De la toxicología , se desprenden desde el aporte de las ciencias básicas y aplicadas

, ramas como las siguientes :

Toxicología Laboral, Ocupacional o Industrial : que estudia la relación de los

compuestos químicos empleados en el ambiente laboral y la salud de los trabajadores
Toxicología Clínica Humana y Veterinaria: se ocupa del diagnostico , prevención y
atamiento de intoxicaciones humanas y animales.
Toxicología Ambiental: estudia los compuestos químicos en algunos de los
compartimientos del Ecosistema .
Ecotoxicología: estudia los compuestos químicos en todos los compartimientos del
Ecosistema
Toxicología de Fármacos: se encarga de estudiar los efectos toxicológicos de los
fármacos .
Toxicología Reguladora: se trata de la aplicación de los conocimientos de la
Toxicología al Legislador para la creación de las leyes.
Toxicología Analítica, que se ocupa de la detección cuali y cuantitativa de los
compuestos tóxicos en los diferentes materiales que pudieran contenerlos,
Toxicología alimentaria: la que incluye el análisis toxicológico de los alimentos y la
evaluación toxicológica de sus constituyentes, incluidos los aditivos, los contaminantes
y los productos derivados, así como la evaluación del riesgo que su ingestión puede
representar para los consumidores,. entre otras ramas.
 Ciencias que aportan y ramas que se desprenden de la Toxicología

Noción de Tóxico

Cualquier sustancia capaz de producir daño en la salud o muerte en organismos vivos

como resultado de interacciones fisicoquímicas. Este daño puede ser leve (p. ej., dolor
de cabeza o náuseas) o grave (p. ej., convulsiones o fiebre alta), en los casos más
graves, la persona intoxicada puede morir.
Casi todos los productos químicos pueden actuar como un tóxico si la cantidad
presente en el cuerpo es suficiente. Algunos son nocivos incluso en cantidades muy
pequeñas (p. ej., una cucharadita por vía oral o el volumen ínfimo introducido por la
mordedura de una serpiente), mientras que otros sólo lo son si la cantidad absorbida
es considerable (p. ej., el contenido de varias tazas).

Por lo tanto , podemos incluir el concepto de Toxicidad, como la capacidad para

producir daño a un organismo vivo , en relación a la cantidad de sustancia
administrada o absorbida, la vía de administración, y su distribución en el tiempo.

Intoxicación: tipos y características

Intoxicación Aguda : Exposición en una sola administración del tóxico , que puede
conducir a la muerte , o con una recuperación total o parcial , con o sin secuelas (con
aparición de sintomatología antes de las 24 horas ).
Intoxicación Crónica : Exposición repetida en largos periodos de tiempo , en dosis muy
bajas , con efectos acumulativos, generalmente de carácter irreversible

Dosis y toma

Se denomina dosis a la cantidad de una sustancia química que ingresa en el cuerpo

en un momento dado. La dosis capaz de causar una intoxicación recibe el nombre de
dosis tóxica. La cantidad más pequeña que ejerce un efecto nocivo se denomina dosis
umbral. Si la cantidad de producto químico que ingresa en el cuerpo es inferior a la
dosis umbral, no se produce intoxicación e incluso puede haber efectos favorables.
Los medicamentos, por ejemplo, ejercen efectos favorables si se toman en la dosis
adecuada, pero pueden producir una intoxicación si la cantidad es excesiva.

La dosis, en términos ponderales podemos conceptuarlo como la cantidad de

sustancia por kilogramo de peso que es capaz de producir un efecto y la toma es la
división de la dosis en 24 horas.

Dosis letal cincuenta o DL50

Experimentación animal. Factores que influyen en su determinación: propios de

la especie o factores exógenos

Para valorar la peligrosidad de cada sustancia antes de que pueda ser comercializada
es necesario someterla a ensayos y experiencias .
Para realizar un estudio completo esos efectos sobre la salud se han subdividido en :

1-efectos letales agudos {tras una sola exposición}

2-efectos irreversibles no letales, tras una exposición
3-efectos graves tras exposición repetida o prolongada
4-efectos corrosivos
5- efectos irritantes
6- efectos sensibilizantes
7-efectos carcinogénicos
8-efectos mutagénicos
9-efectos tóxicos para la reproducción y el desarrollo
10-efectos tóxicos sobre el medio ambiente.

