BIOLOGIA MOLECULAR

Dra. María Trinidad Romero Torres

1869 (Friedrich Meischer):Identifica el DNA (nucleína)

1928 (Fred Griffith):El DNA de bacterias virulentas transmite el

caracter a bacterias no virulentas

1952 (Hershey y Chase):Confirman al DNA como la molécula de la

herencia

1953 (Watson y Crick):Modelo de la doble hélice del DNA

Dogma Central de la Biología Molecular
El flujo de la información génica está contenido en el
ADN
 El ADN es el mismo en todas nuestras células.
En todas las células el ADN expresará proteínas dando
lugar a los distintos tipos de células (célula del hígado,
célula adiposa etc. que van definiendo a un organismo
procariota o eucariota.
 La expresión de unas u otras proteínas determina la
morfología y funcionalidad de las células.
Componentes estructurales de los ácidos nucleicos
Nucleótido = Pentosa + Base nitrogenada + Ácido fosfórico.
 Bases Nitrogenadas

6
1 5 7
8
2 4
9
3

4
3 5

2 6
1
pirimidina imidazol

NH2 O

NH2
 O NH2 O

CH3

O O O
 Azúcar

5’

4’ 1’

2’
3’
 NH2
NH2
N
N
N
adenina N
N N
O O
H N
enlace N-glucosídico N
HO P OH HO OH HO P O CH2
O O
OH OH
desoxirribosa
fosfato
enlace OH OH
ester
Nucleósidos
 Base nitrogenada Azúcar

Nucleósido

Nucleósido Radical fosfato

Nucleótido

Nucleótido Nucleótido Nucleótido Nucleótido ... = AN

 Nucleótidos no nucleicos
• Son nucleótidos que no forman parte de los ácidos
nucleicos.

• Se encuentran libres en las células.

• Pueden actuar como:

• Reguladores metabólicos (aportando energía)

• Activadores de enzimas
• Coenzimas
 Nucleótidos de adenina
ADP - ATP
• Son moléculas transportadoras de energía
• Los fosfatos se unen mediante enlaces ricos en energía.
• En las reacciones que se libera energía (exergónicas) se
forma ATP a partir de ADP.
• En las reacciones que se necesita energía (endergónicas)
se hidroliza el ATP y da ADP y ácido fosfórico
• También pueden actuar en estos procesos nucleótidos de
guanina (GTP – GDP)
 5’-Adenosina
monofosfato, AMP

5’-Adenosina
difosfato, ADP

5’-Adenosina
trifosfato, ATP
 ATP como
donador de energía
 AMP cíclico - AMPc

• Se forma a partir de ATP en el interior celular por la acción de la adenilato ciclasa.

• El enzima actúa por la unión a la membrana celular de determinadas moléculas (hormonas…).
• La formación del AMPc activa enzimas que actúan en reacciones metabólicas
• Se le conoce también como segundo mensajero (las hormonas son los primeros mensajeros
 Características de los Ácidos Nucléicos

Función del DNA:

 Almacenar la información genética, lo que sirve

para programar en el tiempo y el espacio la
biosíntesis de componentes celulares, es decir,
cuando la célula necesite una proteína, el DNA se
encargara de promover su fabricación.
 También define la individualidad, los DNAs son
distintos en cada organismo.
 3200 32
00
Genes 3200

4,6 12,1 125 97 180 3200

Genome
(Mb)
 5 ’ 3’

Orientación de las
hebras
Una hebra se orienta en
sentido 5’ – 3’ y la otra
en sentido 3’ – 5’, es Diapositiva 69
decir son anti paralelas

