PONTIFICIA UNIVERSIDAD CATÓLICA DEL

ECUADOR

FACULTAD DE MEDICINA

CARRERA DE BIOQUÍMICA CLÍNICA

CATEDRA DE BIOLOGÍA MOLECULAR

TEMA: APLICACIONES DE LA BIOLOGÍA

MOLECULAR EN DIAGNÓSTICO CLÍNICO

AUTOR(S): MISHELL AGUILAT Y TANIA

PINARGOTE,

GRUPO: 2

PROFESOR: LUIS SANTIAGO ESCALANTE

VANONI

QUITO, JUNIO 2019

INDICE

TABLA DE CONTENIDO 3
INTRODUCCIÓN 4
DESARROLLO DEL TEMA 5
DIAGNOSTICO MOLECULAR 5
Técnicas utilizadas en el diagnóstico molecular para las etapas en el cuidado
del paciente 5
Screening 6
Terapia 6
Monitoreo 8
La reacción de “polimerasa en cadena” (RPC) 9
Características y aplicaciones de los tipos de RPC 10
RPC Estándar 10
RPC Múltiple 10
RPC-RFLP (Restriction fragment length polymorphisms) 10
RT (Reverse transcriptase)-RPC 10
RT (Reverse transcriptase)-RPC 10
CONCLUSIÓN 11

BIBLIOGRAFÍA 11

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TABLA DE CONTENIDO

1. APLICACIONES DE LA BIOLOGÍA MOLECULAR EN

DIAGNÓSTICO CLÍNICO

1.1 DIAGNÓSTICO MOLECULAR

1.2 LA REACCIÓN DE “POLIMERASA EN CADENA” (RPC)

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INTRODUCCIÓN

En la actualidad ya es un hecho las aplicaciones que se dan en diagnósticos

clínicos utilizando técnicas de biología molecular, estos diagnósticos al ser
importantes para el paciente, alude al análisis que determina la situación y
tendencia basados en varios datos que son obtenidos sistemáticamente y que
permiten juzgar mejor qué es lo que ocurre respecto a la salud del paciente. De
forma general, hoy en día los laboratorios clínicos que ofrecen el desarrollo de
técnicas de diagnóstico molecular, al ser un área diagnóstica con gran
dinamismo y crecimiento dentro los laboratorios clínicos, revoluciona el sistema
de salud, apoyando en el liderazgo de la investigación biomédica y con el fin de
optimizar los tratamientos médicos, estos métodos moleculares, se han ido
incorporando cada vez más, en la detección y caracterización de las
infecciones por virus y principalmente para el diagnóstico de las enfermedades
debidas a bacterias.

La detección molecular clínica se usa principalmente en forma de tecnología de

PCR, (la detección de las transcripciones bcr-c-abl), esta es una técnica "in
vitro", que se basa en la creación de un gran número de copias de un solo
segmento de ADN, “utilizando ciclos de desnaturalización, apareamiento con
cebadores y extensión por una ADN polimerasa termo-resistente”. [ CITATION
Car19 \l 2058 ]

Sin embargo, con la introducción de la automatización en el diagnóstico clínico

utilizando tecnología molecular es importante para las diversas etapas de la
extracción de ADN o ARN, como la amplificación y la detección de varios
productos, junto con la PCR y con esto, los laboratorios moleculares
continuarán siendo mucho más eficientes y rentables.

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DESARROLLO DEL TEMA

Las aplicaciones de la biología molecular en diagnósticos clínicos son un área

emergente de las investigaciones moleculares que prometen un diagnóstico
rápido y preciso de alguna patogenicidad; algunas de las aplicaciones actuales
en pruebas de diagnóstico molecular, así como sus ventajas y limitaciones para
el diagnóstico y tratamiento de las infecciones que revelan translocaciones u
otros reordenamientos que son detectables con el estudio molecular.