Una vez clasificada una sustancia después de los estudios experimentales se etiqueta
,se dan explicaciones sobre riesgos específicos, consejos de prudencia etc.
En cuanto al estudio sobre el medio ambiente se tiene en cuenta dos cuestiones:
*si se estudian objetos o poblaciones aisladas {materia de la toxicología ambiental}
*si se estudia en forma general los efectos sobre el ecosistema {ecotoxicología}

El conocimiento de la toxicidad de una sustancia se obtiene por el estudio

retrospectivo de casos de intoxicación y ensayos experimentales sobre animales y
plantas.
Solo en muy contadas ocasiones se hacen los estudios sobre seres humanos por
consideraciones éticas y legales. se obtiene datos de toxicidad humana estimada.
Sobre el hombre deben emplearse métodos no cruentos y las investigaciones deben
comenzar con sujetos voluntarios pasando a enfermos.
Existen limitaciones y dificultades inherentes a la experimentación humana,
sugiriéndose normas éticas derivadas del famoso juicio de Nuremberg. Este proceso
fue celebrado en 1945 y 1946, ante un tribunal internacional, contra el partido nazi y
otras organizaciones, bajo la acusación de crímenes de guerra durante la II Guerra
Mundial.

De este emanaron las siguientes consideraciones:

1.- consentimiento voluntario del sujeto dotado de capacidad legal de consentir, sin
constricción de ninguna clase y con conocimiento detallado de la naturaleza y riesgos
del experimento. el experimentador no puede denegar su responsabilidad al respecto.
2.- el experimento debe ser necesario e imposible de realizar en otra forma.
3.- debe ser precedido por experimentos en animales e investigación profunda de la
cuestión en estudio.
4.- debe evitarse todo sufrimiento y daño innecesario.
5.- no debe presuponer muerte o invalidez del sujeto salvo en caso de
autoexperimento.
6.- los riesgos no deben exceder el valor eficaz y real.
7.- debe esforzarse de evitar todo daño eventual.
8.- el experimentador debe ser calificado.
9.- el sujeto debe poder interrumpir el experimento cuando desee.
10.- el experimentador debe estar presto a interrumpirlo en caso de peligro posible.

Los estudios toxicológicos sobre plantas están basados sobretodo en conocer la

toxicidad de los productos de uso agrícola y el grado de retención de las sustancias
tóxicas por los vegetales de consumo animal o humano, que no pueden superar lo que
se conoce como límite máximo de residuos {LMR}-algunas técnicas usan plantas
inferiores ,por ej.cultivos de algas en placas de agar, al estilo de los antibiogramas.
Allí se colocan discos de papel impregnados en los materiales sospechosos y se
detectan halos de inhibición del crecimiento del cultivo.
Otros estudios usan larvas de anfibios {método de Reiss} aplicado a la investigación
de los efectos tóxicos de las micotoxinas.
Se estudia la inhibición del desarrollo de huevos y larvas.

En la experimentación sobre animales el mismo fue sistematizado por

Trevan{1927}para la determinación de la dosis letal 50 .Trabajó con lotes de animales
comparables cuantitativamente a los que aplicaba la misma dosis por lote y el número
a utilizar era bastante elevado , 30 animales por cada dosis como mínimo, así el
trazado de la curva {DL500}que es de tipo sigmoide requiere 6 o 7 puntos por lo que
se necesitan entre 180 y 200 animales- asociaciones protectoras de animales y una
mayor sensibilización hizo que cada vez se usaran menor números de ellos ,producir
menor sufrimiento y lograr mas información con menores experimentos, con métodos
alternativos llamados por Russell y Burch {1959}como las tres erres:

3r} reducción, refinamiento y reemplazo.

