Cátedra de Bioquímica Clínica I

Instituto de Bioquímica Aplicada

UNIVERSIDAD NACIONAL DE TUCUMÁN

INMUNOHEMATOLOGÍA
Año 2017

Dra. Gladis Susana Alvarez

 LaInmunohematología se refiere a los
estudios serológicos, genéticos,
bioquímicos y moleculares de antígenos
asociados con estructuras de membrana
de las células de la sangre y sus
correspondientes anticuerpos.
Es la rama de las ciencias médicas que
estudia las interacciones de los
ANTÍGENOS y ANTICUERPOS, privativos
de las células y otros componentes de la
sangre
 ANTÍGENO DE GRUPOS SANGUÍNEOS

UN ANTÍGENO DE GRUPO SANGUÍNEO ES UNA

ESTRUCTURA, LOCALIZADA PRINCIPALMENTE EN LA
MEMBRANA ERITROCITARIA QUE ES CAPAZ DE
COMPLEJAR CON EL ANTICUERPO ESPECÍFICO

SE REFIERE TAMBIÉN A LA DIVERSIDAD INMUNOLÓGICA

DE OTROS CONSTITUYENTES DE LA SANGRE:
LEUCOCITOS, PLAQUETAS Y PLASMA.
Se encuentran codificados en el ADN de nuestras
células
 Uno de los aspectos más importantes de
la inmunohematología es el estudio y
cuantificación de los grupos sanguíneos
eritrocitarios que son componentes
antigénicos presentes en la superficie
de los hematíes.
 Esto se debe a su relación directa con la
terapéutica transfusional y la
prevención de accidentes hemolíticos
graves.
 ANTÍGENO DE GRUPOS SANGUÍNEOS
ERITROCITARIOS

La mayoría de los antígenos eritrocitarios

son producto directo del gen que los
codifica, y se ubican en proteínas,
glicoproteínas y glicolípidos de la
membrana eritrocitaria.
 Los antígenos de los sistemas ABO,
Lewis y P constituyen una excepción,
porque los genes correspondientes
codifican para una enzima (transferasa)
responsable de catalizar la reacción por
la que un determinado monosacárido o
azúcar se une a un sustrato
(oligosacárido) para constituir una
determinada estructura antigénica.
 ANTÍGENOS DE LA MEMBRANA ERITROCITARIA

NH2 A, B, H, I
Lea
Lea
Leb C OOH
Leb
NH2
Exterior

Interior

C OOH C OOH
Proteína de NH2 Proteína de pasajes
pasaje simple múltiples
 GRUPOS SANGUÍNEOS ERITROCITARIOS

 Conjuntos o sistemas de antígenos:

 alotípicos (indica diferencias entre individuos de la misma especie)
 de la membrana del GR (a este nivel están insertadas las
estructuras reactivas)

 genéticamente inducidos (son productos génicos directos

o a través de una enzima)

 genéticamente independientes (cada unidad genética

produce los Ags de diferentes sistemas transmitidos como caracteres
monofactoriales, expresan una sola unidad genética que puede ser
seguido a través de las generaciones)
 SISTEMA DE GRUPO SANGUÍNEO
SISTEMA FORMADO POR UNO O MÁS ANTÍGENOS
CONTROLADOS POR UN ÚNICO LOCUS O POR
UN COMPLEJO DE GENES HOMÓLOGOS 345 Ag
ESTRECHAMENTE LIGADOS QUE NO
RECOMBINAN DURANTE LA MEIOSIS

Por lo tanto se van a segregar 36

SISTEMAS
conjuntamente durante la meiosis.
306 Ag
 Todos los antígenos de los grupos sanguíneos han sido
definidos serológicamente por la presencia de sus
anticuerpos correspondientes

 En primer término se identificaron sobre los hematíes, pero

luego se describieron determinantes antigénicos
plaquetarios, leucocitarios y séricos

 Los genes determinantes de los grupos sanguíneos

transmiten, generalmente, caracteres codominantes ( se
expresan en homocigotos y heterocigotos).

