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BILIRRUBINA Ref.

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Instrucciones de Uso

Finalidad . Sistema para la determinación de las bilirrubinas directa y El procedimiento usado en la calibración y para la prueba debe ser
total en muestras de sangre por reacción de punto final. idéntico.

Uso profesional. Los reactivos no abiertos, almacenados en las condiciones indicadas son
estables hasta la fecha de expiración impresa en el rótulo. Durante el
[Solamente para uso diagnóstico in vitro.] manoseo, los reactivos están sujetos a contaminaciones de naturaleza
química y microbiana que pueden provocar reducción de su estabilidad.
Principio . La bilirrubina es dosificada por diazotación y formación de
azobilirrubina roja con absorción máxima en 525 nm. La bilirrubina Material necesario y no suministrado
directa (diglucurónido) es dosificada en medio acuoso, mientras la total
(directa e indirecta) es dosificada por acción de potente solubilizador de 1. Fotómetro capaz de medir, con exactitud, la absorbancia entre 500 y
acción catalizadora. 540 nm.
2. Pipetas para medir muestras y reactivos.
Características del sistema . El sistema Bilirrubina Labtest es 3. Cronómetro.
un procedimiento sencillo, rápido y de gran especificidad para la 4. Producto Patrón de Bilirrubina Labtest (Ref.: 32) - Para la calibración.
determinación de las bilirrubinas directa y total, en tan solo 5 minutos. El
reactivo Acelerador, compuesto de benzoato y cafeína tamponada,
promueve rápida solubilización y diazotación de la bilirrubina indirecta, Muestra
permitiendo la obtención de soluciones teñidas totalmente libres de Se debe crear un Procedimiento Operacional Estándar (POE) que
turbiedad. La estabilización del nitrito de sodio supone un factor de establezca procedimientos adecuados para la toma, preparación y
seguridad en la dosificación, permitiendo el almacenamiento de todos los almacenamiento de la muestra. Destacamos que los errores debidos a la
reactivos a temperatura ambiente. muestra pueden ser mucho mayores que los errores ocurridos durante el
procedimiento analítico.
La versatilidad del método permite que sean dosificados valores de hasta
25 mg/dL sin necesidad de dilución del suero. Esa versatilidad hace Usar suero o plasma (Heparina, EDTA). Cuando protegido de la luz, el
posible la determinación de la bilirrubina en sangre de recién-nacidos analito es estable 4 días entre 2 - 8 ºC y 3 meses a 20 ºC negativos.
ictéricos.
Sueros hemolisados pueden suministrar valores falsamente disminuidos
El método propuesto utiliza la técnica manual y es fácilmente aplicable a la en la determinación de la bilirrubina directa.
mayoría de los analizadores semi-automáticos capaces de medir con
exactitud una reacción de punto final entre 500 y 540 nm. Como ningún test conocido puede asegurar que muestras de sangre no
transmiten infecciones, todas deben ser consideradas como

(
Metodología . Sims-Horn. potencialmente infectantes. Por lo cual, al manejarlas se deben seguir las
normativas establecidas para biosegurad.
Reactivos
Para deshaceres de los reactivos y del material biológico, sugerimos

)
1. - Acelerador - Conservar entre 15 - 25 ºC. aplicar las normativas locales, regionales o nacionales de protección
Contiene cafeína 130 mmol/L; benzoato de sodio 260 mmol/L; acetato de ambiental.
sodio 460 mmol/L y surfactante.

*
Interferencias
2. - Ácido Sulfanílico - Conservar entre 15 - 25 ºC.
Valores de triglicéridos de hasta 170 mg/dL y hemoglobina hasta
Contiene ácido sulfanílico 5,75 mmol/L y estabilizador.
30 mg/dL no producen interferencias significativas.
3. - Nitrito de Sodio - Conservar entre 15 - 25 ºC. Valores de triglicéridos entre 170 y 3500 mg/dL producen resultados
Contiene nitrito de sodio 72,5 mmol/L y estabilizador. falsamente disminuidos.