Se han reconocido así los derechos de los animales y normas éticas, por lo tanto :
los estudios de toxicidad deben emplear métodos alternativos y cuando se han
alcanzado suficientes conocimientos sobre el producto en cuestión confirmar y ampliar
mediante ensayos sobre animales-los estudios toxicológicos sobre animales presentan
cuatro cuestiones a tener en cuenta:

*especie animal a utilizar.

**numero total y de grupos de animales.
***vías de administración que se deben emplear.
****tiempo de duración del estudio
*Se deberá considerar para cada estudio, tipo de sustancia y el uso al que se destina
la misma:
a} se usan en general animales pequeños como ratones, hamster ,rata, cobayos,
conejos ,perros.
En casos mas concretos aves, gatos, monos.
Se usan también animales transgénicos para estudios muy particulares. Estos
individuos derivan de un huevo recientemente fertilizado, extraído de una hembra al
que se inyectan unas secuencias de ADN .
Nace de este huevo un animal que reciben el nombre de fundador y sus
descendientes que portan el ADN exógeno forman una serie de animales
transgénicos.
Estos animales se usan para el estudio de los efectos cinéticos o metabólicos que
implican poseer proteínas modificadas o carecer de ellas. También se emplean células
transgénicas en la experimentación in vitro.

**Se debe emplear mas de una especie y la mitad de individuos de cada sexo. Deben
proceder de un bioterio de garantía, que asegure animales sanos,alimentación
apropiada ,excelente higiene.

***Para administraciones por vía oral y parenteral se usa la rata y el perro. Para
aplicación tópica {externa} el conejo y para ensayos de sensibilización el cobayo.
Cuando se trasladan de local deben mantenerse en cuarentena antes de usarlos {una
semana ,ratas, a un mes para perros}- después de usar unos animales en una
experimentación no deben volver a emplearse en otra experiencia}.
Se deben aplicar prácticas correctoras de lab.{god laboratory practice,glp} habrá un
número mas sensible y otros mas resistentes al toxico y el calculo se basa en
conceptos estadísticos y se tiende a disminuir el numero de animales.

***Vías de administración: la elección se hace de acuerdo con el tipo de producto y la

posible vía por la que el hombre la absorbería.
Por ej. un contaminante atmosférico deberá ser estudiado por la vía inhalatoria y
cutánea.
Se debe considerar el vehículo o medio de dilución empleado aplicándolo solo a un
grupo de animales de control.
Los estudios de toxicidad se desarrollan :

a- con una sola administración {toxicidad aguda}dl50-muertes a la 24 hs,7,15 y 30

Díaz, estudios histológicos, pruebas dérmicas sobre el conejo, incidencia en el
hombre.
b- o con el tratamiento durante periodos cortos {toxicidad. subcrónica o a dosis
repetidas} a 14,28,90 días medios o largos {crónica } mínimo 3 meses,1 –2 años- 25
roedores y 6 perros por nivel de dosis- no debe olvidarse la aparición de
carcinogénesis ,teratogénenesis, modificación de la fertilidad etc.

Tenemos que considerar el concepto de Toxicidad aguda: como la capacidad de una

sustancia para producir efectos adversos tras una sola dosis. va desde la irritación
hasta la muerte.
La dosis letal 50 {dl50} es el mejor indicativo de la capacidad tóxica de una sustancia.
Trevan {1927} el avance de los conocimientos toxicológicos y la mayor frecuencia de
las intoxicaciones crónicas han disminuido el valor y significación de la DL50- este
valor no es constante sino que puede variar por numerosos variables por lo que es un
valor de referencia. no se hace necesario esforzarse en obtenerla con gran precisión
simplificando y disminuyendo el número de animales sacrificados.
Los factores que influyen en el calculo de la dl50 son:
concernientes al sujeto: especie animal experimental, raza, sexo, peso , edad,
susceptibilidades individuales, estado fisiológico etc.

