PRACTICA N°04 MEDIOS DE CULTIVO Luz

UNIVERSIDAD NACIONAL DE
FRONTERA
FACULTAD DE INGENIERÍA DE
INDUSTRIAS ALIMENTARIAS
“MEDIOS DE CULTIVO”
INFORME DE PRÁCTICA DE LABORATORIO N° 04
AUTORES:
PONCE GONZALES MIRELLA PAOLA
TINOCO JUAREZ ROSITA ARIANA
ZAMORANO ESCALANTE DELIA
ZAPATA PALACIOS STEPHANIE
ZAPATA ZAPATA MARIA DEL CARMEN
ASIGNATURA:
MICROBIOLOGIA DE LOS ALIMENTOS
SULLANA - PERÚ
2020
INDICE
Contenido Pág.
I. RESUMEN.......................................................................................................2
II. INTRODUCCIÓN.............................................................................................3
III. OBJETIVO...................................................................................................4
IV. FUNDAMENTO TEÓRICO.............................................................................5
4.1. Bases Teóricas..........................................................................................5
4.2. Bases Conceptuales..................................................................................5
V. METODOLOGÍA Y MATERIALES.......................................................................6
5.1. Metodología.............................................................................................6
5.1.1. Método..............................................................................................6
5.1.2. Materiales..........................................................................................6
VI. RESULTADOS..............................................................................................8
VII. ANÁLISIS Y DISCUSIONES...........................................................................9
VIII. CONCLUSIONES.........................................................................................10
IX. CUESTIONARIO.........................................................................................11
X. REFERENCIA BIBLIOGRÁFICAS......................................................................12
INDICE DE TABLAS
1
Tabla 1 COMPOSICION DE AGAR CITRATO DE SIMNONS...................................................16
Tabla 2: COMPOCISION DE CALDO TRIPTONA.......................................................................16
Tabla 3: COMPOCISION DE CALDO MR VP(ROJO DE METILO VOGES PROSKAUER). 17
Tabla 4: COMPOCISION DE AGAR TSI (TRIPLE SUGAR IRON)............................................17
Tabla 5: COMPOCISION DE CALDO UREA................................................................................18
Tabla 6: COMPOCISION DE AGAR NUTRITIVO.......................................................................18
Tabla 7:MICROORGANISMOS QUE SE DESARROLLAN EN AGAR CITRATO DE
SIMNONS...........................................................................................................................................25
Tabla 8: MICROORGANISMOS QUE SE DESARROLLAN EN CALDO TRIPTONA............26
Tabla 9: MICROORGANIZMOS QUE SE DESARROLLAN EN CALDO MR VP (ROJO DE
METILO VOGES PROSKAUER)...................................................................................................26
Tabla 10: MICROORGANIZMOS QUE SE DESARROLLAN EN AGAR TSI (TRIPLE
SUGAR IRON)...................................................................................................................................27
Tabla 11: MICROORGANIZMOS QUE SE DESARROLLAN EN CALDO UREA...................27
Tabla 12: MICROORGANISMOS QUE SE DESARROLLAN EN AGAR NUTRITIVO...........28
INDICE DE GRAFICOS:
GRAFICO 1:PREPARACIÓN DEL AGAR CITRATO DE SIMMONS:......................................19
GRAFICO 2:PREPARACIÓN DEL CALDO TRIPTONA:............................................................20
GRAFICO 3:PREPARACIÓN DEL CALDO MRVP:.....................................................................21
GRAFICO 4:PREPARACIÓN DEL AGAR TSI:.............................................................................22
GRAFICO 5:PREPARACIÓN DEL CALDO UREA:.....................................................................23
GRAFICO 6:PREPARACIÓN DEL AGAR NUTRITIVO:...........................................................24
2
I. RESUMEN
El cultivo de las bacterias en el laboratorio es esencial para la identificación de estos

microorganismos. El cultivo consiste en observar el crecimiento
de las bacterias en medios especiales que contengan los nutrientes que favorezcan su
desarrollo. El medio que contiene estas sustancias alimenticias se denomina medio de cultivo
y existen en gran variedad. Para el crecimiento bacteriano además de un medio de cultivo
adecuado es necesario mantener condiciones de temperatura, humedad, PH y nutrientes.
En el presente informe veremos toda la información acerca de los principales medios de
cultivo tanto sólidos como líquidos en el laboratorio de Microbiología de los Alimentos,
información como los procedimientos de la correcta preparación de cada medio de cultivo
mediante gráficos, composición química, en qué microorganismos se utiliza.
3
II. INTRODUCCIÓN
Se le denomina medio de cultivo a un material nutritivo preparado para el crecimiento de

microorganismos. Este debe satisfacer la necesidad del inoculo por ejemplo debe contener
los nutrientes adecuado para el microorganismo especifico que desea desarrollar, también
debe tener un PH ajustado de una manera apropiada y una concentración conveniente de
oxígeno, talvez ausente por completo.
Cuando se desea que las bacterias se desarrollen sobre un medio sólido, se agrega un
agente solidificante, como lo es el agar, que consiste en un polisacárido complejo
proveniente de un alga marina que se utiliza desde hace mucho tiempo como espesante de
alimentos como jaleas y helados. Existen amplia variedad de medios de cultivo para el
crecimiento de microorganismos en el laboratorio, casi todos estos medios disponibles en
el comercio, están constituidos por componentes mezclados con anterioridad y solo
precisan el agregado de agua y medio de esterilización.
El medio que se va utilizar debe ser estéril, es decir, en un principio no debe contener
microorganismos viables, de modo que el cultivo contenga solo microbios (y su
descendencia) que se agregan al medio y debe incubarse a temperatura correcta. Los
medios con agar suelen utilizarse en tubos de ensayo o placas Petri. Los tubos de ensayo
se denominan tubos en pico de flauta o inclinados cuando el medio se solidifica
manteniendo el tubo en un Angulo adecuado para lograr una gran superficie para el
crecimiento. Cuando el agar se solidifica en un tubo de posición vertical se denomina
profundo.
Los cultivos en placas Petri, denominadas así en honor a su inventor se realizan en placas
poco profundas con una tapa que cubre perfectamente la base para evitar contaminarse.
4
III. OBJETIVO
III.II. OBJETIVO GENERAL:
 Prepara correctamente los medios de cultivo
III.II. OBJETIVOS ESPECIFICOS:
 Señalar la composición de los principales medios de cultivos de

laboratorio microbiológico.
 Señalar los procedimientos de preparación de cada medio de cultivo
(graficar).
 Indicar que microorganismo se desarrolla en cada medio de cultivo
microbiológico.
5
IV. FUNDAMENTO TEÓRICO
IV.1. Bases Teóricas
MEDIOS DE CULTIVO
Un medio de cultivo es un sustrato o una solución de nutrientes que permite el
desarrollo de microorganismos. En las condiciones de laboratorio para realizar un
cultivo, se debe sembrar sobre el medio de cultivo elegido las muestras en las que
los microorganismos van a crecer y multiplicarse para dar colonias.
Los microorganismos son los seres más abundantes de la tierra, pueden vivir en
condiciones extremas de pH, temperatura y tensión de oxígeno, colonizando una
amplia diversidad de nichos ecológicos. Entre los requerimientos más importantes
para su desarrollo están el carbono, el oxígeno, nitrógeno, dióxido de carbono e
hidrógeno. Muchas bacterias sin embargo necesitan del aporte extra de factores de
crecimiento específicos en forma de suero, sangre y extracto de levadura entre
otros.
Un medio de cultivo es una técnica de laboratorio (véase microbiología) que
consta de un gel o una solución que contiene los nutrientes necesarios para
permitir, en condiciones favorables de pH y temperatura, el crecimiento de virus,
microorganismos, células, tejidos vegetales o incluso pequeñas plantas. Según lo
que se quiera hacer crecer, el medio requerirá unas u otras condiciones.
Generalmente se presentan desecados en forma de polvo fino o granular antes de
ser preparados; ya preparados pueden encontrarse en estado sólido, semisólido o
líquido. El objetivo último del cultivo es variado: antibiograma, identificación,
multiplicación.
Uno de los sistemas más importantes para la identificación de microorganismos es
observar su crecimiento en sustancias alimenticias artificiales preparadas en el
laboratorio. El material alimenticio en el que crecen los microorganismos es el
Medio de Cultivo y el crecimiento de los microorganismos es el Cultivo. Se han
preparado más de 10.000 medios de cultivo diferentes.
Para que las bacterias crezcan adecuadamente en un medio de cultivo artificial