Valores de hemoglobina entre 30 y 180 mg/dL producen resultados


Precauciones y cuidados especiales
falsamente elevados en la determinación de la bilirrubina total y
Se debem aplicar los cuidados habituales de seguridad en el manejo de falsamente disminuidos en la determinación de la bilirrubina directa.
reactivo.

01 Español - Ref.: 31
Para evaluar la concentración aproximada de la hemoglobina en una Debido a la gran reproducibilidad que puede ser obtenida con la
muestra hemolizada se puede proceder como expuesto a continuación: metodología, se puede utilizar el método del factor.
Diluir 0,05 mL de la muestra en 2,0 mL de NaCl 150 mmol/L (0,85%) y
medir la absorbancia en 405 ó 415 nm, ajustando el cero con agua Concentración del Patrón (mg/dL)
Factor de calibración =
desionizada o destilada.
Absorbancia del Patrón (media)
Hemoglobina (mg/dL) @ Absorbancia405 x 601 Bilirrubina (mg/dL) = Absorbancia del Test x Factor
Hemoglobina (mg/dL) @ Absorbancia415 x 467
Ejemplo
Procedimiento
10
Ver observaciones 1 y 2. Factor = = 29,67
0,337
El procedimiento usado en la calibración y para la prueba debe ser
idéntico. Bilirrubina (mg/dL) = 0,163 x 29,67 = 4,84

La bilirrubina indirecta es obtenida por la diferencia entre las


Preparo del diazo reactivo . Añadir 0,01 mL del Nitrito de Sódio
bilirrubinas total y directa.
(nº 3) a 0,3 mL del Ácido Sulfanílico (nº 2). Mezclar y usar en el día de la
preparación.
Linealidad
Tomar 3 tubos de ensayo y proceder como expuesto a continuación:
La medición es lineal hasta 25,0 mg/dL. Para valores iguales o mayores a
25,0 mg/dL, diluir la muestra con NaCl 150 mmol/L (0,85%), realizar una
Blanco Directa Total nueva determinación y multiplicar el resultado obtenido por el factor de
Agua destilada o deionizada 1,0 mL 1,0 mL dilución. Diluir la muestra para obtener un resultado entre 1, y 10,0 mg/dL.
Acelerador (nº 1) 1,0 mL
Ácido Sulfanílico (nº 2) 0,1 mL Control interno de la calidad . El laboratorio debe mantener un
Diazo Reactivo 0,1 mL 0,1 mL programa de control interno de calidad que defina con claridad los
Muestra 0,05 mL 0,05 mL 0,05 mL reglamentos aplicables, objetivos, procedimientos, criterios para
especificaciones de la calidad y límites de tolerancia, acciones
Mezclar y esperar 5 minutos. Determinar las absorbancias de las correctivas y registro de las actividades. Controles deben ser utilizados
bilirrubinas directa y total en 525 nm o filtro verde (500 a 540), ajustando para evaluar la imprecisión e desviaciones de calibración. Se sugiere que
el cero con el blanco. El color es estable por 30 minutos. las especificaciones para el coeficiente de variación máximo y el error
total sean basados en los componentes de la variación biológica (VB)4,5.
El procedimiento sugerido es adecuado para fotómetros cuyo volumen
mínimo de solución para lectura es igual o menor que 1,0 mL. Se debe Se sugiere utilizar las preparaciones estabilizadas de la línea Qualitrol de
hacer una verificación de la necesidad de ajuste del volumen para el Labtest para control interno de la calidad en ensayos de química clínica.
fotómetro utilizado. Los volúmenes de muestra y reactivo pueden ser
modificados proporcionalmente sin perjuicio para el desempeño de la Intervalo de referencia . Estos valores deben ser usados sólo
prueba y el procedimiento de cálculos se mantiene inalterado. En caso de como orientativos. Se recomienda que cada laboratorio establezca, en la
reducción de los volúmenes, es fundamental que se observe el volumen población atendida, su propio rango de valores de referencia.
mínimo necesario para la lectura fotométrica. Volúmenes de la muestra
menores que 0,01 mL son críticos en aplicaciones manuales y se deben Bilirrubina Directa
usar con cautela porque aumentan la imprecisión de la medición. Edad mg/dL
6
Neonatos Hasta 0,4
Cálculos
Absorbancia del Test BilirrubinaTotal
6
Bilirrubina (mg/dL) = x 10 Neonatos
Absorbancia del Patrón Edad mg/dL
1 día Hasta 5,1
Ejemplo 1 a 2 días Hasta 7,2
Absorbancia del Test = 0,163 3 a 5 días Hasta 10,3
Absorbancia del Patrón = 0,337
Ninos, adolescentes e adultos (mg/dL)
0,163
Bilirrubina (mg/dL) = x 10 = 4,84 Bilirrubina Directa Hasta 0,4
0,337 Bilirrubina Total 1,2