3’ 5 ’
 Estructura Primaria del DNA

Es la secuencia de nucleótidos de una

cadena o hebra. indica la secuencia de
ADN es suficiente con los nombres de las
bases o su inicial (A, T, C, G) en su orden
correcto según los extremos 5' y 3' de la
cadena nucleotídica.
ejemplo:
5'ACGTTTAACGACAAGTATTAAGACAAGTATTAA3'
En un monucleótido, el grupo fosfato es un éster
fosfórico primario, lo que quiere decir que posee
un solo enlace éster. En el dinucleótido se forma el
enlace fosfodiéster, es decir el fosfato está unido
a dos grupos.
}

• De acuerdo con el modelo de doble hélice

propuesto por Watson y Crick, la estructura
secundaria del ADN consiste en:

• Una doble hélice formada por dos cadenas

helicoidales de polinucleótidos, enrolladas la
una alrededor de la otra a lo largo de un eje
imaginario común.

• Las cadenas son antiparalelas, se disponen

en sentido opuestos. Una va en sentido 3'→5'
y la otra en sentido 5'→ 3'
 Las bases nitrogenadas se sitúan en el interior
de la doble hélice mientras que el azúcar (la
pentosa) y el ácido fosfórico forman el
esqueleto externo; los planos de las bases
quedan perpendiculares al eje de la hélice.
 Las dos cadenas están unidas por puentes de
hidrógenos formados entre los pares
adenina-timina (A=T) dos puentes y
guanina-citosina (G≡C) tres puentes.
Grupo fosfato = hidrófilo ya que tiene cargas que hacen que sea
polar (soluble en agua) exterior.

 Resto de la molécula = hidrófobo. Lo más apolar (bases nitrogenadas

por sus anillos aromáticos) tiene que ir escondido del medio hidrófilo
interior, difracción de rayos X.

 Análisis químico: purinas = pirimidinas (A-T= G-C).
Complementariedad de bases en el DNA: mismo número de
purinas que de pirimidinas (leyes de Chargaff).
•ADN-B: ADN en disolución, 92% de humedad relativa, se encuentra en soluciones con baja
fuerza iónica, se corresponde con el modelo de la Doble Hélice. Estado fisiológico

•ADN-Z: presenta la forma de zic-zac, tiene la función de de control de la expresíón génica y la

recombinación

•ADN-A: ADN tratado con reactivos y condiciones de deshidratación.

 PRINCIPALES PROPIEDADES DEL DNA:

ácido, estable, viscoso, absorbe a 260 nm gracias a las bases nitrogenadas

 1. CARÁCTER ÁCIDO. En cada unión fosfodiéster aparece la carga negativa

de los grupos fosfato, por tanto es un POLIANIÓN (como tiene millones de
monómeros tendrá millones de cargas negativas).

 Esto hace que el DNA se encuentre casi siempre neutralizado fisiológicamente

por interacción iónica con las cargas positivas de otras moléculas catiónicas:
Mg++, Ca++… y también con proteínas básicas (histonas: proteínas ricas en
Arg y Lys cargadas positivamente a pH fisiológico).

 Al interaccionar con cargas positivas, que neutralizarán a sus cargas negativas, el

DNA podrá plegarse y adoptar estructuras de orden superior.
2. MUY ESTABLE. Su gran estabilidad es conferida por 2 tipos de
enlaces que, aunque son de tipo débil, son muy numerosos, por lo
que su contribución total a la estabilidad de la molécula es muy
elevada.

Además, la desoxirribosa carece de grupos reactivos, ya

que el 4´-OH está comprometido en el cierre del anillo, los 3´-
OH y 5´-OH están formando parte de los enlaces fosfodiéster.
PUENTES DE HIDRÓGENO

específicos entre bases complementarias (2 A=T; 3 C=G). Los

DNAs más estables serán los ricos en C y G. No obstante, el
DNA humano es más rico en A y T, por lo que resulta más
inestables de lo que lo pudiera ser.

