Desarrollo de biosensor de papel para la

detección de fenol a partir de efluentes

industriales utilizando bioconjugado de
Tyr-AuNps mediado por el nuevo aislado
Streptomyces tuirus DBZ39
Dayanand Agsar - Ambika Prasad
Valentina Cardenas
Angela Ardila
Neftali Aguirre
Que es un biosensor.
Un biosensor es un instrumento para la medición de parámetros biológicos
o químicos.

El sensor Un tejido, un cultivo de microorganismos, enzimas, anticuerpos,

cadenas de ácidos nucléicos, etc. El sensor puede ser tomado de
biológico la naturaleza o ser un producto de la biología sintética.

Acopla los otros dos elementos y traduce la señal emitida por el

El transductor sensor.

El detector Óptico, piezoeléctrico, térmico, magnético, etc.

 Análisis de la sustancia a
Para qué sirven ? determinar en tiempo real

Forma directa, sin

Obtención de medidas directas necesidad de marcador
Respuesta rápida y con alta
sensibilidad

Tamaño y la portabilidad

Análisis de muestras, bajos

(micro y nano litros)

Métodos no invasivos
 Como se hacen ?
BIOSENSOR
Receptor biológico Transductor o sensor

Capaz de interpretar la reacción de

Detectar específicamente una sustancia
reconocimiento biológico que produce el
aprovechando la exquisita especificidad
receptor y "traducirla" en una señal
de las interacciones biomoleculares
cuantificable

Sensibilidad y
selectividad
Objetivo del Artículo

Desarrollar un biosensor de papel para la detección

de constituyentes de fenol utilizando bioconjugado de
tirosinasa y nanopartículas de oro producidas por una
nueva cepa de Streptomyces
Materiales y métodos
 Caracterización molecular de Streptomyces DBZ39

El ADN
Cepa potencial de Caracterización por
genómico del ADN purificado
1 Streptomyces DBZ39 análisis de ARNr
aislado
aislada 16S

Tirosinasa y Amplificación
Se extrajo
por PCR
nanopartículas de oro de
2 Streptomyces tuirus
DBZ39
Secuenciación usando los
Se obtuvo la secuencia cebadores estándar
del gen 16S rRNA universales de
3 Preparación de secuenciación específica
bioconjugado del gen
 Tirosinasa y nanopartículas de oro de Streptomyces
tuirus DBZ39
bioproceso
Se utilizó para sumergido por
Tirosinasa Preparación Producido bajo streptomyces tirus
extracelular bioconjugado DBZ 39

contiene 0,5% tirosina

en 100 ml
De caldo de 0,3% extracto de Durante
tirosina carne 120 H
0,5%gelatina

Para hacer el bioconjugado

se utilizó tirosina
parcialmente purificada
 bioproceso
tiene un tamaño promedio 15nm, bioproceso
optimizado
Nanopartículas de sumergido por
anteriormente
oro extracelulares streptomyces tirus
sintetizadas
DBZ 39

cultivo de 5 Días, en un agitador a

preparación prueba 3 días caldo de caseína 200 rpm
bioconjugado de almidón.
a 35°

se puso en 40° en un agitador a 200 rpm

se lava con agua destilada por 3 días
a 20°, 8000 rpm, solución de cloruro
20 min aurio 1mM

confirmadas y caracterizadas
Nanopartículas de observación visual
oro extracelulares espectro de
sintetizadas absorción UV-vis a
500-550 nm
 Preparación de bioconjugado
mezclar en
proporción 1:39 NAHCO3 10 mM
Método ensayo tirosinasa y oscuridad 40 min,
fluctuación nanopartículas luego 200𝞵L NaCL
de oro 2M

se mide la
20 min reemplazo de la
mezcla 1:39
oscuridad solución salina por absorbancia
50𝞵L de agua en UV-vis entre 400 y
muestra de 800 nm
referencia
 por el radio
Dynamic Light hidrodinámico del se determinó
caracterización del Scattering (DLS)
bioconjugado de biconjugado revela la
morfología de las el biconjugado
nanopartículas de
tirosinasa-oro nanopartículas

relación de fluctuación 1:39

para el análisis
DLS
 Construcción de biosensor de papel
papeles de filtro Procedimiento modificado Las capas múltiples de quitosano, se empapo
Whatman 1 y 2 se estándar bioconjugado Tyr-AuNps y alginato se
utilizaron como base colocaron en el papel en secuencia,
para la construcción una sobre otra.

fosfato de tri-penta
papel secado al aire y se
sódico al 1,5% Tres capas de 10  μ cinco capas de bioconjugado dejaron absorber.
(NaTPP) durante 10 L de quitosano de 200  μ L, dos capas de
minutos y se secó al alginato de 6  μ L y dos
aire durante 30 capas de 20  μL de 4-AAP
minutos.