Conversión: Unidades convencionales (mg/dL) x 17,1 = Unidades SI


(mmol/L).

02 Español - Ref.: 31
Características del desempeño7 Observaciones

Exactitud . En tres muestras con concentraciones de bilirrubina 1. La limpieza y secado adecuados del material utilizado son factores
iguales a 1,15, 1,30 y 20,4 mg/dL se añadieron cantidades diferentes del fundamentales para la estabilidad de los reactivos y obtención de
analito obteniéndose recuperaciones entre 100 y 108%. El error resultados correctos.
sistemático proporcional medio obtenido en un valor de 2,5 mg/dL fue
igual a 0,085 mg/dL ó 3,4%. 2. El laboratorio clínico tiene como objetivo fornecer resultados exactos
y precisos. La utilización de agua de calidad inadecuada es una causa
Especificidad . El método propuesto fue comparado con un método potencial de errores analíticos. El agua desionizada o destilada utilizada
similar utilizando 40 muestras con valores situados entre 0,19 y en el laboratorio debe tener la calidad adecuada para cada aplicación. Así,
21,1 mg/dL. La comparación resultó en la ecuación de la regresión: y = para preparar reactivos y usar en las mediciones y para su uso en
0,247 + 0,940x y un coeficiente de correlación (r) igual a 0,995. El error enjuague final de la vidrería, debe tener resistividad ³1 megaohm.cm o
sistemático total (constante y proporcional) verificado en el nivel de conductividad £1 microsiemens/cm y concentración de silicatos
decisión (2,5 mg/dL) fue igual a 0,097 mg/dL ó 3,9%. Como las muestras <0,1 mg/L. Cuando la columna desionizadora está con su capacidad
fueron seleccionadas aleatoriamente en pacientes de ambulatorio y saturada, se produce agua alcalina con liberación de varios iones,
pacientes hospitalizados, se puede inferir que el método tiene una silicatos y sustancias con gran poder de oxidación o reducción que
especificidad metodológica adecuada. deterioran los reactivos en pocos días o incluso horas, alterando los
resultados de modo imprevisible. Por lo cual es fundamental establecer
un programa de control de la calidad del agua.
Repetitividad - imprecisión intra-ensayo
N Media DE CV (%) 3. Para una revisión de las fuentes fisiopatológicas y medicamentosas
Muestra 1 20 1,43 0,03 2,05 de interferencia en los resultados y en la metodología se sugiere
Muestra 2 20 2,34 0,03 1,16 consultar: <www.fxol.org/>.
Muestra 3 20 21,9 0,22 1,01
Referencias

Reproducibilidad - imprecisión total 1. Malloy HT, Evelyn KA. J Biol Chem 1937;119:481.

N Media DE CV (%) 2. Martineck RG Clin Chim Acta 1966;13:161.


Muestra 1 20 1,44 0,07 4,97
3. Sims FH, Horn C. Am J Clin Path. 1958;29:412.
Muestra 2 20 2,34 0,07 3,04
Muestra 3 20 22,0 0,69 3,15 4. Sociedad Española de Bioquímica Clínica y Patología Molecular,
B a s e d e D a t o s d e Va r i a c i ó n B i o l ó g i c a . D i s p o n í v e l
em:<http://www.seqc.es/ar ticle/ar ticleview/330/1/170>
Sensibilidad metodológica . Una muestra proteica no (acceso en 08/2005).
conteniendo bilirrubina fue utilizada para calcular el límite de detección del
5. http://www.westgard.com/biodatabase1.htm (acceso en: fecha en las
ensayo habiendo sido encontrado un valor igual a 0,06 mg/dL para la
instrucciones de uso se prepararon).
bilirrubina total y 0,03 mg/dL para la bilirrubina directa, equivalente a la
media de 20 ensayos más dos desviaciones estándar. Utilizándose la 6. Soldin SJ, Brugnara C, Wong EC: Pediatric Reference Ranges, 5a.
absorbancia del patrón como parámetro, el límite de detección edição, Washington: AACC Press, 2005: 42-43.
fotométrica es 0,02 mg/dL para bilirrubina total y directa,
correspondiendo a una absorbancia igual a 0,001. 7. Labtest: Datos de Archivo.