debe reunir una serie de condiciones como: temperatura, grado de humedad y
presión de oxígeno adecuadas, así como un grado correcto de acidez o alcalinidad.
Existen rangos de temperatura dónde la tasa máxima de crecimiento se encuentra
entre 20 y 42 °C. A esas bacterias se las conoce como mesófilas. 1Un medio de
cultivo debe contener los nutrientes mínimos para establecer un medio que
contenga solamente los componentes necesarios para el crecimiento2 y debe estar
exento de todo microorganismo contaminante.[ CITATION Sch76 \l 2058 ]
6
CONDICIONES GENERALES PARA EL CULTIVO DE MICROORGANISMOS
El desarrollo adecuado de los microorganismos en un medio de cultivo se ve

afectado por una serie de factores de gran importancia y que, en algunos casos, son
ajenos por completo al propio medio.
1- DISPONIBILIDAD DE NUTRIENTES ADECUADOS
Un medio de cultivo adecuado para la investigación microbiológica ha de

contener, como mínimo, carbono, nitrógeno, azufre, fósforo y sales inorgánicas.
En muchos casos serán necesarias ciertas vitaminas y otras sustancia inductoras
del crecimiento. Siempre han de estar presentes las sustancias adecuadas para
ejercer de donantes o captadores de electrones para las reacciones químicas que
tengan lugar.
Todas estas sustancias se suministraban originalmente en forma de infusiones de

carne, extractos de carne o extractos de levadura. Sin embargo, la preparación de
estas sustancias para su aplicación a los medios de cultivo provocaban la pérdida
de los factores nutritivos lábiles.
Actualmente, la forma más extendida de aportar estas sustancias a los medios es

utilizar peptona que, además, representa una fuente fácilmente asequible de
nitrógeno y carbón ya que la mayoría de los microorganismos, que no suelen
utilizar directamente las proteínas naturales, tienen capacidad de atacar los
aminoácidos y otros compuestos más simples de nitrógeno presentes en la peptona.
Ciertas bacterias tienen necesidades nutritivas específicas por lo que se añade a
muchos medios sustancias como suero, sangre, líquido ascítico, etc. Igualmente
pueden ser necesarios ciertos carbohidratos y sales minerales como las de calcio,
magnesio, manganeso, sodio o potasio y sustancias promotoras del crecimiento,
generalmente de naturaleza vitamínica.
7
Muy a menudo se añaden al medio de cultivo ciertos colorantes, bien como
indicadores de ciertas actividades metabólicas o bien por sus capacidades de
ejercer de inhibidores selectivos de ciertos microorganismos.
2- CONSISTENCIA ADECUADA DEL MEDIO
Partiendo de un medio líquido podemos modificar su consistencia añadiendo

productos como albúmina, gelatina o agar, con lo que obtendríamos medios en
estado semisólido o sólido. Los medios solidificados con gelatina tienen el gran
inconveniente de que muchos microorganismos no se desarrollan adecuadamente a
temperaturas inferiores al punto de fusión de este solidificante y de que otros
tienen la capacidad de licuarla.
Actualmente los medios sólidos son de uso universal, por su versatilidad y

comodidad, pero hay también gran cantidad de medios líquidos cuyo uso está
ampliamente extendido en el laboratorio.
3- PRESENCIA (O AUSENCIA) DE OXÍGENO Y OTROS GASES
Gran cantidad de bacterias pueden crecer en una atmósfera con tensión de oxígeno
normal. Algunas pueden obtener el oxígeno directamente de variados sustratos.
Pero los microorganismos anaerobios estrictos sólo se desarrollarán
adecuadamente en una atmósfera sin oxígeno ambiental. En un punto intermedio,
los microorganismos microaerófilos crecen mejor en condiciones atmosféricas
parcialmente anaerobias (tensión de oxígeno muy reducida), mientras los
anaerobios facultativos tienen un metabolismo capaz de adaptarse a cualquiera de
las citadas condiciones.
4- CONDICIONES ADECUADAS DE HUMEDAD
Un nivel mínimo de humedad, tanto en el medio como en la atmósfera, es

imprescindible para un buen desarrollo de las células vegetativas microbianas en
los cultivos. Hay que prever el mantenimiento de estas condiciones mínimas en las
estufas de cultivo a 35-37ºC proporcionando una fuente adecuada de agua que
mantenga la humedad necesaria para el crecimiento de los cultivos y evitar así que
se deseque el medio.
5- LUZ AMBIENTAL
La mayoría de los microorganismos crecen mucho mejor en la oscuridad que en

presencia de luz solar. Hay excepciones evidentes como sería el caso de los
microorganismos fotosintéticos.
8
6- pH
La concentración de iones hidrógeno es muy importante para el crecimiento de los

microorganismos. La mayoría de ellos se desarrollan mejor en medios con un pH
neutro, aunque los hay que requieren medios más o menos ácidos. No se debe
olvidar que la presencia de ácidos o bases en cantidades que no impiden el
crecimiento bacteriano pueden sin embargo inhibirlo o incluso alterar sus procesos
metabólicos normales.
7- TEMPERATURA
Los microorganismos mesófilos crecen de forma óptima a temperaturas entre 15 y

43ºC. Otros como los psicrófilos crecen a 0ºC y los temófilos a 80ºC o incluso a
temperaturas superiores (hipertemófilos). En líneas generales, los patógenos
humanos crecen en rangos de temperatura mucho más cortos, alrededor de 37ºC, y
los saprofítos tienen rangos más amplios.
8- ESTERILIDAD DEL MEDIO
Todos los medios de cultivo han de estar perfectamente estériles para evitar la
aparición de formas de vida que puedan alterar, enmascarar o incluso impedir el
crecimiento microbiano normal del o de los especimenes inoculados en dichos
medios. El sistema clásico para esterilizar los medios de cultivo es el autoclave
(que utiliza vapor de agua a presión como agente esterilizante)
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CLASIFICACIÓN DE LOS MEDIOS DE CULTIVO
Según su origen:
a. NATURALES: Son los preparados a partir de sustancias naturales de

origen animal o vegetal como ser extractos de tejidos o infusiones y cuya
composición química no se conoce exactamente.
b. SINTÉTICOS: Son los medios que contienen una composición química
definida cuali y cuantitativamente. Se utilizan para obtener resultados
reproducibles.
c. SEMISINTÉTICOS: Son los sintéticos a los que se les añaden factores de
crecimiento bajo una forma de un extracto orgánico complejo, como por
ejemplo extracto de levadura.
Según su consistencia
a. LÍQUIDOS: Se denominan caldos y contienen los nutrientes en solución

acuosa.
b. SÓLIDOS: Se preparan añadiendo un agar a un medio líquido (caldo) a
razón de 15g/litro. El agar es una sustancia inerte polisacárida (hidrato
de carbono) que se extrae de las algas. Como esta sustancia no es digerida
por las bacterias no constituye ningún elemento nutritivo. Este conjunto
convenientemente esterilizado puede ser vertido en placas de Petri o en
tubos de ensayo y presentan la posibilidad de aislar y diferenciar bacterias,
"procesos que antes no eran posibles en medio líquido".
c. SEMISÓLIDOS: Contienen 7,5 g de agar /litro de caldo. Se utilizan para
determinar la motilidad de las especies en estudio.
Actualmente se encuentran disponibles comercialmente con el agregado de
agar.
Según su composición:
A causa de los requerimientos químicos del mundo microbiano, a veces es