 Existen genes “amorfos” que no generan productos que

puedan ser identificados como antígenos ( ej: gen d)
NOMENCLATURA DE LOS GRUPOS SANGUÍNEOS
Los primeros dos antígenos de grupos sanguíneos fueron
nombrados con las dos primeras letras del alfabeto: A y B

Luego se comenzó a nombrar a los sistemas de grupos

sanguíneos con el nombre o parte del nombre de la persona
donde se describieron por primera vez: Lewis–Duffy–Scianna–
Dombrock–Colton–Gerbich–Cromer-Knops-Diego

Algunos grupos sanguíneos se nombraron con el nombre de los

científicos que los descubrieron: LW: Landsteiner y Wiener – T:
Thomsom
GRUPOS SANGUÍNEOS ANTÍGENOS MÁS IMPORTANTES
ABO A, B, AB, O
Rh D, C, c, E, e
MNS M, N, S, s, U
Lewis Lea, Leb
P P1, P2
Lutheran Lua, Lub
Kell K, k, Kpa, Kpb
Duffy Fya, Fyb
Kidd Jka, Jkb
 CLASIFICACIÓN DE LOS ANTÍGENOS DE LOS GRUPOS
SANGUÍNEOS HUMANOS SEGÚN SU NATURALEZA QUÍMICA

1 CARBOHIDRATOS 2 GLICOLÍPIDOS
ABO
Le P
Ii

3 GLICOPROTEÍNAS 4 PROTEÍNAS
Rh Duffy
MNS
KELL
(Glicoforina a y b)
Kidd Diego
(transp de urea) (banda 3)
CLASIFICACIÓN FUNCIONAL DE LOS ANTÍGENOS DE
LOS GRUPOS SANGUÍNEOS HUMANOS

1 Transportadores y canales
Diego: iones Kidd: urea Rh: amonio?

2
Receptores
Le: Helic. pylori Duffy: Plasmodium vivax

3 Moléculas de adhesión
4 Enzimas
5 Moléculas estructurales
 SISTEMA ABO
(Landsteiner-Año 1900)
 Los Polisacáridos con actividad de grupo sanguíneo
se obtienen por adición secuencial de azúcares
específicos (o derivados de azúcar) a los precursores
específicos en los vínculos específicos por
transferasas específicas. Los azúcares comúnmente
involucrados son:

 Galactosa (Gal)
 N-acetil-galactosamina (GalNAc)
 N-acetilglucosamina (GlcNAc)
 Fucosa (Fuc) y
 Ácido N-acetilneuramínico (NeuAc).
 En el Sistema ABO los genes codifican para
GLUCOSILTRANSFERASAS. Las transferasas A y B
tienen solo 4 aminoácidos diferentes en el sitio
catalítico, dos de los cuales son los responsables
de la especificidad de cada una de ellas.

 El fenotipo O resulta de la mutación en los alelos

A y/o B llevando a pérdida de actividad de la/las
glicosiltransferasas

 Todos los grupos conservan algo de sustancia O/

antígeno H
 GEN
HH/Hh

Fucosil
transferasa
SUSTANCIA
PRECURSORA SUSTANCIA H
L-Fucosa
Azúcar
inmunodominante N-Ac. GEN
N-Ac. Galactosamina Galactosaminil A
transferasa

D-Galactosa D-Galactosil GEN

transferasa B

Azúcar GEN AMORFO GEN

0
inmunodominante
SISTEMA ABO
 ANTÍGENOS DEL SISTEMA ABO

 Expresión: GR. Adsorbidos del plasma: Linfocitos, Plaquetas,

Solubles: Fluidos , tejidos.