Efectos de la dilución de la matriz . Dos muestras con valores


iguales a 18,7 y 19,5 mg/dL fueron utilizadas para evaluar la respuesta del
Presentación
sistema en las diluciones de la matriz con NaCl 150 mmol/L (0,85%). Producto Referencia Contenido
Usando factores de dilución que variaron de 2 a 8 fueron encontradas 1 1 x 250 mL
recuperaciones entre 100 y 105%.
Bilirrubina 31 2 1 x 120 mL
Significancia clínica . Las causas más comunes de aumento de 3 1 x 5 mL
bilirrubina directa son las enfermedades hepato-celulares y las
obstrucciones del árbol biliar. Informaciones al consumidor
El aumento de la bilirrubina indirecta indica: I) aumento de la producción [Términos y Condiciones de Garantía]
de bilirrubina (hemólisis), II) disminución en el transporte (por acción de
anticuerpos y medicamentos), III) deficiencia en la captación (deficiencia Labtest Diagnóstica garantiza el desempeño de este producto dentro de
o bloqueo de lingandinas) y IV) deficiencia en la conjugación (enfermedad las especificaciones hasta la fecha de expiración indicada en los rótulos
de Gilbert, entre otros). siempre que los cuidados de utilización y almacenamiento indicados en
los rótulos y en estas instrucciones sean seguidos correctamente.

03 Español - Ref.: 31
Labtest Diagnóstica S.A.
CNPJ: 16.516.296 / 0001 - 38
Av. Paulo Ferreira da Costa, 600 - Vista Alegre - CEP 33400-000
Lagoa Santa . Minas Gerais Brasil - www.labtest.com.br
Customer Service e-mail: customerservice@labtest.com.br

Revisión: Marzo, 2014 Copyright by Labtest Diagnóstica S.A.


Ref.: 150817 Reproducción bajo previa autorización

Símbolos utilizados com produtos diagnósticos in vitro


Símbolos usados con productos diagnósticos in vitro . Symbols used with ivd devices

Conteúdo suficiente para < n > testes Consultar instruções de uso Controle Tóxico
Contenido suficiente para < n > tests Consultar instrucciones de uso Control Tóxico
Contains sufficient for < n > tests Consult instructions for use Control Poison

Data limite de utilização (aaaa-mm-dd ou mm/aaaa) Número do catálogo Controle negativo Reagente
Estable hasta (aaaa-mm-dd o mm/aaaa) Número de catálogo Control negativo Reactivo
Use by (yyyy-mm-dd or mm/yyyy) Catalog Number Negative control Reagent

Material Calibrador Adições ou alterações significativas Controle positivo Fabricado por


Material Calibrador Cambios o suplementos significativos Control positivo Elaborado por
Calibrator Material Significant additions or changes Positive control Manufactured by

Material Calibrador Produto diagnóstico in vitro Controle Número do lote


Material Calibrador Dispositivo de diagnóstico in vitro Control Denominación de lote
Calibrator Material In vitro diagnostic device Control Batch code

Limite de temperatura (conservar a) Liofilizado Risco biológico Período após abertura


Temperatura limite (conservar a) Liofilizado Riesgo biológico Período post-abertura
Temperature limitation (store at) Lyophilized Biological risk Period after-opening

Representante Autorizado na Comunidade Europeia Corrosivo Marca CE Uso veterinário


Representante autorizado en la Comunidad Europea Corrosivo Marcado CE Uso veterinario
Authorized Representative in the European Community Corrosive CE Mark Veterinary use

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04 Español - Ref.: 31