Los avances en el diagnóstico molecular se basan mayormente en la

cuantificación de una proteína específica, actualmente es muy utilizada la
prueba de PCR, que por medio de biomarcadores sanguíneos analiza las
infecciones clínicas, “los estudios han demostrado que un nivel umbral de PCR
de 10 mg / L en sangre proporciona una sensibilidad y especificidad de
aproximadamente 70% a 90% para la detección de PJI (Las infecciones
ortopédicas)”[ CITATION DrH15 \l 2058 ]

DIAGNÓSTICO MOLECULAR

Para el diagnóstico molecular se incluyen las técnicas beneficiarias para la

salud humana, ayudando en la detección y cuantificación de las secuencias
genéticas específicas del ADN, ARN o proteínas.

Inicialmente, para el diagnóstico clínico en el campo molecular ha tenido un

enfoque en el diagnóstico de enfermedades infecciosas, técnicas moleculares
para diagnóstico del cáncer y también en enfermedades genéticas, siendo una
de las áreas con mayor dinamismo y crecimiento, ayudando en la revolución de
las estrategias para tratar las diversas patologías y condiciones de la salud
humana, beneficiando en el ofrecimiento de técnicas con estándares altos de
calidad para el cuidado de los pacientes.

Técnicas utilizadas en el diagnóstico molecular para las etapas en el

cuidado del paciente

Las técnicas que permiten el análisis del diagnóstico clínico se originan en

problemas clínicos que al requerir un método de diagnóstico con alta

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sensibilidad ha permitido la implementación de diseñar varios instrumentos y
métodos para la respuesta de las diferentes necesidades clínicas.

Varias de las técnicas que se utilizan en el diagnóstico molecular para las

etapas en los problemas clínicos de los pacientes son:

Screening

Estos métodos son análisis simples que son utilizados para identificar o
descartar patologías en pacientes y obtener información rápida sobre estos,
pueden clasificarse en métodos:

 cualitativos: permiten obtener información sobre la presencia de alguna

sustancia en una muestra.
 cuantitativos: permite obtener información sobre la concentración de una
sustancia en una muestra.
 semicuantitativos: permite obtener información de una cuantificación de
“un compuesto de manera no numérica, por ejemplo: positivo (++),
posible positivo (+), posible negativo (-), negativo (–)”. [ CITATION Yer12 \l
2058 ]

En la actualidad se encuentra mayormente utilizados métodos de screening

cualitativos y se pueden llevar a cabo de dos maneras, por detección sensorial
se determina por el cambio de color o el olor, y por medio de la detección
instrumental por medio de espectroscopia, electroanálisis.

Terapia (KRAS, BRAF, Her2)

Estas terapias son un tratamiento que se da contra la enfermedad del cáncer,

este tratamiento se basa y es tratada por fármacos, esta terapia es diferente a
la quimioterapia que se realiza en estos casos que es el cáncer, este actúa
orientándose en genes o en proteínas específicas que ayudan a paralizar el
cáncer para que este no se siga desarrollando y no se disperse para otras
partes del cuerpo, estos genes y estas proteínas se encuentran básicamente
en células que son cancerosas o en células que permiten el crecimiento y el
desarrollo de esta enfermedad como es el cáncer o también células presentes
en los vasos sanguíneos.

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Es muy importante saber cómo se desarrollan estas células cancerosas para
saber mejor como funciona este tipo de terapias. Las células forman cada uno
de los tejidos del cuerpo, este tipo de células pueden ser sanguíneas,
cerebrales o cutáneas cada una de estas tienen su función específica, el
cáncer es causado cuando son cambiados los genes que están en las células
sanas este cambia se le llama mutación ,estos genes les indica a las células
como pueden producir proteínas para que la células siga en funcionamiento, si
los genes son cambiados estas proteínas también cambian y esto causa que
las células se dividan de forma anormal, cuando esto se realiza estas células
crecen sin ningún tipo de control y son formados los tumores, algunos
investigadores están descubriendo que hay algunos cambios en los genes y
estos tienen lugar en ciertos tipos de canceres, para esto se están realizando
fármacos que permiten realizar cambios. Estos fármacos pueden actuar como:
Bloqueando señales que indican que estas células malignas crezcan y se
dividan, destruyendo a las células cancerosas.

