Son componentes esenciales de las células, tejidos y organismos; están hechas

¿Qué es una proteína ? de largas cadenas de aminoácidos .

Desempeñan funciones estructurales, enzimáticas, hormonales, reserva y
transporte.
Definen la identidad de cada ser vivo ya que soN la base de la estructura del
código genético (DNA)

Estructura primaria

Estructura secundaria en 3D
 Extracción de Proteínas

1. Rotura Celular

- Células sin Homogenización Con arena o Prensa Sonicación Congelación –

pared celular. alúmina, o en French Descongelación
Hacer pasar la Someter las
- Suspender célula por un tubo molino con Cambio brusco de
en solución piedras de Se hace soluciones a temperatura
hipotónica y un pistón del pasar las vibraciones
vidrio congelándolo con
por diferencia vidrio lo ajusta células a de nitrógeno liquido
osmótica lo completamente gran ultrasonido
que lleva a velocidad a
hincharse y través de un
rotura orificio muy
pequeño
 2. Métodos cromatógrafos para separación de proteínas

Cromatografía de Cromatografía
intercambio iónico Hidrofóbica

 Separa a las proteínas por su hidrofóbicidad

 Separar moléculas basadas en sus propiedades superficial.
de carga eléctrica.  Adsorción de biomoléculas a la superficie
 Se separa en dos fases: estacionaria y móvil débilmente hidrofóbica acuosa y su posterior
elución mediante un gradiente salino
 Cromatografía de exclusión Cromatografía de afinidad

 Especificidad biológica singular de

interacciones entre un
componente de la muestra y otro
molécula unida al soporte inerte
(gel de agarosa, microesfera de
vidrio)

 Diferencias de tamaño, forma o carga entre moléculas de distintos

componentes de la muestra
 Electroforesis

 Comprobar si la proteína de interés se ha

separa de del resto de componentes de la
mezcla ósea que se encuentra pura
 Geles de policrilamida
 La fuerza que provoca la migración de las
proteínas es un campo eléctrico y el gel
actual como filtro molecular realizando la
migración de las proteínas

Para la preparación de
tejido de tamaño
completo (por ejemplo,
riñón, corazón, pulmón,
músculo, etc.)
Inmediatamente antes de la
extracción ultrasónica, se
agrega rápidamente
tampón de lisis helado en el aproximadamente ~ 600 μL
tubo
Extracción de Proteínas a partir
de tejido animal
disecarse en piezas muy
pequeñas con
herramientas limpias,
preferiblemente en hielo,
y lo más rápido posible
para evitar la
degradación por
proteasas
Después de ultrasonidos
10 mg de tejido
homogeneización /
extracción, el lisado se
de tampón
centrifuga a 27.000 g
durante aprox. 20 minutos.
la muestra se sumerge
en nitrógeno líquido para
congelar rápidamente.
Almacenarse a -80 ° C
para su uso posterior o
mantenerse en hielo
para su homogeneización
inmediata.
se recoge el sobrenadante,
de modo que la
concentración de proteína
se puede determinar por
un ensayo de proteína tales
como Pierce BCA ensayo
de proteínas.
 Extracción de Proteínas de
tejido vegetal
tejido vegetal suave, por ejemplo, musgo etc., puede ser
fácilmente alterado simplemente colocando el material de
muestra picado en tampón de lisis para la sonicación.

materiales de plantas
tejidos vegetales ligenous, tales como semillas, abeto leñosas duro debe ser
agujas etc., deben ser molidos en seco. congeladas y suelo en
nitrógeno líquido antes de
extraerse por sonicación.

Para las suspensiones de

el material más duro tal como
cultivo de célula de planta, un
semillas de calabaza requiere
tratamiento ultrasónico entre
una sonicación más intensa
30 y 150 segundos en un
como se describe a
tampón de lisis es sobre todo
continuación.
suficiente.
 Nitrógeno Líquido

Buffer fosfato
pH 7,5

• Alta concentración de proteína

• No interfiere con el método de cuantificación
• Compatibilidad con cromatografía
• Recorrido mas definido

• Minimiza degradación
• Fineza del polvo
 Instrucciones generales

Control de temperatura: Para asegurar un alto rendimiento de proteína sin desnaturalización

térmica, la temperatura durante la extracción debe ser controlado.
Buffer: La elección de un tampón adecuado y el volumen correcto de tampón varía de un tejido
a otro y debe ser calculado de salida mediante pruebas de ensayo y error.
Aislamiento / purificación: Proteína lisados ​pueden contener un exceso de biomoléculas tales
como ADN o hidratos de carbono, que se pueden eliminar por precipitación de proteínas (ácido
desoxicolato-tricloroacético) o intercambio de tampón