Los biosensores de papel grandes se

secaron al aire durante 45 minutos, se
cortaron en tiras del tamaño adecuado y
se almacenaron a 4 ° C para su uso
posterior.
 Detección de fenol por biosensor de papel
detectaron el contenido
de fenol de los efluentes
industriales de vino, papel
y plástico según el
método prescrito
un cambio de color en
diferentes intervalos de
tiempo
Se determinó el color
desarrollado en las
muestras de efluentes
Se colocaron 25  μl de
muestras de efluentes por se observó
en diferentes
separado biosensores
mediante espectros de
se utilizó como agua destilada y el absorción UV-vis
control color del fenol
analitico se considero
para la comparacion
métodos químicos
Se comparó estándar de
con 4-Aminoantipyrine
(AAP) y los ensayos de
Reactivo
Folin-Ciocalteau (FCR)
Resultados
Nueva cepa de cepa de Streptomyces

Figura 1. ADN Genómico y secuencia de nucleótidos (Parciales 836

bases) del gen 16D rRNA de Streptomyces DBZ39
Figura 2. Árbol Filogenético que
muestra la posicion sistematica
de Streptomyces DBZ39
 Desarrollo de Biosensor de papel
Figura 3. Pico dinámico de dispersión de luz que indica la
conjugación de tirosina y nanopartículas de oro(a). Espectro
UV-Vis de tirosina y nanopartículas antes y despues de la
conjugación

(a) (b)
➢ La adsorción de NaTPP en papel facilitó la reticulación iónica rápida y la estabilización de quitosano
en la plataforma sólida.
➢ El quitosano y el bioconjugado de Tyr-AuNps de Streptomyces se inmovilizaron en los papeles de
filtro que incluyen papeles de filtro normales Whatman 1 y 2 de diferente calidad para construir una
plataforma integrada de detección sin reactivos.

➢ Este enfoque proporciona un entorno biocompatible para el bioconjugado de Tyr-AuNps y una mayor
adsorción de proteínas a través de la unión electrostática, estabilizando así el bioconjugado de
Tyr-AuNps.
➢ La resonancia de plasmón superficial (SPR) de nanopartículas de oro es relativamente más
compatible para unirse con tirosinasa y facilita la detección eficiente de constituyentes fenólicos.
➢ Las nanopartículas de oro de menor tamaño permiten más libertad en la orientación de las moléculas
de proteínas ancladas y, por lo tanto, maximizan la utilización de sus sitios bioactivos
Propiedades de papel de filtro cualitativo
Whatman, grado 2 (8 micras)
Diferentes aplicaciones por sus propiedades, como porosidad,
retención de partículas, resistencia a la humedad, velocidad de
flujo, compatibilidad y eficiencia. Incluso se sabe que un pequeño
trozo de papel de filtro absorbe un volumen significativo de
líquido.

Ligeramente más retentivo que el grado 1 con un aumento

correspondiente en el tiempo de filtración.

Más absorbente además de la filtración general en el rango de

tamaño de partícula de 8  μm.

La capacidad de absorción adicional fue una ventaja adicional y

fue capaz de retener los precipitados finos encontrados en el
análisis químico.
Detección de fenol por biosensor de papel

Tabla 1. Detección de fenol de efluentes industriales por biosensor

de papel de filtro normal
Detección de fenol por biosensor de papel

Tabla 2. Detección de fenol de efluentes industriales por biosensor

de papel de filtro Whatman 1.
Detección de fenol por biosensor de papel

Tabla 3. Detección de fenol de efluentes industriales por biosensor

de papel de filtro Whatman 2.
Figura 4. Cambio de color a diferentes intervalos de tiempo que
indican la detección de fenol del efluente de las industrias de vino (a),
papel (b) y plástico (c) por el biosensor de papel Whatman 2

(a) (b)

(c)
Figura 5. Espectros de absorción UV-Vis que indican la detección de
fenol por el biosensor de papel Whatman 2 y los métodos químicos
estándar
Figura 6. Estimación cuantitativa del fenol en muestras de efluentes
de las industrias de vino, el papel y el plástico mediante uso de
fenoles estándar
Bibliografía

1. F. Naghibi, F. Pourmorad, S. Honary y M. Shamsi, "Descontaminación de agua contaminada con

fenol usando Raphanussativus Root", Iranian Journal of Pharmaceutical Research , vol. 2, págs.
29–32, 2003.
2. Ver en: Google Scholar
3. C. Hansch, SC McKarns, CJ Smith y DJ Doolittle, "Evidencia comparativa de QSAR para un
mecanismo de radicales libres de toxicidad inducida por fenol", Chemico-Biological Interactions , vol.
127, no. 1, págs. 61–72, 2000.
4. Ver en: Sitio del editor | Google Académico