necesario agregar o eliminar componentes químicos del medio.
a. COMUNES O UNIVERSALES:
Su finalidad es el crecimiento de la mayor parte de los microorganismos
poco existentes. Es el medio más frecuentemente utilizado para mantener
colonias microbianas. Por ejemlo: agar común o caldo común.
b. ENRIQUECIDOS:
Están compuestos de un medio base como apoyo del crecimiento al cual se
le puede agregar un gran exceso de nutrientes como suplementos
nutritivos, por ejemplo: sangre, suero, líquido ascítico, etc. Se utiliza para
microorganismos que tienen grandes exigencias nutricionales.
c. SELECTIVOS:
Son sólidos en los que la selectividad se consigue alterando las condiciones
físicas del medio o añadiendo o suprimiendo componentes químicos
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específicos con el fin de inhibir el crecimiento de especies químicas cuyo
crecimiento no interesa. Este tipo de medio sólo permite el crecimiento de
un grupo de microorganismos e inhibiendo el de otros. Se utiliza para
seleccionar y aislar microorganismos a partir de poblaciones mixtas. Por
ejemplo, Agar salado-manitol o Chapman (permite el crecimiento de
ciertos estafilococos).
d. DIFERENCIALES:
Son medios de cultivos que nos permiten distinguir entre varios géneros y
especies de microorganismos. Por ejemplo si al medio se le ha añadido un
carbohidrato y un indicador y la bacteria que se cultiva es capaz de
fermentar dicho carbohidrato, se produce una acidificación del medio con
el consiguiente viraje de color del indicador por el cambio de pH. El citrato
de Simmons es un medio cuya única fuente de carbono es el citrato sódico,
entonces en él solo crecerán las bacterias capaces de desarrollarse
utilizando como única fuente de carbono ese componente. A menudo la
separación se basa en la diferencia de color de las colonias aisladas, como
en el agar con azul de metileno - eosina que permite diferenciar E. coli
(colonias oscuras y de brillo metálico) de Enterobacter aerogenes (colonias
rosadas de centro azul sin brillo). Estos dos microorganismos en agar
nutritivo producen colonias de color gris blancuzco. Suelen ser a la vez
selectivos, por lo tanto, solo crecerán determinadas bacterias (pueden ser
dos o más tipos) que, al actuar sobre alguno de los componentes
específicos del medio, demuestran algunas de sus propiedades o
características y nos permite diferenciar entre ambos tipos.
e. DE ENRIQUECIMIENTO:
Son medios líquidos que contienen un agente que inhibe las especies no
deseadas pero que favorece el crecimiento irrestricto del agente infeccioso.
El medio de Muller - Kauffman, permite el crecimiento de Salmonella
inhibiendo a su vez el de numerosos coliformes. Esto es de gran
importancia ya que en ciertas muestras, por ejemplo fecales, el agente
infeccioso (Salmonella) es frágil y puede ser superado en número por
agente bacterianos indígenas como E. coli; por lo tanto antes de realizar las
pruebas de laboratorio es necesario aumentar su número con respecto a ésta
en un caldo de enriquecimiento. Ejemplo de este tipo son los caldo de
tetrationato y selenito. El agua de peptona alcalina se utiliza para Vibrio
cholerae. El enriquecimiento es una técnica que utiliza un medio selectivo
líquido para permitir el desarrollo de un microorganismo a partir de una
muestra que contiene una gran variedad de microorganismos. Así, aquellos
microorganismos para los que el ambiente sea más favorable crecerán más
que los otros y finalmente serán predominantes.
f. DE TRANSPORTE:
Son utilizados para asegurar la viabilidad de la bacteria sin multiplicación
significativa de los microorganismos desde el momento de su extracción
hasta su posterior estudio. Se utilizan generalmente cuando las muestras
11
deben ser enviadas de un laboratorio a otro. Se recomienda un límite de dos
horas desde la recolección de las muestras y su estudio en el laboratorio,
pero este límite de tiempo es superado (frecuentemente cuando se trata de
muestras tomadas en un consultorio). Esta demora hace necesario el uso de
medios de transporte adecuados. Los medios de transporte más
frecuentemente utilizados son los de Stuart, Amies y Carey - Blair. Existe
una unidad descartable de cultivo de transporte llamada Culterette que
consiste en un tapón estéril de poliestireno y un ampolla en la parte inferior
que se rompe cuando se ejerce presión liberando el medio de transporte de
Stuart alrededor del extremo del tapón impregnado en la muestra.
Hasta hace algunos años los componentes orgánicos mencionados debían
ser obtenidos por el microbiólogo y el medio de cultivo se preparaba en el
laboratorio. Actualmente se dispone comercialmente de la mayor parte de
los medios e incluso de sus componentes adicionales.
Un gran número de medios de cultivo usados en el laboratorio de
microbiología son mixtos, es decir que tienen como finalidad la de varios
grupos de los mencionados, por ejemplo, el agar S- S es selectivo
(puestiene un inhibidor: el verde brillante) y es a la vez un medio
diferencial (lleva lactosa y un indicador) que permite diferenciar las
bacterias fermentadoras o no de dicho polisacárido. El medio de Thayer y
Martin para Neisseria es un medio enriquecido (contiene plasma) y es
selectivo (tiene 3 antibióticos inhibidores de la flora bacteriana y fúngica:
colistina, vancomicina y nistatina).[ CITATION LOP06 \l 2058 ]
DEXTROSE TRYPTONE AGAR (DTA) (BASE) AGAR GLUCOSADO

PARA BACILLUS. Detección de esporulados termófilos (ICUMSA, NCA) y
demás Bacillus, alterativos o no. Bacillus cereus (ISO 7932).
COMPOSICIÓN
Extracto de levadura 1,500 g
Triptona 10,000 g
Glucosa 10,000 g
Cloruro sódico 5,000 g
Púrpura de bromocresol 0,015 g
Agar-Agar 12,000 g
(Fórmula por litro)
pH final: 7,0 ± 0,2
PREPARACIÓN
Disolver 38’5 g de medio en 1 litro de agua bidestilada. Calentar hasta ebullición,
agitando hasta la completa homogeneización. Autoclavar a 121 ºC durante 15
minutos. Para que el medio sea selectivo, añadir asépticamente 10 ml/l de
12
Polimixina B estéril (SMS009).
PARA USO EXCLUSIVO EN LABORATORIO MANTENGA EL BOTE BIEN
CERRADO EN LUGAR SECO, FRESCO Y OSCURO. AGITE EL BOTE
ANTES DE USAR.
DESHIDRATADO CODIGO: DMT183
CONTROL DE CALIDAD DEL MEDIO
Realizado en nuestro laboratorio; es prudente repetirlo en su laboratorio siempre
que varíen las condiciones (más de 3 meses sin usar, tras desinfectar laboratorio,
tras conservar a alta Tª, cuando adquiere aspectos extraños aunque no haya llegado
la fecha de caducidad teórica de la etiqueta)
DESHIDRATADO: Polvo fino, Verdoso
PREPARADO: Estéril, Violeta
CONTROL DE CRECIMIENTO 24-48 h a 30-37°C aproximadamente:
Bacillus cereus MKTA 10876, Excelente, colonias expandidas con intensa
acidificación del medio (viraje a amarillo). Con respecto a PCAestandarizado*,
recuento medio 218 %.
Bacillus subtilis MKTA 6633, Excelente, colonias expandidas sin acidificación del
medio (sin viraje). Con respecto a PCA estandarizado*, recuento medio 223 %.
Staphylococcus aureus MKTA 6538P, Crece, colonias redondas y discretas. Con
respecto a PCA estandarizado*, recuento medio 75 %.
Pseudomonas aeruginosa MKTA 27853, Inhibido.
Escherichia coli MKTA 25922, Inhibido.
* El que cumple con recuperación superior al 92-125% con respecto a cepas
cuantitativas trazables a cepa tipo.
PRESENTACION: TUBOS PREPARADOS INCLINADOS, FRASCOS 100

ml, MEDIO DESHIDRATADO.
DEXTROSE TRYPTONE AGAR (DTA) es un medio para la detección de
esporulados termófilos acidificantes en alimentos, incluido Bacillus coagulans. Y
para detección y recuento de esporulados aerobios del aire, de las superficies y de
otras muestras.
SIEMBRA
Para aerobios esporulados, a fin de
germinar las esporas,. calentar el
tubo con dilución madre y el de
dilución –1 en un baño a 80ºC
durante un minuto exacto, sacar y
poner en un baño de agua con hielo
durante 1 hora.
Sembrar 0,1 ml de la muestra y su
serie de diluciones decimales en
superficie de placas duplicadas; o
bien sembrar en estría en los tubos
13
inclinados. O bien sembrar por impacto en placa de contacto con un muestreador
tipo MICROFLOW.
Incubar 2-3 días a 30 ºC aproximadamente, o bien 36-48 horas a 55 ºC