Algunos ejemplos de estas terapias son:

o Cáncer de mama. Esta terapia del Her 2 es utilizado este tipo de cáncer
como es el de mama, alrededor del 20 y el 25 por ciento de todos los
casos de esta enfermedad de cáncer de mama tienen una cantidad
enorme de esta proteína llamada receptor 2 que es uno del factor de
crecimiento epidérmico humano o también llamado (Human Epidermal
Growth Factor Receptor 2, HER2),la función de esta proteína es hacer
que crezcan las células del tumor, si este tipo de cáncer es Her 2
POSITIVO se puede realizar varias terapias dirigidas disponibles
o Cáncer color rectal. El cáncer color rectal produce demasiada cantidad
de una proteína denominada receptor del factor de crecimiento
epidérmico o también llamado (Epidermal Growth Factor Receptor,
EGFR), los fármacos que bloquean el EGFR ayudan principalmente a
detener o también a poder retrasar el desarrollo del cáncer, estos tipos
de cáncer no tienen ninguna mutación en el gen KRAS.

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 o Melanoma. Alrededor de la mitad de los melanomas tienen una
mutación en el gen BRAF,algunos investigadores conocen las
mutaciones en el gen BRAF son buenos para la obtención de
fármacos ,para esto el FDA también ha aceptado inhibidores del
gen BRAF,estos fármacos también pueden ser muy peligrosos si
no hay la mutación del gen BRAF.

Monitoreo (Carga CMV)

 Diagnóstico de la infección por citomegalovirus

El citomegalovirus o también llamado CMV es un virus del ADN, la infección de

citomegalovirus aumenta con la edad infectándose por varios individuos
permaneciendo en el organismo de una forma indefinida, esta infección es
presentada de manera asintomática, cuando se le administra fármacos
inmunosupresores para la prevención, esto puede ocasionar un aumento de
riesgo grande de la enfermedad, estas manifestaciones clínicas de la
enfermedad CMV son inespecíficas por lo que se debe realizar las técnicas
microbiológicas en el laboratorio para un buen diagnóstico.

La infección por citomegalovirus implica la localización del virus CMV en el

organismo que son realizados mediante cultivos, técnica de la biología
molecular o también se puede realizar mediante técnicas serológicas.

Esta infección tiene dos tipos de diagnósticos como son:

o Diagnostico Pre-trasplante
Se realiza mediante la serología que se basa para estratificar
el riesgo de infección para poder prevenir o contrarrestar con
la enfermedad, mediante el lgG anti-CMV se clasifican a los
donantes como aceptadores de un trasplante renal ya sea
seropositivo o seronegativos
o Diagnostico Postrasplante
Este diagnóstico es realizado mediante un cultivo en
fibroblastos humanos, este virus CMV debe ser aislados a
través de muestras como es la sangre, orina, líquido
cefalorraquídeo, lavados bronquiales o biopsias de tejidos, se

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 necesita un tiempo prolongado para el crecimiento en el medio
de cultivo dependiendo sea el caso puede hasta llegar hasta
las seis semanas. La detección del virus CMV anticipadamente
en medios de cultivos se utilizan anticuerpos monoclonales
contra este antígeno en muestras, indica la replicación del
virus en las células, los resultados de esta técnica son
obtenida a partir de 2 a 3 días.

Monitoreo (BCR-ABL)

El monitoreo de la BCR-ABL es una prueba genética que se realiza para

obtener un cambio o una mutación en el cromosoma, el BCR-ABL es una
mutación formada por la combinación de dos genes, conocidos como BCR y
ABL o también llamados gen de fusión.