Relativos a las condiciones de administración: vias de adm., naturaleza del vehículo,

concentración, velocidad de administración, sustancias asociadas, habito o tolerancia
adquiridos

Se admite el concepto de toxicidad aproximada que clasifica a las sustancias

conforme a una DL50 aproximada .por vía oral:
muy toxica : dl50 inferior o igual a 25 mg/kg
toxica: dl50 inferior o igual a 250 mg/kg
nociva: dl50 inferior o igual a 2000 mg/kg
sin toxicidad aguda {pero sin prejuzgar efectos crónicos, carcinogenesis }igual o sup a
5000 mg/kg.}

Selección de la dosis: una de las sistemáticas mas simples es hacer un tanteo

eligiendo una dosis inicial de acuerdo con la toxicidad teórica o prevista según la
sustancia que esta en estudio y se ve lo que pasa con un lote de 4 animales del mismo
peso y sexo. si mueren todos {4/4}, se divide la dosis por 4 y se aplica a otro lote de 4
animales .si en el primer ensayo no murió ningún animal {0/4} se multiplica la dosis por
4 y se da a otro lote – según la mortandad observada se repiten los tanteos, usando el
factor 4 o reduciéndolo progresivamente para conocer que dosis produce la muerte de
todos los animales dosis letal máxima y aquella que solo mata un animal dosis letal
minima. conocidas estas se llega a la dl50 con la que solo mueren el 50 por ciento de
los animales procedimiento up and down {bruce , 1985} el tiempo que debe esperarse
para ver si se produce muerte por intoxicación aguda es de 24 horas , pero como a
veces el efecto puede aparecer mucho mas tarde los animales se mantiene en
observación entre 10 a 15 días .
Se recomienda proseguir la observación por un mes y luego proceder al sacrificio con
el estudio histológico de todos los animales usados.
*otro método es el de la dosis fija {1994} que se basa en la aplicación sucesiva de
cuatro niveles de dosis a sendos lotes de 5 animales de un solo sexo{ luego hay que
comprobar con el otro }. los pasos sucesivos en el estudio no son decididos solo por la
proporción de muertes sino por los efectos tóxicos evidentes.
*en abril de 1996 la ocde {organización para la cooperación y desarrollo económico de
europa} adoptó el método por clase de toxicidad oral aguda , en el que usan 3
animales {ratas} por etapa- según la mortalidad o la gravedad de la intoxicación suelen
requerirse dos a cuatro etapas con dosis de 25, 200 y 2000 mg/kg y supone una
notable reducción en el número de animales .
Se debe mantenerlos a todos en el mismo ambiente de ensayo y efectuar la
administración a la misma hora para evitar influencias ambientales y los ciclos
circadianos.
Se administran añadidos a la comida o la bebida. pero no resulta muy seguro acerca
de la cantidad absorbida, por lo tanto se los intuba {intubación gástrica}cuidando que
no ingrese en traquea.
El volumen administrado por ese proceso no debe exceder los 10 ml/kg de peso del
animal.
***las rutas parenterales serán subcutánea,intramuscular ,intraperitoneal iv- la
absorción intraperitoneal permite una absorción casi tan rápida como la iv y es útil
cuando el numero de aplicaciones es reducido porque puede originar adherencias- los
volumenes aplicados son de 0,5 ml a 2 ml y cuando los cantidades son superiores se
divide e inyecta en lugares diferentes.
Los disolventes ideales son la solución isotónica a ph ente 5 y 8- para la determinar la
DL50 vía dérmica {toxicidad percutánea} se aplica el productos sobre la piel del lomo
del animal afeitado. Por vía inhalatoria donde la toxicidad aguda se expresa como
CL50 {concentración letal media} se mantiene a los animales en cámaras especiales
en las que solo el hocico está expuesto al tóxico y se evite la absorción percutánea.