 Los puentes de hidrógeno se establecen en una dirección

determinada (específicos), por lo son los determinantes de la
estructura.
 Interacciones hidrofóbicas (o de apilamiento) inespecíficas
(independientes del tipo de base implicada) entre bases apiladas
de una misma cadena, como consecuencia de la proximidad y
paralelismo de sus anillos aromáticos hidrofóbicos; así, el
interior de la doble hélice, altamente hidrofóbico, queda aislado
del medio acuoso.
 Las interacciones de la doble hélice son COOPERATIVAS,
hecho que queda evidenciado en la desnaturalización, pues la
separación de las hebras en un punto favorece que se
sigan separando en el resto de la molécula.
3. ALTA VISCOSIDAD. El DNA tiene estructura fibrilar la
doble hélice es rígida e inmensamente larga en relación a su
diámetro, debido a ello las soluciones de DNA son altamente
viscosas. El proceso de desnaturalización se suele observar por la
pérdida de viscosidad.

4. ABSORBE A 260 nm (máximo) en el ultravioleta a través

de sus bases nitrogenadas. La similitud en el valor máximo de
absorbancia de las distintas bases (propiedad característica de las
bases purínicas y pirimidínas debida a su carácter aromático), A
260 nm, permite la cuantificación de la concentración de los
ácidos nucleicos.
 5.- solubles en soluciones salinas
 Tanto el DNA como el RNA, son solubles en soluciones
salinas diluidas como el cloruro de sodio 0,015M.
 El DNA cuando se encuentra en forma de complejos unidos
a nucleoproteínas también es soluble en rangos de NaCl a 1
a2M
 Las proteínas se desnaturalizan a concentraciones altas de
sal, lo cual permitirá la separación en el proceso de
extracción de los ácidos nucleicos.
El alcohol etílico precipita tanto el DNA como el RNA, en
tanto que el isopropanol precipita específicamente el DNA.
 Se debe realizar controles para evitar la contaminación con
proteínas, porque los máximos de absorción son característicos de
cada uno de estos compuestos (260 nm para ácidos nucleicos y
280 nm para proteínas), ambos absorben las dos longitudes de
onda.

 Por ello habrá que emplear ambos valores de absorbancia para

poder así corregir la interferencia mutua.

 Los grupos responsables de la absorción de luz ultravioleta en una

molécula se denominan CROMÓFEROS; en este caso estaremos
hablando de las bases nitrogenadas.
El DNA absorberá más luz “libre” que formando parte
de la estructura en doble hélice, puesto que la propia
estructura interfiere con la absorción. Por tanto el DNA
desnaturalizado (hebras separadas) absorberá más que un DNA
nativo.
 Efecto hipercrómico: aumento de la absorción a 260 nm
del DNA desnaturalizado con respecto al DNA nativo.
 Efecto hipocrómico: disminución de la absorción a 260 nm
del DNA nativo respecto al desnaturalizado.
 DESNATURALIZACIÓN DEL DNA.
 Pérdida de su estructura nativa duplohelicoidal (separación de
las dos hebras del DNA). Base para el estudio de la
estructura del DNA y para la hibridación (renaturalización de
dos cadenas sencillas de un DNA previamente
desnaturalizado).
 Al igual que las proteínas el DNA se desnaturaliza
principalmente por efecto de agentes físicos (calor) o
químicos (ácidos, bases, detergentes…), perdiendo su
conformación tridimensional (forma duplohelicoidal) debido a
la ruptura de los puentes de hidrógeno (entre pares de bases)
y de las interacciones hidrofóbicas (entre bases apiladas).
 Por efecto de la TEMPERATURA

Agente desnaturalizante más representativo). Empieza

por destruir las interacciones más débiles (hidrofóbicas),
causando una apertura a modo de cremallera.
Por efecto de agentes químicos.
 Ácidos y bases (variaciones de pH). Gracias a sus
propiedades el DNA se mantiene estable para un amplio
margen de pH (4-9); solo los pHs extremos podrán destruir
los puentes de hidrógeno.
 Para la desnaturalización del DNA es más habitual emplear
condiciones alcalinas (a las cuales el DNA, a diferencia del
RNA, es estable), ya que condiciones ácidas pueden conducir a
la desnaturalización definitiva del DNA (ruptura de la
estructura primaria: enlaces fosfodiéster y N-glicosídicos).
 Variación de la fuerza iónica. Afectará a los puentes de
hidrógeno, ya que estos se forman por atracción entre
átomos de electronegatividad opuesta (diferencia de cargas):
O-, N- --- H+.