aproximadamente en un incubador húmedo para prevenir la desecación del medio.
Para detectar también la población de cepas termófilas puede ser necesario realizar
un duplicado, e incubarlo tras darle a la placa sembrada un shock térmico de 1-4
horas a 55°C aproximadamente. Para confirmar B.cereus, según Norma ISO 7932,
incubar sólo 24 h a 30°C aproximadamente y observar el viraje del medio lila a
amarillo.
INTERPRETACIÓN
B. coagulans forma colonias en “flat sour” amarillo-verdosas. B.cereus crece en
sólo 24 horas a 30°C con colonias amarillas que viran el medio a amarillo.
La mayoría de especies de Bacillus crecen selectivamente en este medio. Use
KUS700 para identificar la especie de acuerdo con el Manual Berggey.
El usuario es el único responsable de la eliminación de los microorganismos según
la legislación medioambiental vigente. Autoclavar antes de desechar a la basura.
DESOXICOLATO CITRATO AGAR (D.C.A.)
DESOXICOLATO CITRATO AGAR (D.C.A.) es un Agar selectivo para el

aislamiento de Salmonella spp. y Shigella spp. en medicamentos, alimentos,
ambiente y muestras clínicas, asi como de otras enterobacterias y coliformes.
Pharmacopea medio J.
COMPOSICIÓN
Extracto de carne 10,0 g
Peptona de carne 5,0 g
Lactosa 10,0 g
Citrato Sódico 20,0 g
Tiosulfato sódico 5,0 g
Citrato Férrico 1,0 g
Desoxicolato Sódico 5,0 g
Rojo neutro 0,02 g
Agar-Agar 13,5 g
pH final: 7,0 ± 0,2
PREPARACIÓN
Disolver 69,5 gramos en 1 litro de agua bidestilada. Agitar calentando hasta
ebullición. No Autoclavar! No sobrecalentar! El color final del medio es rosa
pálido, traslúcido, con un fino precipitado de desoxicolato. No refundir!
Para uso exclusivo en laboratorio. agite el bote antes de usar, para asegurar la
homogeneización de los eventuales gradientes de densidad de los componentes.
14
mantenga el bote bien cerrado en lugar seco, fresco y oscuro.
deshidratado codigo: dmt037
CONTROL DE CALIDAD DEL MEDIO:
la fecha de caducidad teórica de la etiqueta).
DESHIDRATADO: Polvo grueso, rosado
PREPARADO: Estéril, rosa pálido
EVALUACIÓN DEL RENDIMIENTO ISO/TS 11133-2 24-48 h a 37 ºC:

Salmonella abony MKTN 6017, Colonias transparentes, amarillentas, con centro
negro. PR > 0,5, en concreto >50-96% de colonias respecto al número de ufc
certificadas e inoculadas en TSA; esta variabilidad de la productividad depende de
la composición y carga de la flora acompañante inoculada. Si procede de
enriquecimiento, buen crecimiento en estría.
Shigella flexneri MKTA 12022, colonias incoloras/rosadas.
Citrobacter freundii MKT 8090, Crece con colonias rojas-rosas con centro negro
y precipitado en el medio.
Proteus mirabilis MKT 14153, Crece con colonias amarillas, invasivas, con
centro gris-negro y olor a pescado.
E. coli MKTA 25922, Inhibición parcial o total, colonias grandes, rosas-rojas con
precipitado en el medio.
Enterococcus faecalis MKTN 775, Inhibición completa: Ni una sola colonia.
Staphylococcus aureus MKTA 6538P, Inhibición completa: Ni una sola colonia.
Las colecciones TIPO prohiben el uso de su referencia por lo que indicamos la
nuestra, directamente trazable a la colección TIPO.
PRESENTACIÓN:
MEDIO DESHIDRATADO, TUBOS inclinados con pico largo.
NOTA: Se utiliza para diferenciar enterobacterias y coliformes y en particular
para detectar S.paratyphi. El desoxicolato sódico reduce el crecimiento de gram
positivos. La degradación de lactosa en ácidos se detecta por el color rosa-rojo del
rojo neutro. Los no fermentadores de lactosa crecen con colonias incoloras. La
formación de sulfuro de hidrógeno se detecta por la aparición de óxido de hierro
negro en el centro de las colonias.
PRESENTACIÓN: MEDIO DESHIDRATADO.
SIEMBRA E INTERPRETACIÓN DESOXICOLATO CITRATO AGAR

(D.C.A.)
Sembrar en estría, para aislar colonias, a partir del caldo enriquecido. Incubar 18-
24 horas a 37°C.
Colonias rosas-rojas, con o sin centro negro: Escherichia, Enterobacter, Klebsiella.
Colonias incoloras, con o sin centro negro: Salmonella, Proteus.
15
Colonias incoloras sin centro negro: Shigella, Pseudomonas. Identificar las
colonias mediante galerías adecuadas (KBH260).
ASPARAGINE PSEUDOMONAS BROTH
ASPARAGINE PSEUDOMONAS BROTH es un caldo APHA y CENAN para la

detección y enumeración NMP presuntivas de Pseudomonas aeruginosa en aguas
embotelladas, refrescos, aguas de baño y otros líquidos. Tambien útil para detectar
y enumerar las bacterias gram negativas no fermentadoras.
COMPOSICIÓN
Fosfato monopotásico 10,0 g
Fosfato dipotásico 1,0 g
Asparagina 2,0 g
Sulfato magnésico 0,5 g
pH final: 7,0 ± 0,2
PREPARACIÓN
Disolver 13,5 gramos en 1 litro de agua bidestilada que contenga 8 ml de glicerol.
Agitar hasta su completa disolución. Autoclavar a 121° C durante 15 minutos. Para
obtener el caldo a doble concentración, disolver 27 g en 1 litro de agua bidestilada
que contenga 16 ml de glicerol. El color final del medio es paja-verdoso.
Para uso exclusivo en laboratorio. agite el bote antes de usar, para asegurar la
homogeneización de los eventuales gradientes de densidad de los componentes.
mantenga el bote bien cerrado en lugar seco, fresco y oscuro.
CONTROL DE CALIDAD DEL MEDIO:

DESHIDRATADO: Polvo grueso, Crema
PREPARADO: Estéril, Paja-verdoso
CONTROL DE CRECIMIENTO 24-48 h a 35-37°C aproximadamente:

Pseudomonas aeruginosa MKTA 27853, Correcto, turbidez.
Pseudomonas aeruginosa MKTA 10145, Correcto, turbidez.
Staphylococcus aureus MKTA 6538P Inhibido
SIEMBRA E INTERPRETACIÓN
Medio que permite el correcto enriquecimiento de Pseudomonas aeruginosa por
16
ser estrictamente mineral, con la Asparagina como única fuente de nitrógeno y la
glicerina como única fuente de hidratos de carbono. Los demás componentes
tamponan y proporcionan minerales. En principio, sólo los Gram negativos no
fermentadores pueden crecer en estas condiciones.
Se recomienda para la enumeración NMP mediante 5 tubos/series inoculando 10
ml, 1 ml y 0,1 ml de muestra.
Los tubos se incuban a 35 °C durante 24-48 horas.
Pseudomonas aeruginosa hidroliza la asparagina, convirtiéndola en ácido
aspártico. La aparición de crecimiento mediante turbidez (aparezca o no
pigmentación fluorescente) se considera presuntiva de la presencia de
Pseudomonas aeruginosa. y/o de otros Gram negativos No fermentadores.
Mediante el NMP se determina su concentración en la muestra.
Confirmar los tubos turbios añadiendo una alícuota de cada uno en sendos tubos
de caldo Acetamida (DMT003) que virarán, tras incubarse y añadir reactivo
Nessler (SDA002), a amarillo-pardo, si la presencia de Pseudomonas aeruginosa
es auténtica.
ACIDOTERMÓFILOS OSMOTOLERANTES G.P.Y. BROTH
ACIDOTERMÓFILOS OSMOTOLERANTES G.P.Y. BROTH para recuento