 Ubicación: Cromosoma 9

 Naturaleza Qca: Oligosacáridos (esfingolípidos, proteínas)

 Producto del Gen A: N-Acetilgalactosaminil transferasa

Gen B: Galactosaminil transferasa

 Cromosoma19: Hh, Se/se

 ANTÍGENOS DEL SISTEMA ABO
 Son carbohidratos con modificación, postraduccional, de
glicoproteínas y glicolípidos
 Son expresados por diversas de cadenas oligosacáridas
caracterizadas por la repetición de (β 1-3 Nac-Glu β 1-4 Gal)n
 Los Ag ABH expresados sobre dos tipos de cadenas:
a) tipo 2 sobre la que son endógenamente sintetizados por
precursores eritroides
b) tipo 1 sobre la que son sintetizados por la mucosa
gastrointestinal secretados al plasma y pasivamente adsorbidos
sobre la membrana del GR
ANTÍGENOS DEL SISTEMA ABO
GLÚCIDOS INMUNODOMINANTES
GRUPOS SANGUÍNEOS DEL SISTEMA ABO

 El locus ABO tiene tres alelos: A, B y O, y por el hecho de ser

diploide todo individuo será portador de dos alelos.
 Los genes A y B son codominantes, y producen enzimas que
actúan como transferasas específicas, capaces de
transformar por glicosilación la SUSTANCIA H, presente en
todos los hematíes en los ANTÍGENOS A y B,
 Mientras que el gen 0 es recesivo, no expresando ningún
producto antigénico.
 Ello hace que existan seis genotipos diferentes (AA, AO, BB,
BO, AB y OO) pero solo cuatro fenotipos posibles: A, B, AB y
0.
GRUPOS SANGUÍNEOS DEL SISTEMA ABO
Codominantes
A : AA ó A0
B : BB ó B0
AB : AB
O : OO (H)
Subtipos más comunes de A son A1 y A2
FENOTIPOS DÉBILES ANORMALES O AUSENTES
1 A3, Ax, Am
2
B3,Bm,Bx
Aunque el Sistema ABO tiene solamente 4 fenotipos, se han identificado más de 200
alelos mediante análisis de ADN

3 Cis AB
Genotipo con 2 alelos ocupando el mismo lado. Son
todos A2B (producidos por la misma enzima)

4 B adquirido
Modificación de A1 in vivo

5 Bombay
Carecen de Ag del Sistema ABO.
 GRUPO BOMBAY
 Los individuos con genotipo HH o Hh producen la enzima 1,2-
fucosiltransferasa que transforma la sustancia precursora en
Sustancia H.
 Los individuos con fenotipo BOMBAY con genotipo hh no
producen dicha enzima, por lo que no pueden modificar la
sust. precursora, lo que hace que no puedan sintetizar
Sustancia H.
 Esto condiciona a que los genes del sistema ABO (si los
tuviesen ) no pueden expresarse, por lo que parecen ser del
grupo O.
 Presentan de manera constante además de anti-A y anti-B,
un anticuerpo natural anti-H muy activo a 37ºC, capaz de
hemolisar los hematíes de cualquier individuo que no sea de
fenotipo BOMBAY.
 Anticuerpos del Sistema ABO
 LOS GRUPOS SANGUÍNEOS SON ALOGÉNICOS.

 La mayoría de los individuos desarrollan anticuerpos frente a

los antígenos ABO alogénicos aunque no hayan sido
expuestos a eritrocitos extraños; esta sensibilidad se debe al
contacto con epitopes idénticos que casualmente expresan
de forma rutinaria una gran cantidad de microorganismos.

 Los anticuerpos frente a los antígenos ABO son muy

frecuentes, lo que hace especialmente importante la
verificación de los grupos del donante y del receptor antes
de llevar a cabo una transfusión sanguínea
 Anticuerpos del Sistema ABO