Este gen aparece en pacientes que padecen de varios tipos de leucemia, esta
prueba es detectada en casi todos los pacientes con un tipo de leucemia
llamada leucemia mieloide crónica o LMC, existen algunos medicamentos
contra el cáncer son efectivos en pacientes con leucemia con mutación BCR-
ABL.

Esta prueba se utiliza para poder diagnosticar o descartar una leucemia

mieloide crónica o una leucemia linfoblástica aguda o llamada LLA filadelfia
positiva que significa que se encontró un cromosoma filadelfio, esta prueba no
es utilizada para el diagnóstico de otro tipo de leucemias que no sean las
mencionadas. Esta prueba también se puede usar para averiguar si es válido el
tratamiento contra el cáncer o también para observar si el paciente ha obtenido
una resistencia a un tratamiento.

LA REACCIÓN DE “POLIMERASA EN CADENA” (RPC)

Los diagnósticos moleculares principalmente revolucionan en la práctica clínica

para las enfermedades infecciosas, con efectos importantes en donde las
herramientas de diagnóstico son fundamentales para los resultados y las
decisiones en el tratamiento del paciente.

La PCR es una de la técnica molecular más desarrollada con una gran gama
de aplicaciones clínicas que cumplen ya cumplidas potencialmente con la

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detección de patógenos y con esto ayuda en la evaluación de nuevas
infecciones, también estos métodos con RPC necesitan al ser un avance
tecnológico con mejor automatización, optimiza la sensibilidad y especificidad
para detectar múltiples objetivos simultáneamente. [ CITATION Yan04 \l 2058 ]

Características y aplicaciones de los tipos de RPC

RPC Estándar

Se basa en la amplificación de un segmento de ADN por medio de la utilización

dos partidores mediante geles de agarosa, se le considera como una aplicación
por medio de la detección cualitativa en base a un segmento de ADN.

RPC Múltiple

Este, se caracteriza por la amplificación de dos o más segmentos de ADN por

medio de la utilización de varios partidores en una sola reacción de
amplificación, esta, se caracteriza por la detección por medio de la
amplificación que es mediante geles de agarosa, otra característica importante
es por medio de la detección cualitativa de varios de los segmentos de ADN en
una reacción de RPC

RPC-RFLP (Restriction fragment length polymorphisms)

Se identifica por medio de un paso posterior de digestión por medio de enzimas

de restricción, esta se caracteriza por la detección de polimorfismos genéticos
(SNPs).[CITATION MAU15 \l 2058 ]

RT (Reverse transcriptase)-RPC

Este tipo de RPC son reacciones de la polimerasa en cadena, este RPC sirve
para la síntesis de ADN a partir del ARN mediante la transcripción mediante la
reacción de la polimerasa en cadena, esta tiene la aplicación de la expresión
de genes y la detección del virus ARN.

RPC-TR (Real time) o qRPC RPC

Esta reacción de la polimerasa en cadena es utilizada para tinciones o también

para sondas con fluoroforos, esta puede ser de tipo multiplex. Este tipo de RCP
cumple con la aplicación de la detección de varios segmentos de ADN, también

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para la cuantificación del ADN en muestras o también en la expresión de genes
que esté basada a la reacción de la transcripción inversa

CONCLUSIÓN

El diagnóstico molecular ha revolucionado de diferentes maneras, el material

genético en una muestra biológica ha mostrado un gran desarrollo y un gran
avance en todas las áreas de la salud, sobre todo en las áreas de las
enfermedades crónicas y de mucho riesgo como por ejemplo una de ellas
podemos decir que es el cáncer y otras enfermedades más, con él para el
tiempo se han creado nuevas tecnologías de impacto mucho más rápidas y
precisas ayudando al diagnóstico clínico ya que este es clave para así poder
ayudar al paciente y contrarrestar algunas enfermedades ,descubriendo así
aspectos importantes, técnicas utilizadas etc.

BIBLIOGRAFÍA

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