total de microorganismos acidotermófilos y osmotolerantes en alimentos. Detecta
los heterotrofos osmoacidotolerantes que fermentan la glucosa con producción de
gas.
COMPOSICIÓN
Peptona de Carne 5,0 g
Extracto de Levadura 5,0 g
Glucosa 40,0 g (Fórmula por litro)
pH final: Ajustar hasta 3,8 ± 0,2
PREPARACIÓN
Disolver 50 gramos en 1 litro de agua
bidestilada. Ajustar pH a 3,8. Calentar,
agitando, hasta ebullición, para su total
homogeneización.
Añadir 10 ml por tubo con campana
Durham. Autoclavar a 121ºC durante
15 minutos. Incubar 2-7 días a la
temperatura óptima para los
microorganismos buscados, en general 20-35°C. Contar por el método NMP o
bien, para detección, dar como positivo todo tubo turbio con gas retenido en la
campana.
17
PARA USO EXCLUSIVO EN LABORATORIO.
MANTENGA EL BOTE BIEN CERRADO EN LUGAR SECO, FRESCO Y
OSCURO.
AGITE EL BOTE ANTES DE USAR. DESHIDRATADO
CODIGO: DMT223
CONTROL DE CALIDAD DEL MEDIO ACIDOTERMÓFILOS
OSMOTOLERANTES G.P.Y. BROTH
DESHIDRATADO: Polvo grueso, Crema PREPARADO: Estéril, Crema
Zygosaccharomyces pombe MKTA 24751, Correcto, turbidez y producción de
gas.
PRESENTACIÓN: TUBOS 20 ml, FRASCOS 100 ml, MEDIO
DESHIDRATADO.
Si desea más información sobre nuestro ACIDOTERMÓFILOS
CROMOKIT MAXIM-AGAR CROMOGÉNICO
CROMOKIT MAXIM-AGAR CROMOGÉNICO Recuento total con máxima

recuperación en alimentos, aguas y cosméticos, basado en PCA
(FIL,IDF,AOAC,APHA,ICMSF), diferenciando las colonias, incluso las más
diminutas, de las partículas y del medio.
Recuperación superior (122%) al PCA y 116% respecto al TSA.
COMPOSICIÓN
Triptona 5,0 g
Extracto de Levadura 2,5 g
Glucosa 1,0 g
Factores doping MICROKIT 8,0 g
Agar-agar 10,5 g
Cromógeno termoestable c.s.
pH final: 6,8 ± 0,2
PREPARACIÓN
Disolver 27 g de medio en 1 litro de
agua destilada.
Calentar hasta ebullición, agitando
para su completa disolución.
Repartir en tubos o frascos.
Autoclavar a 121 ºC durante 15 min o
preferiblemente a 116°C durante 15 minutos. No sobrecalentar ni mantener
fundido mucho tiempo. Refundir sólo una vez. El color final del medio es blanco-
18
crema. A veces, por sobrecalentamiento, adquiere un tono rosado que retorna al
crema cuando se vuelve a enfriar el medio, lo cual no afecta los resultados.
PARA USO EXCLUSIVO EN LABORATORIO.
OSCURO.
AGITE EL BOTE ANTES DE USAR.
DESHIDRATADO CODIGO: BCD515
CONTROL DE CALIDAD DEL MEDIO CROMOKIT MAXIM-AGAR

CROMOGÉNICO
DESHIDRATADO: Polvo grueso, Crema
PREPARADO: Estéril, Crema
EVALUACIÓN DEL RENDIMIENTO ISO/TS 11133-2 24-48 h a 37 ºC o
mejor 72 h a 30 ºC, aplicando el método ISO 4833, ISO 2293.
Staphylococcus aureus MKTA 6538P, Excelente, colonias rojas, PR >70% en
concreto 99-164 % * de colonias respecto al número de ufc certificadas e
inoculadas en TSA. Bacillus subtilis MKTA 6633, Excelente, colonias rojas, PR
>70% en concreto 99-129 % * de colonias respecto al número de ufc certificadas e
inoculadas en TSA.
Micrococcus luteus MKTA 9341, Excelente, Colonias rojas en 48 h, crecen
mucho más rápido y mejor que en TSA, y mejor a temperatura ambiente.
Enterococcus faecalis MKTA 29212, Excelente, colonias rojas, PR >70% en
concreto 99-191 % *de colonias respecto al número de ufc certificadas e
inoculadas en TSA.
Pseudomonas aeruginosa MKTA 9027, Excelente, colonias rojas. * Esta
variabilidad de la productividad depende de la composición y carga de la flora
acompañante inoculada. Las colecciones TIPO prohiben el uso de su referencia
por lo que indicamos la nuestra, directamente trazable a la colección
TIPO.
PRESENTACIÓN: TUBOS 20 ml, FRASCOS 100 ml, MEDIO
DESHIDRATADO.
Recuento total standard de bacterias aerobias en alimentos, aguas, productos
farmacéuticos, cosméticos y otros productos. Las colonias crecen en distintos
tonos del rojo: rosa, naranja, purpura…. sobre el tono crema del medio (excepto
ciertos acidolácticos y ciertas levaduras, que crecen con colonias blancas, sin
viraje, por lo que este medio los distingue de los aerobios). El color no afecta a las
pruebas de identificación posteriores que quisiera realizar.
MODO DE EMPLEO E INTERPRETACIÓN DE RESULTADOS
Inocular 1 ml de muestra y su serie de diluciones decimales, en masa. Incubar a 30
ºC aproximadamente durante 48 horas. Con flora psicotrofa, incubar a 6 ºC
19
aproximadamente durante 10 días y con flora termófila, incubar a 55 ºC
aproximadamente durante 48 horas.
Contar todas las colonias. La recuperación supera el 20% por encima de la
obtenida en PCA y el 16% por encima de la obtenida en TSA. Esta fórmula, con
menos agar, aumenta la sensibilidad del medio frente a los aerobios más lábiles, al
permitir una mejor oxigenación del fondo. Este medio está diseñado para siembra
en masa. Si desea sembrar en superficie, añada 3-5 g/l de Agar-Agar (BCB006), o
utilice 30-32 g/l de este mismo medio. Para minimizar la desecación en muestreos
de aire y superficies, o para siembra en Spiral, añadir 2 gotas de antiburbujas
(SBL001) por cada litro de agua, antes de añadir el medio y antes de autoclavar.
Para contar por separado las bacterias, de las levaduras y mohos, añadir a un
duplicado, enfriado a 45°C, 0,05-0,5 g/l de Cicloheximida (SKM200): En la placa
con CEX sólo crecerán las bacterias y en la placa sin CEX , la suma de bacterias +
levaduras y mohos.
AEROMONAS AGAR (BILE SALT IRGASAN BRILLIANT GREEN AGAR)
AEROMONAS AGAR (BILE SALT IRGASAN BRILLIANT GREEN AGAR) es

un Agar selectivo para el aislamiento y la enumeración de Aeromonas spp. en
alimentos, aguas, ambiente y muestras clínicas.
PREPARACIÓN
Disolver 45,5 gramos en 1 litro de agua bidestilada. Agitar calentando hasta
ebullición. No autoclavar! No sobrecalentar! El color final del medio es púrpura.
No refundir!
PARA USO EXCLUSIVO EN LABORATORIO. AGITE EL BOTE ANTES DE
USAR, PARA ASEGURAR LA HOMOGENEIZACIÓN DE LOS
EVENTUALES GRADIENTES DE DENSIDAD DE LOS OMPONENTES.
OSCURO.
CONTROL DE CALIDAD DEL MEDIO

tras conservar a alta Tª, cuando adquiere aspectos extraños aunque no haya
llegado la fecha de caducidad teórica de la etiqueta).
DESHIDRATADO: Polvo grueso, púrpura PREPARADO: Estéril, púrpura