 Momento de aparición: 3 a 6 meses

 Niveles del adulto se alcanzan entre 5 y

10 años
 Tipode Inmunoglobulina:
 Naturales: IgM
 Inmunes: IgG
SISTEMA LEWIS
 Tiene 2 antígenos: Lea y Leb
 Está relacionado con el Sistema Secretor
 El carácter secretor se transmite
genéticamente y está regido por un par
de genes alélicos Se/se.
 El Ag Lewis no se sintetiza en el GR.
 Está en secreciones y plasma y se
adsorbe al GR.
Alelos Le/le
SISTEMA LEWIS
 SISTEMA LEWIS
Sustancia precursora Tipo I (mucosas)
1,3
R Gal N-Ac glucosamina Gal

Gen Le-FUT3 Fucosa (C4) Fucosa Gen Se-FUT2

R Gal N-Ac gluc Gal R Gal N-Ac gluc Gal

1,4 1,2
Lewis a Fucosa Fucosa
Fucosa
Impedimento
estérico Gen Le-FUT3

R Gal N-Ac gluc Gal

1,4 1,2
Lewis b Fucosa Fucosa
 GLÚCIDOS INMUNODOMINANTES

Fucosil transferasa 1:
Sust H en GR
Fucosil transferasa 2:
Sust H en secreciones
Fucosil transferasa 3:
Adulto 3 fenotipos Le: Le (a+b-), Le (a-b+) y Le (a-b-) Responsable de Lea
Sistema Lewis y Carácter Secretor

Los individuos no secretores son Le a+ b-

NO secretor Le a+

Los individuos secretores son Le a- b+

Secretor Le b+
SISTEMA Rh
En 1939 LEVINE y STETSON
En 1940 LANDSTEINER y WIENER
 ANTÍGENOS DEL SISTEMA Rh

 Son sintetizados en el glóbulo

rojo.
 Son detectados solamente en los hematíes
 Sus determinantes proteicos están
representando el producto primario
codificado por un gen.
 Se heredan como rasgos Codominantes.
 NOMENCLATURA
 El fenotipo puede anotarse con letras (D+,C+,
E+, c+, e+) o con números (Rh: 1,2,-3,4,5).
 Un complejo génico (haplotipo) puede
indicarse en términos CDE o mediante el uso
de un símbolo de gen.
 El símbolo de gen R denota la presencia de
un gen D; en tanto que r indica la ausencia de
un gen D.
 NOMENCLATURA
Wiener Fisher & Race Wiener Fisher & Race

R0: cDe r: cde

R1: CDe r’: Cde
R2: cDE r’’: cdE
Rz: CDE ry: CdE
Inmunogenicidad D, c, E, C y e
Los Antígenos del Sistema Rh son
gobernados por 2 genes: RHD y RHCE
con una localización en el Cromosoma 1
(1p36.13-p34.3)

D y CE difieren por 36 aminoácidos

Existe otra cadena denominada Rh50 o Rh AG

 COMPLEJO Rh

 Polipéptidos Rh

 Glicoproteína asociada Rh50

 Otras glicoproteínas LW, GPB, CD47 y Banda 3

COMPLEJO Rh

RhD
 Herencia Rh
Madre: Rh + Padre: Rh+

Rh DD = Rh +

Rh Dd = Rh +

Rh dd = Rh -

Niño
 El Ag D es altamente polimórfico
Variaciones del Antígeno D

 Antígenos D débiles llamados Du

 El término Du es amplio e impreciso
 Los G.R. eran aglutinados por un anti-D
pero no por otro
 Incluía Ags. D débil y D parcial
 No existe un anticuerpo anti-Du
 Sistema Rh (Ag D)
Differences between normal D, D-weak and partial-D phenotypes

D parcial o
Antígeno D Normal
común D Débil Variante D
Epitope: Normal Normal Mutados
Cantidad de Ag: Normal Reducida Normal o Reducida
Ac --- --- ---

Epitope Antígeno
 ANTÍGENOS D DÉBILES

C-trans
C en posición trans con respecto a D (Dce/dCe)

Incompleto (faltan epitopes)

FENOTIPO D PARCIAL
 Fenotipo nulo de Rh

 El fenotipo Nulo de Rh no expresa D Cc ni Ee

 Fenotipo nulo de Rh tiene GR de vida media
acortada (estomatocitos) con fenómenos
hemolíticos con posible alteración estructural
de membrana
 Fenotipo nulo de ABO no tiene repercusión
biológica.
 FENOTIPO D PARCIAL