 Agentes desnaturalizantes: detergentes (rompen ambos

tipos de enlace), urea (competirá por la formación de
puentes de hidrógeno)….
 Se emplean moléculas sencillas, altamente polares, con
grupos amino y carbonilo que les permiten competir en la
formación de puentes de hidrógeno con los grupos amino y
carbonilo propios de la bases, facilitando así la ruptura de
sus apareamientos y la consiguiente separación de las
hebras.
 Variación de la fuerza iónica. Afectará a los puentes de
hidrógeno, ya que estos se forman por atracción entre átomos de
electronegatividad opuesta (diferencia de cargas): O-, N- --- H+.

 Agentes desnaturalizantes: detergentes (rompen ambos tipos

de enlace), urea (competirá por la formación de puentes de
hidrógeno)….
 Se emplean moléculas sencillas, altamente polares, con grupos
amino y carbonilo que les permiten competir en la formación de
puentes de hidrógeno con los grupos amino y carbonilo propios de
la bases, facilitando así la ruptura de sus apareamientos y la
consiguiente separación de las hebras.
 Significado de las curvas de desnaturalización o curvas de
fusión (características para cada DNA). Son la representación
gráfica de la variación de viscosidad o de A260 frente a la
temperatura (o concentración de agente desnaturalizante).
Carácter SIGMOIDE.
 Indica que la desnaturalización se produce bruscamente, en
un margen muy estrecho de temperatura/pH/concentración de
agente desnaturalizante; es decir, debido al carácter cooperativo
de las interacciones que mantienen la doble hélice del DNA, el
primer paso costará mucho, por lo que será lento, pero el
siguiente ya será más rápido, ya que una vez que empiece la
desnaturalización se favorece la separación total de las hebras de
forma casi instantánea (cooperatividad).
 Midiendo la absorción de una disolución de DNA podremos
comprobar si ha empezado o no su desnaturalización (curvas
de fusión): misma absorción no desnaturalización; aumento de
absorción comienzo de desnaturalización.
 TM (“melting”): temperatura de fusión o de
desnaturalización.
 Temperatura a la cual se desnaturaliza el 50% del DNA o
temperatura central del intervalo de transición (50% de
desnaturalización).
 Depende del medio pero estrictamente del % de A=T y
G≡C, por lo que se pueden dar distintas curvas: más altas
cuanto mayor es el contenido en G≡C.
 Por tanto la TM se utiliza para estimar la composición en
bases del DNA. Relación TM/contenido en pares de bases
C≡G o A=T del DNA.
 Cuanto más abundantes son C≡G, más desplazada
hacia la derecha aparece la curva, es decir, se necesita
mayor temperatura para la desnaturalización entonces la
TM es mayor.
 ¿Por qué? Debido a que al ser más fuerte la interacción entre
pares C≡G (3 puentes de hidrógeno frente a los 2 de A=T), el
DNA será más estable y requerirá mayor energía para
disociarse.
• El ADN de las mitocondrias y de los cloroplastos
es similar al de las células procariotas.
• Durante mucho tiempo se creyó que el ADN
procariota no estaba asociado a proteínas (ADN
desnudo) y que estaba disperso en el citoplasma.
• En la actualidad, se ha observado que está
asociado a proteínas no histónicas, formando una
condensación llamada nucleoide, que, a
diferencia del núcleo, carece de envoltura.
• También en los virus se han observado proteínas
básicas asociadas al ADN.

Eduardo Gómez 58