Toxicidad crónica: de acuerdo con la OMS para los estudios de cronicidad se

recomiendan plazos de 6 a 18 meses.
A los 90 días debe sacrificarse una muestra de todos los grupos en estudio para la
observación histológica.
La administración del producto deberá hacerse todos los días, se vio que si se da 5
días a la semana, el descanso de 48 horas puede permitir la recuperación de los
efectos tóxicos.
La selección de las dosis se efectúa con pruebas previas de 4 semanas.
Se tiene en cuenta los estudios de dosis letal 50-en cada uno de los niveles se usan
lotes de 20 a 30 roedores o de 4 a 8 no roedores por nivel y sexo..
Hay que estimar las incidencias de origen no toxico.
Los estudios de toxicidad crónica a medio y largo plazo deben durar 3 meses y de 1 a
2 años-entre las observaciones a realizar tenemos:

Aspecto físico: posiciones extrañas, cola ,orejas, aletas, salivación lagrimeo, en forma
diaria .
Comportamiento : consumo de agua y alimentos, agresividad, sedación
Examenes fisicos: temblores, convulsiones, parálisis , tamaños de pupila, lesiones en
la piel-hematologia: periódicamente y al final. hemograma, recuento leucocitario
,plaquetario, hemoglobina, hematocrito, química sanguínea: glucemia, proteinemia,
colesterol, transaminasa, fosfatasa alcalina, urea..
Orina : volumen, pH ,color, glucosa, cuerpos cetonicos, pigmentos biliares.
Autopsia de animales muertos o sacrificados: examenes macro y microscópicos, peso
de órganos.
Histopatologia: óptica y electrónica.
Examenes fisicos: sistemanervioso y motor, sistema nervioso autónomo, respiratorio,
circulatorio, gastrointestinal, piel, mucosa, ojo, temperatura de la piel y rectal, lugar de
inyección-
**cuando se sacrifican todos los animales y se les hace autopsia deben pesarse los
órganos y se estudian especialmente el bazo, nódulos linfáticos, timo por lo s efectos
inmunotóxicos .
Se estudian los trastornos sobre la fertilidad, efectos negativos en la libido,
comportamiento sexual- efectos sobre los embriones {embriotóxicos y fetotóxicos}
como disminución del peso corporal, retraso en el crecimiento y desarrollo, trastornos
en la lactancia-
*estudios de teratogénesis: minuciosa observación del esqueleto de los animales para
ello se toman los fetos obtenidos por cesárea pocos días antes de la fecha de
nacimiento, hacer transparente los tejidos conjuntivos y colorear el esqueleto.
Para ello se mantiene en alcohol durante tres días y luego por una solución de
hidróxido de potasio al 2 por ciento hasta que los tejidos blandos se hagan traslucidos,
lo que lleva tres días.
Se colocan en solución colorante {sulfato de alizarina} en potasa hidroalcohólica , se
deja tres días observándose los esqueletos bien teñidos y los fetos se conservan en
glicerina. Se examina el esqueleto. Si es necesario se hace la disección del animal.

Los métodos alternativos- toxicidad in vitro se usan para sustituir algunos ensayos in
vivo o como pruebas previas o complementarias para obtener mejor información.
Se usan diferente clases de métodos alternativos como modelos matemáticos,
modelos educativos audiovisuales, técnicas sobre cultivos de organismos inferiores
{bacterias, algas, hongos} o de órganos ,tejidos, células etc. Son muy adecuadas para
estudiar mecanismos de acción de los tóxicos a niveles celular y subcelular.
1-Se puede estudiar el órgano sin extraerlo del animal que se mantiene vivo pero
aislando la víscera de la circulación general. Se reproduce artificialmente la
circulación, sustituyendo la sangre por un medio salino enriquecido con albúmina y
eritrocitos que se inyecta por la arteria de irrigación del órgano.

2-Cultivos de órganos.
Se obtienen trozos del órgano {explantes}
El órgano más difícil de cultivar es el hígado como consecuencia de su actividad
metabólica.
Es importante para estudiar el efecto de los tóxicos sobre la síntesis de ARN y de
proteínas, desarrollo , proliferación y diferenciación etc.
En las investigaciones in vitro en importante distinguir:
A} el sustrato biológico: es el material orgánico, vivo o no, que se mantiene en el
laboratorio en determinadas condiciones para estudiar las reacciones que sobre el se
produzca el xenobiótico que se analiza.
B} indicadores de toxicidad: parámetros elegidos por su representatividad del efecto o
alteración que se quiere observar. Algunos indicadores que se valoran: morfología,
reproducción celular , actividad metabólica, integridad de las membranas celulares .
Son específicos de órganos, sistemas, funciones:
actividad de los receptores, síntesis ,almacenamiento o liberación de determinadas
enzimas, transmisores o anticuerpos.
Es importante la observación del animal in vivo para no sobrevalorar resultados.