Individuos fenotipados como Rh

positivos, producen Ac anti-D al ser
estimulados con GR portadores de
dicho antígeno (transfusiones –
embarazos).
 ANTÍGENOS D FUERTES

E-cis
E en posición cis con D se asocia con fuerte
expresión de D
 IMPORTANCIA DEL ANTÍGENO D
Sujetos Rh Negativo productores de Anti-D

Los anticuerpos Rh
- Son habitualmente de clase IgG
(IgG1 y/o IgG3) y la mayoría
- no fijadores de complemento.
 IMPORTANCIA DEL ANTÍGENO D
Sujetos Rh Negativo productores de Anti-D

80% de los receptores de grandes volúmenes

de sangre D positivo

20% de los transfundidos con plaquetas de

dadores D positivo

10% de las pacientes que han tenido hijos D

positivo y ABO incompatibles
 OTROS GRUPOS SANGUÍNEOS
 P
 Ii
 MNSs: EHFN y reacciones transfusionales hemolíticas
 Lutheran
 Kell: El anti- K es el anticuerpo irregular más común después
del anti-D, ya que puede causar severas reacciones
transfusionales y EHFN. Es un anticuerpo del tipo IgG. El
anti-k se encontró en bebé con EHFN
 Duffy: Puede ocasionar EHFN y reacciones transfusionales
hemolíticas
 Kidd: Puede ocasionar EHFN y reacciones transfusionales
hemolíticas
 Diego: tiene alta penetrancia en nuestra población
INMUNOGENICIDAD DE LOS ANTÍGENOS
DE GRUPOS SANGUÍNEOS

 Varían grandemente en su capacidad para

elicitar una respuesta inmune.

 A, B y D son las más inmunogénicos.

 Después de los Ags D seguirían el Ag K y otros

del Sistema Rh tales como E, c, C, e.
USO RACIONAL DE SANGRE Y
HEMOCOMPONENTES
 HEMOCOMPONENTES

Productos obtenidos por medios físicos o

mecánicos a partir de una unidad de sangre total
 GRS: glóbulos rojos sedimentados
 PF: plasma fresco
 PC: plasma congelado
 CRIO PP: crio-precipitado enriquecido en
Factor VIII, fibrinógeno y fibronectina.
 PLAQUETAS
 HEMODERIVADOS

Concentrados de proteínas específicas, preparadas

por fraccionamiento a partir de mezclas de plasma o
por técnicas de ADN recombinante

 Albúmina
 Factores de coagulación concentrados
 Inmunoglobulinas
RECORDAR

La transfusión
MAS SEGURA
es aquella que
NO SE REALIZA
 ENFERMEDAD HEMOLÍTICA
FETO-NEONATAL

ES LA DESTRUCCIÓN ACELERADA DE LOS

GR DEL FETO Y DEL RECIÉN NACIDO
 ANTICUERPOS

 NATURALES: ABO (IgM, IgG)

 ADQUIRIDOS:Rh, OTROS SISTEMAS Ag

ERITROCITARIOS: IgG, IgM
 ALOINMUNIZACIÓN

ES LA PRODUCCIÓN DE Ac CONTRA Ag DE
LOS GR-PATERNOS, AUSENTES EN LA
MADRE.

