4-3-2020

Practica 2. Determinación de
Bacillus cereus en cereales.

Análisis Microbiológico de Alimentos

CARLA GABRIELA VARGAS VAZQUEZ
Ingeniería Bioquímica 8°B
Erick Alejandro Avalos Zepeda
Darío Fabian Hernández Hernández
Luis Ángel Villa Higareda
Jesús Sánchez Hernández
Fabian Mora Prado Fecha de entrega: 4 de marzo de 2020
Índice General.

1. Objetivos. .................................................................................................................................... 3

1.1 Objetivo general. ....................................................................................................................... 3

1.2 Objetivos específicos................................................................................................................. 3

2. Resumen ...................................................................................................................................... 3

3. Introducción. ............................................................................................................................... 4

4. Material y equipo. ....................................................................................................................... 5

5. Metodología. ............................................................................................................................... 6

5.1 Preparación de medios de cultivo........................................................................................ 6

5.2 Preparación de muestras. ..................................................................................................... 7

6. Resultados. .................................................................................................................................. 7

7. Conclusiones. ............................................................................................................................ 11

Erick Alejandro Avalos Zepeda. ................................................................................................... 11

Darío Fabian Hernández Hernández. ............................................................................................ 12

Jesús Sánchez Hernández. ............................................................................................................. 12

Luis Ángel Villa Higareda. ........................................................................................................... 12

Fabian Mora Prado. ....................................................................................................................... 13

8. Bibliografías. ............................................................................................................................. 13
Índice de Figuras

Figura 1. Caja Petri solución 1:10 Avena .............................................................................. 6

Figura 2. Caja Petri solución 1:10000 .................................................................................... 6

Figura 3. Caja Petri solución 1:100000 .................................................................................. 6

Figura 4. Caja Petri solución 1:1000 ...................................................................................... 7

Figura 5. Petrifilm 3M Hongos y Levaduras 1:10000 ............................................................ 7

Figura 6. Petrifilm 3M Coliformes 1:100000 ......................................................................... 8

Figura 7. Petrifilm 3M Aerobios 1:10…………………………………………………….....8

Figura 8. Petrifilm 3M E. coli y coliformes 1:1000…………………………………………9

Figura 9. Ilustración de Bacillus cereus (Vila, 2009) …………………………………….....9

Índice de Figuras

Tabla 1. Materiales y Reactivos. ............................................................................................ 3

Tabla 2. Resultado de Agar MyP de Cereales ........................................................................ 6

Tabla 3. Resultados de Placas Petrifilm 3M ........................................................................... 7

1. Objetivos.

1.1 Objetivo general.

• Determinar si hay presencia o ausencia de Bacillus cereus en las muestras a analizar

(cereales y hortaliza) mediante la aplicación de la técnica de vaciado en placa, mediante

la preparación de los medios de cultivo necesarios para lograrlo.

1.2 Objetivos específicos.

• Utilizar y observar la realización del método de vaciado en placa.

• Comprender la técnica de la técnica de Petrifilm la cual será utilizada para la examinación

de colonias de microorganismos.

• Llevar a cabo la molienda del cereal y la hortaliza que serán las muestras para la práctica.

2. Resumen

Al comienzo de esta práctica se desarrolló la preparación de los medios de cultivo, los

cuales fueron la solución reguladora de peptona, Agar MyP, entre otros compuestos. Después

se esterilizo el ambiente para las cajas Petri y verter lo anteriormente mencionado. Luego se

tomaron 10g de muestra de avena y se aplico molienda para reducir el tamaño de las

partículas de igual manera para la zanahoria utilizada. Por ultimo se hicieron disoluciones

con diferente concentración 1:100, 1:1000, 1:10000 y 1:100000 de las cuales se tomo un

mililitro de estas para vaciarlo en una caja Petri para posteriormente ser llevadas a incubación

a 35±2ºC por un periodo de tiempo de 24 a 48 hrs. Por ultimo se aplico 1 ml de muestra a las

3M Petrifilm de las distintas soluciones para E. coli y coliformes, hongos y levaduras,

coliformes y aerobias. Y se llego al resultado de que existe presencia de Bacillus cereus en

la muestra de avena y de hongos no se presentó ningún caso.