CONTROL DE CRECIMIENTO 18-24 horas a 37°C aproximadamente:
Aeromonas hydrophila MKTA 49140, Excelente, colonias rosas traslúcidas de 0,5-
3 mm. Pseudomonas aeruginosa MKTA 10662, Excelente, colonias rosas
20
traslúcidas de 0,5-1 mm. Staphylococcus aureus MKT 6571, Inhibido. E.coli MKT
9001, Inhibido.
NOTA: Basando su selectividad en el verde brillante e irgasan, no inhibe las cepas

de Aeromonas sensibles a la ampicilina que es empleada en otros medios.
SIEMBRA E INTERPRETACIÓN: En muestras clínicas, sembrar en superficie,

en estría para aislar colonias. En muestras ambientales de agua, sembrar la
membrana filtrada evitando la aparición de burbujas o de pliegues.
En muestras de alimentos incubar previamente 18-24 horas a 37°C en agua de
peptona alcalina (DMT151) y sembrar después un inóculo enriquecido en estría. El
uso de este enriquecimiento en la investigación de Aeromonas spp. aumenta su
frecuencia de detección hasta en un 40% de los casos.
Incubar 18-24 horas a 37°C.
Examinar las colonias típicas de Aeromonas: rosas y transparentes de 0,5-3 mm de
diámetro. Identificarlas mediante la oxidasa (KOT050) y el medio O/F (DMT095):
Aeromonas es oxidasa positiva y muestra ambos metabolismos (oxidativo y
fermentativo), mientras Pseudomonas, que también es oxidasa positivo, no tiene
metabolismo fermentativo. También pueden diferenciarse mediante TSI Agar
(DMT127) porque Aeromonas crece con fondo ácido (amarillo) y pico alcalino
(rojo) o inalterado (naranja), mientras Pseudomonas crece con fondo y pico
inalterados (naranja).
Identificar la especie con galerías adecuadas.
NOTA: Por lo general, las Aeromonas pueden crecer bien sobre los medios de
cultivo convencionales en el laboratorio, tales como agar MacConkey, agar
Hektoen, agar xilosa-lisina-desoxicolato (XLD), agar Salmonella-Shigella (SS) y
agar nutriente sin adición de sales. Sin embargo estos medios no son selectivos
para ellas y los coliformes acompañantes enmascaran y dificultan su detección.
Diferentes medios de cultivo y métodos para el aislamiento de Aeromonas sp. de
aguas se han propuesto: (APHA, 1989; Havelaar et al., 1987; Nishikawa y Kishi,
1987; Kersters et al., 1996), Agar Ampicilina Dextrina (ADA), Agar Sangre con
Ampicilina (ASA), Agar CIN (Cefsulodina-Irgasan- Novobiocina, originalmente
creado para Yersinia enterocolitica). Este ultimo permite el crecimiento de la
mayoría de las especies y, en algunos estudios, consigue un incremento del 35%
en las tasas de aislamiento. Sin embargo lo ideal para el estudio de las bacterias
pertenecientes a la familia Aeromonadaceae es seguir los esquemas de Janda y col.
y Satcher: se inocula un tubo con agua peptonada alcalina a pH 8,4, con el fin de
incrementar el desarrollo de especies de los géneros Aeromonas y Plesiomonas,
este caldo se incuba a 37°C durante 4 a 6 horas en condiciones de aerobiosis, al
cabo de ese tiempo se siembra en Agar Nutritivo, Agar Ampicilina-Almidón, Agar
Almidón-Sales Biliares-Verde Brillante (BBGS) según Nishikawa y Kishi o mejor
21
el presente agar Aeromonas Irgasan-Sales Biliares-Verde Brillante, incubando a
37°C, en condiciones de aerobiosis durante 24 a 48 horas. Se valoran las colonias
obtenidas y se purifican las colonias de interés para su identificación bioquímica o
molecular [ CITATION Sa15 \l 2058 ]
CLASIFICACIÓN DE LOS MEDIOS DE CULTIVO

En los laboratorios de microbiología se utilizan diferentes tipos de medios de
cultivo que pueden ser preparados en forma líquida o en forma sólida. Usualmente
para preparar un medio sólido se parte de un medio líquido al que se le añade un
agente solidificante como el agar, la gelatina o la sílicagel
Los medios de cultivo se pueden clasificar de acuerdo a la naturaleza de sus
constituyentes en:
a. Medios Líquidos
Conocidos como caldos, estos son especialmente útiles para hacer diluciones, para
homogenizar mezclas de microorganismos, para enriquecer cultivos y para
rehidratar cepas liofilizadas.
b. Medios Sólidos.
Para separar microorganismos y favorecer el desarrollo de las colonias aisladas en
las que es posible observar las características típicas de un solo tipo de
microorganismo.
c. Medios Semisólidos
Son aquellos medios líquidos a los que se adiciona agar en concentraciones de 0.4
a 0.8%. Estos se emplean para determinar la movilidad de los microorganismos
microaerofílicos. Los medios de cultivo se pueden preparar en el laboratorio a
partir de cada uno de sus constituyentes básicos o por simple rehidratación de
productos asequibles comercialmente (medios de cultivo deshidratados).
Generalmente se prefiere el uso de los medios de cultivo deshidratado porque,
además de simplificar el trabajo, con ellos se tiene mayor probabilidad de obtener
resultados reproducibles.
Medios naturales o complejos
Constituidos por sustancias complejas de origen animal o vegetal, las que son
usualmente complementadas por la adición de minerales y otras sustancias. En
ellos no se conocen todos los componentes ni las cantidades exactas presentes de
cada uno de ellos.
Medios definidos o sintéticos
Son los medios que tienen una composición química definida cualitativa y
cuantitativamente.
Generalmente se usan en trabajos de investigación.
Medios de enriquecimiento
Son medios líquidos que favorecen el crecimiento de un tipo de microorganismos
en particular.
Permiten aumentar el número de microorganismos de ese tipo. Usualmente
contienen una o más sustancias inhibidoras del crecimiento de los
microorganismos con excepción de los que se quieren cultivar.
22
Medios selectivos
Son parecidos a los de enriquecimiento, se diferencian por ser medios sólidos y
están diseñados para el aislamiento de microorganismos específicos.
Medios diferenciales
Son medios que contienen indicadores de productos derivados de la actividad
microbiana de los microorganismos. No contienen ningún tipo de sustancia con
actividad antimicrobiana.
Permiten revelar características fisiológicas de los microorganismos
Medios indicadores.
Son todos aquellos en los cuales se busca valorar características metabólicas
especiales de cada especie de bacteria.
23
IV.2. Bases Conceptuales
Dar el concepto de términos científicos, utilizados en la práctica. Como mínimo 5

términos, señalando el autor que lo dice y el año de publicación.
24
V. METODOLOGÍA Y MATERIALES
V.1. Metodología
V.1.1. Método
PREPARACIÓN DE CULTIVOS
Se prepararán los siguientes medios de cultivo: Agar Citrato de Simmons, Caldo
Triptona, Caldo MRVP, Agar TSI, Caldo Urea y Agar nutritivo.
La composición de los medios de cultivo se encuentra en el inserto o etiqueta del
envase.
Los métodos de preparación son los siguientes:
1. Agar citrato de Simmons: Se toman 24,2 g del medio y se disuelven en 1L de agua
destilada.
Calentar en baño de María hasta que se complete la disolución. Dispensar en tubos de
vidrio, tapar y esterilizar en autoclave a 121°C (15 libras de presión) durante 15
minutos. Dejar enfriar los tubos en posición inclinada.
2. Caldo Triptona: Disuelva 15 g de Agua Triptona en 1L de agua destilada. Dispensar

en tubos de vidrio, tapar y esterilizar en autoclave a 121°C (15 libras de presión)
durante 15 minutos.
3. Caldo MRVP: Disuelva 17 g de medio MRVP en 1L de agua destilada. Calentar en

baño María hasta que se complete la disolución. Dispensar en tubos de vidrio, tapar y
esterilizar en autoclave a 121°C (15 libras de presión) durante 15 minutos.
4. Agar TSI: Se toman 62,5 g del medio y se disuelven en 1L de agua destilada.