EMBARAZOS PREVIOS

TRANSFUSIONES
MECANISMO DE LA ENFERMEDAD HEMOLÍTICA
FETO-NEONATAL RH
 RECORDAR
IgG : ATRAVIESA LA BARRERA
PLACENTARIA
IgG1
IgG3

IgM : NO ATRAVIESA LA BARRERA

PLACENTARIA
 FISIOPATOLOGÍA

1) INMUNIZACIÓN

2) LISIS DE LOS GR (ACORTA LA VIDA ½)

3) ERITROPOYESIS :
MEDULAR -EXTRAMEDULAR
 LISIS GR

ANEMIA HIPOXIA

PRODUCCIÓN GR

ERITROBLASTOSIS FETAL
ERITROPOYESIS HEPÁTICA

DISRUPCIÓN CIRCULACIÓN PORTAL

SÍNTESIS DE ALBÚMINA

PRESIÓN ONCÓTICA

EDEMA
 ANEMIA GRAVE

 INSUFICIENCIA CARDÍACA

 HIPOXIA TISULAR

 MUERTE INTRAUTERINA
 FETO HIDRÓPICO

 EDEMA GENERALIZADO
 HIPOPROTEINEMIA
 ASCITIS
 DERRAME PLEURAL
 HEPATO-ESPLENOMEGALIA
 PLACENTA HIPOPERFUNDIDA
 LISIS DE GR

BILIRRUBINA
FETO RN

Hígado
Metaboliza madre
insuficiente
BD

TÓXICO
CEREBRAL
 KERNICTERUS
 BILIRRUBINA PRECIPITA

 GANGLIOS DE LA BASE

 DAÑO CEREBRAL
 RETARDO NEUROLÓGICO
 ESPASTICIDAD
 MUERTE
 GRUPO DE LA MADRE
“O”
Posee anti- A y anti-B que pueden ser IgM e
IgG

GRUPO DEL NIÑO

“A” ó “B”
Posee anti-B o anti-A que generalmente son
IgM y muy bajos niveles de IgG
PRUEBA DE COOMBS
FUNDAMENTOS DE LA PRUEBA DE
COOMBS DIRECTA E INDIRECTA
 PRUEBA de COOMBS DIRECTA
Fundamento:
AGH
poliespecífica

Anti- IgG
Anti-C3d
 APLICACIONES DE LA PCD
Recién nacidos con
incompatibilidad feto-neonatal

Anemia hemolítica autoinmune

- Frías
- Calientes

Reacción hemolítica pos-transfusional

 PRUEBA de COOMBS INDIRECTA
Fundamento:

¿Preguntas?
 APLICACIONES DE LA PCI
Detección e identificación de Ac irregulares en:
- embarazadas
- donantes
- anemias hemolíticas

Determinación de Ag eritrocitarios:
- D débil
- Kell

Pruebas de compatibilidad pretransfusional

Pruebas de compatibilidad conyugal

 PRUEBA DE COOMBS DIRECTA
Detecta GR sensibilizados “in vivo”
 EHRN
 RHPT: reacciones hemolíticas postranfusionales
 AHAI y AHDI: an. hemolítica autoinmune e inducida por
drogas.
PRUEBA DE COOMBS INDIRECTA
Detecta GR sensibilizados “in vitro”
 PRUEBAS DE COMPATIBILIDAD
 DETECCIÓN E IDENTIFICACIÓN DE Ac
 TITULACIÓN
 TIPIFICACIÓN DE GR
Reacción de GR del Reacción del suero
Interpretación
paciente con: del paciente con

Anti-A Anti-B GR. A GR. B GR. O GRUPO ABO

O O + + O ?
+ O O + O ?
O + + O O ?
+ + O O O ?
OTROS MÉTODOS PARA DETECTAR
REACCIONES Ag-Ac
 MICROPLACAS

 Existen métodos manuales, semiautomatizados y

automatizados
 Utilizan antígenos o anticuerpos inmovilizados
 En la prueba indirecta si las células indicadoras se
adhieren a las paredes de la cubeta, la reacción es
positiva
 Si sedimentan no se produjo reacción Ag-Ac
 GEL MICROCOLUMNAS

 Las reacciones se producen en

microcolumnas que contienen
mezclas de cuentas de vidrio o gel,
amortiguadores y a veces reactivos
 Se establecen barreras de densidad
permiten separar el suero
problema de los eritrocitos
 Una de sus ventajas es que se evita
el lavado con solución salina
FIN