Los métodos para probar la capacidad mutagénica, cancerigena o teratogenica de las

sustancias permiten investigar efectos germinales o somáticos por mas de un
procedimiento y se dividen en:

a}Métodos in vitro: rápidos. ejemplo:

1} Bacterianos {usan Salmonelas o Escherichia coli que para crecer precisan la adición
al medio de cultivo de una sustancia determinada prueba de ames {histidina} prueba
de ara {l-arabinosa}

Test de Ames:
La bacteria usada en el Test es una cepa de Salmonella typhimurium que lleva un gen
defectuoso {mutante} haciendo incapaz la síntesis del aminoácido histidina {his} desde
los ingredientes de los medios de cultivo.{por lo que necesita un medio con esta para
crecer}-algunos tipos de mutaciones {incluyendo esta} pueden ser reversibles por lo
tanto una mutación posterior ,recupera esa función. esa regresión hace posible el
crecimiento en un medio con privación de histidina.
El método utiliza una suspensión de la cepa de Salmonella typhimurium que requiere
histidina {his}y ha sido sembrada con una mezcla de enzimas de hígado de rata en el
agar carente de histidina { se supone que no ha de crecer} un disco de papel del filtro
se ha impregnado , por ejemplo con la sustancia a analizar .
El efecto mutagénico del agente químico causa que muchas bacterias recobren la
habilidad de crecer sin histidina, formando las colonias que se ven alrededor del disco.
Muchos productos químicos no son los mutagénicos (o carcinogénico) por si mismos,
pero se convierten en el mutágeno (y carcinógeno) cuando ellos se metabolizan por el
cuerpo. Esta es la razón que la prueba de ames incluye una mezcla de enzimas vivas.

2} No bacterianos : usan, mosca Drosofila, celulas de medula ósea, etc.

Los cromosomas varían en forma y tamaño y, por lo general, se presentan en parejas.
Los miembros de cada pareja, llamados cromosomas homólogos, tienen un estrecho
parecido entre sí. La mayoría de las células del cuerpo humano contienen 23 pares de
cromosomas, en tanto que la mayor parte de las células de la mosca del vinagre o de
la fruta, Drosophila, contienen cuatro pares, y la bacteria Escherichia coli tiene un
cromosoma único en forma de anillo.

b} Métodos in vivo: aplicación cutánea, subcutánea, pulmonar del producto en

animales. Son de realización a largo plazo- Para estudiar embriotoxicidad y
teratogenicidad se pueden usar los huevos de gallina, pato, etc.
Los huevos fecundados se incuban en estufa y hacia el séptimo día se inyectan en el
saco vitelino , observando por trans-iluminación, 0,05 ml de una disolución o emulsión
del producto en suero salino estéril, al final del periodo de incubación se compara
frente a un lote d e huevos sin tratamiento el número de pollitos nacidos y los que
sobreviven mirando posibles malformaciones.
En el huevo la transformación de xenobióticos es mínima por lo que los efectos
observados no se deben a los metabolitos.
Glosario :

Cicuta : La cicuta, Conium maculatum, es una especie botánica de planta con flor
herbácea de la familia de las apiáceas.

Fedón: es un diálogo que nos muestra de manera extraordinaria como Sócrates se

enfrentó con el momento supremo de su existencia: el de la muerte. Por ello, la
intención principal de tal diálogo, es la de trazar una filosofía de la muerte, una teoría
del buen morir, tomando como base la muerte ejemplar del maestro de Platón.
En el Fedón, Sócrates, hace una apología de sí mismo, pero esta vez no ante los
jueces de Atenas, sino ante sus amigos, y no precisamente de su inocencia, sino de
su actitud ante la muerte. Ahora, en el momento de emprender un viaje dudoso y
definitivo, expondrá cuantos motivos tiene para mostrarse sereno y no mostrar
angustia ante la más sincera de las verdades.