Calentar en baño María hasta que se complete la disolución. Dispensar en tubos de
vidrio, tapar y esterilizar en autoclave a 121°C (15 libras de presión) durante 15
minutos. Dejar enfriar los tubos en posición inclinada.
5. Caldo urea: Disolver 38,7g del medio en 1L de agua destilada. Cuando la disolución
estevcompleta, esterilizar por filtración y distribuir en tubos de ensayo.
6. Agar nutritivo: Disolver 31g del medio en 1L de agua destilada. Calentar en baño de
María hasta que se complete la disolución. Dispensar en una botella de vidrio de 1L,
tapar y esterilizar en autoclave a 121°C (15 libras de presión) durante 15 minutos. Una
vez esterilizada y la mezcla a una temperatura tibia (al contacto de la piel no quema),
dispensar en cajas de Petri, evitando la formación de burbujas.
Una vez preparado todos los medios, y después de dejarlos enfriar, se guardarán en el
equipo de frio (nevera) a 4ºC.
25
V.1.2. Materiales
V.1.2.1. Equipos:
 Mecheros.
 Autoclave.
 Equipo de frio.
 Incubadora.
 Baño maría.
 Balanza analítica
V.1.2.2. Instrumentos
 Caja de Petri.
 Aza de siembra.
 Espátula.
 Probetade 1 L.
 Espátula.
 Tubos de ensayo.
 Vaso Erlenmeyer de 500 ml y 1000 ml.
V.1.2.3. Reactivos
 Agua destilada.
 2. Alcohol al 70%.
 3. Agar citrato de Simmons.
 4. Caldo Triptona.
 5. Caldo MRVP.
 6. Agar TSI.
 7. Caldo Urea.
 8. Agar nutritivo.
V.1.2.3.1. Material biológico

 Muestras de alimentos sólidos y líquidos.
V.1.2.4. Material de escritorio

 Lapicero
 Libreta
 celular
26
VI. RESULTADOS
I. Señalización de la composición de los principales medios de cultivos de laboratorio
microbiológico.
COMPOSICIÓN (g / l):
Pluripeptona 7.0 g Tabla 1 COMPOSICION DE AGAR
Glucosa 5.0 g CITRATO DE SIMNONS
Fosfato dipotásico 5.0 g
COMPOCISION EN Gr/L
Fosfato monoamónico 0,20 g
Cloruro sódico 5,00 g
Citrato de sodio tribás. 2,00 g
Sulfato magnésico 0,20 g
Azul bromotimol 0,08 g
Fosfato sodio-amónico 0,80 g
Agar-bacteriologico 15,00 g
Fosfato dipotásico 1g
Dihidrogeno de amonio 1g
Fuente: Britania Sim m onscitrato agar pág. 1
CALDO TRIPTONA
Tabla 2: COMPOCISION DE CALDO TRIPTONA
Triptona 10 g
Cloruro de Sodio 5g
L-Triptofano 1g
Fuente: WINKLER,Caldo triptona pag.1
Tabla 3: COMPOCISION DE CALDO MR VP(ROJO DE METILO VOGES

PROSKAUER)
27
Fuente: Britania MR. VP Medio Pág. 1
Tabla 4: COMPOCISION DE AGAR TSI (TRIPLE SUGAR IRON)
Extracto de carne 3.0 g
Pluripeptona 20.0 g
Cloruro de sodio 5.0 g
Lactosa 10.0 g
Sacarosa 10.0 g
Glucosa 1.0 g
Sulfato de hierro y amonio 0.2 g
Tiosulfato de sodio 0.2 g
Rojo de fenol 0.025 g
Agar 13.0 g
Fuente: Ewing,1985 Agar TSI pág. 1
Tabla 5: COMPOCISION DE CALDO UREA
Fosfato dipotásico 9.5 g

Rojo fenol 0.01 g
Extracto de levadura 0.1 g
Fosfato monopotasico 9.1 g
Urea 20.0 g
Fuente:Condala b Caldo Urea (2019) pág. 1
Tabla 6: COMPOCISION DE AGAR NUTRITIVO
28
Pluripeptona 5.0 g
Extracto de carne 3.0 g
Cloruro de sodio 8.0 g
Agar 15.0 g
Fuente: MacFaddin,1985 pág. 1
II. Señalización de los procedimientos de preparación de cada medio de cultivo (graficar).
GRAFICO 1:PREPARACIÓN DEL AGAR CITRATO DE SIMMONS:
1. Suspender 24,2 g
Agar Citrato de del polvo en 1 litro
Simmons de agua purificada.
4. Distribuir en 3. Calentar con

tubos y esterilizar agitación frecuente y
en autoclave a llevar a ebullición 2. Dejar reposar 5
121°C durante 15 por 1o 2 minutos para minutos.
29
minutos. dilución total.
5. Enfriar y
solidificar en
posición inclinada
(pico de flauta).
[ CITATION Lab15 \l 10250 ] • Preparación del Agar Citrato de Simmons.
GRAFICO 2:PREPARACIÓN DEL CALDO TRIPTONA:
1. Suspender 30 g del
polvo en 1 litro de
Caldo Triptona agua purificada.
4. Distribuir en tubos u 3. Calentar con

otros recipientes y agitación frecuente y
esterilizar en autoclave llevar a ebullición 2. Dejar reposar
30 5
a 118-121°C durante 15 hasta disolver minutos.
minutos. completamente.
[ CITATION Lab151 \l 10250 ] Preparación del Caldo Triptona.
GRAFICO 3:PREPARACIÓN DEL CALDO MRVP:
polvo en 1 litro de
Caldo MRVP agua purificada.

tubos y esterilizar agitación frecuente y
en autoclave a llevar a ebullición 2. Dejar reposar 5
118-121°C para disolución total. minutos.
31
durante 15
minutos.
[ CITATION Lab152 \l 10250 ] Preparación del Caldo MRVP.
GRAFICO 4:PREPARACIÓN DEL AGAR TSI:
1. Suspender 62,5 g
del polvo en 1 litro
Agar TSI de agua purificada.
4. Distribuir en
3. Mezclar bien y
tubos llenándolos
calentar con 32
con un volumen 2. Dejar reposar 5
agitación frecuente y
que ocupe hasta la minutos.
hervir 1 o 2 minutos
tercera parte de
hasta disolución
los mismos.
5. Esterilizar en
autoclave a 121°C 6. Enfriar y
durante 15 solidificar en
minutos. posición inclinada
(pico de flauta).
[ CITATION Lab10 \l 10250 ] Preparación del Agar TSI.
GRAFICO 5:PREPARACIÓN DEL CALDO UREA:
Caldo Urea polvo en 950 ml de
agua purificada
33
recipientes agitación frecuente y
apropiados y 2. Dejar reposar 5
llevar a ebullición
esterilizar en minutos.
para disolución total.
autoclave a 121°C
durante 15
minutos
5. Enfriar a 50°C y
agregar 50 ml. De una 6. Fraccionar en
solución de urea al tubos y dejar
40% previamente solidificar el medio
v
esterilizada por en posición
filtración o inclinada (pico de
cloroformo. flauta).
 [ CITATION Lab153 \l 10250 ] Preparación del Caldo Urea.
GRAFICO 6:PREPARACIÓN DEL AGAR NUTRITIVO:
polvo en 1 litro de
Agar nutritivo agua purificada.
4. Distribuir en 3. Calentar agitando

recipientes frecuentemente y 34
2. Dejar reposar 5
apropiados y hervir 1 o 2 minutos minutos.
esterilizar en hasta su disolución
autoclave a 121°C total.
III. Indicaciones de que microorganismos se desarrolla en cada medio de cultivo
microbiológico.
Tabla 7:MICROORGANISMOS QUE SE DESARROLLAN EN AGAR CITRATO DE

SIMNONS
MICROORGANISMOS CRECIMIENTO COLOR DEL MEDIO

Klebsiella pneumoniae SATISFECHO AZUL
ATCC 700603
Salmonella typhimurium SATISFECHO AZUL
ATCC 1 4028
Pseudomonas aeruginosa SATISFECHO AZUL
ATCC 27853
Enterobacter aerogenes SATISFECHO AZUL
ATCC 13048
Salmonella enteritidis SATISFECHO AZUL
ATCC 13076
35
Shigella dysenteriae NEGATIVO VERDE
ATCC 13313
Salmonella typhi NEGATIVO VERDE
ATCC 19430
Escherichia coli NEGATIVO VERDE
ATCC 25922
Shigella Flexneri NEGATIVO VERDE
ATCC 12022
Fuente: Britania Sim m onscitrato agar pág. 2
Tabla 8: MICROORGANISMOS QUE SE DESARROLLAN EN CALDO TRIPTONA
MICROORGANIZMOS CRECIMIENTO COLOR DEL MEDIO

Escherichia coli POSITIVA AZUL
ATCC 25922
Klebsiella pneumoniae NEGATIVA VERDE
ATCC 13833
Fuente: WINKLER LTDA,2015 pág. 2
Tabla 9: MICROORGANIZMOS QUE SE DESARROLLAN EN CALDO MR VP