3. Introducción.

El poder de resolución del ojo humano, es decir, su capacidad para distinguir entre dos

objetos puntuales que se encuentran muy próximos, es de alrededor de 0,2 mm en el mejor

de los casos. Los microorganismos constituyen un grupo de seres vivos sumamente

heterogéneo cuya única característica común es su reducido tamaño: todos son lo

suficientemente pequeños como para pasar inadvertidos al ojo humano, siendo preciso el uso

de dispositivos de aumento como el microscopio óptico o, en algunos casos, el microscopio

electrónico para poder observarlos. En este caso el microorganismo a observar será el

Bacillus cereus encontrado principalmente en cereales. Los cereales son plantas de la familia

de las poáceas cultivadas por su grano (fruto de pared delgada adherida a la semilla,

característico de la familia). Incluyen cereales mayores como el trigo, el arroz, el maíz, la

cebada, la avena y el centeno, y cereales menores como el sorgo, el mijo, el teff, el triticale,

el alpiste, entre otros. El tamaño del grano de algunos cereales, más grande que el de los

demás pastos, fue producto de la domesticación a lo largo de miles de años. Muchos cereales

en los inicios de su domesticación fomentaron la aparición de civilizaciones que se asociaron

a ellos. Los cereales contienen almidón. El germen de la semilla contiene lípidos en

proporción variable que permite la extracción de aceite vegetal de ciertos cereales. La semilla

está envuelta por una cáscara formada sobre todo por la celulosa, componente fundamental

de la fibra dietética (Ramos, 2013).

El Bacillus cereus es una bacteria que causa envenenamiento por consumo y también es un

bacilo gram positivo, esporulado, anaerobio facultativo y móvil que compite con

microorganismos tales como Salmonella y Campylobacter, en el tracto gastrointestinal, por

lo que su presencia reduce el número de esos microorganismos. El cual se reproduce a 30

grados Celsius (86,0 °F), una población de B. cereus puede doblar en tan poco tiempo como

20 min o hasta 3 h, dependiendo por el producto alimenticio (Ryan, 2004).

4. Material y equipo.

Material y equipo Reactivos

2 matraces Erlenmeyer Agar-Agar

8 pipetas Agar Peptona Carne

14 tubos de ensayo NaCl

2 vaso de precipitado Fosfato bibásico

4 Petrifilm 3M Fosfato de potasio bibásico

Balanza analítica Agar MyP

5 espátulas

5 charolas Parrilla

6 cajas Petri

Baño maría

Tabla 1. Materiales y Reactivos.

5. Metodología.

5.1 Preparación de medios de cultivo.

• Solución reguladora de peptona

Peptona Carne NaCl
10g --------------1000ml 5g----------------1000ml
x-----------------252ml x------------------258ml
x = 2.52g x = 1.26g

Fosfato dibasico Fosfato de potasio dibasico

9g----------------1000ml 1.5g-----------------1000ml
x------------------252ml x--------------------252ml
x = 2.268g x = 0.378g

• Agar MyP

46g--------------900ml
x-----------------90ml x = 4.6g
Se prepararon las siguientes soluciones para crear el medio de cultivo en las placas Petri.
 5.2 Preparación de muestras.

• Preparar las soluciones de 1:10, 1:1000, 1:10000,

Paso 1 1:100000 con las muestras de avena.

• Una vez preparados los medios de cultivos poner 90 ml

Paso 2 en cada matraz Erlenmeyer y 9 ml en 8 tubos de ensayo.

• Despues añadir 15ml de Agar MyP a 6 tubos de ensayo

Paso 3 c/u. Para despues ser refrigerados y solidificados.

• Ingresar al baño maria los 6 tubos de Agar MyP para

Paso 4 derretir el medio y vaciarlo a la caja Petri.

• Una vez vaciado el medio esperar a que solidifique y

Paso 5 agregar 1ml de cada solucion (1:1000, 1:10000, etc)

• Vaciar 1 ml de solucion en cada Petrifilm 3M y esparcirla

Paso 6 por todo el circulo que presenta.

6. Resultados.

Obtuvimos los resultados deseados en la siguiente tabla en la cual se puede ver al

desarrollar la determinación de Bacillus cereus observamos que algunas placas presentaban

varias colonias a lo largo del medio de cultivo y de hongos y levaduras se presentó algunos

casos en las muestras analizadas.

 Determinación de Bacillus cereus en cereales (avena).

Microorganismo Recuento Discusión

Bacillus cereus 1:10 80 UFC de Bacillus Se obtuvo una muestra

cereus en Agar MyP limpia sin presencia de

en 1 gramo de cereal hongo en ella y se aprecia

en una disolución de claramente la presencia de

1:10 Bacillus cereus.

Figura 1. Caja Petri solución 1:10 Avena

Bacillus cereus 1:10000 30000 UFC de Se puede ver como crecen

Bacillus cereus en 3 grupos de hongos muy

Agar MyP en 1 pequeños en ciertas partes

gramos de cereal en de la mezcla, pero de

una disolución de cualquier forma se puede

1:10000 apreciar las colonias de

Figura 2. Caja Petri solución 1:10000 Bacillus cereus.

Bacillus cereus 1:100000 300000 UFC de Se ve claramente como se

Bacillus cereus en presenta una sola colonia

Agar MyP en 1 de Bacillus cereus en esta

gramo de cereal en solución.

una disolución de

1:100000
Figura 3. Caja Petri solución 1:100000
 Bacillus cereus 1:1000 2000 UFC de Se llega a ver como se

Bacillus cereus en presentas dos colonias de

Agar MyP en 1 Bacillus cereus en esta

gramo de cereal en solución de 1:1000

una disolución de

1:1000.
Figura 4. Caja Petri solución 1:1000
Tabla 2. Resultado de Agar MyP de Cereales

Análisis de muestra de zanahoria con Petrifilm 3M

Muestra Recuento Discusión.