(ROJO DE METILO VOGES PROSKAUER)
MICROORGANISMO CRECIMIENTO PRUEBA DEL PRUEBA DE

S ROJO METILO VOGUES
PROSKAUER
Escherichia coli SATISFACTORIO + -
ATCC 25922
Klebsiella pneumoniae SATISFACTORIO - +
ATCC 700603
Proteus mirabilis SATISFACTORIO + -
ATCC 4307
Salmonella SATISFACTORIO + -
typhimurium
ATCC 14028
Enterobacter cloacae SATISFACTORIO - +
ATCC 13047
Fuente: Clark W.M 1915 pág. 2
36
Tabla 10: MICROORGANIZMOS QUE SE DESARROLLAN EN AGAR TSI
(TRIPLE SUGAR IRON)
MICROORGANISMOS SUPERFICIE PROFUNDIDA PRODUCCI PRODUCCIO

D ON DE GAS N DE SH2
Echerichia coli ATCC 25922 Reacción acida Reacción acida + -
(color amarillo) (color amarillo)
Klebsiella pneumoniae Reacción acida Reacción acida + -

ATCC 700603 (color amarillo) (color amarillo)
Proteus mirabilis Reacción Reacción acida - +
ATCC 43071 alcalina (color (color amarillo)
rojo)
Salmonella typhimurium Reacción Reacción acida - +
rojo)
Shigella flexneri Reacción Reacción acida - -
rojo)
Pseudomonas aeruginosa Reacción Reacción alcalina - -
ATCC 27853 alcalina (color (color rojo)
rojo)
Fuente: Ewing,1985 Agar TSI Pag 2
Tabla 11: MICROORGANIZMOS QUE SE DESARROLLAN EN CALDO UREA

Proteus vulgaris SATISFACTORIO AZUL
ATCC 13315
Klebsiella pneumoniae SATISFACTORIO AZUL
ATCC 13883
Salmonella typhimurium NEGATIVO VERDE
ATCC 14028
Echerichia coliATCC 25922 NEGATIVO VERDE
Fuente: Leonar A. J. 2019 Caldo Urea pág. 2
Tabla 12: MICROORGANISMOS QUE SE DESARROLLAN EN AGAR NUTRITIVO.

Echerichia coli SATISFACTORIO AZUL
ATCC 25922
Staphylococcus aureus SATISFECTORIO AZUL
ATCC 25923
Enterococcus faecalis SATISFECTORIO AZUL
ATCC29212
Pseudomonas aeruginosa SATISFACTORIO AZUL
ATCC 27853
Fuente: MacFaddin,1985 pág. 1
37
38
VII. ANÁLISIS Y DISCUSIONES
Se analiza y discute los resultados obtenidos en la práctica. Estos datos deben de ser
analizados, es decir interpretarlos y dar una opinión propia, resultado por resultado, es
decir, si tengo 4 resultados, deben de haber cuatro análisis. Luego, estos resultados
deben de ser discutidos con resultados de otras prácticas, de otros grupos de prácticas
y/o con las teorías dada en las bases teóricas.
ARIANA
39
VIII. CONCLUSIONES
De acuerdo a los objetivos de la práctica. Son conclusiones precisas, breves, deben ser
coherentes y tener lógica con los objetivos específicos de la práctica.
VARINIA
40
IX. CUESTIONARIO
1) ¿Por qué es importante los medios de cultivo dentro de una investigación?
Los medios de cultivo en una investigación ya sea en el campo agrícola como en la

medicina, industria alimentaria es importante ya que gracias a ello se puede hacer
el aislamiento de microorganismos tanto patógenos como benéficos y así
identificarlos para su posterior uso. (María, 2011)
2) ¿Cuáles son los factores de crecimiento de los microorganismos?
El desarrollo adecuado de los microorganismos en un medio de cultivo depende de

factores intrínsecos y extinticos
Factores intrínsecos:
a) disponibilidad de nutrientes adecuados
Un medio de cultivo adecuado para la investigación microbiológica ha de
contener, como mínimo, carbono, nitrógeno, azufre, fósforo y sales inorgánicas.
En muchos casos serán necesarias ciertas vitaminas y otras sustancias inductoras
del crecimiento
b) pH:
neutro, aunque los hay que requieren medios más o menos ácidos
c) presencia (o ausencia) de oxígeno y otros gases

Gran cantidad de bacterias pueden crecer en una atmósfera con tensión de oxígeno
normal. Algunas pueden obtener el oxígeno directamente de variados sustratos.
Pero los microorganismos anaerobios estrictos sólo se desarrollarán
adecuadamente en una atmósfera sin oxígeno ambiental.
Factores extrínsecos:
d) condiciones adecuadas de humedad
Un nivel mínimo de humedad, tanto en el medio como en la atmósfera, es
imprescindible para un buen desarrollo de las células vegetativas microbianas
en los cultivos.
e) Luz ambiental:
La mayoría de los microorganismos crecen mucho mejor en la oscuridad que
en presencia de luz solar. Hay excepciones evidentes como sería el caso de los
microorganismos fotosintéticos
f) pH:
neutro, aunque los hay que requieren medios más o menos ácidos
41
g) Temperatura:
Los microorganismos mesófilos crecen de forma óptima a temperaturas entre 15
y43ºC. Otros como los psicrófilos crecen a 0ºC y los termófilos a 80ºC o incluso
atemperaturas superiores (hipertemófilos). En líneas generales, los patógenoshuma
nos crecen en rangos de temperatura mucho más cortos, alrededor de 37ºC, y los
saprofitos tienen rangos más amplios.
3) ¿Qué debe de contar un medio de cultivo?
Para que los microorganismos crezcan adecuadamente en un medio de cultivo

optimo debe reunir una serie de condiciones como son: temperatura, grado de
humedad y presión de oxígeno adecuadas, así como un grado correcto de acidez o
alcalinidad, nutrientes necesarios y debe estar exento de todo microorganismo
contaminante.(Felix,2012)
4) ¿Cómo probaría si un medio de cultivo esta en condición estéril?
La esterilidad de un medio de cultivo se confirma incubando una parte del lote del medio
esterilizado a una temperatura de incubación específica, durante 14 días, estos medios sirven
como controles negativos durante la realización de la prueba de esterilidad.
La prueba de esterilidad no es válida si la esterilidad del medio o la prueba de promoción de

crecimiento no son satisfactorias(Arias, 2005)
42
X. REFERENCIA BIBLIOGRÁFICAS
XI. Bibliografía
S.A., L. B. (11 de 2010). Britania. Recuperado el 20 de junio de 2020, de Britania:
https://www.britanialab.com/back/public/upload/productos/upl_5a297d2411990.pdf

https://www.britanialab.com/back/public/upload/productos/upl_5a29779bd2be8.pdf

https://www.britanialab.com/back/public/upload/productos/upl_5a297c2b7a49c.pdf

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Schlegel. (1976). Métodos de cultivo y condiciones de crecimiento. Ediciones Omega S.A. .
TEVEZ, L. (2006). TRABAJO PRACTICO MEDIOS DE CULTIVO. Obtenido de TRABAJO PRACTICO MEDIOS
DE CULTIVO: http://www.biologia.edu.ar/microgeneral/tp4.pdf
43

PRACTICA N°04 MEDIOS DE CULTIVO Luz

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UNIVERSIDAD NACIONAL DE

INFORME DE PRÁCTICA DE LABORATORIO N° 04

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NOTA: Basando su selectividad en el verde brillante e irgasan, no inhibe las cepas

SIEMBRA E INTERPRETACIÓN: En muestras clínicas, sembrar en superficie,

Identificar la especie con galerías adecuadas.

CLASIFICACIÓN DE LOS MEDIOS DE CULTIVO

Dar el concepto de términos científicos, utilizados en la práctica. Como mínimo 5

2. Caldo Triptona: Disuelva 15 g de Agua Triptona en 1L de agua destilada. Dispensar

3. Caldo MRVP: Disuelva 17 g de medio MRVP en 1L de agua destilada. Calentar en

4. Agar TSI: Se toman 62,5 g del medio y se disuelven en 1L de agua destilada.

V.1.2.3.1. Material biológico

V.1.2.4. Material de escritorio

Fuente: Britania Sim m onscitrato agar pág. 1

Tabla 2: COMPOCISION DE CALDO TRIPTONA

Fuente: WINKLER,Caldo triptona pag.1

Tabla 3: COMPOCISION DE CALDO MR VP(ROJO DE METILO VOGES

Tabla 4: COMPOCISION DE AGAR TSI (TRIPLE SUGAR IRON)

Fuente: Ewing,1985 Agar TSI pág. 1

Tabla 5: COMPOCISION DE CALDO UREA