Hongos y Levaduras 1:10000 No se presentaron No se logró captar ningún

ningún tipo de hongo o levadura.

hongo y levaduras

en esta disolución de

1:10000.

Figura 5. Petrifilm 3M Hongos y Levaduras 1:10000

 Coliformes 1:100000 200000 UFC de Se presentan claramente

coliformes totales los coliformes en esta

que se forman en la placa Petrifilm 3M.

burbuja de la placa

en una disolución de

1g de zanahoria de

1:100000

Figura 6. Petrifilm 3M Coliformes 1:100000

Aerobios 10 UFC en la placa Se observa una pequeña

Petrifilm 3M de una colonia en el centro de la

disolución de 1g de burbuja de color rojizo o

zanahoria de 1:10 morado.

Figura 7. Petrifilm 3M Aerobios 1:10

E. coli y Coliformes 1:1000
 No se presentan No se observa presencia de

colonias de E. coli y E. coli y coliformes

coliformes en esta

muestra de 1:1000

Figura 8. Petrifilm 3M E. coli y coliformes 1:1000

Tabla 3. Resultados de Placas Petrifilm 3M

Figura 9. Ilustración de Bacillus cereus (Vila, 2009).

7. Conclusiones.

Erick Alejandro Avalos Zepeda.

He llegado a la conclusión de que esta práctica nos es de mucha utilidad ya que no permite

saber cómo preparar los medios de cultivo adecuados para la determinación de los

microorganismos; en los cereales es posible determinar y encontrar la presencia

microorganismos dañinos como lo es el Bacillus cereus el cual puede llegar a producir daño

estomacal si se llega a presentar en algún alimento infectado. Y también fue mucha utilidad

ya que supimos como utilizar las placas Petrifilm 3M para conteo de colonias UFC.
 Darío Fabian Hernández Hernández.

He concluido que la determinación de Bacillus cereus ha sido exitosa ya que se presento

en las distintas soluciones que se desarrollaron como la 1:10, 1:1000 entre otras. Tambien

nos fue de gran apoyo esta practica para saber la manera correcta en que se debe de usar una

placa Petrifilm. Y que no siempre se obtienen resultados de presencia como fue en el caso de

la muestra de zanahoria la cual solo presento colonias en la solución de 1:100000.

Jesús Sánchez Hernández.

He podido concluir que los análisis microbiológicos son muy importantes en los

alimentos, ya que se puede determinar que tanta toxicidad o microorganismos patógenos

contiene 1 gr de cereales o de zanahoria como en el caso de la avena se logró apreciar que

había muchas UFC en las muestras de mayor y menor concentración. Lo cual presenta un

riesgo para el consumidor y se necesita hacer un cambio en los parámetros de calidad que

esta presenta. Y también pudimos aprender el funcionamiento de las placas Petrifilm.

Luis Ángel Villa Higareda.

En base a los resultados obtenidos he llegado a la conclusión de que el microorganismo

patógeno Bacillus cereus mostro presencia en las muestras de avena de las distintas

soluciones preparadas lo cual significa que debe tener cuidado al ingerir este tipo de cereal,

y en la muestra de zanahoria; como se pudo ver en el manejo de las Petrifilm y la colocación

de 1 ml de muestra que después del periodo de incubación no presento colonias más que solo

en una placa Petrifilm se logró ver 1 UFC de solución 1:1000.

 Fabian Mora Prado.

Mi conclusión es que en esta practica se cumplió con los objetivos a desarrollar ya que

pudimos observar las distintas colonias (UFC) que presentaban las cajas Petri después del

periodo de incubación a 35ºC por cierto periodo de tiempo. Y que las cajas Petrifilm son una

herramienta de gran utilidad en el análisis de muestras para determinar colonias como E. coli

y coliformes, aerobios, hongos y levaduras. Tambien nos dimos cuenta de que se presentaron

un numero racional de UFC de Bacillus cereus.

8. Bibliografías.

• Ramos Gamiño, Félix (2013). Universidad Autónoma de Nuevo León, Monterrey,

ed. «Maíz Trigo y Arroz: los cereales que alimentan al mundo». ISBN 9786074339932.

• Ryan KJ; Ray CG, eds. (2004). Sherris Medical Microbiology (4th edition). McGraw

Hill.

• Petrifilm, P. (2000). Placas Petrifilm 3M Placas Petrifilm. 150.

• Vilà, B.; Fontgibell, A.; Badiola, I.; Esteve-Garcia, E. et al. (2009). «Reduction of

Salmonella enterica var. Enteritidis colonization and invasion by Bacillus cereus var. toyoi

inclusion in poultry feeds». Poultry Science (HighWire Press) 88 (55): 975-9